1肌紅蛋白檢測試劑（盒）（免疫熒光層析法）本文件規(guī)定了肌紅蛋白檢測試劑（盒免疫熒光層析法）的技術(shù)要求、試驗(yàn)方法、標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸和貯存。本文件適用于檢測人血清/血漿/全血中的肌紅蛋白含量，臨床上主要用于心肌梗死的輔助診斷。本文件適用于以雙抗體夾心法為原理免疫層析方法定量測定肌紅蛋白的試劑盒。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用文件而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T191包裝儲運(yùn)圖示標(biāo)志GB/T29791.2體外診斷醫(yī)療器械制造商提供的信息（標(biāo)示）第2部分：專業(yè)用體外診斷試劑3術(shù)語及定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4技術(shù)要求4.1外觀試劑各組分應(yīng)齊全、完整，液體無滲漏；包裝標(biāo)簽應(yīng)清晰，易識別。4.2膜條寬度應(yīng)不低于2.5mm。4.3試劑量應(yīng)不低于標(biāo)示量。4.4液體移行速度應(yīng)不低于10mm/min。4.5準(zhǔn)確度4.5.1總則可選用相對偏差法和回收試驗(yàn)法兩種方法之一進(jìn)行驗(yàn)證（如適用，優(yōu)先采用相對偏差的方法）。4.5.2相對偏差2用可用于評價常規(guī)方法的有證參考物質(zhì)（CRM）或其它公認(rèn)的參考物質(zhì)作為樣本進(jìn)行檢測，其測量結(jié)果的相對偏差應(yīng)不超過±15%。4.5.3回收試驗(yàn)將已知濃度的待測物加入到臨床樣本基質(zhì)中，其回收率應(yīng)在80%～120%之間。4.6最低檢出限應(yīng)不高于10ng/mL。4.7線性在所規(guī)定的（10～300）ng/mL區(qū)間內(nèi)，試劑線性相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不低于0.9900。4.8重復(fù)性變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于15.0%。4.9批間差變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于15.0%。4.10特異性分別測定濃度為10mg/mL的血紅蛋白，測量結(jié)果應(yīng)不高于最低檢出限。4.11穩(wěn)定性4.11.1總則可對效期穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性進(jìn)行驗(yàn)證。4.11.2效期穩(wěn)定性制造商應(yīng)規(guī)定試劑（盒）的有效期。取效期末的試劑（盒）檢測其試劑準(zhǔn)確度、最低檢出限、線性、重復(fù)性和特異性，應(yīng)符合4.5～4.8、4.10的要求。4.11.3熱穩(wěn)定性取有效期內(nèi)的試劑（盒）根據(jù)制造商所聲稱的熱穩(wěn)定條件，檢測其試劑準(zhǔn)確度、最低檢出限、線性、重復(fù)性和特異性，應(yīng)符合4.5～4.8、4.10的要求。注1：熱穩(wěn)定試驗(yàn)不能用于推導(dǎo)產(chǎn)品有效期，除非是采用基于大量的穩(wěn)定性注2：一般地，效期為1年時選擇不超過1個月的產(chǎn)品，效期為半年時選擇不超過半個月注3：根據(jù)產(chǎn)品特性可選擇4.11.2、4.11.3方法的任意組合，但所選用方法宜能驗(yàn)證產(chǎn)5試驗(yàn)方法5.1外觀正常視力目測檢查，其結(jié)果應(yīng)符合4.1的要求。5.2膜條寬度3用游標(biāo)卡尺測量試紙條的寬度，其結(jié)果應(yīng)符合4.2的要求。5.3試劑量用通用量具測量，其結(jié)果應(yīng)符合4.3的要求。5.4液體移行速度取檢測卡/試紙條，在加樣端加入待檢樣本，從樣本浸入試紙開始用秒表計時，直至液體達(dá)到反應(yīng)區(qū)末端時停止計時，所用時間記為（t測量反應(yīng)區(qū)的長度記為(L)，計算L/t即為移行速度，重復(fù)測量2次，取平均值，其結(jié)果應(yīng)符合4.4的要求。5.5準(zhǔn)確度5.5.1相對偏差試劑（盒）測試可用于評價常規(guī)方法的有證參考物質(zhì)（CRM）或其它公認(rèn)的參考物質(zhì)3次，測試結(jié)果記為（xi分別計算相對偏差（Bi如果3次結(jié)果的相對偏差均不超過±15%，即判為合格。如果大于等于2次的結(jié)果不符合，即判為不合格。如果有1次結(jié)果不符合要求，則應(yīng)重新連續(xù)測試20次，并分別按照式（1）計算相對偏差，如果大于等于19次測試結(jié)果的相對偏差均不超過±15%，即判為合格。其結(jié)果應(yīng)符合4.5.2的要求。Bi=100%…（1）式中：xi——測試結(jié)果；T——有證參考物質(zhì)標(biāo)示值。5.5.2回收試驗(yàn)將濃度約為50ng/mL（允許其濃度偏差為±20%）的肌紅蛋白樣本A加入到濃度范圍在（0.1～1）ng/mL的血清B中，所加入樣本A與血清B之間的體積比為1：9，每個濃度重復(fù)測定3次，根據(jù)式（2）計算回收率（R），其結(jié)果應(yīng)符合4.5.3的要求。R=100%式中：R——回收率；V——加入A液體積；V0——血清樣品B的體積；C——血清樣品加入A液后的檢測濃度；C0——血清樣品B的檢測濃度；CS——A液的濃度?！?.6最低檢出限對5份濃度近似最低檢出限的肌紅蛋白低值樣本進(jìn)行檢測，每份樣本檢測5次，對檢測結(jié)果按照大小進(jìn)行排序，低于制造商提供的空白限數(shù)值的檢測結(jié)果的數(shù)量應(yīng)不大于3個，即可認(rèn)為制造商提供的空白限和檢出限的設(shè)置基本合理，其結(jié)果應(yīng)符合4.6的要求。45.7線性將接近線性區(qū)間上限的肌紅蛋白高值樣本按一定比例稀釋為至少5個濃度，其中低值濃度的樣本須接近線性區(qū)間的下限。用試劑盒將每一濃度重復(fù)檢測2次，分別求出檢測結(jié)果的均值（yi）。以稀釋比例(xi)為自變量，以檢測結(jié)果均值（yi）為因變量求出線性回歸方程。計算線性回歸的相關(guān)系數(shù)（r其結(jié)果應(yīng)符合4.7的要求。5.8重復(fù)性用同一批號試劑盒檢測高、低兩種不同濃度的質(zhì)控品，各重復(fù)檢測10次，分別計算10次檢測結(jié)果的平均值M和標(biāo)準(zhǔn)差SD，根據(jù)公式CV=SD/M×100%得出變異系數(shù)CV，其結(jié)果應(yīng)符合4.8的要求。5.9批間差取三個批號試劑分別檢測高、低兩種不同濃度的質(zhì)控品，各重復(fù)檢測10次，分別計算30次檢測結(jié)果的平均值M和標(biāo)準(zhǔn)差SD，根據(jù)公式CV=SD/M×100%得出變異系數(shù)CV，其結(jié)果應(yīng)符合4.9的要求。5.10特異性分別在不含任何分析物的樣本中加入濃度10mg/mL的血紅蛋白，各重復(fù)測定3次，其結(jié)果應(yīng)符合4.10的要求。5.11穩(wěn)定性5.11.1效期穩(wěn)定性取失效期的試劑（盒）按照5.5～5.8、5.10的方法進(jìn)行檢測，應(yīng)符合4.11.2的要求。5.11.2熱穩(wěn)定性取有效期內(nèi)的試劑（盒）根據(jù)制造商所聲稱的熱穩(wěn)定性條件，按照5.5～5.8、5.10的方法進(jìn)行檢測，應(yīng)符合4.11.