碳水化合物代謝實(shí)驗(yàn)β半乳糖苷酶實(shí)驗(yàn)董慧講解_第1頁(yè)
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4.4.5碳水化合物代謝實(shí)驗(yàn)-β-半乳糖苷酶實(shí)驗(yàn)CARBOHYDRATEMETABOLISMTEST-BETA-GALACTOSIDASETEST董慧一、原理細(xì)菌分解乳糖靠?jī)煞N酶的作用，一種是β-半乳糖苷酶滲透酶，它位于細(xì)胞膜上，可運(yùn)送乳糖分子滲入細(xì)胞，另一種是β-半乳糖甘酶，亦稱乳糖酶，位于細(xì)胞內(nèi)，能使乳糖水解成半乳糖和葡萄糖。具有上述兩種酶的細(xì)菌，能在24-48h發(fā)酵乳糖，而缺乏此兩種酶的細(xì)菌，不能分解乳糖。乳糖遲緩發(fā)酵只有β-半乳糖甘酶而缺乏β-半乳糖苷酶滲透酶，因面乳糖進(jìn)入細(xì)胞很慢，需經(jīng)培養(yǎng)基中1%乳糖較長(zhǎng)時(shí)間的誘導(dǎo)，產(chǎn)生相當(dāng)數(shù)量的滲透酶后，才能較快分解乳糖，故呈遲緩發(fā)現(xiàn)象。若β-D-半乳糖苷（ONPG）可迅速進(jìn)入細(xì)菌細(xì)跑，被β-半乳糖苷酶水解，釋放出黃色的鄰硝基苯酚，培養(yǎng)液變黃可迅速得知β-半乳糖苷酶的存在，從面確定該菌為乳糖遲緩發(fā)酵菌。二、實(shí)驗(yàn)方法將待檢菌接種到1%乳糖肉湯瓊脂培養(yǎng)基上，35℃培養(yǎng)18-24h。用接種環(huán)取菌置于0.25ml無(wú)菌生理鹽水中制成菌懸液，加入1滴甲苯并充分振搖，使酶釋放。將試管置37℃水浴5mim，加入0.25mlONPG試劑，水浴20min~3h觀察結(jié)果。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果菌懸液呈現(xiàn)黃色為陽(yáng)性反應(yīng)，一般在20~30min內(nèi)顯色。四、應(yīng)用迅速及遲緩分解乳糖的細(xì)菌ONPG試驗(yàn)為陽(yáng)性，而不發(fā)酵乳糖的細(xì)菌為陰性。本實(shí)驗(yàn)主要用于遲緩發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒

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