第六章微生物的生長(zhǎng)繁殖及其控制一個(gè)微生物細(xì)胞適宜的外界條件，吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，進(jìn)行代謝。如果同化作用的速度超過(guò)了異化作用個(gè)體的生長(zhǎng)——原生質(zhì)的總量〔重量、體積、大小〕就不斷增加如果各細(xì)胞組分是按恰當(dāng)?shù)谋壤鲩L(zhǎng)時(shí)，那么到達(dá)一定程度后引起個(gè)體數(shù)目的增加，就是繁殖。群體內(nèi)各個(gè)個(gè)體的進(jìn)一步生長(zhǎng)群體生長(zhǎng)測(cè)生長(zhǎng)量直接法測(cè)體積稱(chēng)干重間接法比濁法生理指標(biāo)法含N量含C量DNARNA等一、測(cè)生長(zhǎng)量第一節(jié)測(cè)定生長(zhǎng)繁殖的方法比濁法在一定波長(zhǎng)下，測(cè)定菌懸液的光密度，以光密度(opticaldensity,即O.D.)表示菌量。

實(shí)驗(yàn)測(cè)量時(shí)應(yīng)控制在菌濃度與光密度成正比的線(xiàn)性范圍內(nèi)，否那么不準(zhǔn)確。計(jì)繁殖數(shù)直接法血球計(jì)數(shù)板法間接法平板菌落計(jì)數(shù)法液體稀釋法厭氧菌的菌落計(jì)數(shù)法膜過(guò)濾二、測(cè)繁殖數(shù)1.顯微鏡直接計(jì)數(shù)法采用細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血球計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下對(duì)微生物數(shù)量進(jìn)行直接計(jì)數(shù)〔計(jì)算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量〕。缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌；不適于對(duì)運(yùn)動(dòng)細(xì)菌的計(jì)數(shù)；需要相對(duì)高的細(xì)菌濃度；個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀(guān)察；活菌計(jì)數(shù)：澆注平板法涂布平板法操作較麻煩，對(duì)好氧菌、熱敏感菌效果不好！使用較多的常規(guī)方法，但有時(shí)涂布不均勻！2.平板菌落計(jì)數(shù)法采用培養(yǎng)平板計(jì)數(shù)法要求操作熟練、準(zhǔn)確，否那么難以得到正確的結(jié)果：樣品充分混勻；每支移液器及涂布棒只能接觸一個(gè)稀釋度的菌液；同一稀釋度三個(gè)以上重復(fù),取平均值；每個(gè)平板上的菌落數(shù)目適宜，便于準(zhǔn)確計(jì)數(shù)；商品化的測(cè)定方法用于菌落計(jì)數(shù)的小型紙片或密封瓊脂板原理：活菌指示劑TTC，可使菌落染成玫瑰紅菌落計(jì)數(shù)分析儀3.膜過(guò)濾培養(yǎng)法菌數(shù)低的樣品〔如水〕→膜過(guò)濾→培養(yǎng)→菌落計(jì)數(shù)如何對(duì)菌數(shù)低的樣品，如水，中的細(xì)菌數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)？第二節(jié)微生物的生長(zhǎng)規(guī)律一、微生物的個(gè)體生長(zhǎng)和同步生長(zhǎng)〔二〕獲得同步生長(zhǎng)的方法1.環(huán)境條件誘導(dǎo)法用氯霉素抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成；細(xì)菌芽孢誘導(dǎo)發(fā)芽；藻類(lèi)細(xì)胞的光照、黑暗控制；用EDTA或離子載體處理酵母菌；短期熱休克〔40℃〕法。2.機(jī)械篩選法利用處于同一生長(zhǎng)階段細(xì)胞的體積、大小的相同性

過(guò)濾法密度梯度離心法膜洗脫法10%蔗糖30%梯度不同步群體細(xì)菌細(xì)胞分層分部收集各層細(xì)胞利用各部細(xì)胞接種離心后密度梯度離心法硝酸纖維素濾膜法細(xì)菌硝酸纖維素濾膜營(yíng)養(yǎng)液子細(xì)胞收集器二、單細(xì)胞微生物的典型生長(zhǎng)曲線(xiàn)生長(zhǎng)曲線(xiàn)：定量描述液體培養(yǎng)基中微生物生長(zhǎng)規(guī)律的實(shí)驗(yàn)曲線(xiàn)活細(xì)胞檢測(cè)描述方法采用活菌計(jì)數(shù)比較麻煩，必需嚴(yán)格操作，否那么不易得到準(zhǔn)確的結(jié)果，重復(fù)性也差，在實(shí)際工作中多采用分光光度計(jì)測(cè)定OD值的方法繪制細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線(xiàn)。微生物的典型生長(zhǎng)曲線(xiàn)延滯期衰亡期指數(shù)期穩(wěn)定期生長(zhǎng)速率常數(shù)（growthrateconstant）：每小時(shí)分裂次數(shù)①生長(zhǎng)速率常數(shù)等于零；②細(xì)胞形態(tài)變大或增長(zhǎng)；③細(xì)胞內(nèi)RNA尤其是rRNA含量增高，原生質(zhì)嗜堿性強(qiáng)；④合成代謝十分活潑，核糖體、酶類(lèi)和ATP的合成加速，易產(chǎn)生各種誘導(dǎo)酶；⑤對(duì)不良環(huán)境條件敏感，對(duì)外界理化因素的抵抗力降低。1.延滯期的特點(diǎn)：〔一〕延滯期lagphase①接種齡即“種子〞的群體生常年齡；②接種量③培養(yǎng)基成分2.影響延滯期長(zhǎng)短的因素：3.延滯期出現(xiàn)的原因1.指數(shù)期的特點(diǎn)：①生長(zhǎng)速率常數(shù)R最大，因而細(xì)胞每分裂一次所需的時(shí)間—代時(shí)〔G〕或原生質(zhì)增加一倍所需的倍增時(shí)間最短；②細(xì)胞進(jìn)行平衡生長(zhǎng)，故菌體內(nèi)各種成分最為均勻；③酶系活潑，代謝旺盛?！捕持笖?shù)期exponentialphase2.指數(shù)生長(zhǎng)期中的三個(gè)重要參數(shù)〔1〕繁殖代數(shù)〔n〕x2=x1.2n：x1和x2為時(shí)間t1和t2時(shí)的細(xì)胞數(shù)；n為繁殖代數(shù)lgx2=lgx1+nlg2lgx2－lgx1nlg2n=3.322〔lgx2－lgx1〕

n=〔2〕生長(zhǎng)速率常數(shù)〔R〕〔3〕代時(shí)〔G〕R=

nt2－t1

=3.322〔lgx2－lgx1〕

t2－t1

G=1R=3.322〔lgx2－lgx1〕

t2－t13.影響指數(shù)期微生物代時(shí)長(zhǎng)短的因素：①菌種：不同菌種的代時(shí)差異極大；②營(yíng)養(yǎng)成分：③營(yíng)養(yǎng)物濃度：營(yíng)養(yǎng)物的濃度可影響微生物的生長(zhǎng)速率和總生長(zhǎng)量；④培養(yǎng)溫度：溫度對(duì)E.coli代時(shí)的影響溫度(℃)代時(shí)(分)溫度(℃)代時(shí)(分)108503522151204017.520904528254047.57730294.應(yīng)用代謝、生理研究的良好材料增殖噬菌體的最適宿主發(fā)酵工業(yè)中作種子的最正確材料1.穩(wěn)定期的特點(diǎn)：①生長(zhǎng)速率常數(shù)R等于0，即處于新繁殖的細(xì)胞數(shù)與衰亡的細(xì)胞數(shù)相等，或正生長(zhǎng)與負(fù)生長(zhǎng)相等的動(dòng)態(tài)平衡之中。②開(kāi)始合成抗生素等次生代謝產(chǎn)物；③細(xì)胞開(kāi)始貯存糖原、異染顆粒和脂肪等貯藏物；④多數(shù)芽孢桿菌在穩(wěn)定期開(kāi)始形成芽孢?！踩撤€(wěn)定期stationaryphase在穩(wěn)定期菌體產(chǎn)量到達(dá)了最高點(diǎn)，而且菌體產(chǎn)量與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗間呈現(xiàn)出一定的比例關(guān)系，這一關(guān)系就是生長(zhǎng)量常數(shù)Y〔或稱(chēng)生長(zhǎng)得率〕。2.穩(wěn)定期的菌體產(chǎn)量與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗之間的關(guān)系：Y=xx0C0C=

C0xx0x為穩(wěn)定期時(shí)的細(xì)胞干重〔g/ml培養(yǎng)液〕；x0為剛接種時(shí)的細(xì)胞干重；C0為限制性營(yíng)養(yǎng)物的最初濃度〔g/ml〕；C為穩(wěn)定期時(shí)限制性營(yíng)養(yǎng)物的濃度產(chǎn)黃青霉在組合培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)，其Y值為1：2.56，即每2.56g葡萄糖可合成1g菌絲體〔干重〕。3.穩(wěn)定期到來(lái)的原因：①營(yíng)養(yǎng)物尤其是生長(zhǎng)限制因子的耗盡；②營(yíng)養(yǎng)物的比例失調(diào)，例如C/N比值不適宜；③有害代謝產(chǎn)物的積累，如酸、醇、毒素、H2O2等代謝產(chǎn)物都對(duì)自身生長(zhǎng)有抑制作用；④pH、氧化復(fù)原勢(shì)等物理化學(xué)條件越來(lái)越不適宜。4.應(yīng)用①個(gè)體死亡的速度超過(guò)新生的速度，群體呈負(fù)生長(zhǎng)；②細(xì)胞形態(tài)多樣，?？梢?jiàn)畸形和衰退型的細(xì)胞；③有些微生物因蛋白水解酶活力的增強(qiáng)發(fā)生菌體自溶；④有些微生物在衰亡期產(chǎn)生或釋放對(duì)人類(lèi)有用的次生代謝產(chǎn)物，如氨基酸、轉(zhuǎn)化酶、外肽酶、抗生素等。⑤產(chǎn)芽孢桿菌在此期釋放芽孢。1.衰亡期的特點(diǎn)：〔四〕衰亡期declinephase2.衰亡期產(chǎn)生的原因：外界環(huán)境對(duì)繼續(xù)生長(zhǎng)越來(lái)越不利，從而引起細(xì)胞內(nèi)的分解代謝大大超過(guò)合成代謝，繼而導(dǎo)致菌體死亡。思考題：生長(zhǎng)曲線(xiàn)對(duì)實(shí)際生產(chǎn)有什么指導(dǎo)意義？至少寫(xiě)出五條三、微生物的連續(xù)培養(yǎng)分批培養(yǎng)：將微生物置于一定容積的培養(yǎng)基中，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)生長(zhǎng)，最后一次收獲的培養(yǎng)方式。連續(xù)培養(yǎng)：當(dāng)微生物以分批培養(yǎng)的方式培養(yǎng)到指數(shù)期的后期時(shí)，一方面以一定的速度連續(xù)流入新鮮培養(yǎng)基，另一方面，以同樣的流速不斷流出培養(yǎng)物。培養(yǎng)物可到達(dá)動(dòng)態(tài)平衡，其中的微生物可長(zhǎng)期保持在指數(shù)期的平衡生長(zhǎng)狀態(tài)和穩(wěn)定的生長(zhǎng)速率上。連續(xù)培養(yǎng)器類(lèi)型1.恒濁器這是根據(jù)培養(yǎng)器內(nèi)微生物的生長(zhǎng)密度，并借光電控制系統(tǒng)來(lái)控制培養(yǎng)液流速，以取得菌體密度高、生長(zhǎng)速度恒定的微生物細(xì)胞的連續(xù)培養(yǎng)器。2.恒化器一種設(shè)法使培養(yǎng)液流速保持不變，并使微生物始終在低于其最高生長(zhǎng)速率條件下進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖的一種連續(xù)培養(yǎng)裝置。恒化器是一種通過(guò)控制某一種營(yíng)養(yǎng)物的濃度，使其始終成為限制因子的條件下到達(dá)的，因而可稱(chēng)為外控式的連續(xù)培養(yǎng)裝置。裝置控制對(duì)象培養(yǎng)基培養(yǎng)基流速

生長(zhǎng)速率產(chǎn)物應(yīng)用范圍恒濁器菌體密度（內(nèi)控制）無(wú)限制生長(zhǎng)因子不恒定最高速率大量菌體或與菌體相平行的代謝產(chǎn)物生產(chǎn)為主恒化器培養(yǎng)基流速（外控制）有限制生長(zhǎng)因子恒定低于最高速率不同生長(zhǎng)速率的菌體實(shí)驗(yàn)室為主恒濁器與恒化器的比較四、高密度培養(yǎng)第三節(jié)影響微生物生長(zhǎng)的主要因素影響微生物生長(zhǎng)的主要環(huán)境因素：溫度氧氣pH水營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)一、溫度

生長(zhǎng)三基點(diǎn)：最低生長(zhǎng)溫度；最高生長(zhǎng)溫度；最適生長(zhǎng)溫度寬溫微生物窄溫微生物最適最低最高

根據(jù)溫度對(duì)微生物分類(lèi)：超嗜熱菌嗜熱菌嗜溫菌兼性嗜冷菌嗜冷菌最適生長(zhǎng)溫度又叫最適溫度〔optimumgrowthtemperature〕某微生物分裂代時(shí)最短或生長(zhǎng)速率最高時(shí)的培養(yǎng)溫度。最適生長(zhǎng)溫度并非一切生理過(guò)程的最適溫度。Penicilliumchrysogenum總共165h青霉素發(fā)酵過(guò)程，根據(jù)不同生理代謝過(guò)程中不同最適溫度的特點(diǎn)分四段不同溫度進(jìn)行培養(yǎng)。比對(duì)照提高14.5%0h5h40h125h165h30℃25℃20℃25℃微生物各生理過(guò)程的不同最適溫度菌名生長(zhǎng)溫度（℃）發(fā)酵溫度（℃）累積產(chǎn)物溫度（℃）嗜熱鏈球菌374737乳酸鏈球菌3440產(chǎn)細(xì)胞：25~30產(chǎn)乳酸：30灰色鏈霉菌3728—北京棒桿菌3233~35—丙酸丁醇梭菌3733—產(chǎn)黃青霉302520二、氧氣〔1〕專(zhuān)性好氧菌必須有分子氧的條件下才能生長(zhǎng)；有完整的呼吸鏈；以分子氧作為最終氫受體；細(xì)胞含超氧化物歧化酶〔SOD〕和過(guò)氧化氫酶。〔2〕兼性厭氧菌在有氧和無(wú)氧條件下均能生長(zhǎng)，但有氧條件下生長(zhǎng)得更好；在有氧時(shí)靠呼吸產(chǎn)能，無(wú)氧時(shí)靠發(fā)酵或無(wú)氧呼吸產(chǎn)能；細(xì)胞含SOD和過(guò)氧化氫酶?！?〕微好氧菌只能在較低的氧分壓〔0.01—0.03Pa〕下才能正常生長(zhǎng)的微生物，通過(guò)呼吸鏈并以氧為最終氫受體而產(chǎn)能。如霍亂弧菌，氫單胞菌屬、發(fā)酵單胞菌屬及擬桿菌屬?！?〕耐氧菌一類(lèi)可在分子氧存在下進(jìn)行厭氧生活的厭氧菌，即它們的生長(zhǎng)不需要氧，分子氧對(duì)它也無(wú)毒害。它們不具有呼吸鏈，僅依靠專(zhuān)性發(fā)酵獲得能量。細(xì)胞內(nèi)存在SOD和過(guò)氧化物酶(POD)，但缺乏過(guò)氧化氫酶。乳酸菌多數(shù)是耐氧菌?！?〕厭氧菌分子氧對(duì)它們有毒；只有在其深層的無(wú)氧或低氧化復(fù)原勢(shì)的環(huán)境中才能生長(zhǎng)；其生命活動(dòng)所需能量是通過(guò)發(fā)酵、無(wú)氧呼吸、循環(huán)光合磷酸化或甲烷發(fā)酵等提供；細(xì)胞內(nèi)缺乏SOD和細(xì)胞色素氧化酶。專(zhuān)性好氧菌兼性厭氧菌耐氧厭氧菌專(zhuān)性厭氧菌微好氧菌好氧菌為何需要氧？為什么氧對(duì)微生物有害？微生物如何自我保護(hù)的？

關(guān)于厭氧菌的氧毒害機(jī)制1971年，McCord和Fridovich提出SOD學(xué)說(shuō)，他們認(rèn)為，厭氧菌因缺乏SOD，故易被生物體內(nèi)極易產(chǎn)生的超氧陰離子自由基〔.O2〕而毒害致死。論據(jù)：凡嚴(yán)格厭氧菌無(wú)SOD活力，一般也無(wú)過(guò)氧化氫酶活力所有具有細(xì)胞色素系統(tǒng)的好氧菌都有SOD和過(guò)氧化氫酶耐氧菌不含細(xì)胞色素，但具有SOD活力，無(wú)過(guò)氧化氫酶活力

2.O2-+2H+SOD好氧微生物及耐氧菌H2O2+O2H2O+1/2O2過(guò)氧化氫酶（好氧生物）

2H2O過(guò)氧化物酶（耐氧菌）NADH2NAD在體內(nèi)，超氧陰離子自由基可由酶促〔如黃嘌呤氧化酶〕或非酶促方式形成，即：O2+e→.O2-生物在其長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中開(kāi)展出去除超氧陰離子自由基等各種有害的活性氧的機(jī)制。為一切好氧生物共有的SOD就是最重要的方式之一。超氧化物歧化酶與過(guò)氧化氫酶在微生物中的分布微生物SOD酶/U·mg-1H2O2酶/U·mg-1好氧與堿性厭氧菌大腸桿菌1.86.1耐輻射微球菌7.0289.0耐氧厭氧菌乳鏈球菌1.40乳清酸桿菌0.60專(zhuān)性厭氧菌巴氏梭菌00斯氏梭菌00三、pHpH影響表現(xiàn)在以下幾方面：①影響培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的離子化程度，從而影響微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收；②影響環(huán)境中有害物質(zhì)對(duì)微生物的毒性；③影響代謝反響中的各種酶的活性；④影響菌體細(xì)胞膜的帶電荷性質(zhì)，膜的穩(wěn)定性及對(duì)物質(zhì)的吸收能力；⑤使菌體外表蛋白變性或水解。發(fā)酵過(guò)程中培養(yǎng)基對(duì)pH的影響培養(yǎng)基內(nèi)中性成分有機(jī)物無(wú)機(jī)鹽糖類(lèi)脂肪蛋白質(zhì)硫酸銨硝酸鈉發(fā)酵、氧化水解有機(jī)酸胺類(lèi)脫羧NH4+離子選擇吸收NO3-離子選擇吸收硫酸NaOH變酸變堿發(fā)酵過(guò)程中如何調(diào)節(jié)pH？pH調(diào)節(jié)措施“治標(biāo)”“治本”過(guò)酸時(shí)：加NaOH、Na2CO3等堿中和過(guò)堿時(shí)：加HCl、H2SO4等酸中和過(guò)酸時(shí)過(guò)堿時(shí)加適當(dāng)?shù)矗喝缒蛩亍aNO3蛋白質(zhì)等提高通氣量加適當(dāng)碳源：糖、乳酸、油脂等降低通氣量一、實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)法第四節(jié)微生物培養(yǎng)法概論〔一〕固體培養(yǎng)法好氧菌的固體培養(yǎng)試管斜面瓊脂平板克氏扁瓶茄子瓶厭氧菌的固體培養(yǎng)高層瓊脂柱厭氧培養(yǎng)皿亨蓋特滾管技術(shù)厭氧罐厭氧手套箱催化劑室含有鈀粒產(chǎn)氣袋厭氧指示劑AnaerobicGloveBox〔二〕液體培養(yǎng)法2.厭氧菌的液體培養(yǎng)1.好氧菌的液體培養(yǎng)試管液體培養(yǎng)三角瓶淺層液體培養(yǎng)搖瓶培養(yǎng)臺(tái)式發(fā)酵罐Batchculture

Batch&Continuousculture10ml20ml-1L1L->1000L二、生產(chǎn)實(shí)踐中培養(yǎng)微生物的裝置〔一〕固態(tài)培養(yǎng)法好氧菌的曲法培養(yǎng)厭氧菌的堆積培養(yǎng)法〔二〕液體培養(yǎng)法淺盤(pán)培養(yǎng)深層液體通氣培養(yǎng)一.幾個(gè)根本概念〔一〕滅菌：采用強(qiáng)烈的理化因素使任何物體內(nèi)外部的一切微生物永遠(yuǎn)喪失其生長(zhǎng)繁殖能力的措施?！捕诚荆合臼且环N采用較溫和的理化因素，僅殺死物體外表或內(nèi)部一局部對(duì)人體有害的病原菌，而對(duì)被消毒的物體根本無(wú)害的措施。〔三〕防腐：利用某種理化因素完全抑制霉腐微生物的生長(zhǎng)繁殖，從而到達(dá)防止食品等發(fā)生霉腐的措施。〔四〕化療：即化學(xué)治療，它是利用具有高度選擇毒力的化學(xué)物質(zhì)來(lái)抑制宿主體內(nèi)病原微生物的生長(zhǎng)繁殖，借以到達(dá)治療該傳染病的一種措施。第五節(jié)有害微生物的控制防腐的措施主要有：〔1〕低溫〔2〕缺氧〔3〕枯燥〔4〕高滲〔5〕高酸度〔6〕防腐劑二、物理殺菌因素的代表—高溫高溫、輻射〔超聲波〕、過(guò)濾等〔一〕高溫殺菌作用的種類(lèi)高溫殺菌的根本原理：高溫能使微生物的蛋白質(zhì)和核酸等重要生物高分子發(fā)生不可逆的變性、破壞，例如它可使核酸發(fā)生脫氮、脫嘌呤或降解，以及破壞細(xì)胞膜上的類(lèi)脂成分等。干熱滅菌法濕熱滅菌(消毒)法高溫滅菌烘烤滅菌法灼燒滅菌法常壓下加壓下巴氏消毒法煮沸消毒法間歇滅菌法常規(guī)加壓滅菌法連續(xù)加壓滅菌法LTH法HTST法1.干熱滅菌灼燒滅菌：接種環(huán)等烘烤滅菌：金屬、玻璃器皿，粉狀物質(zhì)和油燈干熱滅菌需要的溫度高，時(shí)間長(zhǎng)〔121℃16h，160℃2h〕2.濕熱滅菌巴氏消毒：牛奶、酒等不能進(jìn)行高溫滅菌的液體煮沸消毒高壓蒸汽滅菌：最廣泛的滅菌方式超熱消毒：135-150℃，5-15秒，工業(yè)上發(fā)酵培養(yǎng)基135-150℃，2-6秒，牛奶或其它液態(tài)食品3.加熱滅菌效率的衡量標(biāo)準(zhǔn)十進(jìn)位減少時(shí)間或D值在特定溫度下殺死某一樣品中90%微生物或孢子及芽孢所需的時(shí)間以微生物數(shù)量對(duì)加熱時(shí)間，D值代表微生物減少十倍所需時(shí)間Z值是指D值降低至起始數(shù)值1/10時(shí)所需升高的溫度。熱致死時(shí)間：一定溫度下殺死液體中所有微生物所需要的時(shí)間4.影響加壓蒸氣滅菌效果的因素〔1〕滅菌物體含菌量的影響：滅菌物體的含菌量越高，殺死最后一個(gè)個(gè)體所需時(shí)間越長(zhǎng)。〔2〕滅菌鍋內(nèi)空氣排除程度的影響〔3〕滅菌對(duì)象pH的影響時(shí)，微生物較不易死亡pH＜6.0時(shí)，最易引起死亡〔4〕滅菌對(duì)象的體積〔5〕加熱與散熱速度一些細(xì)菌芽孢濕熱滅菌所需時(shí)間菌名不同溫度下殺死時(shí)間（min）100℃105℃110℃115℃120℃125℃130℃炭疽桿菌2~155~10—————枯草芽孢桿菌數(shù)小時(shí)——40———破傷風(fēng)梭菌5~905~25—————產(chǎn)氣莢膜梭菌5~455~2710~1541——肉毒梭菌300~53040~12032~9010~404~20——嗜熱菌—400100~30040~11011~353.9~83.5產(chǎn)芽孢梭菌1504512————芽孢數(shù)目和滅菌時(shí)間的關(guān)系芽孢數(shù)/mL在100℃下殺菌時(shí)間（min）1000000001975000000165000000014250000001210000008100006容器（mL）在121~123℃下殺菌時(shí)間（min）5012~1420012~1550017~22100020~25200030~35900050~55不同容量的液體的滅菌時(shí)間空氣排除對(duì)滅菌溫度的影響壓力表讀數(shù)鍋內(nèi)溫度（℃）Kg/cm2磅/英寸2純蒸汽排除1/2空氣不排除空氣0.35510994720.7010115105901.05151211121001.40201261181091.75251301241152.1030134128121溫度（℃）芽孢數(shù)（個(gè)/mL）滅菌時(shí)間（min）pH6.1pH5.3pH5.0pH4.7pH4.5120100008753311510000252512131311010000706535302410010000740720180150150pH對(duì)滅菌溫度的影響滅菌對(duì)培養(yǎng)基的影響防止方法:分別滅菌、過(guò)濾除菌等輻射滅菌：微波260nm紫外線(xiàn)電離射線(xiàn)：X射線(xiàn)、γ射線(xiàn)輻射處理食品是平安的，γ射線(xiàn)用于醫(yī)療器械消毒過(guò)濾滅菌：熱敏感物質(zhì)溶液三、化學(xué)殺菌劑、消毒劑和治療劑化學(xué)因素外表消毒劑化學(xué)治療劑

溶液狀態(tài)氣體狀態(tài)抗代謝藥物抗生素生物藥物素化學(xué)治療劑的開(kāi)展ThemoderneraofchemotherapybeganwiththeworkoftheGermanphysicianPaulEhrlich.Arsphenaminewasmadeavailablein1910.1935,DomagkdiscoveredthatProntosilRedprotectedmiceagainstpathogenicstreptococciandstaphylococci.Fleming,Florey,andChainreceivedtheNoblePrizein1945forthediscoveryandproductionofpenicilin.WaksmanreceivedtheNoblePrizein1952,andhissuccessledtoaworldwidesearchforotherantibiotic-producingsoilmicroorganisms.①最低抑制濃度〔MIC〕：是評(píng)定某化學(xué)藥物藥效強(qiáng)弱的指標(biāo)，指在一定條件下，某化學(xué)藥劑抑制特定微生物的最低濃度。②半致死劑量〔LD50〕：是評(píng)定某藥物毒性強(qiáng)弱的指標(biāo)，指在一定條件下，某化學(xué)藥劑能殺死50%試驗(yàn)動(dòng)物時(shí)的劑量。③最低致死劑量〔MLD〕：是評(píng)定某藥物毒性強(qiáng)弱的另一指標(biāo)，指在一定條件下，某化學(xué)藥物能引起試驗(yàn)動(dòng)物群體100%死亡率的最低劑量。評(píng)價(jià)化學(xué)殺菌、消毒劑和治療劑的指標(biāo)〔一〕外表消毒劑指對(duì)一切活細(xì)胞都有毒性，不能用作活細(xì)胞或機(jī)體內(nèi)治療用的化學(xué)藥劑。為比較各種外表消毒劑的相對(duì)殺菌強(qiáng)度，常采用臨床上最早使用的消毒劑——石炭酸作為比較的標(biāo)準(zhǔn)。各種抗微生物化學(xué)制劑殺菌能力的比較標(biāo)準(zhǔn)：一般規(guī)定：處理時(shí)間為10分鐘，供試菌定為Salmonellatyphi〔傷寒沙門(mén)氏菌〕。在臨床上最早使用的消毒劑----石炭酸由于各種微生物化學(xué)制劑的殺菌機(jī)制各不相同，故石炭酸系數(shù)僅有一定的參考價(jià)值。待測(cè)制劑最高稀釋度到達(dá)同效的石炭酸的最高稀釋度石炭酸系數(shù)：

=石炭酸系數(shù)〔P.C.〕例如，某甲藥劑以1：300的稀釋度在10分鐘內(nèi)殺死所有供試菌，而到達(dá)同效的石炭酸的最高稀釋度為1：100，那么該藥劑的石炭酸系數(shù)〔P.C.〕等于3，即：P.C.=300100=31.抗代謝藥物：又稱(chēng)代謝拮抗物或代謝類(lèi)似物，是指一類(lèi)在化學(xué)結(jié)構(gòu)上與細(xì)胞內(nèi)必要代謝物的結(jié)構(gòu)相似，并可干擾正常代謝活動(dòng)的化學(xué)物質(zhì)。由于它們具有良好的選擇毒力，因此是一類(lèi)重要的化學(xué)治療劑。G.Domagk因創(chuàng)造第一種治療微生物疾病的“神藥〞獲得了1939年的諾貝爾生理和醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)2.抗代謝物的種類(lèi)

代謝物抗代謝物

3.抗代謝物的主要作用抗菌譜較廣，能抑制大多數(shù)G+和一些G－，在治療有肺炎雙球菌、痢疾桿菌、溶血性鏈球菌、布魯氏菌屬、奈瑟氏球菌屬以及金黃色葡萄球菌等引起的各種嚴(yán)重傳染病中，療效顯著。⑴四氫葉酸代謝過(guò)程很多細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)需要對(duì)氨基苯甲酸〔PABA〕作為生長(zhǎng)因子以合成葉酸。PABA可由細(xì)菌自身合