實(shí)驗(yàn)六柱色譜—次甲基藍(lán)與甲基橙的分離一、實(shí)

驗(yàn)

目

的1.掌握柱層析分離、裝柱、洗脫、分離操作2.分離次甲基藍(lán)與甲基橙混合液二、實(shí)

驗(yàn)

原

理1.柱層析通常是分離混合物和提純少量有機(jī)物的有效方法。常用的柱層析有吸附柱層析和分配柱層析，實(shí)驗(yàn)室最常用的是吸附柱層析，它常用氧化鋁和硅膠作固定相。它是利用混合物中各組分在不相溶的流動(dòng)相中吸附和解吸能力的不同而分離。當(dāng)混合物流動(dòng)相流過(guò)固定相時(shí)，發(fā)生了多次的吸附和解吸過(guò)程，從而使混合物分離成各種單一的純組分2.柱層析通常在玻璃管中填入面積很大，經(jīng)過(guò)活化的粉狀固體吸附劑，將以溶解的樣品加入色譜柱中，混合物溶液流經(jīng)吸附柱時(shí)，各組分同時(shí)被吸附在柱子的上端，當(dāng)用洗脫劑（流動(dòng)相）進(jìn)行淋洗時(shí)由于各組分在洗脫劑中的溶解度不同，因此被解吸的能力也不同。根據(jù)相似相溶原理，極性化合物易溶于極性洗脫劑中，一般先用非極性洗脫劑淋洗。3.吸附-解吸-吸附交替進(jìn)行，使不同吸附能力的化合物按不同速度沿柱向下移動(dòng)，形成不同層次的色帶，每一個(gè)色帶代表一個(gè)組分，分別收集每個(gè)色帶即可得到各組分的溶液，將洗脫劑蒸去后可得到單一純凈的物質(zhì)4.甲基橙和次甲基藍(lán)（亞甲基藍(lán)）的結(jié)構(gòu)式如上圖，可以看到,

它們結(jié)構(gòu)中既有極性部分,又有非極性部分,亞甲基藍(lán)溶于乙醇,而甲基橙不溶于乙醇等有機(jī)溶劑,

但它們都可溶于水，實(shí)驗(yàn)室通常是用乙醇做溶劑進(jìn)行分離三、實(shí)

驗(yàn)

裝

置層析柱裝置四、實(shí)

驗(yàn)

步

驟1.選用直徑1.5cm,長(zhǎng)15cm的層析柱，垂直固定在鐵架臺(tái)上，夾子夾在柱的頂端。向柱中加入乙醇至柱高的1/2，從柱的頂端用玻璃棒將少許棉花推到柱的底部，在棉花上可加入一薄層石英砂2.在小燒杯中稱(chēng)取約10g的氧化鋁加入10-15ml乙醇調(diào)勻。另外，預(yù)先將2g甲基橙和0.25g次甲基藍(lán)溶于110ml乙醇中，備用。3.打開(kāi)柱下活塞，控制流出速度每秒一滴，將燒杯中氧化鋁糊狀物加進(jìn)柱內(nèi)，氧化鋁自然沉降，使填裝緊密而均勻，當(dāng)加至柱高的3/4時(shí)，用滴管吸取少量的乙醇輕輕沖洗柱壁上的氧化鋁，然后用玻棒敲擊柱身，使柱面平整。事先剪好一張圓形濾紙覆蓋在氧化鋁的面上。柱活塞下接一干凈的錐形瓶，流下的乙醇反復(fù)套用。4.當(dāng)溶劑面剛好到達(dá)濾紙表面1mm時(shí)，立即用滴管加入1ml次甲基藍(lán)和甲基醇的混合液。當(dāng)混合液面降至濾紙面1mm時(shí)用滴管吸取少量乙醇，淋洗粘附在柱壁上的溶液。用滴管加入乙醇洗脫，控制流出速度。在整個(gè)洗脫過(guò)程中不要使柱干裂。在淋洗過(guò)程中可看到色帶的形成和分離。當(dāng)藍(lán)色的次甲基藍(lán)色帶到達(dá)柱底時(shí)，更換干凈的接收器，收集藍(lán)色的色帶。然后改為蒸餾水為洗脫劑更換接收器。當(dāng)黃色的甲基橙色帶到達(dá)柱底時(shí)，再更換接收器，收集黃色的色帶。五、注

意

事

項(xiàng)1.棉花主要是拖住氧化鋁，不宜塞得太緊，否則影響流出速度2.氧化鋁與乙醇混合均勻即可，切勿搗碎成黏糊狀，