氧化發(fā)酵實驗第1頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六（二）：實驗原理不同的細菌分解利用糖的能力有很大的差別，有的能利用有的不能利用。能利用者分解糖后，有的只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，有的既產(chǎn)酸又產(chǎn)氣，根據(jù)在培養(yǎng)基中加入溴甲酚紫指示劑的顏色變化來判斷是否產(chǎn)酸，再根據(jù)在單糖發(fā)酵管中倒置一小試管是否產(chǎn)生氣泡來判斷其分解糖時是否產(chǎn)氣。只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣的培養(yǎng)基呈黃色，且試管內(nèi)無氣泡。既產(chǎn)酸又產(chǎn)氣的培養(yǎng)基呈黃色且試管內(nèi)有氣泡。不分解糖的細菌培養(yǎng)基加入指示劑后仍為紫色。第2頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六

加入溴甲酚紫指示劑（5.8……6.8）的顏色變化來判斷是否產(chǎn)酸細菌不分解葡萄糖指示劑不變色（紫色）分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣產(chǎn)酸又產(chǎn)氣在單糖發(fā)酵管中倒置一小試管是否產(chǎn)生氣泡來判斷是否產(chǎn)氣。指示劑變黃色，試管無氣泡指示劑變黃色，試管有氣泡第3頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六（三）：實驗試劑與器材菌種：大腸埃希菌、傷寒沙門菌。培養(yǎng)基：葡萄糖、乳糖發(fā)酵管（內(nèi)置小倒管）。其他：酒精燈、火柴、接種針、接種環(huán)、記號筆、培養(yǎng)箱等。第4頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六（四）：實驗步驟1：接種針滅菌2：用接種針將大腸埃希菌和傷寒沙門菌分別接種于葡萄糖、乳糖發(fā)酵管內(nèi)。3：接種針滅菌，將發(fā)酵管標(biāo)記放入35度孵箱培養(yǎng)18~24小時4：觀察記錄實驗結(jié)果。第5頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六（五）：實驗結(jié)果分析觀察結(jié)果時先確定有無細菌生長（1）：不分解糖接種管指示劑不變色(紫色）（2）:分解糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣培養(yǎng)基呈黃色且液體培養(yǎng)基倒置管內(nèi)沒有氣泡。（3）：分解糖產(chǎn)酸又產(chǎn)氣培養(yǎng)基呈黃色且液體培養(yǎng)基倒置管內(nèi)有氣泡結(jié)果記錄：菌名葡萄糖乳糖大腸埃希菌傷寒沙門菌第6頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六（六）：注意事項1：嚴(yán)格做到無菌操作2：接種細菌前，檢查糖發(fā)酵管小倒管內(nèi)應(yīng)無氣泡存在，否則不能使用。第7頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六氧化——發(fā)酵試驗又稱O—-F試驗或Hugh-Ldifson（HL）試驗第8頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六實驗器材1.菌種

大腸桿菌、金黃色葡萄球菌18~24H培養(yǎng)物2.培養(yǎng)基HL葡萄糖培養(yǎng)基3.其他滅菌液體石蠟、酒精燈、打火機、接種針、記號筆、培養(yǎng)箱等。第9頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六實驗原理細菌在分解葡萄糖的過程中，依據(jù)對分子氧需求的不同，可將細菌分為不同的代謝類型。必須有氧分子參加的，即僅在有氧的環(huán)境中分解葡萄糖的細菌稱為氧化型（O型）；有或無氧分子參與均能分解葡萄糖的細菌成為發(fā)酵型（F型）；有或無氧分子參與均不分解葡萄糖的細菌成為產(chǎn)堿型（O—F試驗陰性）第10頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六加入溴甲酚紫指示劑（5.8……6.8）的顏色變化來判斷是否產(chǎn)酸，用液體石蠟封管保證無氧狀態(tài)。細菌僅在有氧的環(huán)境中分解葡萄糖有或無氧分子參與均能分解有或無氧分子參與均不分解氧化型(o型）發(fā)酵型（F型）產(chǎn)堿型（O—F試驗陰性）開管變色，閉管不變開管變色，閉管變色開管不變閉管不變開管產(chǎn)酸開閉管都產(chǎn)酸開閉管都不產(chǎn)酸第11頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六實驗方法選取一種細菌接種2支HL培養(yǎng)基，發(fā)酵管滴加無菌液體石蠟高度約1CM為閉管；氧化管不加液體石蠟，暴露于空氣中為開管，置于35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~48h，觀察結(jié)果第12頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六實驗結(jié)果兩管均不變色（不產(chǎn)酸）為產(chǎn)堿型或不分解糖型；兩管均變成黃