犐犆犛６５．１２０

犅４６

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

犌犅／犜１７４８０—２００８

代替ＧＢ／Ｔ１７４８０—１９９８

飼料中黃曲霉毒素犅１的測(cè)定

酶聯(lián)免疫吸附法

犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犪犳犾犪狋狅狓犻狀犅１犻狀犪狀犻犿犪犾犳犲犲犱犻狀犵狊狋狌犳犳狊—

犈狀狕狔犿犲犾犻狀犽犲犱犻犿犿狌狀狅狊狅狉犫犲狀狋犪狊狊犪狔

２００８１１２１發(fā)布２００９０２０１實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

書(shū)

犌犅／犜１７４８０—２００８

前言

本標(biāo)準(zhǔn)代替ＧＢ／Ｔ１７４８０—１９９８《飼料中黃曲霉毒素Ｂ１的測(cè)定酶聯(lián)免疫吸附法》。

本標(biāo)準(zhǔn)與ＧＢ／Ｔ１７４８０—１９９８相比主要修改如下：

———范圍中增加“本標(biāo)準(zhǔn)檢出限為０．１μｇ／ｋｇ”；

———規(guī)范性引用文件中，用“ＧＢ／Ｔ２０１９５動(dòng)物飼料試樣的制備”代替“ＧＢ／Ｔ８３８１—１９８７飼料中

黃曲霉毒素Ｂ１的測(cè)定方法”；

———試劑盒組成中，增加“注意：不同測(cè)試盒制造商間的產(chǎn)品組成和操作會(huì)有細(xì)微的差別，應(yīng)嚴(yán)格按

說(shuō)明書(shū)要求規(guī)范操作”；

———儀器、設(shè)備條款中，刪除冰箱條款；增加電動(dòng)振蕩器、具塞磨三角瓶；

———將“取樣”條款改為“試樣制備”，同時(shí)將“按ＧＢ／Ｔ８３８１—１９８７中５．１要求采集、處理樣品，制

成分析用的試樣”改為“按ＧＢ／Ｔ２０１９５要求制備試樣”；

———限量測(cè)定條款中，將測(cè)定操作的分級(jí)條款合并為一個(gè)條款，并刪除表格，均用文字?jǐn)⑹鰷y(cè)定

過(guò)程；

———定量測(cè)定條款中增加“結(jié)果保留２位有效數(shù)字”；

———原“其他”條款刪除，將“凡接觸ＡＦＢ１的容器，需浸入１％次氯酸鈉（ＮａＣｌＯ２）溶液，１２ｈ后清洗

備用。為分析人員安全，操作時(shí)要帶上醫(yī)用乳膠手套”改為“警告”條款；

———增加了資料性附錄Ａ；

———將樣品溶液稀釋表及稀釋倍數(shù)與結(jié)果計(jì)算表作為資料性附錄Ｂ。

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄Ａ和附錄Ｂ均為資料性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：江蘇省微生物研究所有限責(zé)任公司。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：李利東、宓曉黎、袁建興、杜姝蓮。

本標(biāo)準(zhǔn)于１９９８年首次發(fā)布，本次為第一次修訂。

Ⅰ

書(shū)

犌犅／犜１７４８０—２００８

飼料中黃曲霉毒素犅１的測(cè)定

酶聯(lián)免疫吸附法

１范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中黃曲霉毒素Ｂ１的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ＥＬＩＳＡ）方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于各種飼料原料、配合飼料及濃縮飼料中黃曲霉毒素Ｂ１的測(cè)定。

本標(biāo)準(zhǔn)檢出限為０．１μｇ／ｋｇ。

２規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有

的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究

是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

ＧＢ／Ｔ２０１９５動(dòng)物飼料試樣的制備（ＧＢ／Ｔ２０１９５—２００６，ＩＳＯ６４９８：１９９８，ＩＤＴ）

３原理

試樣中黃曲霉毒素Ｂ１、酶標(biāo)黃曲霉毒素Ｂ１抗原與包被于微量反應(yīng)板中的黃曲霉毒素Ｂ１特異性抗

體進(jìn)行免疫競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng)，加入酶底物后顯色，試樣中黃曲霉毒素Ｂ１的含量與顏色成反比。用目測(cè)法或

儀器法通過(guò)與黃曲霉毒素Ｂ１標(biāo)準(zhǔn)溶液比較判斷或計(jì)算試樣中黃曲霉毒素Ｂ１的含量。

４試劑和材料

除非另有說(shuō)明，在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑和蒸餾水或去離子水或相當(dāng)純度的水。

４．１黃曲霉毒素Ｂ１酶聯(lián)免疫測(cè)試盒中的試劑

注意：不同測(cè)試盒制造商間的產(chǎn)品組成和操作會(huì)有細(xì)微的差別，應(yīng)嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)要求規(guī)范操作。

４．１．１包被抗黃曲霉毒素Ｂ１抗體的聚苯乙烯微量反應(yīng)板。

４．１．２樣品稀釋液：甲醇蒸餾水（７＋９３）。

４．１．３黃曲霉毒素Ｂ１標(biāo)準(zhǔn)溶液：１．００μｇ／Ｌ、５０．００μｇ／Ｌ。

警告———凡接觸黃曲霉毒素犅１的容器，需浸入１％次氯酸鈉（犖犪犆犾犗２）溶液，１２犺后清洗備用。為

分析人員安全，操作時(shí)要帶上醫(yī)用乳膠手套。

４．１．４酶標(biāo)黃曲霉毒素Ｂ１抗原：黃曲霉毒素Ｂ１辣根過(guò)氧化物酶交聯(lián)物。

４．１．５０．０１ｍｏｌ／ＬｐＨ７．５磷酸鹽緩沖液的配制：稱(chēng)?。常埃保缌姿釟涠c（Ｎａ２ＨＰＯ４·１２Ｈ２Ｏ）、

０．２５ｇ磷酸二氫鈉（ＮａＨ２ＰＯ４·２Ｈ２Ｏ）、８．７６ｇ氯化鈉（ＮａＣｌ），加水溶解至１Ｌ。

４．１．６酶標(biāo)黃曲霉毒素Ｂ１抗原稀釋液：稱(chēng)?。埃保缗Ｑ灏椎鞍祝ǎ拢樱粒┤苡冢保埃埃恚蹋穑龋罚盗姿猁}緩

沖液（４．１．５）。

４．１．７０．１ｍｏｌ／ＬｐＨ７．５磷酸鹽緩沖液：稱(chēng)?。常埃保缌姿釟涠c（Ｎａ２ＨＰＯ４·１２Ｈ２Ｏ）、２．５ｇ磷酸二

氫鈉（ＮａＨ２ＰＯ４·２Ｈ２Ｏ）、８７．６ｇ氯化鈉（ＮａＣｌ），加水溶解至１Ｌ。

４．１．８洗滌母液：吸?。埃担恚掏聹兀玻坝冢保埃埃埃恚蹋埃保恚铮欤蹋穑龋罚?/p>