ICS11220

B41.

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T32945—2016

牛結(jié)核病診斷體外檢測(cè)γ干擾素法

Bovinetuberculosisdiagnosis—AssayonIFN-γinvitro

2016-08-29發(fā)布2017-03-01實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T32945—2016

目次

前言

…………………………Ⅰ

引言

…………………………Ⅱ

范圍

1………………………1

縮略語(yǔ)

2……………………1

原理

3………………………1

體外檢測(cè)法

4IFN-γ………………………1

儀器與耗材

4.1…………………………1

試劑

4.2…………………2

操作步驟

4.3……………2

附錄規(guī)范性附錄試劑配制

A()…………4

附錄資料性附錄采樣與樣品處理注意事項(xiàng)

B()………6

GB/T32945—2016

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任

。。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

(SAC/TC181)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位華中農(nóng)業(yè)大學(xué)武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司北京出入境檢驗(yàn)檢疫局廣

:、、、

西壯族自治區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心

。

本標(biāo)準(zhǔn)起草人郭愛(ài)珍陳穎鈺涂玲玲胡長(zhǎng)敏晁金馬貴平胡巧云陳煥春

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T32945—2016

引言

牛結(jié)核病是主要由牛分枝桿菌MycobacteriumbovisMb.ovis引起的一種人獸共患慢性傳染病

(,),

呈世界性分布世界動(dòng)物衛(wèi)生組織將其列為必須通報(bào)疫病與國(guó)際貿(mào)易必檢對(duì)象我國(guó)將其列為

。(OIE),

二類動(dòng)物疫病是國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃年種優(yōu)先防治的國(guó)內(nèi)重大動(dòng)物疫病

,“(2012~2020)”16

之一臨床上牛結(jié)核病以肺結(jié)核最為常見(jiàn)但也可發(fā)生乳腺結(jié)核和腸結(jié)核等健康?？赏ㄟ^(guò)被污染的

。,。

空氣飼料和飲水等經(jīng)呼吸道和消化道感染此外牛結(jié)核病是人結(jié)核的重要傳染源之一由于牛分枝

、;,。

桿菌感染譜廣持續(xù)感染普遍牛結(jié)核病程緩慢臨床癥狀不典型等原因牛結(jié)核病凈化相對(duì)困難隨著

、、、,。

近年來(lái)我國(guó)現(xiàn)代奶牛業(yè)和肉牛業(yè)的蓬勃發(fā)展以及國(guó)內(nèi)牛群交易日益頻繁我國(guó)牛結(jié)核病呈上升趨勢(shì)

,。

國(guó)內(nèi)外通用的牛結(jié)核病控制策略是檢疫撲殺因此準(zhǔn)確檢測(cè)是控制和凈化牛結(jié)核病的前提

“—”,,。

目前法定的檢疫方法為牛結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)該方法的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高缺點(diǎn)是操作費(fèi)時(shí)繁瑣結(jié)

,,:,

果判斷主觀性強(qiáng)可與環(huán)境分枝桿菌感染出現(xiàn)交叉反應(yīng)免疫抑制者或結(jié)核病后期對(duì)結(jié)核菌素的反應(yīng)性

,,

降低牛結(jié)核病診斷體外檢測(cè)法是用牛結(jié)核菌素與禽結(jié)核菌素分別刺激外周血淋巴細(xì)胞釋放

。IFN-γ

通過(guò)檢測(cè)濃度判斷牛結(jié)核病感染狀態(tài)的一種方法是一種敏感性與特異性均高的方法

IFN-γ、IFN-γ,,

且能實(shí)現(xiàn)高通量檢測(cè)發(fā)達(dá)國(guó)家已成功利用該方法輔助診斷與監(jiān)測(cè)牛結(jié)核病建立我國(guó)牛結(jié)核病診斷

。。

體外檢測(cè)法國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)能為牛結(jié)核病的早期診斷檢疫監(jiān)測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查等提供技術(shù)支撐促

IFN-γ,、、,

進(jìn)我國(guó)牛結(jié)核病的控制和凈化保障我國(guó)養(yǎng)牛業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展

,。

Ⅱ

GB/T32945—2016

牛結(jié)核病診斷體外檢測(cè)γ干擾素法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了牛結(jié)核病診斷體外檢測(cè)干擾素法的縮略語(yǔ)原理試劑采樣和操作步驟

γ、、、。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于牛結(jié)核病的早期診斷檢疫監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查

、、。

2縮略語(yǔ)

下列縮略語(yǔ)適用于本文件

。

禽結(jié)核菌素

A-PPD:(avianpurifiedproteinderivative)

牛結(jié)核菌素

B-PPD:(bovinepurifiedproteinderivative)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

ELISA:(enzymelinkedimmunosorbentassay)

辣根過(guò)氧化物酶

HRP:(horseradishperoxidase)

干擾素

IFN-γ:γ-(interferongamma)

免疫球蛋白

IgG:G(immunoglobullinG)

磷酸鹽緩沖液

PBS:(phosphatebuffersolution)

光密度值

OD:(opticaldensity)

3原理

感染牛分枝桿菌的結(jié)核陽(yáng)性牛其外周血淋巴細(xì)胞已被牛分枝桿菌致敏并產(chǎn)生免疫記憶當(dāng)體外

,。

遇到牛分枝桿菌特異性抗原牛結(jié)核菌素刺激時(shí)淋巴細(xì)胞將被激活發(fā)生再次細(xì)胞免疫反應(yīng)大量釋

(),,,

放通過(guò)夾心檢測(cè)濃度水平即可診斷牛分枝桿菌感染禽分枝桿菌屬于非結(jié)核

IFN-