（圖片大小可自由調(diào)整）2024年大學(xué)試題(醫(yī)學(xué))-分子診斷學(xué)考試近5年真題集錦（頻考類試題）帶答案第I卷一.參考題庫(共100題)1.病毒基因組存在（）A、基因重疊現(xiàn)象B、類核結(jié)構(gòu)C、斷裂基因D、質(zhì)粒E、可移動基因成分2.基因工程疫苗研究開發(fā)應(yīng)遵循的原則是什么？3.原核細胞和真核細胞轉(zhuǎn)錄的mRNA均具有與rRNA結(jié)合的SD序列，以利于進行有效的轉(zhuǎn)錄。4.下面哪種生物芯片不屬于微陣列芯片（）A、基因芯片B、蛋白芯片C、PCR反應(yīng)芯片D、芯片實驗室5.在RNA純化時，常使用的水飽和酚的pH值為（）A、3.5-4.0B、4.5-5.5C、6.0-7.5D、7.0-8.5E、9.0-10.06.一個典型的基因不包括（）A、增強子B、5′非編碼區(qū)C、3′非編碼區(qū)D、啟始密碼子E、終止密碼子7.蛋白質(zhì)組學(xué)的研究特點有哪些？8.T4DNA連接酶或TthDNA連接酶更容易識別哪類錯配（）A、連接缺口上游探針的5’末端B、連接缺口上游探針的3’末端C、連接缺口下游探針的5’末端D、連接缺口下游探針的3’末端E、以上都不是9.簡述變性高效液相色譜法檢測基因變異的優(yōu)點。10.DNA自動化測序系統(tǒng)中，最常用的標記物是（）A、熒光染料B、α-PC、γ-PD、生物素E、35S11.植入前遺傳學(xué)診斷（PGD）12.人工染色體載體必須具有的元件是（）。A、染色體端粒B、著絲粒C、自主復(fù)制序列D、以上三項全部13.下列哪些技術(shù)屬于分子影像技術(shù)（）A、UltrasoundB、SPECTC、MRID、CTE、PET14.甲型血友病基因倒位的分子檢測法（）A、限制性內(nèi)切酶MstⅡ切割法B、長距離PCR法（LD-PCR）C、多重PCRD、擴增產(chǎn)物變性聚丙烯酰胺凝膠電泳放射自顯影E、Southern印跡雜交法15.HGP研究的主要內(nèi)容不包括（）A、物理圖B、SNP圖C、連鎖圖D、序列圖E、遺傳圖16.下列有關(guān)重組DNA技術(shù)的敘述，正確的是（）A、重組DNA技術(shù)所用的工具酶是限制酶、連接酶和運載體B、所有的限制酶都只能識別一種特定的核苷酸序列C、選細菌作為重組質(zhì)粒的受體細胞是因為細菌繁殖快D、只要目的基因進入了受體細胞就能成功實現(xiàn)表達17.在純化核酸時往往含有少量共沉淀的鹽，常用下列哪種濃度的乙醇洗滌去除（）A、100%B、95%C、70~75%D、50~60%E、30~40%18.簡述酵母雙雜交系統(tǒng)的優(yōu)缺點。19.簡述長病毒末端重復(fù)序列的特點和作用。20.簡述常用的光學(xué)成像技術(shù)。21.下列哪項敘述不正確（）A、F質(zhì)粒的主要特征是帶有耐藥性基因B、R質(zhì)粒又稱抗藥性質(zhì)粒C、Col質(zhì)粒可產(chǎn)生大腸桿菌素D、F質(zhì)粒是一種游離基因E、R質(zhì)粒在基因克隆中應(yīng)用最多22.簡述化學(xué)法測定DNA序列的基本原理。23.臨床基因擴增中，弱陽性室內(nèi)質(zhì)控樣本發(fā)生失控，其原因可能是（）A、核酸提取中的丟失B、標本中擴增抑制物殘留C、擴增儀孔間溫度不均一D、Taq酶和/或逆轉(zhuǎn)錄酶失后E、擴增產(chǎn)物污染24.在定量PCR中，對原始模板準確定量的影響因素中，最大的是（）A、原始模板的量B、擴增效率C、循環(huán)次數(shù)D、擴增產(chǎn)物的量E、循環(huán)閾值25.感受態(tài)細胞（Competentcells）是一種處于（）狀態(tài)的細胞。一般通過（）來誘導(dǎo)大腸桿菌感受態(tài)的形成。26.黏性末端連接法，不僅操作方便，而且（）。A、產(chǎn)生新切點B、易于回收外源片段C、載體不易環(huán)化D、影響外源基因的表達27.影響PCR反應(yīng)的因素有哪些？28.如何有效地提高外源基因的表達效率？29.能對未知序列進行擴增的PCR是（）A、多重PCRB、巢式PCRC、原位PCRD、反向PCRE、不對稱PCR30.亨廷頓病IT15基因CAG常用的分子診斷方法（）A、限制性內(nèi)切酶MstⅡ切割法B、長距離PCR法（LD-PCR）C、多重PCRD、擴增產(chǎn)物變性聚丙烯酰胺凝膠電泳放射自顯影E、Southern印跡雜交法31.如何保證臨床基因擴增檢驗實驗室的質(zhì)量。32.蛋白質(zhì)組學(xué)的研究內(nèi)容有哪些？33.逆轉(zhuǎn)錄病毒編碼的基本結(jié)構(gòu)基因（）A、gag（編碼核心蛋白）B、pol（編碼逆轉(zhuǎn)錄酶等）C、rex（編碼rex調(diào)節(jié)蛋白）D、tax（編碼tax調(diào)節(jié)蛋白）E、env基因（編碼包膜蛋白）34.目前進行蛋白質(zhì)分離最有效的方法是（）。A、質(zhì)譜分析B、二維凝膠電泳C、酵母雙雜交技術(shù)D、DNase?I?足紋分析35.亨廷頓致病基因-IT15基因外顯子1的起始密碼子ATG下游17個密碼子處有一段多態(tài)性的三核甘酸重復(fù)序列，其為（）A、CCGB、CAAC、CGAD、CAGE、CGG36.（）影響DNA復(fù)性的因素。A、DNA的濃度B、DNA的大小和復(fù)雜性C、溫度D、離子強度37.有哪幾種反義核苷酸基因失活療法？簡述其原理。38.鐮狀細胞貧血分子診斷（）A、限制性內(nèi)切酶MstⅡ切割法B、長距離PCR法（LD-PCR）C、多重PCRD、擴增產(chǎn)物變性聚丙烯酰胺凝膠電泳放射自顯影E、Southern印跡雜交法39.人類免疫缺陷病毒的基因組（）A、雙鏈DNAB、單鏈DNAC、雙鏈RNAD、正鏈RNAE、負鏈RNA40.在重組DNA技術(shù)中，不常用到的酶是（）。A、限制性核酸內(nèi)切酶B、DNA?聚合酶C、DNA?連接酶D、DNA?解鏈酶41.等電聚焦凝膠電泳的原理是什么？42.電泳時EB加在瓊脂糖凝膠中一般會降低DNA在瓊脂糖凝膠電泳中的遷移率。43.基因工程誕生的理論基礎(chǔ)是什么？44.下列哪一種酶作用時需要引物？（）A、限制酶B、末端轉(zhuǎn)移酶C、反轉(zhuǎn)錄酶D、DNA連接酶45.基因工程的操作步驟：①使目的基因與運載體結(jié)合②將目的基因?qū)胧荏w細胞③檢測目的基因的表達④提取目的基因。正確的順序是（）A、③②④①B、②④①③C、④①②③D、③④①②46.黏粒（cosmid）是質(zhì)粒－噬菌體雜合載體，它的復(fù)制子來自（）、cos位點序列來自（），最大的克隆片段達到45kb。47.用于核酸分子雜交的探針不能是放射性標記的（）。A、DNAB、RNAC、抗體D、寡核苷酸48.非放射性探針檢測方法有（）A、直接法B、間接免疫法C、直接親合法D、間接親合法等49.基因序列經(jīng)堿基替代，缺失或插入后，可使遺傳信息產(chǎn)生三種不同的后果，分別為（）、（）、（）。50.CsCl2-EB法中在過量EB存在的下，超速離心后密度最大沉于管底的是（）A、蛋白質(zhì)B、帶切口的環(huán)狀或線性DNAC、RNAD、復(fù)合糖類E、閉環(huán)質(zhì)粒DNA51.下列哪些屬于染色體以外的遺傳因子（）A、轉(zhuǎn)座子B、病毒核酸C、細菌的質(zhì)粒D、高等植物的葉綠體E、轉(zhuǎn)位因子F、插入序列G、真核生物的線粒體52.敘述原核生物基因組的結(jié)構(gòu)特征。53.PCR檢測技術(shù)有何臨床應(yīng)用。54.限制性核酸內(nèi)切酶是由細菌產(chǎn)生的，其生理意義是（）。A、修復(fù)自身的遺傳缺陷B、促進自身的基因重組C、強化自身的核酸代謝D、提高自身的防御能力55.真核表達調(diào)控的順式作用元件有哪些？其作用特點是什么？56.入噬菌體的插入型載體只有一個單一限制酶切點，替換型載體有2個成對的限制性酶切點。57.操縱子結(jié)構(gòu)不存在（）A、細菌基因組中B、病毒基因組中C、真核生物基因組中D、大腸桿菌基因組中E、原核生物基因組中58.PCR反應(yīng)過程分為三個步驟，即（），（）和（）。59.試證明Ct值與模板DNA的起始拷貝數(shù)成反比。60.Klenow酶在（）情況下，呈現(xiàn)DNA聚合酶活性，在（）情況下呈現(xiàn)外切酶活性。61.載體的功能是（）。A、外源基因進入受體的搭載工具B、不能為外源基因提供整合能力C、不能提供復(fù)制能力D、不能為外源基因提供表達能力62.簡述CpG島與DNA甲基化調(diào)控。63.簡述bDNA信號放大系統(tǒng)的原理。64.PCR擴增阻礙突變系統(tǒng)檢測突變的原理是基于（）A、由于突變，限制性內(nèi)切酶識別位點變化，不能被切開B、由于突變，電泳遷移率發(fā)生變化C、連接酶不能連接與靶序列錯配的兩個DNA片段D、Taq酶不能延伸3’末端與靶序列錯配的引物E、以上都不是65.TaqMan探針采用的是（）A、熒光標記的探針B、生物素標記的探針C、同位素標記的探針D、SYBR?Green標記引物E、圓形探針66.下列有關(guān)連接反應(yīng)的敘述，錯誤的是（）。A、連接反應(yīng)的最佳溫度為37℃B、連接反應(yīng)緩沖體系的甘油濃度應(yīng)低于10%C、連接反應(yīng)緩沖體系的ATP濃度不能高于1mMD、接酶通常應(yīng)過量2-5倍67.從高溫嗜熱細菌中發(fā)現(xiàn)高溫DNApolymerase后，使得PCR技術(shù)得以廣泛應(yīng)用，在高溫下有活性的DNApolymerase有（）、（）、（）、（）。其中具有3’-5’外切活性的高溫DNApolymerase有（）和（）。68.簡述基因的特點和鑒別標準。69.下列哪種方法不是分離純化高分子量DNA的（）A、酚抽提法B、煮沸裂解法C、甲酰胺解聚法D、玻棒纏繞法E、異丙醇沉淀法70.簡述質(zhì)粒的概念和特性，常用的質(zhì)粒載體有哪幾種？71.有關(guān)DNA鏈末端終止法的不正確說法是（）A、需要ddNMPB、需要ddNTPC、dNTP：ddNTP的比例要合適D、需要放射性同位素E、需要dNTP72.外源基因在原核細胞中表達，常用的啟動子有（）、（）、（）、（）、（）和（）。73.PND和PGD的適應(yīng)癥（）A、有可能孕育出嚴重遺傳性疾病和先天性畸形胎兒的孕婦B、夫婦一方有某種遺傳病或曾生出過某種遺傳病患兒，或孕婦有X伴性隱性遺傳病家族史C、夫婦任何一方為染色體異常、染色體平衡移位和倒位攜帶者D、早孕階段曾服用過致畸藥物或曾有病毒感染史等致畸情況E、羊水過多或過少F、原因不明的多次流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)的孕婦G、胎兒發(fā)育遲緩H、未觸到正常的胎兒I、年齡超過35歲的孕婦等等74.常用的核酸探針熒光素標記物有（）A、異硫氰酸熒光素B、四乙基羅達明C、德克薩斯紅D、吲哚二羧菁等75.通過凝膠電泳法可對RNA分子完整性進行鑒定，提示無RNA的降解時應(yīng)（）A、28S?RNA的熒光強度約為18S的2倍B、18S?RNA的熒光強度約為28S的2倍C、5S?RNA的熒光強度約為18S的2倍D、5S?RNA的熒光強度約為28S的2倍E、28S?RNA的熒光強度約為5S的2倍76.目前研究蛋白質(zhì)間相互作用最常采用的方法是（）。A、質(zhì)譜分析B、二維凝膠電泳C、酵母雙雜交技術(shù)D、DNase?I?足紋分析77.肌營養(yǎng)不良癥分子診斷的常用方法（）A、限制性內(nèi)切酶MstⅡ切割法B、長距離PCR法（LD-PCR）C、多重PCRD、擴增產(chǎn)物變性聚丙烯酰胺凝膠電泳放射自顯影E、Southern印跡雜交法78.限制性內(nèi)切核酸酶的星活性是指（）。A、在非常規(guī)條件下，識別和切割序列也不發(fā)生變化的活性B、活性大大提高C、切割速度大大加快D、識別序列與原來的完全不同79.基因組最大的生物（）A、人B、某些藻類C、某些細菌D、某些顯花植物和兩棲類動物E、某些哺乳動物80.基因治療是把健康的外源基因?qū)耄ǎ〢、有基因缺陷的DNA分子中B、有基因缺陷的染色體中C、有基因缺陷的細胞器中D、有基因缺陷的細胞中81.變性高效液相色譜法可分離（）A、單鏈DNA分子B、雙鏈DNA分子C、環(huán)狀DNA分子D、超螺旋DNA分子E、部分雙鏈DNA分子82.（）影響核酸分子雜交的因素。A、DNA的濃度B、DNA的大小和復(fù)雜性C、溫度D、離子強度83.A.基因重疊現(xiàn)象B.類核結(jié)構(gòu)C.斷裂基因D.質(zhì)粒E.可移動基因成分原核生物具有（）84.細菌的移動基因存在著三種類型的轉(zhuǎn)位因子包括（）、（）、（）。85.作為一種遺傳標記，人類短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）的主要用途有哪幾個方面？86.下列技術(shù)中，不能用來檢測溶液中蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)是（）。A、核磁共振B、圓二色譜法C、氫同位素交換法D、小角中子衍射法87.α珠蛋白基因由α類基因或假基因組成，以下那一個不是假基因（）A、ψζB、ψα1C、ψα2D、ζE、以上均不是88.能使擴增靈敏度提高的方法是（）A、多重PCRB、巢式PCRC、原位PCRD、反向PCRE、不對稱PCR89.紫外分光光度法對DNA進行測定中，下列哪項是正確的（）A、DNA的最大吸收波長為280nmB、A260為1的光密度大約相當于50μg/ml雙鏈DNAC、A260為1的光密度大約相當于40μg/ml雙鏈DNAD、A260為1的光密度大約相當于33μg/ml雙鏈DNAE、A260/A280大于2.090.何謂線粒體??？簡述線粒體病的遺傳學(xué)分類。91.能夠引起遺傳性視神經(jīng)病的線粒體病遺傳學(xué)分類類型是（）A、點突變B、mt?DNA的大規(guī)模缺失C、mt?DNA的大規(guī)模插入D、源于核DNA缺陷引起mtDNA缺失92.cDNA文庫包括該種生物的（）。A、某些蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因B、所有蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因C、所有結(jié)構(gòu)基因D、內(nèi)含子和調(diào)控區(qū)93.Northern印跡技術(shù)是（）A、檢測RNA的核酸雜交技術(shù)B、是以發(fā)明者的名字命名的C、屬于固相雜交的范疇D、與Southern印跡雜交的方法類似，只是變性劑不同94.Maxam-Gilbert化學(xué)降解法測序時，從測序膠上直接讀出的序列是用于測序的模板的互補序列。95.分離與純化mRNA可采用下列哪種方法（）A、oligo（dT）-纖維素柱層析法B、oligo（dA）-纖維素液相結(jié)合離心法C、oligo（U）-濾紙法D、oligo（dC）-纖維素柱層析法E、oligo（dG）-纖維素液相結(jié)合離心法96.下列生物體的細胞基因組哪些會有斷裂基因？（）A、大腸桿菌B、乙肝病毒C、人D、噬菌體97.簡述分子影像在分子診斷中的應(yīng)用。98.質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)特點有（）A、以環(huán)狀雙鏈DNA分子存在B、質(zhì)粒DNA有超螺旋結(jié)構(gòu)C、以環(huán)狀單鏈DNA分子存在D、質(zhì)粒DNA有半開環(huán)結(jié)構(gòu)E、以環(huán)狀雙鏈RNA分子存在F、質(zhì)粒DNA有線性結(jié)構(gòu)G、以線性雙鏈DNA分子存在99.A260/A280100.試述質(zhì)粒的類型有哪些？第I卷參考答案一.參考題庫1.參考答案：A2.參考答案： （1）不能或難于培養(yǎng)的的病原體如乙型肝炎病毒（HBV），丙型肝炎病毒（HCV），戊型肝炎病毒（HEV），EB病毒（Epstein-Barr病毒，EBV），巨細胞病毒（CMV），人乳頭瘤病毒（HPV），麻風(fēng)桿菌，疾原蟲、血吸蟲等。 （2）有潛在致癌性或免疫病理作用的病原體，前者如1型嗜人T淋巴細胞病毒（HTLV-I），人免疫缺損病毒（HIV），單純皰疹病毒（HSV），還有EBV、CMV、HPV等。后者如呼吸道合胞病毒（RSV），登革熱病毒（DGV），腎綜合征出血熱病毒（HFRSV）。 （3）常規(guī)疫苗免疫效果差，如霍亂和痢疾菌苗；或者反應(yīng)大，如百日咳和傷寒菌苗。 （4）能大大節(jié)約成本，簡化免疫程序的多價疫苗，如以痘苗病毒，腺病毒，卡介苗或沙門氏菌為載體的多價活疫菌。3.參考答案：錯誤4.參考答案：C5.參考答案：B6.參考答案：A7.參考答案： ①整體性；②揭示生命的動態(tài)性過程；③體現(xiàn)生命現(xiàn)象的復(fù)雜性。8.參考答案：B9.參考答案： DHPLC突變檢測技術(shù)與其它方法相比，具有更高的準確性和敏感性。 （1）DHPLC與各種電泳法的比較SSCP分析片段長度10.參考答案：A11.參考答案：植入前遺傳學(xué)診斷主要是指在顯微操作下從體外受精發(fā)育至6～8個細胞期的胚胎中，活檢1～2個卵裂球細胞或直接獲取受精前后的極體，通過聚合酶鏈式反應(yīng)或熒光原位雜交，進行快速遺傳學(xué)診斷，選擇正常胚胎植入宮內(nèi)，從而獲得健康胎兒。12.參考答案：D13.參考答案：B,C,E14.參考答案：B15.參考答案：B16.參考答案：B17.參考答案：C18.參考答案： 酵母雙雜交系統(tǒng)所具有的優(yōu)點：①蛋白質(zhì)作為被研究的對象不用被純化；②檢測在活細胞內(nèi)進行，可以在一定程度上反映體內(nèi)（細胞內(nèi)）的真實情況；③由于這一系統(tǒng)可以反映基因表達產(chǎn)物的累積效應(yīng)，因而可檢測存在于蛋白質(zhì)之間微弱或短暫的相互作用；④采用不同組織、器官、細胞類型和分化時期材料構(gòu)建cDNA文庫，可用于分析多種不同功能的蛋白。 局限性：①雙雜交系統(tǒng)分析蛋白間的相互作用定位于細胞核內(nèi)，而許多蛋白間的相互作用依賴于翻譯后加工如糖基化、二硫鍵形成等，這些反應(yīng)在核內(nèi)無法進行。②由于某些蛋白本身具有激活轉(zhuǎn)錄功能或在酵母中表達時發(fā)揮轉(zhuǎn)錄激活作用，從而引起報告基因的表達，產(chǎn)生“假陽性”結(jié)果。③雙雜交只是反映蛋白質(zhì)間能發(fā)生作用的可能性，這種可能還必須經(jīng)過其他實驗驗證，尤其要與生理功能研究相結(jié)合，否則可能會誤入歧途。19.參考答案：逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組RNA在逆轉(zhuǎn)錄后生成的雙鏈DNA中，兩端有長末端重復(fù)序列（longterminalrepeat，LTR）結(jié)構(gòu)。LTR在結(jié)構(gòu)與功能上與上述重復(fù)序列不同。LTR中的重復(fù)序列只占一部分，另外還包括單一序列。5＇端的LTR包含許多特定的基因表達調(diào)控區(qū)域，是一組真核生物增強子和啟動子單位，而3＇端的LTR具有轉(zhuǎn)錄終止的作用。另外，逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組利用LTR中的重復(fù)序列形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)，在整合酶作用下整合入宿主細胞基因組內(nèi)。20.參考答案： 目前的光學(xué)成像技術(shù)主要包括熒光（fluorescence）和生物發(fā)光（bioluminescence）兩種技術(shù)。 熒光成像技術(shù)常用GFP、RFP及等近紅外線（NIR）熒光素基因為報告基因。NIR熒光素是目前熒光成像研究的熱點。將NIR熒光素與傳送載體通過一段蛋白酶特異性肽段連接起來就形成了NIR探針。在原始狀態(tài)由于存在熒光共振能量轉(zhuǎn)移作用，NIR熒光素不發(fā)出熒光信號。當出現(xiàn)靶向蛋白水解酶將特異性肽底物降解時，熒光素與傳送載體分離，熒光淬滅作用消失，NIR熒光素即釋放出高達幾百倍的熒光。通過這類探針能活體無創(chuàng)性檢測多種蛋白酶的活性及疾病早期的病理現(xiàn)象，還能評價治療效果。有點是組織穿透能力較強（可達數(shù)cm），影像信噪比較高。 生物發(fā)光成像技術(shù)主要有兩類報告基因：蟲熒光素酶基因和Renilla蟲熒光素酶基因，底物分別為蟲熒光素和coelenterazine。通過分子克隆技術(shù)將熒光素酶基因插入靶基因，即可將所需研究的基因或細胞標記上熒光素酶，將標記好的細胞注入小鼠體內(nèi)后，?觀測前通過腹腔或靜脈注射導(dǎo)入熒光素酶的底物—熒光素，即可在幾分鐘內(nèi)產(chǎn)生發(fā)光現(xiàn)象。其優(yōu)點是無自發(fā)熒光，所得影像的信噪比高，因此檢測的敏感性與特異性均較高，目前被廣泛應(yīng)用于小動物全身成像。21.參考答案：A22.參考答案：化學(xué)法是對待測DNA進行化學(xué)降解。在化學(xué)法的測序系統(tǒng)中，先對待測DNA末端進行放射性標記，然后分成4組或5組互為獨立的化學(xué)反應(yīng)體系，每一組用不同的化學(xué)試劑特異地針對某一種或某一類堿基進行化學(xué)切割，通過化學(xué)降解后產(chǎn)生長短不一的DNA片段，其長度取決于改組反應(yīng)所針對的堿基在待測DNA片斷中的位置，將各組反應(yīng)產(chǎn)物通過高分辨率的變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，放射自顯影檢測后直接識讀待測DNA的序列。23.參考答案：A,B,D,E24.參考答案：B25.參考答案：容易接受外源DNA片段；CaCl2法26.參考答案：C27.參考答案：PCR反應(yīng)體系包含DNA模板、寡核苷酸引物、DNA聚合酶、dNTP及含有必需離子的反應(yīng)緩沖液，這些因素都對PCR反應(yīng)產(chǎn)生影響。28.參考答案： ⑴提高啟動子強度。 ⑵縮短啟動子同克隆基因間距離。 ⑶高效的翻譯起始序列。 ⑷高效的轉(zhuǎn)錄終止區(qū)。 ⑸提高質(zhì)?？截悢?shù)及穩(wěn)定性。 ⑹用以下方法提高翻譯水平：①調(diào)整SD序列與AUG間的距離②用點突變的方法改變某些堿基③增加mRNA的穩(wěn)定性的。 ⑺減輕細胞的代謝負荷：①誘導(dǎo)表達②表達載體的誘導(dǎo)復(fù)制。 ⑻提高表達蛋白的穩(wěn)定性，防止其降解：①克隆一段原核序列，表達融合蛋白②采用某種突變菌株③表達分泌蛋白質(zhì)。29.參考答案：D30.參考答案：D31.參考答案：臨床基因擴增檢驗實驗室的常規(guī)測定由一系列步驟組成，包括樣本收集、樣本處理（核酸提?。?、核酸擴增、產(chǎn)物檢測結(jié)果報告及解釋等。室內(nèi)質(zhì)量控制僅涉及樣本處理、核酸擴增和產(chǎn)物分析等測定分析步驟，而室間質(zhì)量評價則除了監(jiān)測測定分析步驟外，還包括較大范圍的實驗室活動，諸如樣本接收中的可靠性、結(jié)果報告及解釋等。QA則是覆蓋更廣范圍的活動，包括樣本收集、結(jié)果報告和解釋等。32.參考答案：蛋白質(zhì)組學(xué)的研究包括兩個方面：一是針對蛋白質(zhì)表達模式的研究，一是在蛋白質(zhì)功能模式方面的深入分析。33.參考答案：A,B,E34.參考答案：B35.參考答案：D36.參考答案：A,B,C,D37.參考答案： （1）將特異的反義基因重組到表達載體上（病態(tài)載體或質(zhì)粒），導(dǎo)入靶細胞中轉(zhuǎn)錄出反義RNA，形成雙鏈RNA（RNA/RNA雙鏈體），阻礙基因的翻譯。 （2）人工合成寡聚脫氧核糖核酸（ODN）經(jīng)過化學(xué)修飾導(dǎo)入細胞，與mRNA和DNA結(jié)合，形成RNA/DNA雜鏈或DNA核苷酸三聚體，影響基因的翻譯或轉(zhuǎn)錄。 （3）特異性的核酶，根據(jù)癌基因設(shè)計出特異的“錘頭”或“發(fā)夾”結(jié)構(gòu)，它能夠催化切割，降解異常表達基因的mRNA而影響基因的翻譯。38.參考答案：A39.參考答案：D40.參考答案：D41.參考答案：依據(jù)蛋白質(zhì)分子的凈電荷或等電點進行分離的技術(shù)。在等電聚焦過程中，電場所采用的載體兩性電解質(zhì)含有脂肪族多氨基多羧酸，可在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續(xù)pH梯度，蛋白質(zhì)分子在一個載體兩性電解質(zhì)（ampholyte）形成的連續(xù)而穩(wěn)定的線性pH梯度中電泳，當?shù)鞍踪|(zhì)遷移到其等電點位置時，凈電荷為零，在電場中不再移動，因此可將各種不同等電點性質(zhì)的蛋白質(zhì)分離開來。42.參考答案：正確43.參考答案： 是現(xiàn)代分子生物學(xué)領(lǐng)域理論上的三大發(fā)現(xiàn)和技術(shù)上的三大發(fā)明。理論上的三大發(fā)現(xiàn)： 1.證實了DNA是遺傳物質(zhì)。 2.揭示了DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型和半保留復(fù)制機理。 3.遺傳密碼的破譯和遺傳信息傳遞方式的確定。 技術(shù)上的三大發(fā)明：①限制核酸內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)與DNA切割②DNA連接酶的發(fā)現(xiàn)與DNA片段的連接③基因工程載體的研究與應(yīng)用。44.參考答案：C45.參考答案：C46.參考答案：質(zhì)粒；噬菌體47.參考答案：C48.參考答案：A,B,C,D49.參考答案：同義突變；錯義突變；無義突變50.參考答案：C51.參考答案：A,C,D,E,F,G52.參考答案：在原核生物基因組中只有一個DNA復(fù)制起點?；蚪MDNA通常是由一條環(huán)狀雙鏈DNA（doublestrandedDNA，dsDNA）分子組成?；蚪MDNA與支架蛋白和RNA結(jié)合在一起，以復(fù)合體的形式存在。廣泛存在操縱子結(jié)構(gòu)。操縱子結(jié)構(gòu)是原核生物基因組的功能單位，在原核基因調(diào)控中具有普遍的意義。原核生物的結(jié)構(gòu)基因多數(shù)是單拷貝的并且結(jié)構(gòu)基因中沒有內(nèi)含子成分。編碼順序一般不重疊。具有編碼同工酶的不同基因?；蚪M中編碼區(qū)所占比例為50﹪，不編碼區(qū)中常常含有基因表達調(diào)控的序列。基因組DNA分子中存在多種功能的識別區(qū)域，這些區(qū)域經(jīng)常有反向重復(fù)序列存在，并能形成特殊的結(jié)構(gòu)。原核生物基因組存在著可移動的DNA序列，這些可移動的DNA序列，通過不同的轉(zhuǎn)移方式發(fā)生基因重組，使生物體更適應(yīng)環(huán)境的變化。53.參考答案：（1）PCR在病原微生物的檢測中的應(yīng)用；（2）PCR在遺傳病中的應(yīng)用；（3）PCR在腫瘤中的應(yīng)用；（4）其它方面的應(yīng)用：PCR技術(shù)除用于臨床診斷和治療外，還可用于DNA指紋、個體識別、親子關(guān)系識別、法醫(yī)物證等。54.參考答案：D55.參考答案： 順式作用元件為一些能與DBP結(jié)合的特定序列的DNA片段，決定轉(zhuǎn)錄起始位點和RNA聚合酶的轉(zhuǎn)錄效應(yīng)，按功能可分為啟動子、增強子、沉默子、衰減子和終止子等DNA序列片段。 啟動子：真核基因啟動子是基因表達時與基因轉(zhuǎn)錄起始有關(guān)的5’端DNA序列，包括在-30bp區(qū)富含有AT的典型TATA盒（框）（TATA?box）和在-70～-80bp區(qū)域（在TATA?box上游）啟動元件。前者是引導(dǎo)RNA聚合酶Ⅱ在正確起始位點轉(zhuǎn)錄mRNA所必需的DNA序列，即保證轉(zhuǎn)錄的精確起始。后者UPE是調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄起始頻率和提高轉(zhuǎn)錄效率的調(diào)控序列，后者的序列常為GGTCAAT和GGGCCC序列，稱為GC?box，它們經(jīng)協(xié)同作用，以調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄效率。 增強子：增強子是使啟動子的基因轉(zhuǎn)錄效率顯著提高（增強轉(zhuǎn)錄活性）的一類順式作用元件，其本身不具有啟動子活性，是由多個獨立的，具有特征性的核苷酸序列所組成。其基本的核心組件常由812bp組成，以單拷貝或多拷貝串聯(lián)的形式存在。增強子一般有以下特性：⑴增強子能提高同一條DNA鏈上基因轉(zhuǎn)錄的速率；⑵增強子對同源或異源基因都有效?⑶增強子的位置可在基因5’上游、3’下游或內(nèi)部；⑷無方向性，增強子從5’→3’或是從3’→5’均可對啟動子發(fā)揮作用；⑸增強子可遠離轉(zhuǎn)錄起始點；⑹增強子一般無基因特異性，對各種基因啟動子均有作用，但具有組織或細胞特異性。 典型的增強子首先發(fā)現(xiàn)于SV40的病毒中，為SV40的早期基因增強子，約200bp，含2個72bp的重復(fù)序列，位于早期啟動子上游，增強子可促使病毒基因轉(zhuǎn)錄效率提高100倍，因此具有這一增強子的載體已得到了廣泛的應(yīng)用。些年來，來自于Rous肉瘤病毒基因長末端重復(fù)序列和人類巨細胞病毒（CMV）增強子也已被廣泛用于真核細胞的基因表達。增強子能增強啟動子的轉(zhuǎn)錄能力，有效的增強子能促進轉(zhuǎn)錄達10倍或100倍以上，在某些情況下，表達產(chǎn)物可能具有細胞毒效應(yīng)。因此，最好使用一種可被外界刺激信號誘導(dǎo)表達外源基因的誘導(dǎo)型啟動子，誘導(dǎo)型啟動子有熱休克啟動子、金屬硫蛋白啟動子、糖皮質(zhì)激和固醇類激素誘導(dǎo)的啟動子，熱休克啟動子的誘導(dǎo)可通過提高細胞的培養(yǎng)溫度使啟動子轉(zhuǎn)錄水平提高，重金屬離子可有效地促進金屬硫蛋白啟動子的轉(zhuǎn)錄活性。 R.NA剪接信號：多數(shù)高等的真核基因都含有內(nèi)含子序列，在細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的前體mRNA要經(jīng)過剪接過程去掉內(nèi)含子順序后才成為成熟的mRNA分子。雖然許多基因的cDNA轉(zhuǎn)入哺乳類動物細胞后，其表達不受有或無內(nèi)含子的影響，但有些基因在真核細胞中表達需要有內(nèi)含子的存在。一般來說，在哺乳動物細胞的表達載體中最好有一段內(nèi)含子序列的剪接信號，以提供外源基因cDNA表達的需要。常用的內(nèi)含子剪接序列有SV40的小t抗原的內(nèi)含子序列等。 負調(diào)控元件：沉默子和衰減子是抑制基因轉(zhuǎn)錄的DNA序列，稱為負調(diào)控元件，它們與反式作用因子相互結(jié)合而起作用。這些負調(diào)控元件不受距離和方向的限制，并可對異源基因表達起作用。 終止子和polyA信號：核基因轉(zhuǎn)錄的確切終止信號和終止機制，目前尚不清楚，終止過程不是在RNA聚合酶指導(dǎo)下完成的，在不明機制下發(fā)生轉(zhuǎn)錄終止?，F(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)模板DNA分子的3’端有轉(zhuǎn)錄終止信號序列，稱終止子。通常由轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的具有polyA尾的基因終止信號是在多聚腺苷酸化位點下游的一段長度為數(shù)百個堿基的DNA區(qū)域內(nèi)的G/T簇，例如在SV40中的AGGTTTTTT的DNA序列為終止轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件。一般轉(zhuǎn)錄終止子為發(fā)夾結(jié)構(gòu)的反向重復(fù)序列?，F(xiàn)在基因工程表達載體上所使用的轉(zhuǎn)錄終止子都是病毒基因或細胞基因的3’端的一段序列，其中也包括3’端不翻譯區(qū)。如SV40小t抗原和β-球蛋白的轉(zhuǎn)錄終止片段常用于構(gòu)建真核基因表達載體。 在雙啟動子的表達載體中，啟動子的轉(zhuǎn)錄方向為同向時，上游啟動的轉(zhuǎn)錄由于會穿過下游啟動子，這樣就使得下游的轉(zhuǎn)錄受到極大的影響，造成下游轉(zhuǎn)錄水平的下降，但是如果在兩個啟動子間插入一個轉(zhuǎn)錄終止子后，上游啟動子對下游啟動子的影響就被消除了，這樣下游啟動子的表達量會有明顯提高。當兩個啟動轉(zhuǎn)錄方向相反時，基因表達可能會被轉(zhuǎn)錄形成的反義RNA所抑制，這時插入轉(zhuǎn)錄終止子將會消除這種抑制作用。56.參考答案：正確57.參考答案：C58.參考答案：變性；退火；延伸59.參考答案： 一般來說，第n次PCR循環(huán)的熒光信號強度（Rn）等于背景信號強度（RB）加上每個分子的熒光強度（即單位熒光強度RS與分子數(shù)目的乘積），用數(shù)學(xué)式表示如下：Rn=RB+XO（1+Ex）nRs式中：Rn代表熒光信號強度；RB代表背景信號強度；Xo代表起始模板拷貝數(shù)；Ex代表擴增效率；Rs代表單位熒光強度；N代表循環(huán)次數(shù)。 對每一個特定的PCR反應(yīng)來說，Ex、RT、RB、和Rs都是常數(shù)，所發(fā)Ct值與lgXo成反比，也就是說，Ct值與起始模板DNA的拷貝數(shù)（Xo）的對數(shù)成反比，起始DNA濃度每增一倍，Ct值減小一個循環(huán)。因此，Ct值的引入確保了實時熒光PCR定量的精確和嚴格。60.參考答案：有dNTP；沒有dNTP61.參考答案：D62.參考答案： 大約有一半的人類基因富含CpG的順序，稱為CpG島（CpGisland），CpG島常位于轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)或其附近，主要存在于看家基因和一些組織特異性表達基因。在正常組織，除印記基因和失活的X染色體外，包括啟動子區(qū)在內(nèi)的基因5′端CpG島大部分是非甲基化的。DNA甲基化與基因表達呈負相關(guān)，DNA甲基化調(diào)控基因表達直接的機制可能是因為甲基從DNA分子的大溝中突出，阻止了轉(zhuǎn)錄因子與基因相互作用，還可能直接抑制RNA聚合酶活性而抑制基因的表達。間接的機制包括兩種類型：①與甲基化DNA結(jié)合蛋白結(jié)合；②改變?nèi)旧|(zhì)結(jié)構(gòu)，這都間接阻礙轉(zhuǎn)錄因子與DNA結(jié)合而抑制轉(zhuǎn)錄。DNA甲基化對胚胎發(fā)育非常重要，與X染色體失活，基因組印記，特別是腫瘤密切相關(guān)。63.參考答案： 分枝DNA是人工合成的帶有側(cè)鏈的DNA片段，在每個側(cè)鏈上都可以標記可被激發(fā)的標記物。以bDNA為基礎(chǔ)建立的連續(xù)放大DNA信號以檢測DNA的技術(shù)稱為分枝DNA信號放大系統(tǒng)。 bDNA信號放大系統(tǒng)包括四種雜交探針，即目標探針、前放大體、?放大體和標記探針。首先用親和素包被微孔，加入目標探針，該組探針能與等檢核酸靶序列上不同區(qū)域互補，其5′端用生物素標記，能與微孔中的親和素高度親和結(jié)合；再向微孔中加入待測標本，目標核酸與固定于微孔中的目標探針結(jié)合；再加入前放大體，該組探針的一段能與目標核酸的不同區(qū)域互補結(jié)合，另一段與放大體（即分枝DNA）的主鏈部分的序列互補結(jié)合，分枝DNA由主鏈和數(shù)十根寡核苷酸組成，每個分枝上都有標記探針的雜交位點，由酶標寡核苷酸組成的標記探針與bDNA上的互補序列結(jié)合，加入底物后最后經(jīng)化學(xué)發(fā)光檢測儀檢測。利用bDNA信號放大系統(tǒng)可在每個靶序列上結(jié)合60～300個酶分子，而且所有雜交反應(yīng)同時進行，觀察到的信號與靶DNA的量成正比，可通過標準曲線將靶DNA定量。64.參考答案：D65.參考答案：A66.參考答案：A67.參考答案：TaqDNA聚合酶；TthDNA聚合酶；VentDNA聚合酶；PwoDNA聚合酶；DNA聚合酶；PwoDNA聚合酶；PfuDNA聚合酶68.參考答案：對于數(shù)量很少的編碼tRNA、rRNA和某些小分子RNA的基因，我們較易通過核酸序列加以判斷。而對于數(shù)量極大的蛋白質(zhì)編碼基因，目前可根據(jù)其特點使用五項標準來鑒別：①開放閱讀框（openreadingframe，ORF）；②序列特征和密碼子偏愛；③序列保守性；④轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物；⑤基因失活。但這些標準使用