毒理學(xué)研究設(shè)計(jì)及

實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)TheDesignofToxicologyStudy&FoundationsofToxicologyExperiment

1精選課件本章的學(xué)習(xí)目的學(xué)習(xí)了解毒理學(xué)研究的基礎(chǔ)（方法和手段）實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)實(shí)施觀察結(jié)果評(píng)價(jià)方法科學(xué)手段上的毒理學(xué)：實(shí)驗(yàn)科學(xué)（以動(dòng)物實(shí)驗(yàn)為中心）2精選課件一.藥物的研發(fā)流程總的來(lái)說(shuō)新藥的研發(fā)分為兩個(gè)階段：研究和開(kāi)發(fā)。

這兩個(gè)階段是相繼發(fā)生有互相聯(lián)系的。區(qū)分兩個(gè)階段的標(biāo)志是候選藥物的確定，即在確定候選藥物之前為研究階段，確定之后的工作為開(kāi)發(fā)階段。

3精選課件1.藥物的研究研究階段包括四個(gè)重要環(huán)節(jié)：（1）靶標(biāo)的確立（2）模型的確立（3）先導(dǎo)化合物的發(fā)現(xiàn)（4）先導(dǎo)化合物的優(yōu)化

4精選課件2.藥物的開(kāi)發(fā)開(kāi)發(fā)階段也包括四個(gè)重要環(huán)節(jié)：（1）臨床前試驗(yàn)：由制藥公司進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)室和動(dòng)物研究，以觀察化合物針對(duì)目標(biāo)疾病的生物活性，同時(shí)對(duì)化合物進(jìn)行安全性評(píng)估。（2）研發(fā)中新藥申請(qǐng)（InvestigationalNewApplication,IND）（3）臨床試驗(yàn)：（Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期）（4）新藥申請(qǐng)（NewDrugApplication,NDA）

5精選課件

臨床前研究

（1）藥學(xué)研究：

（2）藥效學(xué)研究：評(píng)價(jià)化學(xué)物質(zhì)的生物活性和確定藥物作用機(jī)理。（3）一般藥理學(xué)研究：指對(duì)新藥主要藥效作用以外廣泛藥理作用的研究。主要是藥物作用特征、對(duì)機(jī)體重要系統(tǒng)（神經(jīng)、心血管、呼吸系統(tǒng)）的影響。（4）藥代動(dòng)力學(xué)研究(ADME)

（5）毒理學(xué)研究6精選課件二.為什么要進(jìn)行毒理學(xué)試驗(yàn)？

毒理學(xué)試驗(yàn)是對(duì)藥物安全性評(píng)價(jià)的主要手段，各國(guó)際組織或各國(guó)的行政部門(mén)所頒布的規(guī)程或指南已將毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)列為常規(guī)試驗(yàn)，也稱(chēng)為法規(guī)(管理)毒理學(xué)試驗(yàn)（regulatorytoxicologytest），這類(lèi)毒理學(xué)試驗(yàn)是以篩查和描述藥物的毒性為目的，屬于描述毒理學(xué)范疇。7精選課件毒理實(shí)驗(yàn)種類(lèi)1.體內(nèi)試驗(yàn)：2.體外試驗(yàn)：3.人體調(diào)查和流行病學(xué)調(diào)查：8精選課件三.毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)的原則和局限性1.基本原則（三個(gè)原則）第一原則：藥物在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生的作用，可以外推于人。第二原則：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物必須暴露于高劑量受試物。第三原則：選擇成年的健康（雄性和雌性未孕）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和人可能的暴露途徑。9精選課件2.利用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的局限性不確定性：用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的毒理學(xué)試驗(yàn)資料外推到人群接觸的安全性時(shí)，會(huì)有很大的不確定性。“給人使用時(shí)總是不可避免地要冒一定的風(fēng)險(xiǎn)。”（要知己知彼）不確定性的產(chǎn)生：藥物的毒性作用受到許多因素的影響。

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和人對(duì)藥物的反應(yīng)敏感性不同，有時(shí)甚至存在著質(zhì)的差別。（癥狀和體征）

2.試驗(yàn)中選用較大的染毒劑量，有些藥物在高劑量和低劑量的毒性作用規(guī)律并不一定一致。

3.毒理學(xué)試驗(yàn)所用動(dòng)物數(shù)量有限，那些發(fā)生率很低的毒性反應(yīng)，在少量動(dòng)物中難以發(fā)現(xiàn)。

4.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般都是實(shí)驗(yàn)室培育的品系，一般選用成年健康動(dòng)物，反應(yīng)較單一。10精選課件3.毒理實(shí)驗(yàn)的重要原則（1）貫徹優(yōu)良實(shí)驗(yàn)室規(guī)范(GLP)（2）尊重動(dòng)物福利（3R原則）11精選課件四.毒性評(píng)價(jià)試驗(yàn)的基本目的1.藥物毒作用的表現(xiàn)和性質(zhì)2.劑量-反應(yīng)(效應(yīng))研究3.確定毒作用的靶器官4.確定損害的可逆性5.其它（1）毒作用的敏感檢測(cè)指標(biāo)和生物學(xué)標(biāo)志（2）毒作用機(jī)制研究（3）受試物的毒物動(dòng)力學(xué)和代謝研究（4）中毒的解救措施12精選課件四.毒性評(píng)價(jià)試驗(yàn)的基本目的1.藥物毒作用的表現(xiàn)和性質(zhì)2.劑量-反應(yīng)(效應(yīng))研究3.確定毒作用的靶器官4.確定損害的可逆性5.其它（1）毒作用的敏感檢測(cè)指標(biāo)和生物學(xué)標(biāo)志（2）毒作用機(jī)制研究（3）受試物的毒物動(dòng)力學(xué)和代謝研究（4）中毒的解救措施13精選課件劑量-反應(yīng)(效應(yīng))研究是毒性評(píng)價(jià)和安全性評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)。通過(guò)對(duì)不同有害作用的劑量-反應(yīng)(效應(yīng))研究，可以得到該受試物的多種毒性參數(shù)。

急性(致死性)毒性試驗(yàn)：LD50、LD01和MTD。急性非致死性毒性試驗(yàn)中：急性可觀察到有害作用的最低劑量

(LOAEL)和未觀察到有害作用的劑量(NOAEL)。亞急性、亞慢性及慢性毒性試驗(yàn)：相應(yīng)的LOAEL和NOAEL。致畸試驗(yàn)：LOAEL和NOAEL

致突變、致癌試驗(yàn)：表觀的LOAEL和NOAEL。14精選課件四.毒性評(píng)價(jià)試驗(yàn)的基本目的1.藥物毒作用的表現(xiàn)和性質(zhì)2.劑量-反應(yīng)(效應(yīng))研究3.確定毒作用的靶器官4.確定損害的可逆性5.其它（1）毒作用的敏感檢測(cè)指標(biāo)和生物學(xué)標(biāo)志（2）毒作用機(jī)制研究（3）受試物的毒物動(dòng)力學(xué)和代謝研究（4）中毒的解救措施15精選課件四.毒性評(píng)價(jià)試驗(yàn)的基本目的1.藥物毒作用的表現(xiàn)和性質(zhì)2.劑量-反應(yīng)(效應(yīng))研究3.確定毒作用的靶器官4.確定損害的可逆性5.其它（1）毒作用的敏感檢測(cè)指標(biāo)和生物學(xué)標(biāo)志（2）毒作用機(jī)制研究（3）受試物的毒物動(dòng)力學(xué)和代謝研究（4）中毒的解救措施16精選課件四.毒性評(píng)價(jià)試驗(yàn)的基本目的1.藥物毒作用的表現(xiàn)和性質(zhì)2.劑量-反應(yīng)(效應(yīng))研究3.確定毒作用的靶器官4.確定損害的可逆性5.其它（1）毒作用的敏感檢測(cè)指標(biāo)和生物學(xué)標(biāo)志（2）毒作用機(jī)制研究（3）受試物的毒物動(dòng)力學(xué)和代謝研究（4）中毒的解救措施17精選課件五.毒理學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì)18精選課件環(huán)境條件(氣溫,氣濕等)暴露藥物———→機(jī)體→毒效應(yīng)·化學(xué)結(jié)構(gòu)·理化性質(zhì)水溶性脂/水分配系數(shù)揮發(fā)度氣/血分配系數(shù)·分散度·純度/雜質(zhì)·途徑·時(shí)間/頻率·溶劑·稀釋度·交叉暴露·物種,品系·個(gè)體因素性別年齡生理狀態(tài)營(yíng)養(yǎng)/習(xí)慣疾病19精選課件五.毒理學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì)要點(diǎn)1．劑量分組一般至少要設(shè)3個(gè)劑量組

高劑量組中劑量組

低劑量組希望能得到滿意的劑量-反應(yīng)(效應(yīng))關(guān)系。(一)體內(nèi)毒理學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì)20精選課件①未處理對(duì)照組（空白對(duì)照組）：確定本底值，進(jìn)行質(zhì)量控制（常用于遺傳毒理學(xué)試驗(yàn)）②陰性（溶劑）對(duì)照：是染毒組比較的基礎(chǔ)③陽(yáng)性對(duì)照：檢測(cè)試驗(yàn)體系的有效性④歷史性對(duì)照：檢測(cè)試驗(yàn)體系的穩(wěn)定性對(duì)照組問(wèn)題毒理學(xué)實(shí)踐的基本手段之一就是比較分析。21精選課件2．各組動(dòng)物數(shù)3．試驗(yàn)期限22精選課件1.測(cè)定藥物的溶解性2.試驗(yàn)最高劑量的推薦3.代謝活化4.陽(yáng)性對(duì)照5.重復(fù)（二）體外毒理學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì)23精選課件環(huán)境條件(氣溫,氣濕等)暴露藥物———→機(jī)體→毒效應(yīng)·化學(xué)結(jié)構(gòu)·理化性質(zhì)水溶性脂/水分配系數(shù)揮發(fā)度氣/血分配系數(shù)·分散度·純度/雜質(zhì)·途徑·時(shí)間/頻率·溶劑·稀釋度·交叉暴露·物種,品系·個(gè)體因素性別年齡生理狀態(tài)營(yíng)養(yǎng)/習(xí)慣疾病24精選課件六.藥物1.受試樣品的準(zhǔn)備①純度及雜質(zhì)成分②化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)（揮發(fā)性和溶解性）③相似化合物的毒性參考資料④同種同一批號(hào)⑤成分和配方必須固定⑥穩(wěn)定性受試物應(yīng)一次備齊全部實(shí)驗(yàn)的用量。25精選課件受試物的準(zhǔn)備劑型：水溶液、油溶液或混懸液對(duì)溶劑和助溶劑的要求：無(wú)毒，與受試物不起反應(yīng)，穩(wěn)定。制劑要點(diǎn)染毒容積：以受試的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物物種或制劑來(lái)確定。26精選課件1.在制備制劑時(shí)加熱受試物不應(yīng)接近或者達(dá)到改變其化學(xué)性質(zhì)或者物理性質(zhì)的溫度2.在評(píng)價(jià)固體受試物皮膚毒性時(shí)，應(yīng)保持其形狀和顆粒大小3.多成分的受試物應(yīng)按照配方配制，使染毒制劑準(zhǔn)確反映原混合物4.制劑應(yīng)保持化學(xué)穩(wěn)定性和一致性5.制劑應(yīng)減少總試驗(yàn)容積，利用溶劑或賦形劑的量不應(yīng)過(guò)多。6.制劑應(yīng)易于準(zhǔn)確染毒7.制劑的pH應(yīng)為5-9.8.不應(yīng)用酸堿解離受試物，基于保護(hù)動(dòng)物的原因，并避免改變腸道或者腎小管內(nèi)的pH值9.非胃腸道染毒，受試物應(yīng)盡可能接近等滲27精選課件環(huán)境條件(氣溫,氣濕等)暴露藥物———→機(jī)體→毒效應(yīng)·化學(xué)結(jié)構(gòu)·理化性質(zhì)水溶性脂/水分配系數(shù)揮發(fā)度氣/血分配系數(shù)·分散度·純度/雜質(zhì)·途徑·時(shí)間/頻率·溶劑·稀釋度·交叉暴露·物種,品系·個(gè)體因素性別年齡生理狀態(tài)營(yíng)養(yǎng)/習(xí)慣疾病28精選課件藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)

物理化學(xué)性質(zhì)化學(xué)活性↓↓ADME毒動(dòng)學(xué)靶毒效學(xué)29精選課件化學(xué)結(jié)構(gòu)對(duì)其毒性的影響同系物的碳原子數(shù)：烷、醇、酮等碳?xì)浠衔锇赐滴锵啾?，碳原子?shù)愈多，則毒性愈大(甲醇與甲醛除外)。但當(dāng)碳原子數(shù)超過(guò)一定限度時(shí)(7～9個(gè))，毒性反而迅速下降。取代基團(tuán)：鹵代烷烴、基團(tuán)的位置不同也可能影響毒性分子中不飽和鍵構(gòu)型異構(gòu)：順?lè)串悩?gòu)和手性異構(gòu)

30精選課件31精選課件藥物的理化性質(zhì)溶解度：水溶性：化學(xué)物在水中的溶解度直接影響其毒性大小，溶解度愈大，毒性愈大。脂溶性：脂溶性物質(zhì)易在脂肪中蓄積，易侵犯神經(jīng)系統(tǒng)。揮發(fā)度：分散度純度和雜質(zhì)：藥物的純度常常改變其毒性

32精選課件北醫(yī)三院眼科用藥33精選課件

上海華聯(lián)抗癌藥(甲氨喋呤、阿糖胞苷)致殘130多人(其中因廠方瞞報(bào)藥品被污染事實(shí)，導(dǎo)致真相延遲揭示，藥害例數(shù)增加數(shù)十人)，癥狀為下肢疼痛乏力、進(jìn)而行走困難癱瘓等。

調(diào)查原因：存在嚴(yán)重的質(zhì)量管理混亂,導(dǎo)致在5方面違規(guī)生產(chǎn)行為。部分批次產(chǎn)品中混入了微量硫酸長(zhǎng)春新堿——另一種不能用于鞘內(nèi)注射的抗腫瘤藥物（生產(chǎn)尾料未交三廢處理人員，而由灌裝工收集存放于儲(chǔ)藏室，繼續(xù)用于生產(chǎn)）。

鞘內(nèi)注射甲氨蝶呤致患者雙腿癱瘓變形34精選課件越戰(zhàn)中美軍使用落葉劑2、4、5-T（橙劑）TCDD35精選課件環(huán)境條件(氣溫,氣濕等)暴露藥物———→機(jī)體→毒效應(yīng)·化學(xué)結(jié)構(gòu)·理化性質(zhì)水溶性脂/水分配系數(shù)揮發(fā)度氣/血分配系數(shù)·分散度·純度/雜質(zhì)·途徑·時(shí)間/頻率·溶劑·稀釋度·交叉暴露·物種,品系·個(gè)體因素性別年齡生理狀態(tài)營(yíng)養(yǎng)/習(xí)慣疾病36精選課件七.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇和處理毒理學(xué)的動(dòng)物試驗(yàn)是以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作為研究對(duì)象的，為獲得可靠的研究結(jié)果，先決條件是正確地選用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。37精選課件(一)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物物種的選擇基本原則①對(duì)受試物在代謝、生物化學(xué)和毒理學(xué)特征與人最接近的物種②敏感的物種③自然壽命不太長(zhǎng)的物種④易于飼養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)操作的物種;經(jīng)濟(jì)并易于獲得的物種38精選課件動(dòng)物物種大鼠小鼠豚鼠兔狗地鼠彌猴小型豬雞等等。39精選課件表1常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生物學(xué)和生理學(xué)參數(shù)40精選課件

背腫了≠41精選課件（二）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品系的選擇1.近交系：C57、Balb/c、dba-1；shrn、ZDF大鼠、F344/DuCrlCrlj大鼠2.雜交群動(dòng)物：3.封閉群：昆明種、ICR小鼠；F344大鼠、SD大鼠、wistar大鼠等42精選課件（三）對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物控制的選擇43精選課件（四）個(gè)體選擇①性別

②年齡和體重

③生理狀態(tài)

④健康狀況44精選課件環(huán)境條件(氣溫,氣濕等)暴露藥物———→機(jī)體→毒效應(yīng)·化學(xué)結(jié)構(gòu)·理化性質(zhì)水溶性脂/水分配系數(shù)揮發(fā)度氣/血分配系數(shù)·分散度·純度/雜質(zhì)·途徑·時(shí)間/頻率·溶劑·稀釋度·交叉暴露·物種,品系·個(gè)體因素性別年齡生理狀態(tài)營(yíng)養(yǎng)/習(xí)慣疾病45精選課件皮膚癌：飲酒：

46精選課件環(huán)境條件(氣溫,氣濕等)暴露藥物———→機(jī)體→毒效應(yīng)·化學(xué)結(jié)構(gòu)·理化性質(zhì)水溶性脂/水分配系數(shù)揮發(fā)度氣/血分配系數(shù)·分散度·純度/雜質(zhì)·途徑·時(shí)間/頻率·溶劑·稀釋度·交叉暴露·物種,品系·個(gè)體因素性別年齡生理狀態(tài)營(yíng)養(yǎng)/習(xí)慣疾病47精選課件（五）飼養(yǎng)條件①合理的全營(yíng)養(yǎng)飼料②水③溫度和濕度④空氣清潔度⑤人工照明的晝夜周期48精選課件（六）國(guó)家有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量監(jiān)督和質(zhì)量合格證制度1998年《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》試驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)和寄生蟲(chóng)學(xué)檢測(cè)等級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物哺乳類(lèi)動(dòng)物遺傳質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物全價(jià)營(yíng)養(yǎng)飼料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境及設(shè)施49精選課件環(huán)境條件(氣溫,氣濕等)暴露藥物———→機(jī)體→毒效應(yīng)·化學(xué)結(jié)構(gòu)·理化性質(zhì)水溶性脂/水分配系數(shù)揮發(fā)度氣/血分配系數(shù)·分散度·純度/雜質(zhì)·途徑·時(shí)間/頻率·溶劑·稀釋度·交叉暴露·物種,品系·個(gè)體因素性別年齡生理狀態(tài)營(yíng)養(yǎng)/習(xí)慣疾病50精選課件八.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的染毒和處置①雌雄分開(kāi)飼養(yǎng)②5～7天的檢疫（適應(yīng)環(huán)境）③標(biāo)記和分組。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組的原則要求所有的動(dòng)物分配到各劑量組和對(duì)照組的機(jī)會(huì)均等，避免主觀選擇傾向，減少偏性，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。正確的分組方法：隨機(jī)分組(一)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備51精選課件(二)染毒途徑選擇原則：應(yīng)盡可能模擬人在接觸該受試物的方式途徑：經(jīng)口、經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮及注射途徑1.經(jīng)口(胃腸道)染毒：灌胃、喂飼和吞咽膠囊2.經(jīng)呼吸道染毒：吸入染毒（靜式、動(dòng)式）和氣管內(nèi)注入3.經(jīng)皮膚染毒：備皮4.注射染毒：肌肉、皮下和靜脈滴注（ip）52精選課件（1）經(jīng)口(胃腸道)染毒灌胃、喂飼和吞咽膠囊

喂飼：5%53精選課件(二)染毒途徑選擇原則：應(yīng)盡可能模擬人在接觸該受試物的方式途徑：經(jīng)口、經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮及注射途徑1.經(jīng)口(胃腸道)染毒：灌胃、喂飼和吞咽膠囊2.經(jīng)呼吸道染毒：吸入染毒（靜式、動(dòng)式）和氣管內(nèi)注入3.經(jīng)皮膚染毒：備皮4.注射染毒：肌肉、皮下和靜脈滴注（ip）54精選課件（2）經(jīng)呼吸道染毒：55精選課件(二)染毒途徑選擇原則：應(yīng)盡可能模擬人在接觸該受試物的方式途徑：經(jīng)口、經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮及注射途徑經(jīng)口(胃腸道)染毒：經(jīng)呼吸道染毒：經(jīng)皮膚染毒：備皮注射染毒56精選課件環(huán)境條件(氣溫,氣濕等)暴露藥物———→機(jī)體→毒效應(yīng)·化學(xué)結(jié)構(gòu)·理化性質(zhì)水溶性脂/水分配系數(shù)揮發(fā)度氣/血分配系數(shù)·分散度·純度/雜質(zhì)·途徑·時(shí)間/頻率·溶劑·稀釋度·交叉暴露·物種,品系·個(gè)體因素性別年齡生理狀態(tài)營(yíng)養(yǎng)/習(xí)慣疾病57精選課件藥物的聯(lián)合作用一種藥物對(duì)機(jī)體的毒性作用，可以由于同時(shí)或先后接觸另一種藥物而使其所表現(xiàn)的聯(lián)合毒性比任一單一藥物的毒性增強(qiáng)或減弱，毒理學(xué)將兩種或兩種以上的藥物對(duì)機(jī)體的交互作用稱(chēng)為聯(lián)合作用(jointaction)。58精選課件類(lèi)型相加作用(additionaljointaction)協(xié)同作用(synergisticeffect)加強(qiáng)作用(potentiationjointaction)拮抗作用(antagonisticjointaction)獨(dú)立作用(independenteffect)

59精選課件環(huán)境條件(氣溫,氣濕等)暴露藥物———→機(jī)體→毒效應(yīng)·化學(xué)結(jié)構(gòu)·理化性質(zhì)水溶性脂/水分配系數(shù)揮發(fā)度氣/血分配系數(shù)·分散度·純度/雜質(zhì)·途徑·時(shí)間/頻率·溶劑·稀釋度·交叉暴露·物種,品系·個(gè)體因素性別年齡生理狀態(tài)營(yíng)養(yǎng)/習(xí)慣疾病·各種毒性反應(yīng)·死亡·各種血相、生化、病理改變60精選課件(三)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處死及生物標(biāo)本采集1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處死方法2.血液采集3.尿液采集4.病理解剖和標(biāo)本留取5.大體解剖在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處死后半小時(shí)內(nèi)進(jìn)行，解剖方法采用胸腔、腹腔臟器聯(lián)合取出法。應(yīng)觀察有關(guān)臟器的外形和表面情況、顏色、邊界和大小、質(zhì)地、切面。對(duì)指定的臟器稱(chēng)重，并計(jì)算臟器系數(shù)。61精選課件病理解剖標(biāo)準(zhǔn)操作程序(大體解剖)動(dòng)物固定在解剖板上，解剖頸部(頜下腺、腮腺、局部淋巴結(jié)等)↓取一側(cè)乳腺及腹部皮膚；開(kāi)腹并擴(kuò)展切口(胰、脾、生殖器官、腎、腎上腺、直腸、胃、十二指腸、空腸、回腸、腸系膜淋巴結(jié)、肝臟等)↓開(kāi)胸(舌、喉、氣管、甲狀腺、甲狀旁腺、食管、心、肺、胸腺)↓剝離左后肢

(肌肉、坐骨神經(jīng)、股骨)；頭皮、耳；開(kāi)顱

(顱神經(jīng)、腦組織、垂體)；暴露脊髓(取出脊髓)組織病理學(xué)檢查62精選課件九.毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的處理和分析認(rèn)真貫