緒論微生物是一切肉眼看不見(jiàn)或看不清的微小生物的總稱(chēng)。￥包括原核類(lèi)的細(xì)菌、放線菌、藍(lán)細(xì)菌、支原體、立克次氏體、衣原體；屬于真核類(lèi)的真菌（酵母菌、霉菌和蕈菌）、原生動(dòng)物和顯微藻類(lèi)；以及屬于非細(xì)胞類(lèi)的病毒、亞病毒（類(lèi)病毒、擬病毒、朊病毒）。特點(diǎn)為個(gè)體微小、構(gòu)造簡(jiǎn)單、進(jìn)化地位低。￥微生物的五大共性：體積小面積大（最根本的）、吸收多轉(zhuǎn)化快、生長(zhǎng)旺繁殖快、適應(yīng)強(qiáng)易變異、分布廣種類(lèi)多。列文虎克：微生物學(xué)的先驅(qū)者，自制單式顯微鏡第一個(gè)觀察到了微生物。￥巴斯德：微生物學(xué)奠基人，其貢獻(xiàn)有；①?gòu)氐追穸恕白匀话l(fā)生”學(xué)說(shuō)。②免疫學(xué)——預(yù)防接種。③證實(shí)發(fā)酵是由微生物引起的。￥科赫：細(xì)菌學(xué)奠基人科赫學(xué)派發(fā)明了微生物純種分離技術(shù)第一章1.G+和G-菌細(xì)胞壁構(gòu)造成分的異同及肽聚糖單體的異同答：G+菌的細(xì)胞壁主要成分為肽聚糖和膦壁酸（細(xì)胞壁為單層）膦壁酸按成分可分為核糖醇膦壁酸和甘油膦壁酸。肽聚糖由肽和聚糖兩部分組成。肽分為四肽尾和肽橋G+菌的四肽尾為L(zhǎng)-Ala_D-Glu_L-Lys_D-Ala肽橋的變化很多因此決定了肽聚糖的多樣性聚糖有N-乙酸葡糖胺和N-乙酰胞壁酸由β-1，4-糖苷鍵連接組成G-菌的細(xì)胞壁為內(nèi)外兩層，外膜分為脂多糖（LPS）磷脂外膜蛋白LPS分為O-特異側(cè)鏈類(lèi)脂A和核心多糖組成外膜蛋白分為孔蛋白和脂蛋白內(nèi)層為肽聚糖G-的肽聚糖與陽(yáng)性菌大體相同僅甲肽聚糖四肽尾的第四個(gè)氨基酸的羧基和乙肽聚糖的第三個(gè)氨基酸的氨基相連構(gòu)成肽橋第三個(gè)氨基酸為m-DAP2.革蘭氏染色機(jī)制請(qǐng)同學(xué)們閱讀書(shū)18頁(yè)3.缺壁細(xì)胞自發(fā)突變：L型細(xì)菌自然界長(zhǎng)期進(jìn)化：支原體人工去壁：原生質(zhì)體球狀體4.細(xì)胞質(zhì)部分由于靠判斷知識(shí)點(diǎn)太多太碎請(qǐng)同學(xué)們自行看書(shū)5.菌毛（性菌毛）結(jié)合第七章總結(jié)的接合相關(guān)內(nèi)容6.糖被糖被分為莢膜微莢膜菌膠團(tuán)粘液層有糖被的菌會(huì)長(zhǎng)出大型透明蛋清狀的菌落用負(fù)染色可以觀察到7.芽孢抗熱抗化學(xué)藥物抗輻射了解滲透皮層膨脹學(xué)說(shuō)8.放線菌放線菌分為氣生菌絲營(yíng)養(yǎng)菌絲孢子絲（用于菌種鑒定）9.藍(lán)細(xì)菌靜息孢子（休眠體）異型胞（固氮）10.支原體沒(méi)有細(xì)胞壁衣原體分為始體和原體立克次氏體嚴(yán)格寄生第二章細(xì)菌，放線菌，酵母菌，霉菌的細(xì)胞壁組成及原生質(zhì)體的制備細(xì)菌的細(xì)胞壁主要是由肽聚糖組成，此外還有少量的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)；放線菌的細(xì)胞壁組成和細(xì)菌一樣；酵母菌的細(xì)胞壁主要由酵母纖維素組成，它是三明治狀，外層為甘露聚糖，內(nèi)層為葡聚糖，中間夾著一層蛋白質(zhì)；霉菌的細(xì)胞壁最外層由無(wú)定形葡萄糖組成，接著為糖蛋白組成的嵌埋在蛋白質(zhì)基質(zhì)層中的粗糙網(wǎng)，再下層為蛋白質(zhì)層，最內(nèi)層為放射狀排列的幾丁質(zhì)微纖維絲組成。細(xì)菌和放線菌的原生質(zhì)體是用溶菌酶處理細(xì)胞而得到；酵母菌使用蝸牛消化酶來(lái)制備原生質(zhì)體；霉菌用纖維素酶和幾丁質(zhì)酶來(lái)制備原生質(zhì)體。拉丁文解釋主要幾個(gè)Staphylococcusaureus(金黃色葡萄球菌)Streptococcuspneumoniae(肺炎鏈球菌)Escherichiacoli(大腸埃希氏菌)Bacillussubtilis（枯草芽孢桿菌）Streptomyces（鏈霉菌屬）Saccharomycescerevisiae（釀酒酵母）Aspergillusniger(黑曲霉)Bacillusmagaterium（巨大芽孢桿菌）Clostridiumbctulinum（肉毒梭菌）Bacillusthuringiensis(蘇云金芽孢桿菌)Nocardia（諾卡氏菌屬）Saccharomycodesludwiqii(路德類(lèi)酵母)Schizosaccharomycesoctosponcs(八孢裂殖酵母)代表種的用途枯草芽孢桿菌：可生產(chǎn)枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短桿菌肽、B族維生素以及中性蛋白酶?？捎糜陲暳咸砑觿⑺a(chǎn)養(yǎng)殖水質(zhì)凈化。大腸桿菌：大腸菌群數(shù)常作為飲水或食物的衛(wèi)生學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)磺胺類(lèi)、鏈霉素、氯霉素的等敏感。在基因工程中可用于外源基因的表達(dá)宿主菌，質(zhì)?？捎糜谕庠椿蜉d體。雙歧桿菌：雙歧桿菌在母乳喂養(yǎng)兒腸道內(nèi)大量存在，對(duì)嬰幼兒有許多好處，如營(yíng)養(yǎng)、免疫及抗感染作用，維護(hù)腸道正常細(xì)菌菌群平衡，是腸道益生菌。并且還具有抗過(guò)敏、抗腫瘤、調(diào)整腸道功能及改善營(yíng)養(yǎng)的作用等。在臨床上，雙歧桿菌具有調(diào)整腸道功能紊亂作用。可以預(yù)防腹瀉，減少便秘，即雙向調(diào)節(jié)。這種調(diào)節(jié)能起到預(yù)防和治療各種腸道疾病的效果。鏈霉菌：因許多種是抗生素的產(chǎn)生菌而且產(chǎn)生抗生素的種類(lèi)最多而著名。黑曲霉：是制醬、釀酒、制醋的主要菌種。是生產(chǎn)酶制劑（蛋白酶、淀粉酶、果膠酶）的菌種。生產(chǎn)有機(jī)酸（如檸檬酸、葡萄糖酸等）。農(nóng)業(yè)上用作生產(chǎn)糖化飼料的菌種?？捎脕?lái)測(cè)定錳、銅、鉬、鋅等微量元素和作為霉腐試驗(yàn)菌。干酪成熟中污染會(huì)使干酪表面變黑、變質(zhì)，對(duì)奶油也會(huì)產(chǎn)生變色。黑根霉：常利用它的糖化作用,比如甜酒曲中的主要菌種就是黑根霉!毛霉：毛霉的用途很廣，常出現(xiàn)在酒藥中，能糖化淀粉并能生成少量乙醇，產(chǎn)生蛋白酶，有分解大豆蛋白的能力，我國(guó)多用來(lái)做豆腐乳、豆豉。許多毛霉能產(chǎn)生草酸、乳酸、琥珀酸及甘油等，有的毛霉能產(chǎn)生脂肪酶、果膠酶、凝乳酶等。常用的毛霉主要有魯氏毛霉和總狀毛霉。腐生，廣泛分布于酒曲、植物殘?bào)w、腐敗有機(jī)物、動(dòng)物糞便和土壤中。有重要工業(yè)應(yīng)用，如利用其淀粉酶制曲、釀酒；利用其蛋白酶以釀制腐乳、豆豉等。青霉：青霉對(duì)人類(lèi)非常重要,在工業(yè)上,它可用于生產(chǎn)檸檬酸,延胡索酸,葡萄糖酸等有機(jī)酸和酶制劑;非常名貴的婁克馥干酪,丹麥青干酪都是用青霉釀制而成的;最著名的抗生素——青霉素就是從青霉的某些品系中提取而來(lái),它是最早發(fā)現(xiàn),最先提純,臨床上應(yīng)用最早的抗生素;近期發(fā)現(xiàn)的另一重要抗生素——灰黃霉素,是由灰黃青霉產(chǎn)生的,是抑制諸如腳癬之類(lèi)的真菌性皮膚病的最好抗生素.保加利亞乳桿菌：乳酸發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)最常用的乳酸菌是保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌、雙歧桿菌等。發(fā)酵乳糖、分解乳蛋白、產(chǎn)生香氣。4.霉菌分類(lèi)鑒定菌屬特點(diǎn)應(yīng)用代表種根霉屬多核單細(xì)胞，菌絲無(wú)隔，有匍匐枝、假根，產(chǎn)孢子囊孢子糖化菌，產(chǎn)酒精、有機(jī)酸，能轉(zhuǎn)化甾族化合物黑根霉（面包霉）米根霉華根霉毛霉屬（黑霉）多核單細(xì)胞，菌絲無(wú)隔，無(wú)假根、匍匐枝，產(chǎn)孢子囊孢子和接合孢子藥酒，糖化淀粉，產(chǎn)蛋白酶，做豆腐乳，豆豉，產(chǎn)有機(jī)酸，轉(zhuǎn)化甾族化合物高大毛霉魯氏毛霉總狀毛霉犁頭霉屬多核單細(xì)胞，菌絲有隔，有匍匐枝假根，產(chǎn)孢子囊孢子和接合孢子常為生產(chǎn)菌的污染菌青霉屬菌絲有隔，大部分呈藍(lán)綠色，產(chǎn)分生孢子，帚狀枝，無(wú)足細(xì)胞青霉素生產(chǎn)，干酪加工，有機(jī)酸生產(chǎn)灰綠青霉灰黃青霉產(chǎn)黃青霉木霉屬菌絲有隔，菌落呈不同程度綠色，分支繁復(fù)，產(chǎn)分生孢子纖維素酶重要生產(chǎn)菌，大型真菌寄生菌康氏木霉綠色木霉曲霉屬有足細(xì)胞，菌絲有隔，菌落顏色多變，產(chǎn)子囊孢子和分生孢子釀酒，制醋，生產(chǎn)各種酶制劑，糖化飼料黃曲霉黑曲霉5.四大類(lèi)微生物繁殖方式細(xì)菌：對(duì)稱(chēng)二分裂：絕大多數(shù)二分裂不等二分裂：柄細(xì)菌屬裂殖三分裂：綠色硫細(xì)菌復(fù)分裂：蛭弧菌放線菌：多數(shù)放線菌借以形成各種孢子進(jìn)行繁殖，僅少數(shù)種類(lèi)以基內(nèi)菌絲分裂形成孢子狀細(xì)胞進(jìn)行繁殖，在液體培養(yǎng)時(shí)菌絲片段也可繁殖。放線菌孢子形成方式為橫割分裂，以兩種途徑進(jìn)行=1\*GB3①細(xì)胞膜內(nèi)陷，再由外向內(nèi)逐漸收縮，最后形成一完整橫割膜，從而把孢子絲分割成許多分生孢子。=2\*GB3②細(xì)胞壁和膜同時(shí)內(nèi)陷，再逐步向內(nèi)縊縮，最終將孢子絲縊裂成一串分生孢子。分生孢子：最常見(jiàn)，鏈霉菌屬借孢子無(wú)鞭毛：孢囊鏈霉菌屬包囊孢子放線菌繁殖方式有鞭毛：游動(dòng)放線菌屬基內(nèi)菌絲斷裂：諾卡氏菌屬借菌絲任何菌絲片段：多種放線菌酵母菌芽殖：各屬酵母菌都存在無(wú)性裂殖：裂殖酵母中存在節(jié)孢子酵母菌繁殖方式產(chǎn)無(wú)性孢子擲孢子厚垣孢子有性（產(chǎn)子囊孢子）：酵母屬、接合酵母屬霉菌通過(guò)產(chǎn)有性孢子和無(wú)性孢子來(lái)繁殖游動(dòng)孢子：壺菌卵孢子：德氏腐霉包囊孢子：根霉、毛霉接合孢子：根霉、毛霉分生孢子：曲霉、青霉有性孢子無(wú)性孢子節(jié)孢子：白地霉擔(dān)孢子：蘑菇厚垣孢子：總狀毛霉子囊孢子：脈孢菌。紅曲霉芽孢子：假絲酵母擲孢子：擲孢酵母6.絲狀真菌、放線菌菌絲體及孢子萌發(fā)觀察法：小室培養(yǎng)又稱(chēng)載片培養(yǎng)圖5-1圖5-1真菌的載片培養(yǎng)1.培養(yǎng)皿；2.U形玻棒；3.濾紙；4.載玻片；5.蓋玻片；6.固體培養(yǎng)基取直徑7cm左右圓形濾紙一張，鋪放于一個(gè)直徑9cm的平皿底部（圖5-1），上放一U形玻棒，其上再平放一張干凈的載玻片與一張蓋玻片，蓋好平皿蓋進(jìn)行滅菌。挑取真菌孢子接入盛有滅菌水的試管中，搖振試管制成孢子懸液備用。用滅菌滴管吸取滅菌后融化的真菌固體培養(yǎng)基少許，滴于上述滅菌平皿內(nèi)的載玻片中央，并以接種環(huán)將孢子懸液接種在培養(yǎng)基四周，加上蓋玻片，并輕輕壓貼一下。為防止培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)基干燥，可在濾紙上滴加滅菌20％甘油液3～4ml，然后蓋上平皿蓋，即成所謂濕室載片培養(yǎng)。放在適宜溫度（多數(shù)真菌為20～30℃）的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，定期取出在低倍鏡下觀察，可以看到孢子萌發(fā)、發(fā)芽管的長(zhǎng)出、菌絲的生長(zhǎng)、無(wú)隔菌絲中孢子囊柄與孢子囊孢子形成的過(guò)程、有隔菌絲上足細(xì)胞生長(zhǎng)、鎖狀聯(lián)合的發(fā)生、孢子著生狀態(tài)等。第三章非細(xì)胞生物包括疹病毒、亞病毒。亞病毒包括類(lèi)病毒、擬病毒、阮病毒。（填空）病毒的七個(gè)特點(diǎn)：eq\o\ac(○,1)個(gè)體微小，在電子顯微鏡下才能看見(jiàn)。eq\o\ac(○,2)無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)，僅為核酸包以蛋白質(zhì)外殼的病毒粒子。eq\o\ac(○,3)每一種病毒只含有一種核酸，DNA或者RNA。eq\o\ac(○,4)既無(wú)產(chǎn)能酶系，又無(wú)蛋白質(zhì)和核酸合成酶系，只能利用宿主細(xì)胞內(nèi)現(xiàn)成的代謝系統(tǒng)來(lái)合成自身的核酸和蛋白質(zhì)組分，因此只能在活細(xì)胞內(nèi)專(zhuān)性寄生。eq\o\ac(○,5)獨(dú)特的繁殖方式，病毒不存在個(gè)體生長(zhǎng)和二分裂等細(xì)胞繁殖方式，僅通過(guò)核酸復(fù)制和蛋白質(zhì)合成、然后裝配的方式進(jìn)行增值。eq\o\ac(○,6)在離體條件下能以無(wú)生命大分子的狀態(tài)存在，并保持其侵染性。eq\o\ac(○,7)對(duì)大多數(shù)抗生素不敏感，但是對(duì)干擾素敏感。（簡(jiǎn)答）病毒的基本成分是蛋白質(zhì)和核酸。核心和衣殼構(gòu)成核衣殼。有些病毒核衣殼外面還有包膜，是病毒感染性和專(zhuān)一性的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。還有一些包膜外面生有刺突。（填空）病毒對(duì)稱(chēng)結(jié)構(gòu)：eq\o\ac(○,1)螺旋對(duì)稱(chēng)，例煙草花葉病毒。eq\o\ac(○,2)二十面體對(duì)稱(chēng)例動(dòng)物腺病毒。eq\o\ac(○,3)復(fù)合對(duì)稱(chēng)例大腸桿菌T偶數(shù)噬菌體。（填空）噬菌體一般為雙鏈DNA，植物病毒一般為單鏈RNA。噬菌體分為嗜細(xì)菌體、噬放線菌體、噬藍(lán)細(xì)菌體。（填空）大腸桿菌T偶數(shù)噬菌體以5-羥甲基胞嘧啶代替胞嘧啶。（填空）溫和型噬菌體的存在形式：游離態(tài)、整合態(tài)、營(yíng)養(yǎng)態(tài)。（填空）烈性噬菌體的復(fù)制過(guò)程：吸附、侵入、增殖、成熟、裂解。缺壁細(xì)胞不能被噬菌體吸附。增殖包括核酸的復(fù)制和蛋白質(zhì)的生物合成。（判斷）一步生長(zhǎng)曲線：感染時(shí)間為橫坐標(biāo)，病毒滴度為縱坐標(biāo)。分為潛伏期、裂解期、平穩(wěn)期。三個(gè)特征參數(shù)潛伏期、裂解期、裂解量。裂解量等于噬菌體粒子數(shù)除以細(xì)菌數(shù)。潛伏期包括隱晦期和胞內(nèi)積累期。（填空）10、測(cè)定病毒滴度方法：雙層平板法計(jì)數(shù)單位體積樣品內(nèi)形成噬菌斑數(shù)量。預(yù)先分別配制2%和1%的瓊脂的底層培養(yǎng)基和上層培養(yǎng)基，底層培養(yǎng)基在培養(yǎng)皿上澆一層平板，待凝固后，再把預(yù)先融化并冷卻到45度以下，加有較濃的敏感宿主和一定體積待測(cè)噬菌體樣品的上層培養(yǎng)基，在試管中搖勻后，立即倒在培養(yǎng)基上鋪平待凝，然后在37度下保溫。一般經(jīng)過(guò)十小時(shí)即可計(jì)數(shù)。（簡(jiǎn)答題）11、類(lèi)病毒無(wú)蛋白質(zhì)外殼，只有相對(duì)分子質(zhì)量較低的ssRNA，能自我復(fù)制，不需輔助病毒。此RNA不能編碼蛋白質(zhì)。擬病毒是包裹在真病毒里的有缺陷的類(lèi)病毒，此真病毒又稱(chēng)輔助病毒，擬病毒本身又稱(chēng)衛(wèi)星病毒，擬病毒的復(fù)制必須依賴輔助病毒的協(xié)助。阮病毒不含核酸，無(wú)免疫原性、抗逆性強(qiáng)。（填空）12、污染噬菌體的表現(xiàn)？如何防治？（簡(jiǎn)答）表現(xiàn)：發(fā)酵周期延長(zhǎng)、發(fā)酵液變清、發(fā)酵產(chǎn)物不易形成以及將發(fā)酵液接種于敏感菌平板上會(huì)出現(xiàn)噬菌斑等現(xiàn)象。防治：絕不使用污染或有污染嫌疑的菌種，并經(jīng)常輪換生產(chǎn)菌種。嚴(yán)格保持環(huán)境衛(wèi)生。各種非生產(chǎn)菌液及時(shí)滅活。生產(chǎn)設(shè)備定期清洗、滅菌。嚴(yán)格操守守則。13、設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)菌為溶源菌。檢驗(yàn)?zāi)尘涫欠袷侨茉淳姆椒ǎ菍⑸倭咳茉淳c大量的敏感性指示菌相混合，然后與瓊脂培養(yǎng)基混勻后倒一個(gè)平板，經(jīng)培養(yǎng)后溶源菌就一一長(zhǎng)成菌落。由于溶源菌在細(xì)胞分裂過(guò)程中有極少數(shù)個(gè)體引起自發(fā)裂解，其釋放的噬菌體可不斷侵染溶源菌菌落周?chē)闹甘揪?，于是就形成了一個(gè)個(gè)中央有溶源菌的小菌落，四周有透明圈圍著的這種獨(dú)特噬菌斑。第四章1微生物的六大營(yíng)養(yǎng)要素：碳源、氮源、能源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子、水、2微生物的碳源譜類(lèi)型元素水平化合物水平培養(yǎng)基原料水平有機(jī)碳CHONX*復(fù)雜蛋白質(zhì)、核酸等牛肉膏、蛋白胨、花生餅粉等CHON多數(shù)氨基酸、簡(jiǎn)單蛋白質(zhì)等一般氨基酸、明膠等CHO糖、有機(jī)酸、醇、脂類(lèi)等葡萄糖、蔗糖、各種淀粉、糖蜜等CH烴類(lèi)天然氣、石油及其不同餾份等無(wú)機(jī)碳C(?)——COCO2CO2COXNaHCO3、CaCO3等NaHCO3、CaCO3、白堊等微生物的碳源譜雖廣，但異養(yǎng)微生物在元素水平上的最適碳源則是“CHO”型。在糖類(lèi)中，單糖優(yōu)先于雙糖和多糖，己糖優(yōu)于戊糖，葡萄糖，果糖優(yōu)于甘露糖、半乳糖；在多糖中，淀粉明顯優(yōu)于纖維素或幾丁質(zhì)等純多糖，純多糖則優(yōu)于瓊脂等雜多糖。3生長(zhǎng)因子：氨基酸、維生素、堿基和卟啉及其衍生物4在配制微生物培養(yǎng)基時(shí)，對(duì)大量元素來(lái)說(shuō)，只要加入相應(yīng)化學(xué)試劑即可，但其中首選的應(yīng)是K2HPO4、MgSO4因?yàn)樗麄兛赏瑫r(shí)提供4種需要量最大的元素。5微生物的營(yíng)養(yǎng)類(lèi)型根據(jù)碳源，能源和電子供體的不同可以將微生物分為光能無(wú)機(jī)自養(yǎng)型、光能有機(jī)異養(yǎng)型、化能無(wú)機(jī)自養(yǎng)型、化能有機(jī)異樣型四種營(yíng)養(yǎng)型。主要通過(guò)微生物的電子供體、能源和碳源的不同進(jìn)行劃分營(yíng)養(yǎng)類(lèi)型氫供體碳源能源舉例光能無(wú)機(jī)自養(yǎng)型無(wú)機(jī)物CO2光能藍(lán)細(xì)菌、紫硫細(xì)菌、綠硫細(xì)菌、藻類(lèi)光能有機(jī)異養(yǎng)型有機(jī)物CO2及簡(jiǎn)單有機(jī)物光能紅螺菌科的細(xì)菌（及紫色無(wú)硫細(xì)菌）化能無(wú)機(jī)自養(yǎng)型無(wú)機(jī)物CO2無(wú)機(jī)物硝化細(xì)菌、硫化細(xì)菌、鐵細(xì)菌、氫細(xì)菌、硫磺細(xì)菌等化能有機(jī)異樣型有機(jī)物有機(jī)物有機(jī)物絕大多數(shù)細(xì)菌和全部真菌6營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的方式不通過(guò)膜上載體蛋白：?jiǎn)渭償U(kuò)散運(yùn)送方式：不耗能：促進(jìn)擴(kuò)散通過(guò)膜上載體蛋白：運(yùn)送前后溶質(zhì)分子不變：主動(dòng)運(yùn)送耗能：運(yùn)送前后溶質(zhì)分子改變：基團(tuán)移位7選用和設(shè)計(jì)培養(yǎng)基的原則和方法：目的明確、營(yíng)養(yǎng)協(xié)調(diào)、理化適宜、經(jīng)濟(jì)節(jié)約8培養(yǎng)基的種類(lèi)按對(duì)培養(yǎng)基成分的了解分類(lèi)天然培養(yǎng)基、組合培養(yǎng)基、半組合培養(yǎng)基按培養(yǎng)基外觀的物理狀態(tài)做分類(lèi)液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、脫水培養(yǎng)基按培養(yǎng)基對(duì)微生物的功能做分類(lèi)選擇培養(yǎng)基（利用分離對(duì)象對(duì)某種營(yíng)養(yǎng)物的特殊“嗜好”的原理，專(zhuān)門(mén)在培養(yǎng)基中加入該營(yíng)養(yǎng)物，從而把它制成一種加富性選擇培養(yǎng)基：利用分離對(duì)象對(duì)某種制菌物質(zhì)所特有的抗性，在篩選的培養(yǎng)基中加入這種制菌物質(zhì)，而這種培養(yǎng)基實(shí)為抑制性培養(yǎng)基。）鑒別性培養(yǎng)基(最常見(jiàn)的伊紅美藍(lán)乳糖培養(yǎng)基EMB)9真題鑒別培養(yǎng)基？利用伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基EMB培養(yǎng)大腸桿菌和沙門(mén)氏菌時(shí)，菌落會(huì)出現(xiàn)何種現(xiàn)象？為什么？一類(lèi)在成分中加有能與目的菌的無(wú)色代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示劑，從而達(dá)到只需用肉眼辨別顏色就能方便的從近似菌落中找出目的菌菌落的培養(yǎng)基。在菌落上呈現(xiàn)深紫色，并在反射光下看到綠色金屬閃光的菌落為大腸桿菌，菌落呈無(wú)色的為沙門(mén)氏菌。10真題產(chǎn)高產(chǎn)蛋白酶的枯草芽孢桿菌第五章1底物脫氫的四條途徑：EMP途徑、HMP途徑、ED途徑、TCA途徑2ED途徑的特點(diǎn)是：①具有—特征性反應(yīng)——KDPG裂解為丙酮酸和3-甘油醛：②存在—特征性酶—KDPG醛縮酶：③其終產(chǎn)物2分子丙酮酸的來(lái)歷的不同，其一由KDPG直接裂解形成，另一則由3-磷酸甘油醛經(jīng)EMP途經(jīng)轉(zhuǎn)化而來(lái)：④產(chǎn)能效率低3ED途徑是少數(shù)EMP途經(jīng)不完整的細(xì)菌所特有的利用葡萄糖的替代途徑。本途徑中所產(chǎn)生的丙酮酸對(duì)運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌，這類(lèi)未好氧菌來(lái)說(shuō)，可脫羧成乙醛，乙醛又可進(jìn)一步被NADH2還原為乙醇。這種經(jīng)ED途徑發(fā)酵生產(chǎn)乙醇的方法成為細(xì)菌酒精發(fā)酵，他與酵母菌通過(guò)EMP途徑形成乙醇的機(jī)制不同。4這種發(fā)酵方法的優(yōu)點(diǎn)：代謝速率高，產(chǎn)物轉(zhuǎn)化率高，菌體生成少，代謝副產(chǎn)物少，發(fā)酵溫度較高，以及不必定期供氧等。缺點(diǎn);生長(zhǎng)PH較高，較易染雜菌，并且對(duì)乙醇的耐受力較酵母菌低。5生物氧化的類(lèi)型：呼吸、無(wú)氧呼吸、發(fā)酵6無(wú)氧呼吸又分硝酸鹽呼吸（反硝化作用）、硫酸鹽呼吸、硫呼吸、鐵呼吸、碳酸鹽呼吸、延胡索酸呼吸7由EMP途徑中丙酮酸出發(fā)的發(fā)酵;同性酒精發(fā)酵、同性乳酸發(fā)酵、丙酸發(fā)酵、混合酸發(fā)酵、2，3-丁二醇發(fā)酵、丁酸型發(fā)酵8MR甲基紅試驗(yàn)原理：多數(shù)細(xì)菌能分解葡萄糖，但分解葡萄糖的途徑和產(chǎn)物不完全相同。例如大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，若繼續(xù)代謝還能生成其它有機(jī)酸和醛、醇等化合物，其中，大腸桿菌所產(chǎn)生的酸能使培養(yǎng)液的pH降到4.2或更低，可使甲基紅指示劑變成紅色，并至少持續(xù)4d之久。因此，甲基紅實(shí)驗(yàn)是測(cè)定細(xì)菌利用葡萄糖產(chǎn)酸能力的強(qiáng)弱。但這些微生物可將產(chǎn)生的酸進(jìn)一步代謝，在4天或更長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)生成中性化合物，不具有使甲基紅變紅的能力。因此進(jìn)行此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)時(shí)，觀察時(shí)間顯得很重要。腸道桿菌生長(zhǎng)在37℃以下4天觀察為宜，其他細(xì)菌也可參照同樣時(shí)間。方法與步驟：取緩沖葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基試管三支，于其上分別做好培養(yǎng)基名稱(chēng)和試驗(yàn)菌種、空白樣等標(biāo)記，然后無(wú)菌操作將試驗(yàn)菌種接入相應(yīng)的試管中，連同空白對(duì)照置36℃±1℃恒溫箱中培養(yǎng)2—4d后進(jìn)行觀察和記錄結(jié)果。結(jié)果與討論：在實(shí)驗(yàn)試管和空白管中各加入甲基紅試劑5至6滴，呈紅色者為甲基紅試劑陽(yáng)性，呈橘紅色者為弱陽(yáng)性，橘黃色為陰性。V.P試驗(yàn)乙酰甲基甲醇試驗(yàn)原理：產(chǎn)期腸桿菌利用葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸后，可進(jìn)一步使一部分丙酮酸脫羧生成中性的乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在強(qiáng)堿環(huán)境中，能被空氣中的氧氣氧化，生成雙乙酰，雙乙酰與蛋白胨中的精氨酸的胍基作用生成紅色化合物，此即為V-P實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性。當(dāng)在試管中加入萘酚時(shí)，可促進(jìn)反應(yīng)的進(jìn)行。如果某細(xì)菌在4天期間MR和V-P反應(yīng)均為陽(yáng)性，可延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，以確定生成的酸是否能轉(zhuǎn)化成乙酰甲基甲醇。對(duì)于一些發(fā)酵遲緩的微生物可能實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陰性，也可延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，以判斷微生物是否能利用葡萄糖產(chǎn)生大量酸。對(duì)于一種微生物，MR試驗(yàn)陽(yáng)性，V-P反應(yīng)一定為陰性，反之亦然。結(jié)果與討論：在上述三支試管中分別按培養(yǎng)液一半的量加入6%萘酚酒精液，搖勻，再按培養(yǎng)液1/3的量加入40%氫氧化鉀溶液，充分搖勻，觀察結(jié)果，呈現(xiàn)紅色者為V-P試驗(yàn)陽(yáng)性，不呈現(xiàn)紅者，為陰性，后者還應(yīng)在36℃±1℃下培養(yǎng)4h再進(jìn)行觀察判定。9通過(guò)HMP途經(jīng)的發(fā)酵-異型乳酸發(fā)酵10硝化細(xì)菌分為亞硝化細(xì)菌或氨氧化細(xì)菌，硝化細(xì)菌或亞硝酸氧化細(xì)菌11生物固氮是指大氣中的分子氮通過(guò)微生物固氮酶的催化而還原成氨的過(guò)程，生物界中只有原核生物才具有固氮能力。生物固氮反應(yīng)的六要素：ATP的供應(yīng)、還原力【H】及其傳遞載體、固氮酶、還原產(chǎn)物-N2、鎂離子、嚴(yán)格的厭氧微環(huán)境12好氧菌固氮的抗氧保護(hù)機(jī)制：呼吸保護(hù)、構(gòu)象保護(hù)13微生物結(jié)構(gòu)大分子-肽聚糖的生物合成書(shū)上138頁(yè)14高產(chǎn)酪氨酸菌株的選育書(shū)上145頁(yè)第六章1.生長(zhǎng)測(cè)定方法：a直接法：用計(jì)數(shù)板（例：血球計(jì)數(shù)板）光學(xué)顯微鏡下直接觀察，十分常用，但是得到的數(shù)目是包括死細(xì)胞在內(nèi)的總菌數(shù)b間接法：是一種活菌計(jì)數(shù)法。活菌指示劑TTC，使菌落成玫瑰色。2.【必】單細(xì)胞微生物的典型生長(zhǎng)曲線：a根據(jù)微生物的生長(zhǎng)速率常數(shù)，典型生長(zhǎng)曲線粗分為延滯期、指數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期。b延滯期（停滯期、調(diào)整期、適應(yīng)期）特點(diǎn)：1生長(zhǎng)速率為零2細(xì)胞形態(tài)變大或增長(zhǎng)，許多桿菌可長(zhǎng)成絲狀3細(xì)胞內(nèi)的RNA尤其是rRNA的含量增高，原生質(zhì)呈嗜堿性4合成代謝十分活躍5對(duì)外界不良條件反應(yīng)敏感。c影響延滯期的因素：1接種齡2接種量3培養(yǎng)基成分d指數(shù)期（對(duì)數(shù)期）特點(diǎn)：1生長(zhǎng)速率常數(shù)R最大，代時(shí)或原生質(zhì)增加一倍所需的倍增時(shí)間最短2細(xì)胞進(jìn)行平衡生長(zhǎng)3酶系活躍，代謝旺盛e指數(shù)期三個(gè)參數(shù)：1繁殖代數(shù)nn=3.322（lgx2-lgx1）2生長(zhǎng)速率常數(shù)RR=n/(t2-t1)3代時(shí)GG=1/R=(t2-t1)/nf影響指數(shù)期微生物代時(shí)長(zhǎng)短的因素：1菌種，例：大腸桿菌12.5-17min，枯草芽孢26-32min，金黃色葡萄球菌27-30min2營(yíng)養(yǎng)成分3營(yíng)養(yǎng)物濃度4培養(yǎng)溫度g指數(shù)期微生物是代謝生理等研究的良好材料，是增殖噬菌體的最適宿主。h穩(wěn)定期特點(diǎn)：生長(zhǎng)速率常數(shù)R等于零，菌體產(chǎn)量達(dá)到了最高點(diǎn)，而且菌體產(chǎn)量與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗間呈現(xiàn)出有規(guī)律的比例關(guān)系。生長(zhǎng)產(chǎn)量常數(shù)Y（生長(zhǎng)得率）Y=(x-x0)/(C0-C)=(x-x0)/CI穩(wěn)定期，細(xì)胞內(nèi)開(kāi)始積聚糖原、異染顆粒和脂肪等內(nèi)含物，芽孢桿菌則開(kāi)始形成芽孢，生成次生代謝物。j穩(wěn)定期到來(lái)的原因：1營(yíng)養(yǎng)物尤其是生長(zhǎng)限制因子的耗盡2營(yíng)養(yǎng)物的比例失調(diào)，例如C/N比不合適3酸、醇、毒素或H2O2等有害代謝產(chǎn)物的累積4pH、氧化還原勢(shì)等物理化學(xué)條件越來(lái)越不適宜等k衰亡期中，有的微生物因蛋白水解酶活力的增強(qiáng)而發(fā)生自溶3連續(xù)培養(yǎng)a按控制方式分裝置控制對(duì)象培養(yǎng)基培養(yǎng)基流速生長(zhǎng)速率產(chǎn)物應(yīng)用范圍恒濁器菌體密度（內(nèi)控制）無(wú)限制生長(zhǎng)因子不恒定最高速率大量菌體與菌體相平行的代謝產(chǎn)物生產(chǎn)為主恒化器培養(yǎng)基流速（外控制）有限制生長(zhǎng)因子恒定低于~~不同生長(zhǎng)速率的菌體實(shí)驗(yàn)室為主b按培養(yǎng)器級(jí)數(shù)分：?jiǎn)渭?jí)連續(xù)培養(yǎng)器和多級(jí)連續(xù)培養(yǎng)器c連續(xù)發(fā)酵優(yōu)點(diǎn)：1高效2自控3產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定4節(jié)約了大量動(dòng)力、人力、水和蒸氣d連續(xù)發(fā)酵缺點(diǎn)：1菌種易退化2易污染雜菌3營(yíng)養(yǎng)物的利用率一般低于單批培養(yǎng)。e連續(xù)培養(yǎng)廣泛用于酵母菌單細(xì)胞蛋白的生產(chǎn)4同步培養(yǎng)方法：a環(huán)境條件誘導(dǎo)法——氯霉素抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成；細(xì)菌芽孢誘導(dǎo)發(fā)芽；藻類(lèi)細(xì)胞的光照、黑暗控制；用EDTA或離子載體處理酵母菌等b機(jī)械篩選法——過(guò)濾法、密度梯度梯度離心法、膜洗脫法5溫度對(duì)微生物的影響：a生長(zhǎng)溫度三基點(diǎn)：最低生長(zhǎng)溫度、最適生長(zhǎng)溫度、最高生長(zhǎng)溫度6影響微生物生長(zhǎng)的主要因素：溫度，氧氣，pH，水活度，滲透壓等7氧氣對(duì)微生物的毒害機(jī)制：超氧化物歧化酶學(xué)說(shuō)，凡嚴(yán)格厭氧菌就無(wú)SOD活力，一般也無(wú)過(guò)氧化氫酶活力，所有具色素系統(tǒng)的好養(yǎng)菌都有SOD何過(guò)氧化氫酶，耐養(yǎng)性厭氧菌不含細(xì)胞色素系統(tǒng)，但具有SOD活力而無(wú)過(guò)氧化氫酶活力。SOD的功能是保護(hù)好養(yǎng)菌免受超氧化物陰離子自由基的毒害，從而提出了缺乏SOD的微生物必然只能進(jìn)行專(zhuān)性厭氧生活的學(xué)說(shuō)。8高溫滅菌的種類(lèi)：干熱滅菌和濕熱滅菌。濕熱滅菌：例巴氏消毒法，低溫維持法63℃30min，高溫瞬時(shí)法，72℃保持15s9抗代謝類(lèi)藥物磺胺類(lèi)藥物——與正常代謝物一起共同競(jìng)爭(zhēng)酶的活性中心，從而使微生物正常代謝所需的重要物質(zhì)無(wú)法正常合成。作用機(jī)制：磺胺的結(jié)構(gòu)與細(xì)菌的一種生長(zhǎng)因子對(duì)氨基苯甲酸高度相似，故是它的代謝類(lèi)似物，因此兩者間會(huì)發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)拮抗作用。10抗生素青霉素和紅霉素主要抗G+細(xì)菌；鏈霉素和新霉素以抗G-細(xì)菌為主，也抗結(jié)核分支桿菌；慶大霉素、萬(wàn)古霉素和頭孢霉素兼抗G+和G-細(xì)菌；氯霉素、四環(huán)素等能同時(shí)抗G+和G-細(xì)菌以及立克次氏體和衣原體，故成光譜性抗生素。11大題：從微生物營(yíng)養(yǎng)要素外界條件，如何優(yōu)化培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件？答：a影響要素有碳源、氮源、能源、生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、水。1找到最適的碳源譜，加多少，以及碳源的濃度。2最適氮源譜，以及根據(jù)不同微生物所加的氮源濃度3生長(zhǎng)因子也需要根據(jù)微生物的種類(lèi)，進(jìn)行適量的添加。b影響外界的培養(yǎng)條件有：pH，溫度，氧氣，等。c用正交分析法，選出最適的培養(yǎng)基，根據(jù)生物統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行計(jì)算，優(yōu)化培養(yǎng)基，以及培養(yǎng)條件。12大題：設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，雙歧桿菌高密度培養(yǎng)？答：由于雙歧桿菌屬于厭氧菌，所以我們要在厭氧的環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)。1首先要優(yōu)化培養(yǎng)基，優(yōu)化培養(yǎng)條件，對(duì)于培養(yǎng)基要注意雙歧桿菌的6類(lèi)生長(zhǎng)要素，選好每類(lèi)生長(zhǎng)要素的最適值，其次，還需要注意影響培養(yǎng)的條件，主要有pH，溫度，氧氣等。進(jìn)行正交試驗(yàn)，通過(guò)生物統(tǒng)計(jì)學(xué)方法優(yōu)選最適合雙歧桿菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境。2要使雙歧桿菌進(jìn)行高密度培養(yǎng)，則需要進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)，連續(xù)培養(yǎng)首先要注意營(yíng)養(yǎng)給予的充分，即C源、N源等。pH要適合生長(zhǎng)，適當(dāng)?shù)募铀峄驂A來(lái)調(diào)節(jié)pH值，其次溶氧也是能否使雙歧桿菌高密度培養(yǎng)的一個(gè)重要因素，一般在培養(yǎng)基加還原劑。13大題：測(cè)定微生物生長(zhǎng)方法的優(yōu)缺點(diǎn)？答：第七章1.核酸是DNA的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)：細(xì)菌的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，噬菌體轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，植物病毒重建實(shí)驗(yàn)。2.證明基因突變的自發(fā)性和不對(duì)稱(chēng)性的實(shí)驗(yàn)證明：變量實(shí)驗(yàn)，涂布試驗(yàn)，影印平板法。3.質(zhì)粒作為載體的特點(diǎn)：（1）體積小，便于DNA的分離操作（2）呈環(huán)狀，使其在化學(xué)分離過(guò)程中能保持性能穩(wěn)定（3）核基因組控制的獨(dú)立復(fù)制起點(diǎn)（4）拷貝數(shù)多，使外源DNA可很快擴(kuò)增（5）存在抗藥性基因等選擇性標(biāo)記，便于含質(zhì)粒的檢出和選擇。4.質(zhì)粒的類(lèi)型：嚴(yán)謹(jǐn)性質(zhì)粒和松弛型質(zhì)粒。質(zhì)粒的種類(lèi)：接合性質(zhì)粒、抗藥性質(zhì)粒、產(chǎn)細(xì)菌素和抗生素質(zhì)粒、具生理功能質(zhì)粒、產(chǎn)毒質(zhì)粒。5.質(zhì)粒的檢測(cè)方法：質(zhì)粒的分離與鑒定，質(zhì)粒的分離一般可包括細(xì)胞的裂解、蛋白質(zhì)和RNA的去除以及設(shè)法使質(zhì)粒DNA與染色體DNA相分離等步驟，經(jīng)分離后的質(zhì)粒，可用電鏡、瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠電泳來(lái)鑒定（或利用密度梯度離心法）。6.抗性質(zhì)粒：？7.基因突變的類(lèi)型，規(guī)律：營(yíng)養(yǎng)缺陷型（株）選擇型突變抗性突變型（株）條件致死突變型（株）基因突變的類(lèi)型形態(tài)突變型（株）非選擇型突變抗原突變型（株）產(chǎn)量突變型（株）規(guī)律：（機(jī)制）堿基置換：轉(zhuǎn)換、顛換點(diǎn)突變誘變移碼突變：缺失、添加基因突變畸變：缺失、添加、易位、倒位自發(fā)突變8.營(yíng)養(yǎng)缺陷型的篩選方法：一般要經(jīng)過(guò)誘變、淘汰野生型、檢出和鑒定營(yíng)養(yǎng)缺陷型4個(gè)環(huán)節(jié)。誘變劑處理