固定相與流動(dòng)相2023/4/4第1頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四7.3.1液相色譜固定相

1.液-液分配及離子對(duì)分離固定相（1）全多孔型擔(dān)體

氧化硅、氧化鋁、硅藻土等制成的多孔球體；早期采用100μm的大顆粒，表面涂漬固定液，性能不佳已不多見(jiàn)?，F(xiàn)采用10μm以下的小顆粒，化學(xué)鍵合制備柱填料。（2）表面多孔型擔(dān)體

（薄殼型微珠擔(dān)體）

30～40μm的玻璃微球，表面附著一層厚度為1～2μm的多孔硅膠。表面積小，柱容量底。2023/4/4第2頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四（3）化學(xué)鍵合固定相

化學(xué)鍵合固定相：應(yīng)用最廣、性能最佳的固定相；

a.硅氧碳鍵型：≡Si—O—C

b.硅氧硅碳鍵型：≡Si—O—Si—C

穩(wěn)定，耐水、耐光、耐有機(jī)溶劑，應(yīng)用最廣；

c.硅碳鍵型：≡Si—C

d.硅氮鍵型：≡Si—N2023/4/4第3頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四化學(xué)鍵合固定相的特點(diǎn)：（1）傳質(zhì)快，表面無(wú)深凹陷。（2）壽命長(zhǎng)，化學(xué)鍵合，無(wú)固定液流失，耐流動(dòng)相沖擊；耐水、耐光、耐有機(jī)溶劑，穩(wěn)定。（4）選擇性好，可鍵合不同官能團(tuán)，提高選擇性。（5）有利于梯度洗脫。存在著雙重分離機(jī)制：(鍵合基團(tuán)的覆蓋率決定)高覆蓋率：分配為主；低覆蓋率：吸附為主。

2023/4/4第4頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四

2.液-固吸附分離固定相種類(lèi)：硅膠、氧化鋁、分子篩、聚酰胺等。種類(lèi)有限，應(yīng)用面相對(duì)較窄。結(jié)構(gòu)類(lèi)型：全多孔型和薄殼型；粒度：5～10μm。

2023/4/4第5頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四3.離子交換色譜分離固定相

結(jié)構(gòu)類(lèi)別：（1）薄殼型離子交換樹(shù)脂薄殼玻璃珠為擔(dān)體，表面涂約1%的離子交換樹(shù)脂。（2）離子交換鍵合固定相薄殼鍵合型；微粒硅膠鍵合型（鍵合離子交換基團(tuán)）。

樹(shù)脂類(lèi)別：（1）陽(yáng)離子交換樹(shù)脂（強(qiáng)酸性、弱酸性）。（2）陰離子交換樹(shù)脂（強(qiáng)堿性、弱堿性）。2023/4/4第6頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四

4.空間排阻分離固定相（1）軟質(zhì)凝膠

葡聚糖凝膠、瓊脂凝膠等。多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)；水為流動(dòng)相。適用于常壓排阻分離。（2）半硬質(zhì)凝膠

苯乙烯-二乙烯基苯交聯(lián)共聚物，有機(jī)凝膠；非極性有機(jī)溶劑為流動(dòng)相，不能用丙酮、乙醇等極性溶劑（3）硬質(zhì)凝膠

多孔硅膠、多孔玻珠等；化學(xué)穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性好、機(jī)械強(qiáng)度大，流動(dòng)相性質(zhì)影響小，可在較高流速下使用?？煽乜讖讲Ａ⑶?，具有恒定孔徑和窄粒度分布。2023/4/4第7頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四

５.手性固定相生物、藥物分子和天然有機(jī)產(chǎn)物的分離。環(huán)糊精（CD）結(jié)構(gòu)：2023/4/4第8頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四環(huán)糊精：

空腔內(nèi)壁為弱疏水性，所有羥基在空腔的外沿呈親水性，這使他們能與各種極性、非極性分子、離子形成包含化合物（主客體配合物）。

1984年Armstrong首次將環(huán)糊精鍵合到二氧化硅上用作HPLC的手性分離固定相，目前已成為十分普及的手性固定相。全苯基環(huán)糊精分離柱特別適合于分離氨基醇類(lèi)β阻斷劑，而其他類(lèi)型手性固定相則很難分離。2023/4/4第9頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四7.3.2液相色譜的流動(dòng)相1.流動(dòng)相特性（1）流動(dòng)相組成改變，極性改變，可顯著改變組分分離狀況。（2）親水性固定液常采用疏水性流動(dòng)相，即流動(dòng)相的極性小于固定相的極性，正相，極性柱也稱(chēng)正相柱。（3）若流動(dòng)相的極性大于固定液的極性，則稱(chēng)為反相液液色譜，非極性柱也稱(chēng)為反相柱。組分在兩種類(lèi)型分離柱上的出峰順序相反。2023/4/4第10頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四2.流動(dòng)相類(lèi)別

按流動(dòng)相組成分：?jiǎn)谓M分和多組分；

按極性分：極性、弱極性、非極性；

按使用方式分：固定組成淋洗和梯度淋洗。

常用溶劑：己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。采用二元或多元組合溶劑作為流動(dòng)相可以靈活調(diào)節(jié)流動(dòng)相的極性或增加選擇性，以改進(jìn)分離或調(diào)整出峰時(shí)間。2023/4/4第11頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四3.流動(dòng)相選擇

在選擇溶劑時(shí)，溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)。

采用正相液-液分配分離時(shí)：首先選擇中等極性溶劑，若組分的保留時(shí)間太短，降低溶劑極性，反之增加。

也可在低極性溶劑中，逐漸增加其中的極性溶劑，使保留時(shí)間縮短。

常用溶劑的極性順序：水(最大)>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六環(huán)>四氫呋喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙醚>異丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>環(huán)己烷>己烷>煤油(最小)2023/4/4第12頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四4.選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題（1）盡量使用高純度試劑作流動(dòng)相，防止微量雜質(zhì)長(zhǎng)期累積損壞色譜柱和使檢測(cè)器噪聲增加。（2）避免流動(dòng)相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。（3）試樣在流動(dòng)相中應(yīng)有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積。（4）流動(dòng)相同時(shí)還應(yīng)滿足檢測(cè)器的要求。當(dāng)使用紫外檢測(cè)器時(shí)，流動(dòng)相不應(yīng)有紫外吸收。2023/4/4第13頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四請(qǐng)選擇內(nèi)容結(jié)束7