標(biāo)準(zhǔn)解讀

《NY/T 569-2002 馬傳染性貧血病瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)方法》是一項(xiàng)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，旨在規(guī)定用于檢測馬傳染性貧血病毒抗體的瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)的具體操作流程和技術(shù)要求。該標(biāo)準(zhǔn)適用于獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室對(duì)疑似感染或攜帶馬傳染性貧血病毒的馬匹進(jìn)行血清學(xué)診斷。

根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)前需準(zhǔn)備抗原、陽性對(duì)照血清、陰性對(duì)照血清以及待檢樣品等材料，并確保所有試劑均處于有效期內(nèi)。其中，抗原應(yīng)為經(jīng)過國家認(rèn)可機(jī)構(gòu)鑒定合格的產(chǎn)品；陽性對(duì)照血清來自已知含有高滴度抗體的馬匹；而陰性對(duì)照則來源于未感染該病毒的健康個(gè)體。

制備瓊脂板時(shí)，按照一定比例將瓊脂粉溶解于磷酸鹽緩沖液中加熱至完全融化后冷卻至約50℃左右倒入平皿內(nèi)形成均勻薄層。待瓊脂凝固后，在其上打孔并加入相應(yīng)樣本及對(duì)照品。隨后將平板置于濕潤環(huán)境中保持恒定溫度（通常為37℃）下孵育一段時(shí)間直至出現(xiàn)清晰可見的沉淀線為止。

對(duì)于結(jié)果判讀，若在待測樣本孔與抗原孔之間形成一條連續(xù)且明顯的白色沉淀帶，則表明該樣本中含有針對(duì)馬傳染性貧血病毒的特異性抗體，即判斷為陽性反應(yīng)；反之，若無明顯沉淀線或僅見模糊不清者則視為陰性。此外，每次實(shí)驗(yàn)都必須同時(shí)設(shè)立正負(fù)對(duì)照以驗(yàn)證整個(gè)過程的有效性和準(zhǔn)確性。


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  • 已被廢除、停止使用，并不再更新
  • 2002-08-27 頒布
  • 2002-12-01 實(shí)施
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文檔簡介

5S.11.220NY141中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T569-2002馬傳染性貧血病瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)方法Agargeiimmunodiffusiontestforequineinfectiousanemia2002-08-27發(fā)布2002-12-01實(shí)施中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布

NY/T569-2002馬傳染性貧血?。╡quineinfcetiousanemia,簡稱EIA)是馬屬動(dòng)物以反復(fù)發(fā)作、貧血和持線病毒血癥為特征的傳染性疾病，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織WorldOrganizationforAnimalHealth(英）,OfficeIn-ternationaldesEpizooties(法),IEJ列為B類疫病，我國農(nóng)業(yè)部列為二類動(dòng)物疫病。本病是由反轉(zhuǎn)錄病毒科、慢病毒屬的馬傳貧病毒(ELAV)引起的，經(jīng)吸血昆蟲傳播本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)(AGID)診斷方法，是根據(jù)（IE《診斷試驗(yàn)和變苗標(biāo)準(zhǔn)手冊》（2000年版)和我國實(shí)際情況制定的·技術(shù)上一致。該法簡便特異，在國際貿(mào)易中為指定的診斷方法。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄八為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部童牧獸醫(yī)局提出本標(biāo)準(zhǔn)由全國動(dòng)物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口，本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：相文華、沈榮顯。

NY/T569-2002馬傳染性貧血病瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)方法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了馬傳染性貧血病的瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于馬傳染性貧血病的診斷和檢疫2瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)2.1材料準(zhǔn)備2.1.1抗原：檢測用抗原按說明書使用2.1.2血清：“）檢驗(yàn)用標(biāo)準(zhǔn)陽性血清：能與合格抗原在12h內(nèi)產(chǎn)生明顯致密沉淀線的傳貧馬血清,做8倍以上的稀釋仍保持陽性反應(yīng)者為宜。小量分裝，凍結(jié)保存。b）被檢血清：不含防腐劑和抗凝劑的被檢馬血清。2.1.3pH7.20.01mol/L的磷酸鹽緩沖液(PBS），配制方法見附錄A規(guī)范性附錄)。2.2操作方法2.2.1制備瓊脂板2.2.1.1取優(yōu)質(zhì)瓊脂1.0g,直接放入含有萬分之一硫柳汞的100ml.的PBS中，用熱水浴溶化混勾2.2.1.2將直徑90mm的平血放在水平臺(tái)上，每平血倒入熱溶化瓊脂液15mL～18mL,厚度約2.5mm左右，注意不要產(chǎn)生氣泡,冷凝后加蓋,把平血倒置，防止水分蒸發(fā)，放在普通冰箱中可保存兩周左右。根據(jù)受檢血清樣品多少亦可采用大、中、小三種不同規(guī)格的玻璃板。10cmX16cm的玻璃板加注熱瓊脂液40mL:6cm×7cm的加注11mL:3.2cm×7.6cm的加注6mL.配成的瓊脂液，可裝瓶中用膠塞蓋好,以防水分蒸發(fā)，待使用時(shí)，現(xiàn)溶化現(xiàn)制板.2.2.2打孔反應(yīng)孔現(xiàn)用現(xiàn)打。在坐標(biāo)紙上畫好七孔型圖案。把坐標(biāo)紙放在帶有瓊脂板的平血或玻璃板下面,照?qǐng)D案在固定位置上用金屬管打孔，將切下的瓊脂片取出，勿使瓊脂膜與玻璃面離動(dòng)?？乖准巴庵芸卓讖骄鶠?mm,孔間距3mm(見圖1

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