純培養(yǎng)和顯微技術(shù)

微生物的基本特點：??！在絕大多數(shù)情況下都是利用微生物的群體來研究其屬性；微生物的物種（菌株）一般也是以群體的形式進(jìn)行繁衍、保存；培養(yǎng)技術(shù)在微生物學(xué)中具有重要意義！在研究中所使用的微生物培養(yǎng)群體：培養(yǎng)物：在一定的條件下培養(yǎng)、繁殖得到的微生物群體混合培養(yǎng)物：含有多種微生物的培養(yǎng)物；純培養(yǎng)物：只有一種微生物的培養(yǎng)物；通常情況下只有純培養(yǎng)物才能提供可以重復(fù)的結(jié)果純培養(yǎng)技術(shù)是進(jìn)行微生物學(xué)研究的基礎(chǔ)！微生物個體微小的特點也決定了顯微技術(shù)是進(jìn)行微生物研究的另一項重要技術(shù)，因為絕大多數(shù)微生物的個體形態(tài)及其內(nèi)部結(jié)構(gòu)只能通過顯微鏡才能進(jìn)行觀察和研究。微生物的基本特點：小！第一節(jié)微生物的分離和純培養(yǎng)

從混雜的群體中分離特定的某一種微生物，是研究和利用微生物的第一步。一、無菌技術(shù)用于分離、培養(yǎng)微生物的器具事先不含任何微生物；在轉(zhuǎn)接、培養(yǎng)微生物時防止其它微生物的污染；其自身不污染操作環(huán)境1、微生物培養(yǎng)的常用器具及其滅菌常用的器具：試管、瓶子、培養(yǎng)皿等1887年，RJPetri發(fā)明

Petridish高溫干熱滅菌高壓蒸汽滅菌試管、瓶子、培養(yǎng)皿等常用的滅菌方法：1、微生物培養(yǎng)的常用器具及其滅菌常用的器具：無菌操作：火焰附近（酒精燈、煤氣燈）進(jìn)行無菌操作：在無菌箱或操作室內(nèi)無菌的環(huán)境下進(jìn)行二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基；固體培養(yǎng)基；半固體培養(yǎng)基；二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基；固體培養(yǎng)基；半固體培養(yǎng)基；瓊脂柯赫（RobertKoch）的助手WHeese和他的夫人FranHeese二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)菌落（colony）：

單個（或聚集在一起的一團(tuán)）微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長、繁殖到一定程度可以形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞生長群體（P13）眾多菌落連成一片菌苔（lawn）不同微生物在特定培養(yǎng)基上生長形成的菌落或菌苔一般都具有穩(wěn)定的特征（形狀、顏色等），可以成為對該微生物進(jìn)行分類、鑒定的重要依據(jù)（見P14圖2-3）。（P6圖2-3）同一細(xì)菌在不同的培養(yǎng)平板上形成不同的特征菌落二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)使微生物在固體培養(yǎng)基平板上形成單個菌落的基本方法：稀釋！二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)1、稀釋倒平板法2、涂布平板法操作較麻煩，對好氧菌、熱敏感菌效果不好！使用較多的常規(guī)方法，但有時涂布不均勻！二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)3、平板劃線法二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)3、平板劃線法二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)4、厭氧微生物的分離厭氧罐厭氧手套箱厭氧罐厭氧手套箱二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)4、厭氧微生物的分離稀釋搖管法三、用液體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)0.050.05+0.0025+0.004=0.975稀釋法進(jìn)行液體分離必須在同一個稀釋度的許多平行試管中，大多數(shù)（一般應(yīng)超過95%）表現(xiàn)為不生長。例如：若同一稀釋度的試管中有95%表現(xiàn)為不生長，則生長的試管中僅含一個細(xì)胞的幾率為：5%；含二個細(xì)胞的幾率為：0.25%；含三個細(xì)胞的幾率為：0.004%在有細(xì)菌生長的試管中得到純培養(yǎng)的幾率為97.5%四、單細(xì)胞（孢子）分離一般采用顯微操作儀，在顯微鏡下進(jìn)行；操作難度與細(xì)胞或個體的大小成反比；五、選擇培養(yǎng)分離抑制大多數(shù)其它微生物的生長；使待分離的微生物生長更快；使待分離的微生物在群落中的數(shù)量上升，方便用稀釋法對其進(jìn)行純化。微生物群落中數(shù)量占少數(shù)的微生物的分離純化：使待分離的微生物生長“突出”；直接挑取待分離的微生物的菌落獲得純培養(yǎng)。五、選擇培養(yǎng)分離1.利用選擇平板進(jìn)行直接分離待分離的微生物生長，其它微生物的生長被抑制高溫下培養(yǎng)：分離嗜熱細(xì)菌；培養(yǎng)基中不含N：分離固氮菌；培養(yǎng)基加抗生素：分離抗性菌；五、選擇培養(yǎng)分離1.利用選擇平板進(jìn)行直接分離待分離的微生物的生長特征明顯不同于其它微生物顏色反應(yīng)：分離特定的菌株；牛奶平板：分離蛋白酶產(chǎn)生菌；五、選擇培養(yǎng)分離2.富集培養(yǎng)從自然界中分離到所需的特定微生物特定的環(huán)境條件僅適應(yīng)于該條件的微生物旺盛生長待分離微生物在群落中的數(shù)量大大增加六、二元培養(yǎng)物培養(yǎng)物中只含有二種微生物，而且是有意識的保持二者之間的特定關(guān)系的培養(yǎng)物稱為二元培養(yǎng)物。病毒和宿主細(xì)胞；纖毛蟲、變形蟲和粘細(xì)菌；在一定時間內(nèi)使菌種不死、不變、不亂（參見P19）基本要求：基本方法：生活態(tài)休眠態(tài)培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)寄主傳代培養(yǎng)冷凍干燥斜面、平板液氮、低溫冰箱沙土管、冷凍真空干燥七、微生物的保藏技術(shù)第二節(jié)顯微鏡和顯微技術(shù)幾個基本概念：放大分辨率反差被觀察物越小，放大倍數(shù)應(yīng)越大，否則難以看清！能辨別兩點之間最小距離的能力被觀察物區(qū)別于背景的程度被觀察物區(qū)別于背景的程度與顯微鏡的自身特點有關(guān)，但也取決于進(jìn)行顯微觀察時對顯微鏡的正確使用及良好的標(biāo)本制作和觀察技術(shù)，這就是顯微技術(shù)。一、顯微鏡的種類及原理1.普通光學(xué)顯微鏡復(fù)式顯微鏡一、顯微鏡的種類及原理1.普通光學(xué)顯微鏡光學(xué)顯微鏡一般配置的最大放大倍數(shù)是多少？為什么？如何實現(xiàn)光學(xué)顯微鏡一般配置的最大放大倍數(shù)？其原理？目鏡：10~20╳；物鏡：100╳；總放大倍數(shù)1000~2000╳；使用油鏡，即在100╳物鏡和載玻片之間滴加香柏油；0.5l分辨率（最小可分辨距離）=————

nsinqλ：光波波長n：玻片與物鏡間介質(zhì)的折射率θ：為物鏡鏡口角的半數(shù)1.普通光學(xué)顯微鏡1.普通光學(xué)顯微鏡0.5l分辨率（最小可分辨距離）=————

nsinqq為物鏡鏡口角的半數(shù)，它取決于物鏡的直徑和工作距離1.普通光學(xué)顯微鏡0.5l分辨率（最小可分辨距離）=————

nsinqN：玻片與物鏡間介質(zhì)的折射率空氣(n=1.0)、水(n=1.33)、香柏油(n=1.52)、玻璃(n=1.54)普通光學(xué)顯微鏡又稱明視野顯微鏡其照明光線直接進(jìn)入視野，屬透射照明。一、顯微鏡的種類及原理2.暗視野顯微鏡一、顯微鏡的種類及原理3.相差顯微鏡4.熒光顯微鏡一、顯微鏡的種類及原理4.熒光顯微鏡一、顯微鏡的種類及原理一、顯微鏡的種類及原理5.透射電子顯微鏡；6.掃描電子顯微鏡一、顯微鏡的種類及原理5.透射電子顯微鏡；6.掃描電子顯微鏡一、顯微鏡的種類及原理7.掃描隧道顯微鏡本章小結(jié)

培養(yǎng)物、純培養(yǎng)物、無菌操作、菌落、菌苔稀釋倒平板法、涂布平板法、平板劃線法選擇培養(yǎng)分離、富集培養(yǎng)稀釋法、菌種保藏TEM、SEM、STM、AFM