ICS65.120B46中華人民共和國國家標準GB/T17480—1998飼料中黃曲霉毒素B1的測定酶聯(lián)免疫吸附法DeterminationofaflatoxinBinfeeds-Enzyme-linkedimmunosorbentassay1998-08-28發(fā)布1999-01-01實施國家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

中華人民共和國國家標準飼料中黃曲霉毒素B的測定酶聯(lián)免疫吸附法GB/T17480-1998中國標準出版社出版發(fā)行北京西城區(qū)復興門外三里河北街16號郵郵政編碼：100045電話：63707337、637874471999年1月第一版2005年1月電子版制作書號：155066·1-15410版權(quán)專有侵權(quán)必究舉報電話：（010）68533533

GB/T17480-1998前酶聯(lián)免疫吸附(ELISA）法測定黃曲霉毒素B,AFB,）是近20年來發(fā)展起來的一種新的分析方法它比原GB8381—87薄層熒光限量法(半定量)測定AFB,具有技術(shù)先進、靈敏度高、特異性強、精確度高、重復性好、測定速度快、成本低、污染少等優(yōu)點。其原理是通過AFB,抗體與酶標AFB,抗原和待測抗原之間免疫竟爭反應以及酶的催化顯色反應相結(jié)合來檢測樣品中AFB，的含量。國外已研制成專門的測試盒供檢測部門使用，如美國Agri-Screen等公司就有這種產(chǎn)品。本標準等效采用AOAC(美國公職分析化學家協(xié)會)中關(guān)于棉籽制品和混合飼料中AFB,酶聯(lián)免疫吸附篩選法，該法1989年首次在AOAC上獲得通過，本標準為飼料中AFB限量和定量測定法，可與原GB8381—87標準并列使用，而以原標準為仲裁法本標準由全國飼料工業(yè)標準化技術(shù)委員會提出本標準由全國飼料工業(yè)標準化技術(shù)委員會歸口本標準由江蘇省微生物研究所、上海市飼料質(zhì)量監(jiān)督檢驗站、國家飼料質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心(北京）上海市嘉定纖檢儀器廠共同組成的起草工作組負責起草。本標準主要起草人：成恒嵩、潘中華、張瑜、陳必芳、岔曉黎、趙曉聯(lián)、袁建興、楊歡、徐燕芳、葛其德.

中華人民共和國國家標準飼料中黃曲霉毒素B的測定酶聯(lián)免疫吸附法GB/T17480-1998DeterminationofaflatoxinBinfeeds-Enzyme-linkedimmunosorbentassay范圍本標準規(guī)定了飼料中黃曲霉毒素B,<AFB,)的酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)方法。本標準適用于各種飼料原料、配(混）合飼料中AFB的測定。2引用標準GB8381-87飼料中黃曲餐毒素B的測定方法3原理利用固相酶聯(lián)免疫吸附原理，將AFB，特異性抗體包被于聚苯乙烯微量反應板的孔穴中，再加入樣品提取液(未知抗原)及酶標AFB,抗原(已知抗原)使兩者與抗體之間進行免疫竟爭反應,然后加酶底物顯色，顏色的深淺取決于抗體和酶標AFB,抗原結(jié)合的量，即樣品中AFB,多,則被抗體結(jié)合酶標AFB,抗原少，顏色淺，反之則深。用目測法或儀器法與AFB,標樣比較來判斷樣品中AFB,的含量。試劑和材料4.1AFB，酶聯(lián)免疫測試盒組成4.1.1包被抗體的聚苯乙烯微量反應板：24孔或48孔。4.1.2A試劑：稀釋液，甲醇：蒸水為7：93(V/V)。4.1.3）B試劑：AFB,標準物質(zhì)(Sima公司，純度100%）溶液,1.00g/L.4.1.4C試劑:酶標AFB抗原(AFB，辣根過氧化物酶交聯(lián)物,AFB-HRP),AFB,HRP(摩爾比)<2：1。4.1.5D試劑：酶標AFB抗原稀釋液，含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的pH7.5磷酸鹽緩沖液(PBS)。pH7.5磷酸鹽緩沖液的配制：稱取3.01g磷酸氫二鈉(NazHPO,·12H.O),0.25g磷酸二氫鈉(NaH.PO,·2H.O).8.76g氯化鈉(NaCl)加水溶解至1L、4.1.6E試劑：洗滌母液，含0.05%吐溫-20的PBS溶液.4.1.7F試劑：底物液a，四甲基聯(lián)苯胺(TMB）用pH5.0乙酸鈉-檸檬酸緩沖液配成濃度為0.2g/L.pH5.0乙酸鈉-檸樓酸緩沖液配制：稱取15.09g乙酸鈉(CH,COONa·3H.O),1.56g檸檬酸(C.H.O,·H.O)加水溶解至1L。4.1.8G試劑：底物液b.1mlpH5.0乙酸