中山大學腫瘤防治中CancerCenterSunYat-Sen原始庫建立記內容：復蘇293細 日期⒈生產條件記錄溫度濕⒈生產條件記錄溫度濕度潔凈度⒉主要原輔料和器具試 廠批器具個儀器廠型CO2培養(yǎng)箱S一恒科技2123-DK-8DAirTechCentrifuge⒊操作步驟1）細胞培養(yǎng)液成分：胎牛ml，DMEM(高糖) 2)1000ml393）從液氮罐中取出凍存的293細胞（ 速放入39℃純水水浴，解凍，然后放入離心機，1000rpm離心3min。4)吸棄上清，加入細胞培養(yǎng)液懸浮細胞，將細胞移至25cm2培養(yǎng) 5）在瓶上標記為：293細胞，時間 ，置37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 ⒋備注5．結果：293細胞原 庫建293細胞原 庫建立記內容：293細胞傳代培 日期批號 數(shù)量⒈生產條件記錄溫度 濕度潔凈度 ⒉主要原輔料和器具試 批 胎 器具 儀器 廠 型CO2培養(yǎng) 2 DK-8D型 AirTech離心 Centrifuge倒置顯微 重慶光學儀器 XDS-⒊操作步驟1）37℃水浴預 顯微鏡觀 日傳代的293細胞 匯合，生長正常吸棄培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)液，加 ml胰酶潤洗兩次，倒出胰酶1min加 ml細胞培養(yǎng)液，終止消化；輕輕吹打細胞分散完全將細胞均分轉入2個25cm2 ml培養(yǎng)液；共傳在瓶上標記293細胞，代數(shù) ，時間 ，日期 ，操作 ，置37℃，5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。h⒋備注傳代前細胞代次 傳代后細胞代次 5．結果 293細胞原 庫建293細胞原 庫建立記內容：293細胞傳代培 日期批號 數(shù)量⒈生產條件記錄溫度 濕度潔凈度 ⒉主要原輔料和器具試 廠 批 培養(yǎng) 儀器 廠 型CO2培養(yǎng) 2123- DK-8D型 AirTech離心 Centrifuge倒置顯微 重慶光學儀器 ⒊操作步驟1）37℃水浴預 日傳代的293細胞， 瓶25cm2和 吸棄培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)液，加 ml胰酶潤洗兩次，倒出胰酶1min加 ml細胞培養(yǎng)液，終止消化；輕輕吹打細胞分散完全將細胞懸液的轉入1個25cm2 培養(yǎng)瓶中，轉入1個75cm2一次性培養(yǎng)瓶中分別加入ml和ml培養(yǎng)液共傳瓶25cm2和瓶75cm2。在瓶上標記293細胞，代數(shù)，時間，日期，操作 ，置37℃，5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。h⒋備注傳代前細胞代次 傳代后細胞代次 5．結果 293細胞原 庫建立記內容：293細胞傳代培 日期批號 數(shù)量⒈生產條件記錄潔凈度 ⒉主要原輔料和器具試試廠批個個儀器儀器 廠 型CO2培養(yǎng) 2123-水浴 一恒科 DK-8D超凈 蘇州凈超凈 蘇州凈 Air離心 Centrifuge倒置顯微 重慶光學儀器 ⒊操作步驟1）37℃水浴預 顯微鏡觀 日傳代的293細胞 匯合，生長正常吸棄培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)液，加 ml胰酶潤洗兩次，倒出胰酶1min75cm2培養(yǎng)瓶加 將細胞懸液轉入25cm2和75cm2 培養(yǎng)瓶中，每瓶分別 ml和 ml和 在瓶上標記293細胞，代數(shù) ，時間 ，日期 ，操作 ，置37℃，5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。h⒋備注傳代前細胞代次 傳代后細胞代次 5．結果 中山大學腫瘤防治中CancerCenterSunYat-SenCO2 CO2 2123-內容：293批號：日數(shù)⒈生產條件記錄⒉主要原輔料和器具試 廠 批15ml個2ml個AirCentrifuge⒊操作步驟37℃水浴預 日配制的細胞培養(yǎng)液，0.25%胰酶消化顯微鏡觀 日傳代的293細胞 匯合，生長正常吸棄培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)液，加 ml胰酶潤洗兩次，倒出胰酶1min加 ml細胞培養(yǎng)液，終止消化；輕輕吹打細胞分散完全將細胞懸液轉 個15ml離心管中，700rpm離心2 ml新生牛和 2ml低溫冰箱（-80℃過夜）→液氮。⒋備注5．結果：293細胞原 庫建293細胞原 庫建立記內容：293細胞傳代培 日期批號 數(shù)量⒈生產條件記錄溫度 濕度潔凈度 ⒉主要原輔料和器具試 廠 批 培養(yǎng) 儀器 廠 型CO2培養(yǎng) 2123- DK-8D型 AirTech離心 Centrifuge倒置顯微 重慶光學儀器 ⒊操作步驟1）37℃水浴預 顯微鏡觀察 日傳代的 瓶175cm2中生長的293細胞，吸棄培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)液，加 ml胰酶潤洗兩次，倒出胰酶1min每瓶加 ml細胞培養(yǎng)液，終止消化；輕輕吹打細胞分散完全 在瓶上標記293細胞，代數(shù) ，時間 ，日期 ，操作 ，置37℃，5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。h⒋備注傳代前細胞代次 傳代后細胞代次 5．結果 293細胞原 庫建293細胞原 庫建立記內容：293細胞傳代培 日期批號 數(shù)量⒈生產條件記錄溫度 濕度潔凈度 ⒉主要原輔料和器具試 廠 批 培養(yǎng) 儀器 廠 型CO2培養(yǎng) 2123- DK-8D型 AirTech離心 Centrifuge倒置顯微 重慶光學儀器 ⒊操作步驟1）37℃水浴預 cm2培養(yǎng)瓶中的293細胞，吸棄培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)液，加 ml胰酶潤洗兩次，倒出胰酶1min加 ml細胞培養(yǎng)液，終止消化；輕輕吹打細胞分散完全將細胞懸液轉 cm2 培養(yǎng)瓶中，補加培養(yǎng)液至培養(yǎng)體積ml；共 瓶在瓶上標記293細胞，代數(shù) ，時間 ，日期 ，操作 ，置37℃，5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。h⒋備注傳代前細胞代次 傳代后細胞代次 5．結果 293細胞原 庫建293細胞原 庫建立記內容：293細胞凍 日期批號 數(shù)量⒈生產條件記錄溫度 濕度潔凈度 ⒉主要原輔料和器具試 廠 批 培養(yǎng) 培養(yǎng) 15ml離心 2ml細胞凍存 毛細 經熱原處儀器 廠 型CO2培養(yǎng) 2123- DK-8D型 AirTech離心 Centrifuge倒置顯微 重慶光學儀器 ⒊操作步驟顯微鏡觀 日傳代的293細胞 瓶25cm2 瓶75匯 ，生長正常吸棄培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)液，加 ml胰酶潤洗兩次，倒出胰酶1min加 ml細胞培養(yǎng)液，終止消化；輕輕吹打細胞分散完全 ml細胞懸液轉入1個25cm2培養(yǎng)瓶中，其余細胞懸液轉 個 離心管中，700rpm2 ml新生牛 2ml9）4℃（30分鐘）→冰箱冷凍室（-2030~60分鐘）→低溫冰箱（-80℃過夜）→液氮。⒋備注凍存前細胞代次 5．結果 293細胞原 庫建立記293細胞原 庫建立記內容：293細胞凍 日期15ml個2ml個潔凈度 個個CO2培養(yǎng) 水浴 2123- DK-8D數(shù)量：批號：倒置顯微 重慶光學儀器 離心 Centrifuge超凈 蘇州凈 Air儀器 廠 型試 廠 批溫度 濕度⒊操作步驟顯微鏡觀 日傳代的293細胞 瓶25cm2 瓶75匯 ，生長正常吸棄培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)液，加 ml胰酶潤洗兩次，倒出胰酶1min加 ml細胞培養(yǎng)液，終止消化；輕輕吹打細胞分散完全 ml細胞懸液轉入1個25cm2培養(yǎng)瓶中，其余細胞懸液轉 個 離心管中，700rpm2 ml新生牛 2ml9）4℃（30分鐘）→冰箱冷凍室（-2030~60分鐘）→低溫冰箱（-80℃過夜）→液氮。⒋備注凍存前細胞代次 5．結果 293細胞原 庫建293細胞原 庫建立記內容：293細胞傳代培 日期批號 數(shù)量⒈生產條件記錄溫度 濕度潔凈度 ⒉主要原輔料和器具試 廠 批 胰 培養(yǎng) 儀器 廠 型CO2培養(yǎng) 2123- DK-8D型 AirTech離心 Centrifuge倒置顯微 重慶光學儀器 ⒊操作步驟1）37℃水浴預 顯微鏡觀察月日傳代的生長在cm2培養(yǎng)瓶中的瓶293細胞， 吸棄培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)液，加入ml1min加 ml細胞培養(yǎng)液，終止消化；輕輕吹打細胞分散完全將細胞懸液轉 cm2 培養(yǎng)瓶中，補加培養(yǎng)液至培養(yǎng)體積ml；共 瓶在瓶上標記293細胞，代數(shù) ，時間 ，日期 ，操作 ，置37℃，5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。h⒋備注傳代前細胞代次 傳代后細胞代次 5．結果 293細胞原 庫建293細胞原 庫建立記內容：293細胞傳代培 日期批號 數(shù)量⒈生產條件記錄溫度 濕度潔凈度 ⒉主要原輔料和器具試 廠 批 培養(yǎng) 儀器 廠 型CO2培養(yǎng) 2123- DK-8D型 AirTech離心 Centrifuge倒置顯微 重慶光學儀器 ⒊操作步驟顯微鏡觀 日傳代的生長 cm2培養(yǎng)瓶中 瓶細胞 匯合，生長正常吸棄培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)液，加 ml胰酶潤洗兩次，倒出胰酶1min加 ml細胞培養(yǎng)液，終止消化；輕輕吹打細胞分散完全 cm2 在瓶上標記293細胞，代數(shù) ，時間 ，日期 ，操作 ，置37℃，5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。h⒋備注傳代前細胞代次 傳代后細胞代次 5．結果 293細胞原 庫建立記293細胞原 庫建立記內容：293細胞凍 日期15ml個2ml個潔凈度 個個CO2培養(yǎng) 水浴 2123- DK-8D數(shù)量：批號：倒置顯微 重慶光學儀器 離心 Centrifuge超凈 蘇州凈 Air儀器 廠 型試 廠 批溫度 濕度⒊操作步驟顯微鏡觀 日傳代的293細胞 瓶25cm2 瓶75匯 ，生長正常吸棄培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)液，加 ml胰酶潤洗兩次，倒出胰酶1min加 ml細胞培養(yǎng)液，終止消化；輕輕吹打細胞分散完全 ml細胞懸液轉入1個25cm2培養(yǎng)瓶中，其余細胞懸液轉 個 離心管中，700rpm2 ml新生牛 2ml9）4℃（30分鐘）→冰箱冷凍室（-2030~60分鐘）→低溫冰箱（-80℃過夜）→液氮。⒋備注凍存前細胞代次 5．結果 293細胞原 庫建293細胞原 庫建立記內容：293細胞傳代培 日期批號 數(shù)量⒈生產條件記錄溫度 濕度潔凈度 ⒉主要原輔料和器具試 廠 批 培養(yǎng) 儀器 廠 型CO2培養(yǎng) 2123- DK-8D型 AirTech離心 Centrifuge倒置顯微 重慶光學儀器 ⒊操作步驟 cm2培養(yǎng)瓶中的 瓶293細 吸棄培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)液，加 ml胰酶潤洗兩次，倒出胰酶1min加 ml細胞培養(yǎng)液，終止消化；輕輕吹打細胞分散完全 cm2 在瓶上標記293細胞，代數(shù) ，時間 ，日期 ，操作 ，置37℃，5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。h⒋備注傳代前細胞代次 傳代后細胞代次 5．結果 293細胞原 庫建293細胞原 庫建立記內容：293細胞傳代培 日期批號 數(shù)量⒈生產條件記錄溫度 濕度潔凈度 ⒉主要原輔料和器具試 廠 批 培養(yǎng) 儀器 廠 型CO2培養(yǎng) 2123- DK-8D型 AirTech離心 Centrifuge倒置顯微 重慶光學儀器 ⒊操作步驟 cm2培養(yǎng)瓶中的293細胞，吸棄培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)液，加 ml胰酶潤洗兩次，倒出胰酶1min加 ml細胞培養(yǎng)液，終止消化；輕輕吹打細胞分散完全將細胞懸液轉 cm2 培養(yǎng)瓶中，補加培養(yǎng)液至培養(yǎng)體積ml；共 瓶在瓶上標記293細胞，代數(shù) ，時間 ，日期 ，操作 ，置37℃，5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。h⒋備注傳代前細胞代次 傳代后細胞代次 5．結果 293細胞原 庫建293細胞原 庫建立記內容：293細胞凍 日期15ml個2ml個潔凈度 個個CO2培養(yǎng) 水浴 2123- DK-8D數(shù)量：批號：倒置顯微 重慶光學儀器 離心 Centrifuge超凈 蘇州凈 Air儀器 廠 型試 廠 批溫度 濕度⒊操作步驟顯微鏡觀 日傳代的293細胞 瓶25cm2 瓶75匯 ，生長正常吸棄培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)液，加 ml胰酶潤洗兩次，倒出胰酶1min加 ml細胞培養(yǎng)液，終止消化；輕輕吹打細胞分散完全將細胞懸液轉 個 離心管中，700rpm離心2 ml新生牛 2ml9）4℃（30分鐘）→冰箱冷凍室（-2030~60分鐘）→低溫冰箱（-80℃過夜）→液氮。⒋備注凍存前細胞代次 5．結果 293細胞原 庫建293細胞原 庫建立記內容：293細胞傳代培 日期批號 數(shù)量⒈生產條件記錄溫度 濕度潔凈度 ⒉