第十三章與醫(yī)學(xué)有關(guān)的其他細(xì)菌軍團(tuán)菌屬,假單胞菌屬是一群不發(fā)酵葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厭氧、無(wú)芽胞的革蘭陰性桿菌；多為條件致病菌。

第一節(jié)軍團(tuán)菌屬（Legionella)

一、概述1976年在美國(guó)費(fèi)城退伍軍人集會(huì)時(shí)發(fā)生了爆發(fā)性肺炎流行，有221人發(fā)病，29人死亡。次年發(fā)現(xiàn)為一類新菌，1978年正式命名為軍團(tuán)菌，共有39種及3個(gè)亞種，63個(gè)血清型。

Ｇ-桿菌，有端鞭毛或側(cè)鞭毛，有菌毛，有微莢膜菌體不易染色，用Dieterle鍍銀法染成黑褐色Giemsa法染色染成紅色

二、生物學(xué)特性對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求苛刻，生長(zhǎng)緩慢嚴(yán)格需氧，初次分離2.5％－5％的CO２生長(zhǎng)良好，生長(zhǎng)溫度為35℃，最適pH6.1。血平板上不生長(zhǎng)BCYE（活性炭-酵母浸液瓊脂）orGVPC：含L-半胱氨酸和鐵離子，3-5天可形成1-2mm直徑的光澤菌落，有酸臭味。

F－G（Feeley-Garman）瓊脂培養(yǎng)基：3～

5d培養(yǎng)可見針尖大小菌落，在紫外線照射下可發(fā)出黃色熒光在富含L－酪氨酸－苯丙氨酸瓊脂平板：產(chǎn)生棕色水溶性色素，能分解馬尿酸鹽嗜肺軍團(tuán)菌的生存能力較強(qiáng)，在蒸餾水中存活100天以上，在污水中可存活1年、對(duì)熱和常用化學(xué)消毒劑敏感常存在于人工管道的水源中（空調(diào)冷卻管，淋浴頭，呼吸機(jī)等），故可以氣溶膠傳播高發(fā)于夏秋季節(jié)，易侵犯患有慢性器質(zhì)性疾病或免疫功能低下患者，如惡性腫瘤、慢性支氣管炎或肺氣腫等患者，以及使用激素及免疫抑制劑和器官移植的患者。軍團(tuán)菌在機(jī)會(huì)感染或醫(yī)院內(nèi)感染中的位置也越來(lái)越被人們所重視。三、臨床意義臨床類型：流感樣型（旁地亞克熱）：輕癥、發(fā)熱、寒戰(zhàn)、上感癥狀、無(wú)肺炎肺炎型（軍團(tuán)?。褐匕Y、高熱、咳嗽、肺炎、多器官衰竭死亡肺外感染型（繼發(fā)感染）：多臟器感染癥狀屬胞內(nèi)菌，能在巨噬細(xì)胞內(nèi)繁殖，其免疫主要是細(xì)胞免疫。四、微生物鑒定1.核酸檢測(cè)：

針對(duì)5SrRNA和16SrRNA基因設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，可快速檢測(cè)。2.分離培養(yǎng)

活性炭-酵母浸液瓊脂培養(yǎng)基(BCYE)orGVPC

：形成1-2mm直徑的光澤菌落。

3.溴甲酚紫(BCP)斑點(diǎn)試驗(yàn)即BCP100mg溶于1mol／LKOH10ml中，配成10％濃度。然用蒸餾水稀釋25倍，使之成為0.04％濃度。試驗(yàn)時(shí)取此試劑1滴，滴于濾紙上，再刮取新培養(yǎng)菌，涂抹于含有BCP試劑的濾紙上，若在30s內(nèi)出現(xiàn)藍(lán)寶石色澤即為陽(yáng)性。

4.色素產(chǎn)生試驗(yàn)在MH-LH培養(yǎng)基產(chǎn)生的色素：在培養(yǎng)基中產(chǎn)生的褐色素：由酶介導(dǎo)形成黑色素細(xì)胞外熒光:該熒光是由細(xì)菌分泌的一種化合物進(jìn)人瓊脂培養(yǎng)基中而形成的，用長(zhǎng)波紫外線照射時(shí)可出現(xiàn)黃色或黃綠色熒光；細(xì)胞內(nèi)熒光，在紫外線照射時(shí)，細(xì)菌菌落呈藍(lán)白色或暗黃色熒光。5.抗體檢測(cè)作為檢測(cè)軍團(tuán)菌感染臨床常用手段，檢測(cè)病人血清中抗軍團(tuán)菌lgM及l(fā)gG抗體做出特異性診斷。lgM抗體為近期感染，lgG抗體在體內(nèi)持續(xù)數(shù)月，供流行病學(xué)的調(diào)查。直接法熒光抗體染色6.藥物敏感試驗(yàn)

臨床治療藥物為紅霉素，可加用利福平，而氨基糖甙類抗生素、青霉素、頭孢菌素類抗生素對(duì)本菌無(wú)效。藥物敏感試驗(yàn)不做臨床常規(guī)化驗(yàn)項(xiàng)目。第二節(jié)假單胞菌屬需氧、有鞭毛、無(wú)芽胞、無(wú)莢膜的革蘭陰性桿菌，氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性。DNAG+Cmol％為58～71，包括200余種菌。多數(shù)為腐生菌，少數(shù)為植物和動(dòng)物寄生菌，大多為條件致病菌。

分類按rRNA同源性分為5群及未確定群第1群可分為12個(gè)菌種銅綠假單胞菌熒光假單胞菌斯氏假單胞菌產(chǎn)堿假單胞菌等。銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌（P.aeruginosa）俗稱綠膿桿菌，廣泛分布于自然界。常見的條件致病菌。當(dāng)燒傷、腫瘤、使用免疫抑制劑或?qū)Ч軙r(shí)易感染。產(chǎn)生綠色水溶性色素，感染后使膿汁或敷料出現(xiàn)綠色，故得名。一、生物學(xué)性狀1.形態(tài)和染色革蘭陰性，大小為0.5～1.0×1.5～3.0μm的直或微彎桿菌。有莢膜，單端有1～3根鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑。臨床分離的菌株常有菌毛。2.培養(yǎng)需氧，在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好。最適生長(zhǎng)溫度為35℃在4℃不生長(zhǎng)而在42℃可生長(zhǎng)(特點(diǎn))菌落大小不一，扁平濕潤(rùn),邊緣不齊產(chǎn)生帶熒光的水溶性色素（青膿素與綠膿素）而使培養(yǎng)基呈亮綠色。血瓊脂平板上產(chǎn)生透明的溶血環(huán)。在液體培養(yǎng)基中呈混濁生長(zhǎng)，常在其表面形成菌膜。3、生化反應(yīng)分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，多數(shù)菌不液化明膠。銅綠假單胞菌分解尿素，氧化酶陽(yáng)性，不形成吲哚。二、致病性（一）致病因素

粘附素：黏附上皮細(xì)胞多糖莢膜：細(xì)菌黏附細(xì)胞；抗吞噬內(nèi)毒素：發(fā)熱、休克、DIC外毒素：抑制蛋白質(zhì)合成綠膿素:催化超氧化物產(chǎn)生有毒基團(tuán)彈性蛋白酶：降解彈性蛋白，損傷肺組織磷脂酶C：組織損傷（二）臨床意義廣泛存在自然界與人體，為人體內(nèi)的正常菌群多見于皮膚粘膜損傷與機(jī)體免疫力下降病人，幾乎可感染人體的任何組織和部位多見于燒傷和創(chuàng)傷后感染局部化膿性炎癥：手術(shù)切口、燒傷組織感染也可引起中耳炎、角膜炎、尿道炎、胃腸炎、心內(nèi)膜炎、膿胸，以及菌血癥、敗血癥三、微生物檢驗(yàn)

1．標(biāo)本采集采取不同的標(biāo)本：患者的血液、腦脊液、胸(腹)水、膿液、分泌液、痰、尿液、十二指腸引流液、糞便等；醫(yī)院病區(qū)或手術(shù)室的空氣、水、地面、把手、醫(yī)療診斷器械及生活用品。

2．標(biāo)本鏡檢為革蘭陰性，有動(dòng)力的桿菌

3．分離培養(yǎng)普通培養(yǎng)基：形成圓形、扁平隆起、光滑濕潤(rùn)菌落，瓊脂被染成綠色或黃綠色，約80％-90％產(chǎn)生綠膿素或熒光菌株素。血瓊脂平板：有特殊氣味的藍(lán)綠色菌落，有透明溶血環(huán)

4．生化鑒定氧化酶陽(yáng)性，氧化分解葡萄糖、木糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，液化明膠，還原硝酸鹽產(chǎn)生氮?dú)?，吲哚陰性，利用枸櫞酸鹽，精氨酸雙水解酶陽(yáng)性。四、檢驗(yàn)結(jié)果分析與報(bào)告

結(jié)合臨床感染癥狀，特別是反復(fù)檢出即可確定是感染病原菌。如無(wú)感染的臨床表現(xiàn)，應(yīng)作為正常菌群。銅綠假單胞菌具有多重耐藥性，能抵抗多種抗生素

Kolar報(bào)道耐藥株約占臨床分4.0%~26.3%，可在治療過(guò)程中發(fā)生突變產(chǎn)生耐藥，應(yīng)密切監(jiān)測(cè)其耐藥性。第三節(jié)李斯特菌屬（Listeria

）概述李斯特氏菌屬（Listeria

）普遍存在于環(huán)境中，最新的分類學(xué)研究表明，其分為六個(gè)種：?jiǎn)魏嗽錾钏固厥暇↙isteria

monocytogenes）伊氏李斯特氏菌（Listeria

ivanovii）無(wú)害李斯特氏菌（Listeria

innocua）斯氏李斯特氏菌（Listeria

seeligeri）威氏李斯特氏菌（Listeria

welshimeri）格氏李斯特氏菌（Listeria

grayi）

一、生物學(xué)特性（一）形態(tài)染色革蘭氏陽(yáng)性；小的、類似球形桿菌在有些培養(yǎng)基中稍彎，兩端鈍圓，單個(gè)、成短鏈、細(xì)胞彼此連成V形，或成群的細(xì)胞沿長(zhǎng)軸方向平行排列，在較老的或生長(zhǎng)不良的培養(yǎng)物中，可能形成絲狀；20-25℃以4根周生鞭毛運(yùn)動(dòng)，在37℃只有較少的鞭毛或1根鞭毛；無(wú)芽胞、無(wú)莢膜。（二）培養(yǎng)特性兼性厭氧；pH范圍pH4.4-pH9.6。在20-25℃培養(yǎng)有動(dòng)力，穿刺培養(yǎng)2-5天可見倒立傘狀生長(zhǎng)，肉湯培養(yǎng)物在顯微鏡下可見翻跟斗運(yùn)動(dòng)。生長(zhǎng)溫度范圍為2-42℃（也有報(bào)道在0℃能緩慢生長(zhǎng)），最適培養(yǎng)溫度為35--37℃。在固體培養(yǎng)基上，菌落初始很小，透明，邊緣整齊，呈露滴狀，但隨著菌落的增大，變得不透明。在5-7%的血平板上，菌落灰白色，可產(chǎn)生窄小β-溶血環(huán)。在0.6%酵母浸膏胰酪大豆瓊脂(TSAYE)瓊脂上，用45°角入射光照射菌落，通過(guò)解剖鏡垂直觀察，菌落呈蘭色、灰色或蘭灰色。

（三）生化反應(yīng)觸酶陽(yáng)性，氧化酶陰性。能發(fā)酵多種糖類，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，如發(fā)酵葡萄糖、乳糖、水楊素、麥芽糖、鼠李糖、七葉苷、蔗糖（遲發(fā)酵）、山梨醇、海藻糖、果糖，不發(fā)酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、側(cè)金盞花醇、棉子糖、衛(wèi)矛醇和纖維二糖。不利用枸櫞酸鹽，40%膽汁不溶解，吲哚、硫化氫、尿素、明膠液化、硝酸鹽還原、賴氨酸、鳥氨酸均陰性，VP、甲基紅試驗(yàn)和精氨酸水解陽(yáng)性。（四）血清型根據(jù)菌體（O）抗原和鞭毛(H)抗原，將單增李氏菌分成13個(gè)血清型，分別是1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4ab、4c、4d、4e和“7”。致病菌株的血清型一般為1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、1/2a和4b,后兩型尤多。（五）抵抗力該菌對(duì)理化因素抵抗力較強(qiáng)，在土壤、糞便、青儲(chǔ)飼料和食品中能長(zhǎng)期存活；對(duì)堿和鹽抵抗力強(qiáng)，60-70℃經(jīng)5-20min可殺死，70%酒精5min、2.5%石炭酸、2.5%氫氧化鈉、2.5%福爾馬林20min可殺死此菌；濕熱滅菌（121℃，至少15min）和干熱滅菌（160-170℃，至少1hr）可殺滅該菌，對(duì)紫外線和γ射線敏感；該菌對(duì)青霉素、氨芐青霉素、四環(huán)素（已產(chǎn)生抗性）、氨基糖苷類、氯霉素均敏感。

二、流行病學(xué)

分布：廣泛存在于自然界中，土壤、地表水、污水、廢水、青儲(chǔ)飼料、動(dòng)植物及其食品中均有該菌存在，所以動(dòng)物很容易食入該菌，并通過(guò)口腔-糞便的途徑進(jìn)行傳播寄主范圍：哺乳動(dòng)物、鳥類、魚類、甲殼類和昆蟲二、流行病學(xué)

據(jù)報(bào)道，有1-10%的人類腸道中存在單核增生李斯特氏菌，4-8%的水產(chǎn)品、5-10%的奶及其產(chǎn)品、30%以上的肉制品及15%以上的家禽均被該菌污染。相關(guān)食品：鮮奶、巴氏消毒奶、奶酪（尤其是軟奶酪）、冰激凌、生的蔬菜、發(fā)酵過(guò)的生肉制作的香腸、生的和加工過(guò)的禽肉、各種生的肉類、生的和煙熏的魚肉。約有85-90%的病例是由被污染的食品引起的。1996年至1999年，因單核增生李斯特氏菌回收的食品種類（來(lái)源：USDA及FDA報(bào)告）三、致病性及其治療該病的臨床表現(xiàn)，健康成人個(gè)體出現(xiàn)輕微類似流感癥狀，新生兒、孕婦、免疫缺陷患者表現(xiàn)為呼吸急促、嘔吐、出血性皮疹、化膿性結(jié)膜炎、發(fā)熱、抽搐、昏迷、自然流產(chǎn)或死嬰、腦膜炎、敗血癥直至死亡。由該菌造成的腦膜炎的致死率可高達(dá)70%，敗血癥的死亡率達(dá)50%，圍產(chǎn)期或新生兒感染的死亡率超過(guò)80%，懷孕期婦女的感染，母親通常能存活下來(lái)?？股刂委煟们嗝顾鼗虬逼S青霉素注射給藥，或與氨基糖苷類抗生素一起用藥。（一）感染人群感染劑量未知，但與該菌的毒力和易感人群的年齡、免疫狀態(tài)有關(guān)。易感者：孕婦/胎兒—圍產(chǎn)期和新生兒的感染；接受皮質(zhì)激素、抗癌劑治療、器官移植治療、艾滋病患者等免疫缺損者；

癌癥病人—尤其是白血病的患者；不太常見的報(bào)道—糖尿病、肝硬化、哮喘和潰瘍性結(jié)腸炎的患者；年紀(jì)較大的人；沒有免疫缺陷的健康的人，食用污染該菌尤其是大量污染該菌的食品后，也有患病的危險(xiǎn)。（二）致病機(jī)理單增李氏菌的抗原結(jié)構(gòu)與毒力無(wú)關(guān)，它的致病性與毒力機(jī)理如下：

1、寄生物介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)增生，使它附著及進(jìn)入腸細(xì)胞與巨噬細(xì)胞；

2、抗活化的巨噬細(xì)胞，單增李氏菌有細(xì)菌性過(guò)氧化物歧化酶，使它能抗活化巨噬細(xì)胞內(nèi)的過(guò)氧物（為殺菌的毒性游離基團(tuán)）分解；

3、溶血素，即李氏桿菌素O，可以從培養(yǎng)物上清液中獲得，有α和β兩種，為毒力因子。四、實(shí)驗(yàn)室危害不是一種普遍的與實(shí)驗(yàn)室相關(guān)的傳染病，目前只有少數(shù)有報(bào)道的案例發(fā)生；直接攝取是最普遍的一種感染方式，除此之外，暴露在該菌高濃度的氣溶膠中，也可通過(guò)眼睛和破損的皮膚、粘膜進(jìn)入體內(nèi)造成感染。（一）注意事項(xiàng)生物安全2級(jí)，操作時(shí)應(yīng)有相應(yīng)的防污染設(shè)施，在進(jìn)行可能產(chǎn)生氣溶膠的操作時(shí)，應(yīng)在生物安全柜內(nèi)完成；在直接接觸有感染性的材料時(shí)，必須穿著實(shí)驗(yàn)服，戴手套和護(hù)目鏡；懷孕的婦女應(yīng)避免接觸傳染物。（二）操作要求濺灑：使氣溶膠沉降，穿著防護(hù)服裝，用紙巾輕輕覆蓋濺灑處，加入1%次氯酸鈉溶液，由周邊向中心加，在清理之前要留充足的接觸時(shí)間（30min）；廢棄：在廢棄前應(yīng)先采取凈化措施，高壓蒸汽滅菌、化學(xué)消毒、焚燒等；儲(chǔ)存：在有適當(dāng)標(biāo)記的密封容器內(nèi)儲(chǔ)存。五、檢測(cè)程序

（一）增菌

目前常用的單核增生李斯特氏菌檢測(cè)增菌肉湯主要有半量Fraser肉湯、Fraser肉湯（FB）、UVM（ModifiedUniversityofVermontbroth，也叫UVM1）、LEB（Listeriaenrichmentbroth）和BLEB（bufferedListeriaenrichmentbroth）半量Fraser肉湯和Fraser肉湯具有選擇性和區(qū)別性。加入檸檬酸鐵銨和七葉靈，起到區(qū)別的作用。李斯特氏菌可以水解七葉靈，與培養(yǎng)基中的鐵離子反應(yīng)，使培養(yǎng)基變黑，可直觀的從培養(yǎng)液的顏色就可以判斷是否有單核李斯特氏菌的生長(zhǎng)。氯化鋰、吖啶黃和萘啶酮酸作為選擇性因子。半量Fraser肉湯與Fraser肉湯所用的添加劑一樣半量Fraser肉湯：萘啶酮酸10mg/L，吖啶黃12.5mg/LFraser肉湯：萘啶酮酸20mg/L，吖啶黃的25mg/LUVMUVM只有選擇性沒有區(qū)別性加入萘啶酮酸和鹽酸吖啶黃，作為選擇性因子。雖然其中含有七葉靈，但是沒有添加檸檬酸鐵銨，不能發(fā)生黑色的顏色反應(yīng)。LEB和BLEB只有選擇性沒有區(qū)別性LEB是在TSB-YE的基礎(chǔ)上加入鹽酸吖啶黃、萘啶酮酸和放線菌酮等選擇性因子；加入的丙酮酸鈉，有助于受損細(xì)胞的恢復(fù)；不含七葉靈和檸檬酸鐵銨，無(wú)顏色反應(yīng)BLEB是在LEB基礎(chǔ)上加入緩沖體系：磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉（二）分離分離培養(yǎng)基有：OXA、PALCOM、LPM、MOX等，但首選仍然是OXA。分離原理主要是基于李斯特氏菌具有β－D－葡萄糖苷酶的活性，能水解培養(yǎng)基中的七葉靈，產(chǎn)生七葉苷，與鐵離子產(chǎn)生顏色反應(yīng)而，使菌落為棕褐色，并帶有褐色暈圈，而致病性和非致病性李斯特氏菌病都能發(fā)生這種反應(yīng)還有一些選擇性顯色培養(yǎng)基，如BCM、ALOA、CHROMagar

listeria、Rapid’L.mono等，其原理主要是檢測(cè)由毒力基因編碼的溶血素，而此種溶血素只存在于單核增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌中，因而可以很好的將此兩種菌同李斯特屬的其他種分開。

OXA平板單核增生李斯特氏菌ATCC1911748h，35℃培養(yǎng)

OXA平板無(wú)害李斯特氏菌ATCC3309048h，35℃培養(yǎng)

（三）鑒定藍(lán)色菌落檢驗(yàn)（Henryillumination）典型運(yùn)動(dòng)：相差顯微鏡，輕微旋轉(zhuǎn)或翻跟頭動(dòng)力試驗(yàn)：7天，傘形生長(zhǎng)過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)：陽(yáng)性革蘭氏染色：陽(yáng)性短桿菌溶血試驗(yàn)：穿刺接種血平板硝酸鹽還原試驗(yàn)：5天，陰性糖發(fā)酵試驗(yàn)：葡萄糖、麥芽糖和七葉靈，李斯特菌屬反應(yīng)均為陽(yáng)性，除格氏李斯特甘露醇陰性，李斯特其他種甘露醇陰性，木糖和鼠李糖最有檢測(cè)意義動(dòng)力試驗(yàn)血平板單核增生李斯特氏菌ATCC1911736h，35℃培養(yǎng)血平板無(wú)害李斯特氏菌ATCC3309036h，35℃培養(yǎng)血平板伊氏李斯特氏菌ATCC1911924h，35℃培養(yǎng)單核增生李斯特氏菌檢測(cè)流程25g樣品+225mlBLEB基礎(chǔ)（加入丙酮酸鈉）

加入萘啶酮酸、鹽酸吖錠黃、放線菌酮30℃4hr劃線接種OXA平板30℃

24hr和48hr

科瑪嘉李氏菌顯色培養(yǎng)基TSA-YE分純35℃

24hr-48hr

35℃

24hr過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)、革蘭氏染色、溶血試驗(yàn)、糖發(fā)酵試驗(yàn)（木糖、鼠李糖）APIListeria35℃

24-48hr報(bào)告結(jié)果35℃18-24hr方法名稱一次增菌二次增菌分離鑒定快速方法SN0184-1993加工MBP30℃，18-24hEB30℃，24/48hMMA/OXA（35℃，24-48h）藍(lán)色菌落；典型運(yùn)動(dòng)；過(guò)氧化氫酶；革蘭氏染色；溶血試驗(yàn)；尿素酶試驗(yàn)；硝酸鹽還原；MR-VP；三糖鐵；糖發(fā)酵；動(dòng)力試驗(yàn)；協(xié)同溶血*；血清學(xué)檢驗(yàn)*；小鼠毒力試驗(yàn)*無(wú)未加工EB（30℃，24/48h）GB/T4789.30-2003EB（30±1℃，48h）MMA（30±1℃，24-48h）藍(lán)色菌落；三糖鐵；動(dòng)力試驗(yàn)；染色鏡檢（革蘭氏染色、典型運(yùn)動(dòng)）；生化特性（溶血反應(yīng)、硝酸鹽還原、尿素酶、MR-VP、糖發(fā)酵）；小鼠毒力試驗(yàn)；協(xié)同溶血無(wú)LB1（30±1℃，24h）LB2（30±1℃，24h）FDABLEB+Phy（30℃，4h）BLEB+Phy+三種抑菌劑（30℃，20/44h）OXA/PALOM/MOX/LPM+七葉靈+Fe3+推薦BCM/ALOA/RapidL'mono/CHROMagar

Listeria藍(lán)色菌落*；典型運(yùn)動(dòng)或動(dòng)力試驗(yàn)；過(guò)氧化氫酶；革蘭氏染色；溶血試驗(yàn)；硝酸鹽還原*；糖發(fā)酵；協(xié)同溶血；血清學(xué)檢驗(yàn)；小鼠毒力試驗(yàn)*篩選、鑒定都可以使用快速方法USDAUVM（30±2℃，22±2h）FB（35±2℃，26-48±2h）MOX（35±2℃，26-48±2h）初步鑒定：純菌菌落形態(tài)；典型運(yùn)動(dòng)；生化鑒定：MICRO-ID?

Listeria或Api?

Listeria或BAM等方法中的傳統(tǒng)生化反應(yīng)；協(xié)同溶血遺傳鑒定：核糖體RNA檢測(cè)；PFGE*篩選用的快速方法必須經(jīng)過(guò)確認(rèn)后才可使用鑒定中用到MICRO-ID?

、Api?、GenProbe

AccuProbe?、GENE-TRAK?各官方方法比較各官方方法比較方法名稱一次增菌二次增菌分離鑒定快速方法CFIAMFHPB-30LEB（UVM）（30℃，24/48h）MFB（35℃，24-48h）OXA+LPM或MOX或PALCOM典型運(yùn)動(dòng)或動(dòng)力試驗(yàn)；溶血試驗(yàn)；甘露醇；木糖；鼠李糖；快速鑒定試劑盒*；過(guò)氧化氫酶*；革蘭氏染色*；協(xié)同溶血*；血清學(xué)試驗(yàn)*作為鑒定的可選步驟，允許使用快速方法，如Vitek或API、MicroIDListeria、Listera

Accuprobe?ISO11290-1:1996（E）半量Fraser肉湯(30℃，24±2h）Fraser肉湯（35或37℃，48±2h）OXA和PALCOM（30、35或37℃，24-48h)PALCOM平板微需氧或好氧條件培養(yǎng)藍(lán)色菌落*；過(guò)氧化氫酶；革蘭氏染色；動(dòng)力試驗(yàn)或典型運(yùn)動(dòng)*；溶血試驗(yàn)；糖發(fā)酵試驗(yàn)；協(xié)同溶血；送參考實(shí)驗(yàn)室（血清或噬菌體分型）無(wú)NMKLNo.1362nd1999LBⅠ(30.0±1.0℃，24±3h)LBⅡ(30.0±1.0℃，24±3h）或Fraser肉湯（37.0±1.0℃，48±4h)OXA和PALCOM(37.0±1.0℃，24±3/48±4h，好氧或微需氧）溶血試驗(yàn)；過(guò)氧化氫酶；革蘭氏染色；典型運(yùn)動(dòng)動(dòng)力試驗(yàn)；糖發(fā)酵試驗(yàn)；送參考實(shí)驗(yàn)室（血清、噬菌體、DNA或酶分型）允許使用經(jīng)過(guò)確認(rèn)的商業(yè)化生產(chǎn)的單核增生李斯特氏菌菌株鑒定試驗(yàn)，但沒列明具體試劑盒名稱單核增生李斯特氏菌檢測(cè)

快速方法VIDASVITEKAPIListeriaBAXTECTAVIDASLMO：?jiǎn)魏嗽錾钏固豓IDASLIS：李斯特氏菌VIDASVITEKAPIListeriaBAXTECRA?UNIQUEPLUS?TECRA?UNIQUETM第四節(jié)布魯菌屬包括羊布魯菌(又稱馬爾他布魯菌)、牛布魯菌(又稱流產(chǎn)布魯菌)、豬布魯菌、綿羊布魯菌、狗布魯菌、森林鼠布魯菌等6個(gè)種，在我國(guó)流行占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)的是羊布魯斯菌病，其次為牛布魯斯菌。（一）臨床意義

可通過(guò)皮膚、呼吸道、消化道引起感染。以長(zhǎng)期發(fā)熱多汗、關(guān)節(jié)痛及全身乏力疼痛為特征。多見于牧區(qū)，城市散發(fā)，發(fā)病季節(jié)以夏秋較多。傳染源為病獸，病菌存在于乳液、陰道分泌物、胎兒及羊水內(nèi)，引起動(dòng)物死胎及流產(chǎn)。在淋巴結(jié)、脾、骨髓等處繁殖，并多次進(jìn)入血液引起菌血癥，有各種類型發(fā)熱，常見波狀熱。胞內(nèi)寄生菌，以細(xì)胞免疫為主，它有較強(qiáng)的內(nèi)毒素，能產(chǎn)生透明質(zhì)酸酶和過(guò)氧化氫酶有關(guān)。有利于細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖和擴(kuò)散，致病性還與遲發(fā)性超敏反應(yīng)有關(guān)。特異性IgM和lgG可發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。布魯菌各菌種或生物型的抗體有交叉保護(hù)作用，其初期的免疫為有菌免疫，但隨著免疫力不斷增強(qiáng)，可轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)菌免疫。

（二）微生物特性Ｇ-短小球桿菌，無(wú)動(dòng)力無(wú)芽胞、光滑型有微莢膜，家畜的胎盤、絨毛膜中都含有赤癬醇，為本菌的生長(zhǎng)因子；所以這些部位對(duì)感染敏感。為需氧菌，營(yíng)養(yǎng)要求高，初次分離時(shí)需５～10％的C02及硫胺、煙酸、生物素等物質(zhì)，最適生長(zhǎng)溫度為35℃，最適pH6．7。生長(zhǎng)緩慢，初代分離更為遲緩。其抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，主要有A和M抗原，羊布魯菌A：M約為1：20；牛布魯菌A：M約為20：1。

(三)微生物檢驗(yàn)

1.采集血液、骨髓、尿液或流產(chǎn)胎兒的淋巴、肝脾肺組織，及流產(chǎn)的子宮分泌物等標(biāo)本。2.在血瓊脂平板培養(yǎng)5～7天可形成微小、灰色不溶血菌落。延長(zhǎng)培養(yǎng)≥30天才能報(bào)告陰性3．生化鑒定及染料抑制試驗(yàn)：可利用葡萄糖等糖類，但產(chǎn)酸量少。各種布魯菌的生化鑒定菌種氧化酶/觸酶葡萄糖分解精氨酸脫羧硫廑40μg復(fù)紅20μg羊布魯菌

++-++牛布魯菌

++--+豬布魯菌

++++-綿羊布魯菌

+/---+-犬布魯菌++++-

4．藥物敏感試驗(yàn)

首選強(qiáng)力霉素，次選磺胺增效劑(TMP／SMZ)；由于病程長(zhǎng)，用藥時(shí)間需4—6周。藥敏試驗(yàn)可不作為臨床常規(guī)。

5．抗體檢測(cè)感染后2周血中開始出現(xiàn)不完全抗體，需用抗人球蛋白檢測(cè)，且在病程進(jìn)展中不斷的升高。發(fā)病3周后出現(xiàn)IgG抗體，其特異性較高。

6．結(jié)果解釋由于培養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)苛求而且時(shí)間長(zhǎng)，應(yīng)以血清學(xué)診斷為主。從患者的標(biāo)本中分離出布魯菌即為確診的依據(jù)。應(yīng)盡早抽血或骨髓作分離培養(yǎng)。血清學(xué)檢查是常用的診斷方法，癥狀出現(xiàn)后，抗體效價(jià)上升，持續(xù)時(shí)間很長(zhǎng)；若抗體效價(jià)再次升高，可能是重復(fù)感染或復(fù)發(fā)。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)特異性強(qiáng)，診斷價(jià)值較高。第五節(jié)彎曲菌屬是一類呈逗點(diǎn)狀或s形的G-菌。廣泛分布于動(dòng)物界，其中有些可引起動(dòng)物與人類的腹瀉、胃腸炎和腸道外感染等疾病。對(duì)人致病有空腸彎曲菌、大腸彎曲菌、胎兒彎曲菌等，其中空腸彎曲菌是腹瀉的常見病原菌。

空腸彎曲菌(C.jejuni)一、流行病學(xué)特征家畜、家禽腸道正常菌群

傳染源病人，帶菌者，帶菌動(dòng)物

傳播途徑動(dòng)物→人密切接觸、糞口傳播人→人糞口傳播

人群易感性人群普遍易感

1～5歲兒童發(fā)病率最高二、致病性

1.致病物質(zhì)該菌借助于鞭毛和外膜蛋白與空腸上皮細(xì)胞結(jié)合，侵入生長(zhǎng)繁殖，產(chǎn)生腸毒素、細(xì)胞毒素和內(nèi)毒素等物質(zhì)，引起腸炎和腸道外感染。

2.所致疾病嬰幼兒急性腸炎－腹痛、水樣瀉、粘液膿血便。食物中毒：腹瀉。腹瀉是空腸彎曲菌感染最常見的臨床表現(xiàn)，轉(zhuǎn)為粘液膿血樣便，甚至血便。有發(fā)熱腹痛、惡心不適等癥狀。可在1周內(nèi)消退，20％患者癥狀可持續(xù)1-3周。三、微生物特性1.形態(tài)結(jié)構(gòu)G-菌體彎曲呈逗點(diǎn)。無(wú)芽胞。有鞭毛。運(yùn)動(dòng)活潑，呈投鏢樣為其特征。2.基因組及抗原成分基因組大小僅為大腸桿菌的35％；DNA的G+C為30-38mol％按O抗原不同分為65個(gè)血清型。3.培養(yǎng)特征為微需氧菌，最佳氣體環(huán)境通常為含5％氧氣、10％二氧化碳及85％氮?dú)狻?2℃能生長(zhǎng)，營(yíng)養(yǎng)要求高。四、微生物檢驗(yàn)

1.糞便直接鏡檢，G-呈弧形、呈投鏢式運(yùn)動(dòng)。2.核酸檢測(cè)糞便彎曲菌flaA基因，體外擴(kuò)增空腸／大腸彎曲菌為1．3kb。3.分離培養(yǎng)糞便等標(biāo)本可接種選擇平板進(jìn)行分離，置微氧環(huán)境培養(yǎng)?？漳c／大腸彎曲生長(zhǎng)溫度為42℃，培養(yǎng)24h可觀察為灰白濕潤(rùn)、扁平邊緣不整的蔓延生長(zhǎng)的菌落。五、鑒定要點(diǎn)1.為氧化酶陽(yáng)性，G-菌體彎曲或呈S型。2.萘啶酸、頭孢噻吩敏感試驗(yàn)：空腸彎曲菌對(duì)萘啶酸敏感、噻吩耐藥；胎兒彎曲菌對(duì)萘啶酸耐藥、對(duì)頭孢噻吩敏感。3.馬尿酸鹽試驗(yàn)：有助于鑒定空腸彎曲菌空腸亞種，凡試驗(yàn)陽(yáng)性、在42℃條件下生長(zhǎng)，氧化酶陽(yáng)性且與鏡檢形態(tài)相符者，即可報(bào)告為空腸彎曲菌空腸亞種。4.醋酸吲哚水解試驗(yàn)：空腸彎曲菌為陽(yáng)性，胎兒彎曲菌為陰性。5.用抗體包被的乳膠顆粒，遇到相應(yīng)的彎曲菌時(shí)便可出現(xiàn)反應(yīng)?？捎糜阼b定空腸／大腸彎曲菌，具有高度敏感性和特異性。6.DNA探針：DNA-DNA雜交可以用于鑒別大腸彎曲菌與馬尿酸水解陰性的空腸彎曲菌、區(qū)別空腸彎曲菌和其他的彎曲菌。第六節(jié)氣單胞菌屬

一、分類有四個(gè)種：嗜水氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌、溫和氣單胞菌和殺鮭氣單胞菌。分為14個(gè)DNA雜交群(HGs),HG8和HG10被證實(shí)為同一菌種，即維隆氣單胞菌分為兩個(gè)生物型。（動(dòng)力生物型，維隆生物型）二、臨床意義為水中的常居菌，引起腸道內(nèi)的感染,是夏季慢性腹瀉的常見病原菌,其主要的致病物質(zhì)為溶血和細(xì)胞毒素等。腸道外感染為皮膚和軟組織的感染，菌血癥通常發(fā)生在免疫低下的人群,由嗜水氣單胞菌和維隆氣單胞菌引起。也可引起眼部感染，腦膜炎，肺炎，胸膜炎，骨髓炎，關(guān)節(jié)炎，腹膜炎，膽囊炎，靜脈炎和尿道感染等。三、微生物特性

1.G-直桿菌，有動(dòng)力，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上可以生長(zhǎng)。分為嗜冷菌群35℃以下生長(zhǎng)，37℃不生長(zhǎng)。嗜中溫菌群10℃—42℃之間生長(zhǎng)。三、微生物特性

2.氧化酶和觸酶陽(yáng)性，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣，還原硝酸鹽。22℃生化反應(yīng)比37℃活躍，pH為4．5～9．0。

3.抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，血清學(xué)分型有異質(zhì)性。011、034和016在人類的感染中特別重要。四、微生物檢驗(yàn)

1.標(biāo)本采集采取糞便或肛門拭子，血液，膿液。

2.分離培養(yǎng)可用堿性胨水,含菌量少的標(biāo)本增菌培養(yǎng)，糞便和膿液標(biāo)本直接接種，初次分離用血平板和加有10u／ml氨芐西林的血平板。生長(zhǎng)為灰白色，光滑濕潤(rùn)凸起，2mm大小的菌落，有溶血現(xiàn)象。四、微生物檢驗(yàn)

3.生化鑒定：對(duì)O／129耐藥、TCBS平板不生長(zhǎng)、在無(wú)鹽培養(yǎng)基生長(zhǎng)。

嗜水氣單胞菌和豚鼠氣單胞菌均能發(fā)酵阿拉伯糖而其它為陰性，嗜水氣單胞菌V-P和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)陽(yáng)性，而豚鼠氣單胞菌為陰性。

維隆氣單胞菌維隆生物型鳥氨酸脫羧酶陽(yáng)性，精氨酸雙水解酶陰性。第七節(jié)螺桿菌屬

幽門螺桿菌最為常見。幽門螺桿菌

(Helicobacterpylori)1983年首次分離到。HP人群感染率高，平均世界人口的50％被感染。自然定居于胃粘膜。與上消化道疾病高度相關(guān)慢性胃炎（萎縮性胃