ICS65.120DB13B46河北省地方標(biāo)準(zhǔn)DB13/T1384.9—2011飼料中伊維菌素的測(cè)定Determinationoftylosininfeed河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB13/T1384.9—2011前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1－2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：河北省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院、石家莊市疾病預(yù)防控制中心、河北醫(yī)科大學(xué)、北京出入境檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心、河北省飼料產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張巖、張宏、李揮、叢斌、盧曉宇、呂品、楊立學(xué)、李志平、賈茜、馬春玲、米振杰、張敬軒、沈磊、高振同、武英利。IDB13/T1384.9—2011飼料中伊維菌素的測(cè)定1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中伊維菌素的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料中伊維菌素的測(cè)定。本標(biāo)準(zhǔn)的方法檢出限為10μg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法（GB/T6682－1992，neqISO3696:1987)3原理試樣中的伊維菌素，采用丙酮-水提取。提取液經(jīng)用異辛烷進(jìn)行液-液分配使被測(cè)物進(jìn)入異辛烷層。濃縮，用正己烷與乙腈浸出，并進(jìn)行第二次液-液分配使被測(cè)物進(jìn)入乙腈層。濃縮，加水，使成水溶液。水溶液再經(jīng)Sep－Pak小柱凈化，用乙腈洗脫。洗脫液經(jīng)蒸干，甲醇浸出并定容，溶液經(jīng)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜定性定量檢測(cè)。丙酮：經(jīng)高錳酸鉀回流lh，重蒸餾。4.10伊維菌素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取0.1g（準(zhǔn)確至0.000lg）的伊維菌素標(biāo)準(zhǔn)品于100mL容量瓶中，用少量的甲醇溶解，然后再用甲醇稀釋至刻度，混勻。配制成伊維菌素濃度為1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。4.11伊維菌素標(biāo)準(zhǔn)工作液：根據(jù)需要，準(zhǔn)確移取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，標(biāo)準(zhǔn)工作液需每周配制一次。1DB13/T1384.9—20114.130.1％甲酸水溶液：準(zhǔn)確量取1mL甲酸至1000mL容量瓶中，用水定容，混勻即可。5儀器和設(shè)備5.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源。5.2電子天平：感量精確至0.01g。5.3離心管：50mL。5.45.55.65.7離心機(jī)。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。超聲波浴。旋渦混勻器。6測(cè)定步驟6.1提取稱取約5g（精確至0.0lg）試樣于燒杯中，加入10mL丙酮-水（1+1），旋渦混勻2min。移至50mL離心管中，用20mL異辛烷洗滌燒杯，合并入離心管中。旋渦混勻1min，于5000r/min離心10min，取異辛烷層氮吹至2mL。6.2凈化取上述濃縮液加入8mL正己烷和10mL乙腈，于超聲波浴中超聲振搖5min。移至50mL離心管中，于5000r/min離心5min。移乙腈層于50mL離心管中。再用10mL乙腈提取一次，離心5min，合并乙腈層。加入20mL水，于60℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至約6mL，加入6mL水。取上述溶液緩慢注入經(jīng)預(yù)處理過的C18Sep－Pak小柱中，棄去流出液，減壓干燥。用3×5mL乙腈洗脫，收集洗脫液于具塞刻度離心管中。氮?dú)獯蹈桑?.0mL甲醇－乙腈－水溶液（9+9+2）溶解，待測(cè)。2DB13/T1384.9—2011表1梯度洗脫程序時(shí)間（min）0A（％）B（％）606090951010606040401051.002.0011.0011.1012.5012.6015.00909040606.3.2色譜測(cè)定根據(jù)試樣中被測(cè)樣液的含量情況，選取響應(yīng)值相近的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行色譜分析。標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣液中待測(cè)物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器線性響應(yīng)范圍內(nèi)。伊維菌素標(biāo)準(zhǔn)品多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）色譜圖見附錄A。6.4定性、定量按照液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件測(cè)定樣品和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，如果檢測(cè)的質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)品一致，定量測(cè)定時(shí)采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法。定性時(shí)應(yīng)當(dāng)與濃度相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的相對(duì)豐度一致，相對(duì)豐度允許偏差不超過表2規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在對(duì)應(yīng)的被測(cè)物。表2定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差除不加試樣外，均按上述操作步驟進(jìn)行。m——最終樣液代表的試樣質(zhì)量，單位為克（g）。