ICS6502001

B16..

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T31789—2015

冬生疫霉菌檢疫鑒定方法

DetectionandidentificationofPhytophthorahibernalisCarne

2015-07-03發(fā)布2015-11-27實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T31789—2015

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任

。。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院中華人民共和國(guó)廈門出入境檢驗(yàn)檢疫局

:、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人杜洪忠吳品珊王宏毅嚴(yán)進(jìn)張秋娥

:、、、、。

Ⅰ

GB/T31789—2015

冬生疫霉菌檢疫鑒定方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了冬生疫霉菌的檢疫鑒定方法

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于針對(duì)冬生疫霉菌寄主的苗木枝條枝葉果實(shí)以及夾帶土壤和介質(zhì)中冬生疫霉菌的

、、、

鑒定

。

2儀器和用具

21儀器

.

生物顯微鏡超凈工作臺(tái)光照培養(yǎng)箱電子天平高壓滅菌鍋冰箱擴(kuò)增儀熒光

、、、(1/1000g)、、、PCR、

擴(kuò)增儀電泳儀凝膠成像儀高速冷凍離心機(jī)恒溫水浴鍋

PCR、、、、。

22用具

.

燒杯三角瓶量筒試管培養(yǎng)皿酒精燈鑷子剪刀解剖刀接種針載玻片蓋玻片塑料研杵

、、、、、、、、、、、、、

移液器移液器吸頭離心管液氮罐

、、、。

3試劑材料和培養(yǎng)基

、

31試劑

.

匹馬霉素氨芐青霉素鈉鹽利福平鈉鹽五氯硝基苯

(pimaricin),(ampicillin),(rifampicin),(penta-

碳酸鈣β谷甾醇β色氨酸硫氨

chloronitrobenzene),(CaCO3),-(-sitosterol),(tryptophan),(thiamine),

氯化鈣次氯酸鈉

(CaCl2·H2O),(NaClO)。

瓊脂糖乙二胺四乙酸四鈉鹽

,Tris-HCl,MgCl2,HCl,EDTA(),NaOH,NaOAc,KCl,Tris,CTAB

十六烷基三甲基溴化銨無(wú)水乙醇三氯甲烷異丙醇異

(),TAE,(Ethanol),(Chloroform),(Isopropanol),

戊醇核酸染料蛋白酶Taq聚合酶相對(duì)分子

(Isoamylalcohol),SYBRGreenI,K,DNA,dNTPs,DNA

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物引物和實(shí)時(shí)熒光引物和及探針

,PCRPHIB1PHIB2,PCRPH-FPH-RTaqMan-MGB

PH-Pr。

32材料

.

瓊脂粉汁雪松松針Cedrusdeodara柑橘葉片Citrus胡蘿卜玉米油

、V8、()、(spp.)、、。

33培養(yǎng)基

.

培養(yǎng)基胡蘿卜絲培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基和卵孢子培養(yǎng)基具體配方參見(jiàn)附

V8、CPA、PARP-V8,

錄

B。

4檢疫鑒定方法

41癥狀檢查

.

重點(diǎn)觀察柑橘果實(shí)是否有褐色病變?nèi)~和小枝是否枯萎杜鵑屬植物