專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用

課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)——實(shí)驗(yàn)操作

1、闡述配制固體培養(yǎng)基的方法2、掌握平板劃線法和稀釋涂布平板法的操作方法學(xué)習(xí)目標(biāo)學(xué)生自學(xué)（5分鐘）自學(xué)課本P16-P20上半部分，思考這部分講了哪些知識(shí)點(diǎn)，哪些是重點(diǎn)，標(biāo)出疑惑自學(xué)指導(dǎo)一（4分鐘）根據(jù)P16-P17實(shí)驗(yàn)操作完成下列問(wèn)題1.制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的大致過(guò)程有哪幾部？2.牛肉膏蛋白胨有什么樣的特點(diǎn)，稱取時(shí)要注意什么？3.溶化過(guò)程中需要注意什么？4.滅菌時(shí)應(yīng)注意什么？5.怎樣進(jìn)行倒平板操作？6.完成課本P17下面的討論。實(shí)驗(yàn)操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（二）純化大腸桿菌大腸桿菌（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂20.0g將上述物質(zhì)溶解后，添加水，定容至1000mL（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計(jì)算：根據(jù)配方比例，計(jì)算100mL培養(yǎng)基各成分用量牛肉膏：0.5g蛋白胨：1.0gNaCl：0.5g瓊脂：2.0g電子天平2.稱量：準(zhǔn)確稱取各成分注意：稱取牛肉膏和蛋白胨時(shí)動(dòng)作要迅速，稱后要及時(shí)蓋上瓶蓋牛肉膏：0.5g蛋白胨：1.0gNaCl：0.5g瓊脂：2.0g3.溶化：①加水加熱溶化牛肉膏牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯，溶化后取出稱量紙②加入蛋白胨和氯化鈉，玻棒攪拌溶解③加入瓊脂，不斷攪棒熔解④用蒸餾水定容到100mL目的：防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂4.滅菌：將配置好的培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi)滅菌15～30min4.滅菌：將配置好的培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi)滅菌15～30min將培養(yǎng)皿用舊報(bào)紙包緊，放入干熱滅菌箱內(nèi)滅菌2h5.倒平板：待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板討論1：你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？用手觸摸錐形瓶，感覺(jué)溫度剛好不燙手倒平板操作11.右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手撥出棉塞22.右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過(guò)火焰討論2：為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？進(jìn)行灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基33.用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約10-20mL)倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋44.等待平板冷卻凝固（大約5-10min）后，將平板倒過(guò)來(lái)放置討論3：平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)出水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的溫度較高，將平板倒置，既可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染，又可避免培養(yǎng)基中水分過(guò)快地?fù)]發(fā)討論4：在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？不能，空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，造成污染注意：倒平板時(shí)，不能將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位6.無(wú)菌檢查：將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃的恒溫箱中培養(yǎng)24-48h，以檢查滅菌是否徹底自學(xué)指導(dǎo)二（4分鐘）根據(jù)P18下半部分至P20上面兩行純化大腸桿菌完成下列問(wèn)題1.什么是菌落？2.什么是平板劃線法？3.平板劃線的操作過(guò)程是怎樣的？4.完成P18討論題5.什么是稀釋涂布平板法？6.稀釋和涂布平板的操作步驟分別是怎樣的？（二）純化大腸桿菌1.微生物的分離與純化：從混雜微生物群體中獲得只含某一種或某一株微生物的過(guò)程，稱為微生物的分離與純化利用固體培養(yǎng)基，將混雜細(xì)菌分散或稀釋成單個(gè)細(xì)胞，使其繁殖成單個(gè)菌落2.微生物接種方法：①平板劃線法②稀釋涂布平板法工具：接種環(huán)

通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作,將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次畫線后,可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見的子細(xì)胞群體,這就是菌落。平板劃線法:平板劃線操作土壤稀釋液用力不能過(guò)大

一旦劃破，會(huì)造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個(gè)細(xì)胞無(wú)法形成規(guī)矩的菌落，菌落會(huì)沿著劃破處生長(zhǎng)，會(huì)形成一個(gè)條狀的菌落。平板劃線操作區(qū)域一區(qū)域二區(qū)域三區(qū)域四區(qū)域五平板劃線操作思考：平板劃線操作的整個(gè)過(guò)程，是如何實(shí)現(xiàn)純化大腸桿菌的？平板劃線操作區(qū)域一區(qū)域二區(qū)域三區(qū)域四區(qū)域五菌種多菌種少菌種減少菌種減少菌種減少菌種最少問(wèn)題討論（1）為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？

操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。（2）在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種（3）在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？

劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。稀釋涂布平板法

將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。

在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單菌落。

1.將分別盛有9mL水的6支試管滅菌，并按101~106的順序編號(hào)。系列稀釋操作2.用移液管吸取1mL培養(yǎng)的菌液，注入第二支試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，使菌液與水充分混勻。系列稀釋操作3.從101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液，注入102倍稀釋的試管中，重復(fù)第2步的操作。依次類推，直到完成最后一支試管的稀釋。

注意：移液管需要經(jīng)過(guò)滅菌。操作時(shí)，試管口和移液管離火焰1~2cm處涂布平板操作自學(xué)指導(dǎo)三（2分鐘）根據(jù)P20完成下列問(wèn)題1、解決P20結(jié)果分析與評(píng)價(jià)2、怎樣對(duì)菌種進(jìn)行保存？四、菌種的保藏甘油冷凍管藏法1、臨時(shí)保藏——頻繁使用的菌種：