消毒劑模擬現(xiàn)場和現(xiàn)場消毒鑒定試驗1消毒劑對食(飲)具消毒效果的模擬現(xiàn)場鑒定試驗1.1目的鑒定消毒劑對食(飲)具上細菌的殺滅作用，以驗證該消毒劑對食(飲)具消毒的實用劑量。1.2試驗器材(1)大腸桿菌(8099)。對尚需用于殺滅其他特定細菌者，可增用該特定細菌進行試驗。菌懸液制備按2.1.1.2規(guī)定的方法和要求進行。(2))磷酸鹽緩沖液(PBS，0.03mol/L，pH7.2)(3)稀釋液：見附錄A。(4)中和劑(按2.1.1.5方法鑒定合格者)(5)胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基(6)無菌棉拭(7)規(guī)格板(用可略彎曲的軟性材料制備，中央留一大小為5.0cm×5.0cm空格作為采樣部位)。(8)試驗用食(飲)具樣本瓷碗（盤）或竹（木）筷前端（周長2.0cm，長度為12.5cm。1.3操作程序（1）按產(chǎn)品使用說明書的用法，選定本試驗擬用濃度和作用時間，分別進行大腸桿菌殺滅試驗。（2）用無菌規(guī)格板在試驗用瓷碗（盤）中間標出染菌區(qū)(5.0cm×5.0cm)。用無菌吸管吸取菌懸液，分別滴加于染菌區(qū)，每區(qū)0.1ml，用無菌L棒在區(qū)內(nèi)涂勻，置37℃恒溫箱干燥。對筷子取前端12.5cm長度，蘸染預定量菌液后，并置37℃或室溫干燥。（3）試驗組：將30個染菌碗或30個筷子樣本，依次定時放入含消毒劑溶液的容器中，使其完全浸沒。作用至規(guī)定時間后取出，棄掉消毒劑，向瓷碗（盤）內(nèi)的染菌區(qū)加入5ml中和劑，用L棒刮洗染菌區(qū)，作用10min后，分別取1.0ml樣液傾注接種2塊平皿。將筷子放入含20ml~25ml中和劑的試管中，使其完全浸沒在中和劑中，電動混勻器震蕩60s或振敲200次，作用10min后，分別取1.0ml樣液傾注接種2塊平皿。將接種好的平皿放37℃恒溫箱培養(yǎng)48h，計數(shù)菌落數(shù)，作為試驗組。（4）陽性對照組：將3個染菌碗或3只筷子樣本不浸泡消毒劑，直接向瓷碗（盤）內(nèi)的染菌區(qū)加入5ml中和劑，或直接將筷子放入含20ml~25ml中和劑的試管中。待試驗組消毒處理完畢后，隨試驗組進行采樣和檢測。陽性對照組菌量應為1.25×107cfu/樣本～1.25×108cfu/樣本(相當于5×105cfu/cm2～5×106cfu/cm2)。（5）陰性對照組：待試驗組與陽性對照組試驗結束后，將未用過的同批次中和劑、PBS接種培養(yǎng)基和未種菌的培養(yǎng)基等與上述兩組樣本同時進行培養(yǎng)，作為陰性對照。（6）按下式計算每件食具上的生長菌落數(shù)。每件食具樣本生長菌落數(shù)（cfu/樣本）=平板上平均菌落數(shù)×檢測時樣本稀釋倍數(shù)（7）計算殺滅對數(shù)值。1.4評價規(guī)定以每種食（飲）具30個樣本中大腸桿菌殺滅對數(shù)值均≥3.00所用消毒劑的濃度和作用時間為消毒合格劑量。1.5注意事項(1)試驗操作過程必須采取嚴格的無菌技術。直接或間接接觸樣本的器材必須經(jīng)滅菌后使用。模擬現(xiàn)場試驗所用食(飲)具在染菌前亦必須經(jīng)滅菌處理。(2)每次試驗必須設置陽性和陰性對照，絕不可省略。2消毒劑對醫(yī)療器械的消毒模擬現(xiàn)場試驗2.1目的鑒定消毒劑對人工污染于醫(yī)療器械上細菌芽孢的殺滅作用作用，以驗證對醫(yī)療器械處理的實用劑量。2.2試驗器材(1)枯草桿菌黑色變種(ATCC9372)芽孢(下簡稱芽孢，其懸液的制備按2.1.1.2.3(2)規(guī)定進行)(2)磷酸鹽緩沖液(PBS，0.03mol/L，pH7.2)(3)中和劑溶液(經(jīng)按2.1.1.5規(guī)定方法鑒定合格者)(4)含中和劑的胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（5）模擬現(xiàn)場試驗用樣本(將醫(yī)用止血鉗截斷，取其由軸至齒端部分，參照2.1.1.2.4(2)規(guī)定方法進行脫脂處理。經(jīng)壓力蒸汽滅菌后，烤干備用)。(6)塑料試管(1.8cm×18cm)。2.3操作程序(1)以載體浸泡定量殺菌試驗進行消毒效果的測定。按產(chǎn)品使用說明書的劑量，選定本試驗擬用濃度和和作用時間。(2)染菌時，用無菌鑷子將止血鉗樣本齒面朝上，并固定在無菌支撐物上。用0.1ml無菌吸管或定量無菌移液器，將0.02ml芽孢懸液滴染于齒部，用無菌L型鉑金絲涂勻，置37℃恒溫箱內(nèi)干燥備用。(3)取無菌平皿，按每個載體10ml用量加入消毒液，置20℃±2℃水浴中保溫5min。(4)將30個染菌樣本浸沒于消毒液中進行消毒處理。(5)作用至規(guī)定時間，取出樣本，分別移入含10ml中和劑溶液的塑料試管內(nèi)。在手掌上振敲200次，分別取樣液1.0ml傾注接種兩個無菌平皿，放37℃恒溫箱培養(yǎng)72h，計數(shù)菌落數(shù)，作為試驗組。(6)以無菌蒸餾水代替消毒液，將3個染菌樣同樣條件處理，然后與試驗組樣本同法進行活菌培養(yǎng)計數(shù)，作為陽性對照組，其菌量應在5×105cfu/樣本～5×106cfu/樣本。(7)試驗結束后，將用過的同批次中和劑、采樣液、稀釋液接種培養(yǎng)基，進行培養(yǎng);另將未用過的同批培養(yǎng)基亦放入恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，作為陰性對照。2.4評價規(guī)定在規(guī)定作用時間內(nèi)，陽性對照組均有菌生長，活菌培養(yǎng)計數(shù)達到規(guī)定的數(shù)量，陰性對照均無菌生長時，以對試驗組30個樣本上人工污染芽孢的殺滅率對數(shù)均值≥3.00，可判為消毒合格。2.5注意事項與本試驗有關的其它試驗中的注意事項亦適用于本試驗。3消毒劑對醫(yī)療器械的模擬現(xiàn)場滅菌試驗目的用于驗證消毒劑對人工染有芽孢的醫(yī)療器械滅菌效果。3.2試驗器材(1)枯草桿菌黑色變種(ATCC9372)芽孢(下簡稱芽孢，其懸液的制備按2.1.1.2.3(2)規(guī)定進行)(2)磷酸鹽緩沖液(PBS，0.03mol/L，pH7.2)(3)中和劑溶液(經(jīng)按2.1.1.5規(guī)定方法鑒定合格者)(4)含中和劑的胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（5）模擬現(xiàn)場試驗用樣本(將醫(yī)用止血鉗截斷，取其由軸至齒端部分，參照2.1.1.2.4(2)規(guī)定方法進行脫脂處理。經(jīng)壓力蒸汽滅菌后，烤干備用)。(6)塑料試管(1.8cm×18cm)3.3操作程序按產(chǎn)品使用說明書中的最低使用濃度與0.5倍最短作用時間。25個(2)規(guī)定進行。(3)無菌平皿，按每個載體10ml用量加入消毒液，置20℃±2℃水浴中保溫5min。(4)將20個染菌樣本浸沒于消毒液中進行滅菌處理，作用至規(guī)定時間，將樣本取出，分別放于含10ml中和劑肉湯的試管內(nèi)（共20支），置37℃培養(yǎng)箱中定性培養(yǎng)7d，觀察最終結果，作為試驗組。有菌生長者，肉湯培養(yǎng)基呈輕度渾濁，有皺褶狀菌菌膜，輕輕振搖可見絮狀沉淀，無菌生長者肉湯清澈透明。（5）以標準硬水代替消毒液，將2個染菌載體依上同樣條件處理，然后與試驗組載體同法接種、培養(yǎng)、觀察結果，作為陽性對照組。(6)另取3個染菌樣本，分別放入10ml中和劑溶液塑料試管內(nèi)。振蕩1min，或在手掌上振敲200次，取樣液進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。培養(yǎng)72h計數(shù)菌落。作為菌數(shù)對照組，其菌量應為5×105cfu/樣本～5×106cfu/樣本。(7)試驗結束后，將用過的同批次中和劑、采樣液和稀釋液接種培養(yǎng)基，進行培養(yǎng)，另將未用過的同批培養(yǎng)基亦放入恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，作為陰性對照。(8)試驗重復3次。3.4評價規(guī)定各次試驗組所有60個樣本均無菌生長，同時陽性對照組均有菌生長，菌數(shù)對照組活菌培養(yǎng)計數(shù)達到規(guī)定的數(shù)量，陰性對照組均無菌生長時，可判定為滅菌合格。3.5注意事項(1)滅菌效果觀察時，應嚴格無菌操作，否則可將滅菌合格誤判為失敗。(2)于本試驗有關的其它試驗中的注意事項亦適用于本試驗。4連續(xù)使用穩(wěn)定性試驗4.1目的驗證消毒劑在反復取放浸泡醫(yī)療器械條件下的使用有效期。4.2試驗器材(1)枯草桿菌黑色變種(ATCC9372)芽孢(下簡稱芽孢，其懸液的制備按2.1.1.2.3(2)規(guī)定進行)(2)磷酸鹽緩沖液(PBS，0.03mol/L，pH7.2)(3)中和劑溶液(經(jīng)按2.1.1.5規(guī)定方法鑒定合格者)(4)含中和劑的胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基：見附錄A。（5）試驗樣本[參照2.1.1.2.4（2）]。(6)滿載用醫(yī)療器械(選用醫(yī)用剪刀、止血鉗等小型器械，或根據(jù)需要選用其他器械。(7)無菌帶蓋搪瓷盤。4.3操作程序(1)以枯草桿菌黑色變種芽孢為試驗菌。(2)試驗時，配制雙份2000ml消毒液，分別盛裝于2個無菌帶蓋搪瓷盤中。各放入清潔的試驗用醫(yī)療器械，使達滿載要求。每次試驗，同時分別對2個搪瓷盤中的消毒液進行檢測。(3)搪瓷盤內(nèi)放入器械后，每日將器械取出，用清水洗滌，瀝干，再回放入消毒液中。連續(xù)每日將器械取出、洗滌、瀝干、再放入，直至試驗結束。(4)放入器械至說明書上連續(xù)使用的最長時間，吸取消毒液樣本，醫(yī)療器械消毒按消毒劑對醫(yī)療器械的消毒模擬現(xiàn)場試驗(2)，醫(yī)療器械滅菌按消毒劑對醫(yī)療器械的模擬現(xiàn)場滅菌試驗（3）的方法，測定該消毒液對芽孢的殺滅效果。4.4評價規(guī)定試驗重復3次，以3次試驗均達到合格要求，可判為連續(xù)使用穩(wěn)定性試驗合格。4.5注意事項盛裝消毒液的搪瓷盤，在每次操作完畢后應加蓋。滅菌效果觀察時，應嚴格無菌操作，否則可將滅菌合格誤判為失敗。(3)本試驗有關的其它試驗中的注意事項亦適用于本試驗。5消毒劑對手消毒模擬現(xiàn)場試驗5.1目的用于測定消毒劑對人工污染于手表面細菌的殺滅作用，并作為確定該消毒劑對手消毒實用劑量的參考。5.2試驗器材（1）大腸桿菌8099或NCTC10538，對尚需用于殺滅其他特定細菌目的者，可增用該特定細菌進行試驗。菌懸液制備按2.1.1.2規(guī)定的方法和要求進行。（2）胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA）：見附錄A。（3）胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB）：見附錄A。（4）中和劑（以TSB為溶劑，經(jīng)鑒定合格）。（5）液體肥皂200g/L。（6）參考樣品：正丙醇60%（V/V）與異丙醇60%（V/V）。（7）標準硬水：見附錄A。（8）磷酸鹽緩沖液(PBS，0.03mol/L，pH7.2)。（9）無菌紗布巾。（10）吸管、試管、平皿若干。（11）振蕩混合器。5.3試驗步驟(1)菌懸液的制備取2支在TSB中培養(yǎng)18h～24h的大腸桿菌培養(yǎng)物分別接種于1LTSB大三角燒瓶中，在36℃±1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18h～24h，用TSB將其稀釋為2×108cfu/ml～2×109cfu/ml菌懸液。（2）將12名～15名志愿者隨機分為兩組，第一組使用參考樣品，第二組使用試驗樣品（3）使用液體肥皂洗手1min去除手表面污染的自然菌，然后用無菌紗布將手擦干。（4）將2×108cfu/ml-2×109cfu/ml大腸桿菌的菌懸液放入一無菌容器中，（5）將手掌中間到指尖部位浸入菌懸液中，手指分開，停留５s，將手離開菌懸液，在空氣中干燥３min。（6）干燥后立即將拇指與其他手指尖在含10mlTSB的平皿中搓洗１min，取適當稀釋度接種平皿。計數(shù)菌落數(shù)，作為試驗前菌數(shù)。（7）不再重復污染手，立即進行消毒處理。（8）試驗樣品組：按說明書介紹的用量、作用時間和使用頻率以標準的洗手方法（如圖2-1）搓擦30s～60s（衛(wèi)生手消毒）或最長5min（外科手消毒）。以流動的自來水沖洗5s，抖掉手上殘留的水。立刻將拇指與其它手指尖在含10ml中和劑的平皿中搓洗1min，做適當稀釋后，分別取樣液1.0ml以傾注法接種兩個無菌平皿，放37℃恒溫箱培養(yǎng)48h，計數(shù)菌落數(shù)。(9)參考樣品組：對于衛(wèi)生手消毒，取60%異丙醇3ml到入手心中，按標準的洗手方法用力搓擦30s。以確保手的所有部位均勻接觸異丙醇。重復使用異丙醇按上述方法搓擦使總的搓擦時間為60s。對于外科手消毒，使用60%正丙醇3ml，按標準的洗手方法用力搓擦，當接近干燥時，再加3ml正丙醇搓擦。以保持作用3min。用流動的自來水沖洗5s，抖掉手上殘留的水。其余步驟與試驗樣品組相同。1.掌心對掌心搓擦2.手指交錯掌心對手背搓擦3.手指交錯掌心對掌心搓擦4.兩手互握互搓指背5.拇指在長中轉動搓擦6.指尖在掌心中摩擦圖2-1標準的洗手方法(10)在試驗當日，第一組與第二組樣品對換，重復上述試驗。(11)分別計算參考樣品組和試驗樣品組的菌數(shù)減少的對數(shù)值。5.4評價規(guī)定(1)試驗樣品的殺滅對數(shù)值大于或等于參考樣品的殺滅對數(shù)值為合格。(2)若試驗樣品的殺滅對數(shù)值小于參考樣品的殺滅對數(shù)值，應進行統(tǒng)計學處理，以確定差異是否顯著。(3)若試驗樣品的殺滅對數(shù)值不顯著小于參考樣品的殺滅對數(shù)值，可判為消毒合格。若試驗樣品的殺滅對數(shù)值顯著小于參考樣品的殺滅對數(shù)值，表明該試驗樣品不符合本規(guī)范的要求。5.5注意事項（1）試驗必須在同一受試者、同一天、相同環(huán)境、同樣條件下進行，使試驗樣品和參考樣品的結果具有可比性。（2）所有受試者應年滿18歲，身體健康。手部皮膚應無破損、無皮膚病，手指甲短而干凈。（3）試驗用菌懸液應在第1只手浸入后3h內(nèi)使用。在1次試驗中，無論使用試驗樣品還是參照樣品，所有受試者手的染菌都應使用同一批菌懸液。（4）對受試者，在每次試驗結束時，應及時對雙手進行徹底的消毒處理。6消毒劑對手消毒現(xiàn)場試驗6.1目的測定消毒劑對手表面自然菌消毒所需使用的劑量，以驗證該消毒劑對手消毒實用劑量。6.2試驗器材（1）中和劑（中和劑經(jīng)鑒定合格)（2）無菌棉拭（3）稀釋液0.1%吐溫80的0.03mol/L磷酸鹽緩沖液pH7.2（4）磷酸鹽緩沖液(PBS，0.03mol/L，pH7.2)。（5）標準硬水：見附錄A。（6）無菌紗布巾（7）胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB）：見附錄A。（8）胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA）：見附錄A。（9）振蕩混合器（10）吸管、試管、平皿若干。6.3試驗步驟(1)在使用現(xiàn)場，隨機選定受試者。試驗不少于30人次。(2)消毒前，在受試者雙手相互充分搓擦后，讓受試者左手指并攏，用無菌棉拭在含10ml稀釋液試管中浸濕，于管壁上擠干后，在五指屈面指尖至指根，往返涂擦2遍，每涂擦一遍，將棉拭轉動一次。采樣后，以無菌操作方式將棉拭采樣端剪入中和劑試管內(nèi)，作為陽性對照組樣本。(3)根據(jù)消毒劑使用說明書的方法對右手進行消毒，對手的衛(wèi)生消毒一般設定作用時間為1min，對外科洗手后的泡手一般設定作用時間為3min。消毒后用中和劑代替稀釋液，與陽性對照組同樣的方法對受試者右手上殘留的自然菌采樣一次，作為試驗組樣本。(4)分別將未用過的同批中和劑、稀釋液各1.0ml、棉拭1份～2份作為陰性對照組樣本。(5)分別取試驗組、陽性對照組和陰性對照組樣本各1ml，以瓊脂傾注法接種平皿，每個樣本接種2個平皿，放37℃恒溫箱中培養(yǎng)48h，觀察最終結果。(6)計算殺滅對數(shù)值6.4評價規(guī)定陽性對照組應有較多細菌生長，陰性對照組應無菌生長，以對30人次手上自然菌的平均殺滅對數(shù)值≥1.00可判為消毒合格。6.5注意事項(1)本試驗需有志愿者參與，重復人次較多，一人可多次受試，但不得在一批試驗或同日反復參與，否則可影響結果的準確性。(2)受試者接受試驗時，不得觸摸任何表面，以免使手的試驗部位沾染雜菌。(3)棉拭涂抹采樣，較難標準化，為此應盡量使棉拭的大小，用力的均勻，吸取采樣液的量，以及洗菌時敲打的輕重等先后保持一致。(4)擦拭消毒時，涂藥量要適宜，涂抹要均勻。(5)現(xiàn)場樣本須及時檢測，室溫存放不得超過2h。否則應放4℃冰箱內(nèi)，但亦不得超過4h。77.1目的測定消毒劑對人工污染于皮膚表面細菌的殺滅作用，以驗證該消毒劑對皮膚消毒實用劑量。7.2試驗器材（1）試驗菌株：金黃色葡萄球菌ATCC27217，對尚需用于殺滅其他特定細菌者，可增用該特定細菌進行試驗。（2）胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA），見附錄A。（3）磷酸鹽緩沖液(PBS，0.03mol/L，pH7.2)。（4）中和劑（中和劑經(jīng)鑒定合格）。（5）液體肥皂200g/L。（6）金屬筒（直徑2.2cm、高度3cm）。（7）尼龍刮菌棒。（8）無菌紗布巾。（9）吸管、試管、平皿若干。（10）振蕩混合器。（11）一次性接種環(huán)（直徑4mm）。（12）抗生素軟膏。（13）皮膚消毒劑。（14）恒溫箱。7.3試驗步驟（1）菌懸液的制備按2.1.1.2.3規(guī)定的方法和要求進行。（2）使用液體肥皂清洗受試者前臂內(nèi)側1min，用自來水沖凈殘留皂液，然后用無菌紗布擦干，以去除前臂內(nèi)側表面污染的自然菌。（3）用一端醮有印墨直徑為3.0cm的玻璃筒扣印在受試者的每只前臂中段（不要在手腕和肘皺褶處），劃分出一個試驗區(qū)。（4）使用加樣器取10μl上述菌懸液，接種于前臂試驗區(qū)（使回收菌落數(shù)為2×106cfu/試驗區(qū)～1×107cfu/試驗區(qū)），用一次性接種環(huán)，把菌懸液涂成一圓形，與試驗區(qū)邊緣應有4mm～5mm的距離，在空氣中自然干燥。（5）根據(jù)消毒劑使用說明書的方法對右前臂內(nèi)側進行消毒，一般設定作用時間為1min～3min。（6）消毒后用中和劑對前臂上接種的區(qū)域進行取樣。采樣時，將金屬筒放置于試驗區(qū)中間部位，罩住染菌區(qū)，不要接觸到蓋有印墨的邊緣。將1.0ml中和劑吸移至金屬筒內(nèi)，用尼龍刮菌棒刮洗金屬筒罩住區(qū)域內(nèi)的皮膚60s，將筒內(nèi)液體吸移至試管內(nèi)，再加1.0ml中和劑對該區(qū)域內(nèi)的皮膚進行第二次刮洗30s，將第二次擦洗的液體，注入含第一次刮洗液體的試管中，作為試驗組樣本。（7）以蒸餾水代替消毒劑對左前臂中段做同樣處理，作為對照組樣本。（8）每次試驗分別將未用過的同批中和劑、稀釋液各1.0ml作為陰性對照組樣本。（9）分別取適宜稀釋度試驗組、對照組樣本和陰性對照組樣本各1.0ml，以瓊脂傾注法接種平皿，每個樣本接種2個平皿，放37℃恒溫箱中培養(yǎng)48h，觀察最終結果。（10）計算殺滅對數(shù)值。（11）試驗不得少于15人次。7.4．評價規(guī)定對照組回收菌落數(shù)為2×106cfu/試驗區(qū)～1×107cfu/試驗區(qū)，陰性對照組應無菌生長，且對每一人次皮膚表面人工污染的金黃色葡萄球菌的殺滅對數(shù)值均≥3.00可判為消毒合格。7.5注意事項（1）受試者錄用標準1）年齡介于18歲至65歲的男性或女性；2）受試者應身體健康；3）前臂皮膚應完好無損且沒有皮膚病及其它皮膚問題。（2）排除受試者的標準，如果受試者有下列情況之一，不能被錄用參加試驗1）懷孕婦女；2）診斷患有糖尿病、肝炎、艾滋?。℉IV陽性）、器官移植者。（3）試驗采樣結束后，先用70%的酒精對受試者前臂進行消毒，然后用皮膚消毒劑對兩只前臂進行消毒處理，處理后清水沖洗，擦干，再涂少量的抗生素軟膏于試驗區(qū)，以防皮膚感染。（4）在試驗完成后的48h至72h內(nèi)，受試者如發(fā)現(xiàn)前臂上有小膿皰、水皰，隆起的紅色癢皰，應及時通知檢驗單位。8消毒劑對皮膚消毒現(xiàn)場試驗8.1目的測定消毒劑對皮膚表面自然菌消毒所需使用的劑量，以驗證該消毒劑對手消毒的實用劑量。8.2試驗器材（1）中和劑（中和劑經(jīng)鑒定合格）。（2）無菌棉拭。（3）稀釋液0.1%吐溫80的0.03mol/L磷酸鹽緩沖液pH7.2。（4）磷酸鹽緩沖液(PBS，0.03mol/L，pH7.2)。（5）標準硬水：見附錄A。（6）無菌紗布巾。（7）規(guī)格板(用牛皮紙制備，中央留一3.0cm×10.0cm的空格作為采樣部位)121℃15min滅菌備用。（8）胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA）。（9）振蕩混合器。（10）吸管、試管、平皿若干。8.3試驗步驟(1)在使用現(xiàn)場，隨機選定受試者。試驗不少于30人次。(2)消毒前，讓受試者將左右前臂內(nèi)側中段相互充分對搓后，將規(guī)格板放于受試者左前臂內(nèi)側中段表面，用無菌棉拭在含10ml稀釋液試管中浸濕，于管壁上擠干后，在規(guī)格板框定的區(qū)域內(nèi)，橫向往返涂擦10遍，縱向往返涂擦3遍，每涂擦一遍，將棉拭轉動一次。采樣后，以無菌操作方式將棉拭采樣端剪入采樣液試管內(nèi)，振打200次。(3)根據(jù)消毒劑使用說明書的方法對右前臂內(nèi)側進行消毒，一般設定作用時間為1min～3min。消毒后用中和劑代替稀釋液，與陽性對照組同樣的方法對受試者右前臂內(nèi)側表面殘留的自然菌采樣一次，作為試驗組樣本。(4)分別將未用過的同批中和劑、稀釋液和棉拭作為陰性對照組樣本。(5)分別取適宜稀釋度的試驗組、陽性對照組和陰性對照組樣本各1.0ml，以瓊脂傾注法接種平皿，每個樣本接種2個平皿，放37℃恒溫箱中培養(yǎng)48h，觀察最終結果。(6)計算殺滅對數(shù)值8.4評價規(guī)定陽性對照組應有較多細菌生長，陰性對組應無菌生長，以對30人次批皮膚表面自然菌的平均殺滅對數(shù)值≥1.00，可判為消毒合格。8.5注意事項(1)本試驗需有志愿者參與，重復人次較多，一人可多次受試，但不得在一批試驗或同日反復參與，否則可影響結果的準確性。(2)受試者接受試驗時，不得觸摸任何表面，以免使試驗部位沾染雜菌。(3)棉拭涂抹采樣，較難標準化，為此應盡量使棉拭的大小，用力的均勻，吸取采樣液的量，以及洗菌時敲打的輕重等先后保持一致。(4)擦拭消毒時，涂藥量要適宜，涂抹要均勻。(5)現(xiàn)場樣本須及時檢測，室溫存放不得超過2h。否則應放4℃冰箱內(nèi)，但亦不得超過4h。9消毒劑對其它表面消毒模擬現(xiàn)場鑒定試驗9.1目的用于鑒定消毒劑對人工污染于一般物體[指除本規(guī)范已有專門規(guī)定如食(飲)具、醫(yī)療器械等以外的物體]表面細菌的殺滅作用，以驗證該消毒劑對上述表面消毒的實用劑量。9.2試驗器材(1)大腸桿菌(8099)與金黃色葡萄球菌(ATCC6538)。如需用于殺滅其特定微生物者，可增用該特定微生物進行試驗。菌懸液制備，按2.1.1.2規(guī)定的方法和要求進行，檢測菌量應在1.25×107cfu/樣本～1.25×108cfu/樣本(相當于5×105cfu/cm2～5×106cfu/cm2)。(2)磷酸鹽緩沖液(PBS，0.03mol/L，pH7.2)(3)稀釋液(含0.1%吐溫80的PBS溶液)(4)中和劑(按2.1.1.5方法鑒定合格者)(5)胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基(6)無菌棉拭(7)規(guī)格板(用不銹鋼材料制備，中央留一5.0cm×5.0cm的空格作為采樣部位)9.3試驗步驟(1)以人工染菌實物如桌面、地面、墻壁等為消毒對象。在無特殊要求情況下，可用木制桌面為代表，進行消毒效果觀察。(2)每次試驗，各類物品表面測試30個樣本。(3)染菌時，選物品較平的部位，于規(guī)格板中央空格內(nèi)用無菌棉拭沾以菌懸液均勻涂抹被試表面的60個區(qū)塊(各為25cm2)。待自然干燥后進行試驗。30個區(qū)塊作為陽性對照區(qū)，30個區(qū)塊為試驗區(qū)。(4)陽性對照組：將無菌棉拭于含5ml稀釋液試管中沾濕，對30個對照組區(qū)塊涂抹采樣，每區(qū)塊橫豎往返各8次。采樣后，以無菌操作方式將棉拭采樣端剪入原稀釋液試管內(nèi)，振打200次，作用10min。用稀釋液做適當稀釋。(5)試驗組：根據(jù)說明書中介紹的使用劑量將消毒劑噴霧或涂擦于物體表面進行消毒。消毒后，將無菌棉拭于含5ml中和劑試管中沾濕，分別對30個消毒區(qū)塊進行涂抹采樣，每區(qū)塊橫豎往返各8次。采樣后，以無菌操作方式將棉拭采樣端剪入原中和劑試管內(nèi)，振打200次，作用10min。必要時用中和劑作適當稀釋。(6)試驗結束后，將用過的同批次中和劑、稀釋液各1.0ml接種培養(yǎng)基，作為陰性對照組樣本。(7)將陽性對照組、陰性對照組和消毒組樣本，每份吸取1.0ml，以瓊脂傾注法接種平皿，每個樣本接種2個平皿，放37℃恒溫箱中培養(yǎng)48h，觀察最終結果。(8)9.4評價規(guī)定試驗重復3次，陽性對照組菌數(shù)符合要求，陰性對組無菌生長，所有樣本的殺滅對數(shù)值均≥3.00，可判為消毒合格。9.5注意事項(1)試驗操作必須采取嚴格的無菌技術。(2)每次試驗均需設陽性和陰性對照，絕不可省略