ICS07.100.30C53中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T：19915.3—2005豬鏈球菌2型PCR定型檢測技術(shù)MethodfordetectionSireptococcussuistype2byPCR2005-09-27發(fā)布2005-11-01實(shí)施中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)褚鏈球菌2型PCR定型檢測技術(shù)GB/T19915.3—2005中中國標(biāo)準(zhǔn)出版社出版發(fā)行北京西城區(qū)復(fù)興門外三里河北街16號郵政編碼：100045電話：63787337、637874472005年12月第一版2005年12月電子版制作書號：155066·1-26802版權(quán)專有侵權(quán)必究舉報電話：（010)68533533

GB/T19915.3—2005前豬鏈球菌病是鏈球菌屬中豬源鏈球菌引致的豬鏈球菌病的總稱,其病原主要有豬鏈球菌2型和馬鏈球菌獸疫亞種。豬鏈球菌2型可引起豬敗血癥、腦膜炎等。人可通過傷口感染該菌,并導(dǎo)致死亡。為控制和預(yù)防該菌引致的豬鏈球菌病，建立快速、特異、敏感的檢測方法是當(dāng)務(wù)之急。本標(biāo)準(zhǔn)是采用公認(rèn)的細(xì)菌學(xué)診斷的現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)制定的。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A是規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)局提出本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陸承平、范紅結(jié)、姚火春、何孔旺

GB/T19915.3—2005豬鏈球菌2型PCR定型檢測技術(shù)T范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬鏈球菌2型的PCR的定型方法本標(biāo)準(zhǔn)適用于由豬鏈球菌2型引致的病死豬分離菌的檢測和定型。規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勒誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T6682一1992分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于木標(biāo)準(zhǔn)。豬鏈球菌2型SIreplococcussuistype2豬鏈球菌是屬于鏈球菌屬的一種細(xì)菌,根據(jù)其英膜多糖抗原的差異,可分為1～34及1/2共35個血清型。豬鏈球菌2型是豬鏈球菌的一個血清型,不僅對豬致病性很強(qiáng),而且可以感染特定的人群,是一種重要的人畜共患病病原菌，4測定方法方法提要挑取可疑細(xì)菌培養(yǎng)物菌落加入PCR反應(yīng)管中.進(jìn)行PCR擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物.與標(biāo)準(zhǔn)分子量標(biāo)記比較，確定擴(kuò)增產(chǎn)物的大小。4.2試劑和材料除另有規(guī)定.所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682—1992的滅菌雙蒸水。4.2.1豬鏈球菌2型定型PCR反應(yīng)混合物和豬鏈球菌2型定型套式PCR反應(yīng)混合物4.2.2TagDNA聚合酶4.2.3瓊脂糖：電泳級。4.2.4溴化乙鍵。4.2.5分子量標(biāo)記：DL-2000。4.2.6TE緩沖液：10mmol/LTris-HCI(pH8.0),1mmol/LEDTA(pH8.0)。4.2.710×PCR緩沖液：100mmol/LKCl.160mmol/L(NH,).SO,.20mmol/LMgSO,.200mmol/LTris-HCI(pH8.8).1%TritonX-100,1mg/mLBSA.4.2.8電泳緩沖液：242gTris堿，57.1mL冰乙酸,100mL0.5mol/LEDTA(pH8.0)，加蒸水至1000mL.使