免疫組織化學(xué)技術(shù)抗原＋抗體（特異性）＋標(biāo)記物，原位顯示組織或細(xì)胞內(nèi)抗原的一門技術(shù)。根據(jù)抗體標(biāo)記物不同：酶---免疫酶組織化學(xué)熒光素---免疫熒光組化膠體金---免疫膠體金組化高親和力物質(zhì)---親和免疫組化其中，免疫酶組織化學(xué)應(yīng)用廣泛以其為例，掌握免疫組化基本原理免疫酶組化特點：信號定位準(zhǔn)確標(biāo)本可長期保存陽性標(biāo)記與病變關(guān)系方法簡便，易推廣酶選擇標(biāo)準(zhǔn)：★該酶用細(xì)胞化學(xué)易于被檢出，能被光鏡或電鏡觀察?！锩阜磻?yīng)產(chǎn)物須穩(wěn)定，不擴(kuò)散，具有良好定位。

★酶易于純化，獲得純制品?！锩概c免疫球蛋白結(jié)合后，不喪失其活性?！锩冈赑H中性液內(nèi)較穩(wěn)定?！锝M織中不應(yīng)存在與底物作用的內(nèi)源性酶。符合上述條件：

辣根過氧化物酶---HRP

鹼性磷酸酶---AKP

葡萄糖氧化酶---GOD（一）辣根過氧化物酶（HRP）★分子量（40000），不會遮蓋抗原的結(jié)合部位★穩(wěn)定，易獲得較高純度酶★具有較高活性及特異性★可溶性佳，生成的產(chǎn)物不擴(kuò)散★組織中內(nèi)源性酶較少★可作用于多種底物，產(chǎn)生不同顏色★HRP穿透力強(qiáng)，易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)HRP的底物：低濃度的H2O2，供氫體為胺類及酚類化合物。HRP顯色反應(yīng)：

HRP＋H2O2HRP＋H2O＋電子供體（氧化型）電子供體電子供體被氧化后，迅速改變顏色，通過聚合等反應(yīng)，生成不溶性有色顆粒，并就地原位沉淀。HRP常用的電子供體：●3.3-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)～棕色●氨乙基卡巴唑(AEC)～紅色，易溶于有機(jī)溶劑，易擴(kuò)散，用水溶性封固劑。●4-氯-1-茶酚（4CN）～藍(lán)色，易彌散，不能久保存●3.3，5.5-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)～黃色（二）鹼性外磷酸刮酶（AK厭P）從小殘牛腸恭粘膜鼓或大太腸桿享菌中辜提取●鄭組亭織穿饑透能爽力較卻弱●圾內(nèi)隔源性AK沫P較高●閉左擋旋咪噸唑具園有抑只制作羅用AK犧P底物懶：AK僅P常用殺的底岸物為α-萘酚AS弱-B懸1磷酸直鹽偶聯(lián)帶試劑催：固不蘭BB～藍(lán)色固紅TR～紅色（三嗎）葡字萄糖偉氧化紗酶（GO攝D）底物崇為葡躁萄糖羨，終協(xié)產(chǎn)物沃穩(wěn)定●壺體槳內(nèi)無郵內(nèi)源努性GO牢D●分子在量大駐，穿疑透力硬較弱第一佳節(jié)基紅本能原象理酶標(biāo)測記抗除體法紛（En志za條ym銜eLa芳be赴l(fā)l傲edan把ti毅bo籃dy）是將夏酶通啊過共績價鍵慚結(jié)合掃在抗貨體分架子上循，制雕備成擊酶標(biāo)危記抗膝體，鏡通過供抗體礎(chǔ)去尋溉找相蝕應(yīng)抗洞原。一、杏酶標(biāo)購記抗齊體法組織抗原第一抗體過氧化物酶直接屢法（一姻）直騎接法原理每：HR柜P標(biāo)記延在特許異性垮抗體泉（第扔一抗廈體）錯上，辜抗原--韻-抗體著●HR先P復(fù)合粉物步驟尿：一步淡完成優(yōu)點筑：簡便牧、省叮時特異模性強(qiáng)珍，非特辭異染粗色輕缺點殘：敏感胸性差一種懸標(biāo)記獅抗體拔只能孫檢測釣一種版抗原組織么抗原第一乎抗原第二傾抗體過氧列化物營酶間接摸法（二麗）間斬接法原理封：HR領(lǐng)P標(biāo)記蛇在第蜻二抗桶體上歡，抗原--睡-特異酷性抗目體--顛-第二抗芹體●HR地P復(fù)合夢物優(yōu)點搏：較直資接法仿敏感掀性高一種胞標(biāo)記步抗體敬能用識于相楊應(yīng)動帽物制召備的池多種寶特異夾性抗秒體，滾檢測該多種燃抗原缺點暫：較直勤接法芹費時非特異性聰染色平稍重步驟蘿：二步喬法●制備災(zāi)抗酶搜抗體●制備PA闖P復(fù)合孤物酶橋已法組織池抗原第一冷抗體第二陪抗體第三曉抗體捕（抗悼酶抗瓦體）HR盯P二、蠟酶橋風(fēng)法原理?。篐R造P標(biāo)記懼在抗配酶抗役體（坦三抗崇）上竹，職抗原--傍-特異女性抗照體--辯-第碧二抗脖體--桑-第三丙抗體獨●HR鉛P復(fù)合葡物一抗的、三嚴(yán)抗有南何關(guān)坑系？優(yōu)點糖：與酶犧標(biāo)記喝抗體油法相猛比，闊敏感輩性高（酶餐與三殿抗通淹過抗牲原-抗體石反應(yīng)佛結(jié)就合，晌避免弦直接秘標(biāo)記焦引起逃兩者骨活性失降低星）缺點錘：較費固時步驟解：四步此法一、PA鏈P法原理躬：抗原--殿-特異詠性抗鞠體--爹-第二抗江體（求橋抗免體）--脆-PA湊P復(fù)合帽物組織魄抗原第一脹抗原第二倉抗體PA扔P復(fù)合駁物HR東P三、PA描P法（號過氧特化物壤酶抗復(fù)過氧偷化物械酶復(fù)趕合物握法）原理棄：與酶橋躍法相似蛋，不輔同之葛處是叔將酶鑒與三拼抗制義備成PA壩P復(fù)合雜物?？乖?-深-特異史性抗禿體--顧-第二協(xié)抗體論（橋撇抗）--義-P商AP復(fù)合卡物優(yōu)點示：敏感剝性較團(tuán)高背景歪染色箏較輕局限似：特異隱性抗兔體與PA悶P必須世為同翅一種動屬動盈物步驟檢：三步鏈法AP捷AA聰P法（前堿性搏磷酸偏酶抗蠻堿性僻磷酸館酶復(fù)謠合物例法）原理認(rèn)：抗原--雹-特異沾抗體--驅(qū)-二抗--夸-煩AP虎AA易P復(fù)合錯物優(yōu)點腳：非特馬異背蚊景較匯輕，慌不受漠內(nèi)源性徑酶的蕉干擾缺點舅：產(chǎn)物襖易溶也于有俊機(jī)溶露劑步驟虜：三步寇法組織抗原第一抗原第二抗體PAP復(fù)合物HRP四、吩雙PA商P法原理吵：在PA鎖P的基鮮礎(chǔ)上側(cè)再重駝復(fù)第灑二抗鎮(zhèn)體和PA陪P復(fù)合拖物抗原--蒙-特異踩性抗堆體--摔-二抗秤（橋遇抗）--藍(lán)-P曠AP醋-立--二抗--裂-堅PA頭P復(fù)合請物步驟芝：五步齡法優(yōu)點街：敏感黎性較給高缺點刑：步驟怖多，夕費時非特稀異性漂背景笑重Av裂id恐in--憤-一種師鹼性邀糖蛋允白，崗由四手個相匠同亞禮基組指成Bi獸ot跨in業(yè)--皺-小分拼子維漲生素Av淚id優(yōu)in和Bi偵ot記in具有照較高膜親和圓力，景比普燭通抗菜原抗液體親暗和力高百撓萬倍以上五、抗親和售免疫薯組化組織舟抗原第一畏抗體第二唉抗體HR求P生物皂素親和便素原理肉：酶標(biāo)袖記Bi滾ot返in形成秋酶素與化Bi居ot勢in（一懼）AB需C法(Av證id彼in-B財io帳ti少n漁–pe池ro防xi預(yù)da驅(qū)se-C字om默pl瞎ex育m敵et唇ho蹲d)酶素拋化Bi升ot厘in＋Av率id撞in--屈-濫AB壤C復(fù)合碧物抗原--勢-特異砍抗體--恥-翁Bi山ot便in標(biāo)記狗二抗--乞-Av勺id險in●離Bi縱ot呢in攻●油H烏RP步驟豈：三步豆法優(yōu)點踢：敏感創(chuàng)性較劇高特異滴性強(qiáng)應(yīng)用滔范圍曉廣缺點吐：某些史臟器尖存在杰內(nèi)源或性生拿物素苗干擾Av間id怠in與糖將基、婚纖維伴組織病、核棕酸及獨細(xì)胞哥膜中凈磷脂狹有非爆特異牧反應(yīng)（二陷）SA效BC法（St賄re隱pt插av橋id舍inbi藥ot捕inPe已ro感xi吼da樹seCo客mp伶le汗x）比較撲親和販素，裙鏈霉絲式親和晶素造尊成的室背景扣著色渡淺SA嘴BC法已充代替AB評C法（三勾）LS脖AB法（La乎be扒ll池edSt西re復(fù)pt顆av丈id塔inBi乎ot械in摧M棉et漿ho跑d）--汽-又稱侄鏈霉鄉(xiāng)豐親和通素-過氧僻化物性酶法島（SP法）原理饞：●Bi鋪ot界in標(biāo)記經(jīng)第二凈抗體務(wù)●HR值P標(biāo)記Av陰id江in抗原--練-特異涂性抗浸體--濫-B頁io償ti幻玉n標(biāo)記怎第二要抗體--偉-Av才id曉in●黃HR傭P復(fù)合會物步驟寫：三步穴法優(yōu)點團(tuán)：敏感睡性高特異漠性強(qiáng)駝，背景外淺淡方法爬簡便六、斬多聚隙合物歸酶法組織答抗原一抗HR卡P多聚骨架（一料）Ep嬸os法（En嫁ha限nc繼ed嬸p描ol妄ym猜er炊o拴ne賓-s違te喝p饒st傘ai樂ni菜ng）原理暑：采用河一種怪具有桃惰性對的多聚賄化合匹物作為繪骨架耐，將悠特異難性抗輪體和HR莖P，同時友標(biāo)記悲在多承聚合齒物分蔑子上姑，形咱成HR箏P-蝴--多聚壞合物--耽-特異解性旗抗體。步驟屈：一步摟法優(yōu)點煩：快速歇，簡莫便，娛特異肺性強(qiáng)牛，敏感俱性高缺點貓：商品昏化種艘類不碌全，價格壺昂貴組織肆抗原一抗二抗酶多聚骨架第一送步第二猜步（二別）En下Vi外si至on法（En匙ha歪nc套edLa