中藥及其制劑分析2AnalysisofPharmaceuticalPreparationsandTraditionalChineseMedicine中藥制劑分析的一般程序含量測定檢查鑒別取樣鑒別藥味的選取原則單味制劑，干脆選取單一藥味進(jìn)行鑒別。中藥復(fù)方制劑，應(yīng)依據(jù)君、臣、佐、使，依次選擇藥味。當(dāng)藥味較多時，應(yīng)首選君藥、臣藥、珍貴藥、毒性藥進(jìn)行鑒別探討。凡有原粉入藥者，應(yīng)當(dāng)作顯微鑒別。原則上處方中的每一藥味均應(yīng)進(jìn)行鑒別探討，選擇盡量多的藥味制訂在標(biāo)準(zhǔn)中，但最少也要超過處方的1/3藥味。二、鑒別試驗鑒定有臨床療效的已知成分黃連小檗堿（抗菌消炎）麻黃麻黃堿（支氣管哮喘）烏頭烏頭堿（毒性）洋地黃強心苷（強心）延胡索延胡索乙素（鎮(zhèn)痛）選擇原則應(yīng)選有專屬性的特征進(jìn)行鑒別多來源的藥材應(yīng)選擇共有的特征進(jìn)行鑒別顯微鑒別（含生藥粉制劑）丸劑、片劑、膠囊劑、散劑快速，簡便，覆蓋面大色譜鑒別TLC法——應(yīng)用最多（Rf、顏色、熒光）GC法——含揮發(fā)性成分的藥物HPLC法——常與含量測定同時進(jìn)行陰、陽比照法陽性比照將要鑒別的藥材按制劑工藝處理，再按鑒別方法提取的溶液陰性比照把制劑中要鑒別的藥材除去，用剩下的各味藥按制劑工藝處理，再按鑒別方法提取的溶液[處方]牛黃10g朱砂60g黃連200g黃芩120g梔子120g郁金80g[方藥分析]牛黃—清熱解毒藥，主含膽酸類成分黃連—清熱燥濕藥，主要為小檗堿黃芩—清熱燥濕藥，主要為黃酮類梔子—清熱瀉火藥，主含梔子甙朱砂—安神藥，主含硫化汞（HgS）郁金—活血去瘀藥，主含揮發(fā)油示例萬氏牛黃清心丸黃芩甙供試品黃芩空白梔子甙供試品梔子空白中藥指紋圖譜定義：運用現(xiàn)代分析技術(shù)表征和評價具有代表性中藥化學(xué)成分群信息?！艾F(xiàn)代分析技術(shù)”：光譜、色譜、波譜、聯(lián)用技術(shù)，以及化學(xué)計量學(xué)和計算機技術(shù)等?！爸兴幓瘜W(xué)成分群”：藥材、飲片、中藥提取物和成藥中與藥理活性相關(guān)的，由次生代謝產(chǎn)物組成的化合物群。“代表性”：中藥化學(xué)成分群信息須具有統(tǒng)計學(xué)意義的樣本數(shù)。國外應(yīng)用狀況美國FDA允許草藥類食品添加劑申報中可以供應(yīng)色譜指紋圖譜。WHO在草藥評價指導(dǎo)原則中規(guī)定若活性成分不明，可以供應(yīng)色譜指紋圖譜以證明產(chǎn)品質(zhì)量的一樣性。歐共體在草藥質(zhì)量評價的指南中指出，單靠測定某有效成分的穩(wěn)定性是不夠的。國際上基本認(rèn)可，草藥色譜指紋圖譜可以供應(yīng)困難成分的定性甚至定量信息，考察生產(chǎn)中的影響，限制產(chǎn)品的一樣性。色譜指紋圖譜的基本屬性模糊性強調(diào)分析、比較指紋圖譜的相像性，而不是完全相同。是一種綜合的、量化的色譜鑒別手段。整體性將指紋圖譜作為一個整體來分析和比較它的綜合特征以達(dá)到鑒別的目的。系統(tǒng)性：指圖譜所反映的化學(xué)成分全部信息，其中包括中藥有效部位所含主要成分的種類，或指標(biāo)成分的全部。特征性：指圖譜中反映的化學(xué)成分信息是具有高度選擇性的，這些信息的綜合結(jié)果，將有助于特征區(qū)分中藥的真?zhèn)闻c優(yōu)劣。穩(wěn)定性：在規(guī)定的方法與條件下，不同的操作者和不同的試驗室應(yīng)能作出相同的指紋圖譜。指紋圖譜的制定原則中藥材預(yù)處理中藥液相色譜分析條件分別色譜條件初始化指導(dǎo)方法學(xué)考察指紋圖譜調(diào)整色譜條件N其他1.計算機幫助指紋圖譜評價2.多成分定量分析方法建立色譜指紋圖譜平臺流程《中藥指紋圖譜工作站》軟件知母為百合科植物知母(AnemarrhenaàsphodeloidesBge.)的干燥根莖，為常用中藥主要成分為皂苷類，黃酮類，木脂素等芒果苷和新芒果苷是其清熱作用的有效成分示例：知母的指紋圖譜探討色譜條件色譜柱：Hypersil填料，C18-ODS柱（5μm，4.6×250mm，大連依利特）；流淌相：接受梯度洗脫，A相為乙腈，B相為25mmol/L磷酸二氫鉀緩沖液（pH3.0）；流速：1.0ml/min，運行時間60min，檢測波長257nm，柱溫為25℃。梯度程序：Time(min)%A(ACN)%B(buffer)0010020100589220892321585507030溶液制備供試品溶液藥材粉末0.2g80%甲醇25ml超聲20min過濾殘渣80%甲醇25ml濾液過濾超聲20min濾液合并濾液揮干，甲醇定容至25ml不同產(chǎn)地知母藥材的HPLC指紋圖譜中藥制劑分析的一般程序含量測定檢查鑒別取樣檢查項目意義方法水分貯藏過程中保證質(zhì)量的中藥指標(biāo)，霉變、粘結(jié)、成分分解烘干法、甲苯法、減壓干燥法總灰分和酸不溶性灰分控制藥材中泥土、砂土的量熾灼殘渣法重金屬對人體有嚴(yán)重危害，藥材由于環(huán)境污染等原因易引入重金屬雜質(zhì)，嚴(yán)重影響中藥出口干法、濕法破壞-硫代乙酰胺法砷鹽藥材由于受除草劑、殺蟲劑、化學(xué)肥料等影響易引入砷鹽古蔡法、二乙基二硫代氨基甲酸銀法等農(nóng)藥殘留藥材栽培為了減少蟲害，噴灑農(nóng)藥，土壤中殘存的農(nóng)藥，含磷、含氯，嚴(yán)重影響中藥出口氧瓶燃燒法(不明農(nóng)藥測定總氯/磷量)、GC(已知農(nóng)藥)、比色等中藥及其制劑分析的雜質(zhì)檢查烘干法（不含或少含揮發(fā)性成分）甲苯法（含揮發(fā)性成分）減壓干燥法（含揮發(fā)性成分珍貴藥）GC法(一)水分測定法酸不溶性灰分的測定（外來雜質(zhì)）△△總灰分的測定（生理灰分+外來雜質(zhì)）（二）總灰分和酸不溶性灰分的測定WHO規(guī)定植物藥鉛≤10ppm鎘≤0.3ppm干法破壞濕法破壞硫代乙酰胺法（三）重金屬的測定（四）殘留農(nóng)藥有機氯類：六六六、DDT、五氯硝基苯、艾氏劑有機磷類：磷酸酯類（敵敵畏、敵百蟲）、硫代磷酸酯類（對硫磷）、磷酰胺及硫代磷酰胺（甲胺磷）氨基甲酸酯類：萘基氨基甲酸酯類（西維因）、雜環(huán)甲基氨基甲酸酯類（呋喃丹）、涕滅威等擬除蟲菊酯類

農(nóng)殘的特性中藥材中農(nóng)藥殘留污染具有普遍性種植藥材中農(nóng)藥殘留量較高，而野生藥材中僅有痕量檢出中成藥中農(nóng)藥殘留量一般較低同一地區(qū)的同種藥材、同一藥材的不同部位農(nóng)藥殘留量也有較大的差異不易發(fā)生急性中毒事務(wù)有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥檢出率較低，殘留量也低薄層色譜法薄層酶抑制法----利用某些有機磷農(nóng)藥對膽堿酯酶具有抑制作用，且酶的基質(zhì)(β-醋酸萘酯)水解產(chǎn)物能與特定顯色劑結(jié)合呈紫色反應(yīng)原理，在已有農(nóng)藥展層的薄層板上，其農(nóng)藥斑點部位因酶的活性被抑制，基質(zhì)不被水解，不引起呈色反應(yīng)，能在薄層板上襯出無色斑點，依據(jù)斑點大小，經(jīng)掃描測定殘留量。綻開前綻開后12

12

氣相色譜法提?。?/p>

1、有機溶劑+硅藻土或Flori硅土柱純化2、超臨界流體萃?。⊿FE）色譜柱：毛細(xì)管柱，多以硅氧烷類為固定液，如OV-17，OV-21，SE-30，SE-54等檢測器：電子捕獲檢測器（ECD）火焰光度檢測器（FPD）ChP2010一部附錄IXQ

農(nóng)藥殘留量測定法

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：SE-54（30m0.32mm0.25um）或DB-1701，63Ni-ECD電子捕獲檢測器。進(jìn)樣口溫度：230℃；檢測器溫度：300℃；不分流進(jìn)樣；程序升溫：初始100℃，每分鐘10℃升至220℃，每分鐘8℃升至250℃，保持10分鐘。理論塔板數(shù)按α-BHC峰計算，不低于106，分別度應(yīng)大于1.5。ChP2010一部附錄IXQ

農(nóng)藥殘留量測定法混合比照品溶液：BHC（α、β、γ、δ-BHC），DDT（PP′-DDE、PP′-DDD、OP′-DDT、PP′-DDT），五氯硝基苯（PCNB），溶劑為石油醚（60-90℃）；供試品溶液制備：藥材、中藥制劑進(jìn)樣量：1ul按外標(biāo)法計算9種農(nóng)藥殘留量?！?.2μg/g；≤0.1μg/g針對農(nóng)殘的對策

抗蟲藥材品種的選育生物防治及生物農(nóng)藥的運用科學(xué)種植中藥材，科學(xué)運用農(nóng)藥采收、加工、包裝、貯存藥材種植環(huán)境的選擇降低土壤農(nóng)藥殘留本底加強綠色中藥材基地建設(shè)中藥制劑分析的一般程序含量測定檢查鑒別取樣測定項目的選定原則1首選君藥及珍貴藥、劇毒藥建立含量測定方法2其次考慮臣藥及其他味藥3有效成分明確的，可選有效成分4成分類別清晰的，可測某一類總成分的含量含量測定5檢測成分應(yīng)歸屬某單一藥味6檢測成分應(yīng)與中醫(yī)用藥的功能主治相近7無法含量測定的，可測定浸出物含量化學(xué)分析法色譜法常用定量方法分光光度法（一）化學(xué)分析法重量分析法容量分析法特點A、精確度、精密度高B、抗干擾實力差（二）分光光度法UV法比色法特點A、靈敏度高B、簡便、快速C、精密度稍低D、干擾多（三）薄層掃描法（TLCS）測定薄層板上斑點對單色光的吸收或反射的強度而進(jìn)行定量的方法特點A、分別效果好B、適用于無法用UV、HPLC法測定的組分C、精確度、精密度低于HPLC1、選擇測定條件（1）薄層色譜條件分別好不拖尾（2）檢測方法吸取測定法熒光測定法反射法透射法（3）掃描方式

單波長雙波長線性掃描法鋸齒掃描法外標(biāo)法（4）散射參數(shù)SX（1）薄層板勻整、平整2、留意事項（2）點樣量精確（4）顯色劑勻整、適當(dāng)（5）疼惜斑點用相同大小干凈玻璃蓋住薄層板，并用透亮膠紙封住邊緣，以起固定和隔絕空氣作用（3）斑點應(yīng)完全分別，不拖尾（四）HPLC法RP-HPLC流淌相甲醇-水PIC

反離子

氫氧化四丁基銨色譜柱

ODSRP-PIC

反離子

烷基磺酸鹽無機陰離子外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法流淌相的選擇（1）中性成分甲醇-水、乙腈-水、四氫呋喃-水三種系統(tǒng)。乙腈-水:黏度較小;乙腈的紫外末端吸取小;待測物極性較大－－甲醇或乙腈的比率可適當(dāng)小些;待測物極性較小－－適當(dāng)加大甲醇或乙腈的比例;流淌相的選擇（2）堿性成分生物堿類化合物如小檗堿、麻黃堿等;固定相上的殘余硅醇基往往使峰拖尾或被吸附，柱效降低。①向流淌相中加入胺類添加劑作為掃尾劑，讓胺類添加劑中的游離胺基與殘余硅醇基（Si－OH）首先相互作用，從而掩蓋生物堿分子與鍵合相的親硅醇基效應(yīng)。常用添加劑：三乙胺、乙二胺、二乙胺、正丁胺流淌相的選擇②加入反離子，常用離子對試劑為烷基磺酸（鹽），如庚烷磺酸鈉；所接受的流淌相的pH為33.5。例如反相離子對HPLC法測定偽麻黃堿分別條件為色譜柱：（4.0mmi.d.×25cm），流淌相：乙腈（50ml）-水（400ml）-磷酸氫鉀（4g）-庚烷磺酸鈉（1g）：乙二胺（0.1ml），流速0.7ml/min。流淌相的選擇（3）酸性成分中藥有效成分酸性成分：脂肪酸、酚類、黃酮類等。如丹參素、黃芩甙、甘草酸等；常接受離子抑制色譜法及離子對色譜法。流淌相的選擇①離子抑制色譜法通過向流淌相中加入少量弱酸（常用醋酸）調(diào)整流淌相的pH值，抑制組分的解離，以達(dá)到分別的目的。本法適用于3≤pKa≤7的弱酸。例如反相離子抑制色譜法測定綠原酸分別條件為色譜柱:YWG-C18(4.6mm×25cm);流淌相:甲醇-水-乙酸(60:40:0.5)。流淌相的選擇②離子對色譜離子對色譜法測定中藥有效成分酸性成分時，所接受的流淌相pH一般為77.5，常用的反離子為四丁基季銨鹽及四丁基磷酸鹽等。例如大黃素：反相離子對色譜法分別條件為色譜柱:YWG-C18(4.6mmi.d.×25cm);流淌相:甲醇-水(含10mmol/L四丁基磷酸鈉)=65:35;流速1ml/min。中藥含量測定－色譜法的難點分別不完善色譜容量－結(jié)構(gòu)相像檢測受限制檢測響應(yīng)－含量低指標(biāo)成分的選擇易分別檢測成分－有效/毒性/珍貴成分本品為(±)-a-(羥甲基)苯乙酸-8-甲基-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]-3-辛酯硫酸鹽-水合物。按干燥品計算，含(C17H23NO3)2·H2S04不得少于98.5%。【性狀】本品為無色結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉末；無臭。本品在水中極易溶解，在乙醇中易溶。熔點取本品，在120℃干燥4小時后，立刻依法測定(附錄ⅥC)，熔點不得低于189℃，熔融時同時分解?！捐b別】(1)本品的紅外光吸取圖譜應(yīng)與比照的圖譜(光譜集487圖)一樣。(2)本品顯托烷生物堿類的鑒別反應(yīng)(附錄Ⅲ)。(3)本品的水溶液顯硫酸鹽的鑒別反應(yīng)(附錄Ⅲ)?！緳z查】酸度取本品0.50g，加水10ml溶解后，加甲基紅指示液1滴，如顯紅色，加氫氧化鈉滴定液(0.02mol／L)0.15ml，應(yīng)變?yōu)辄S色。莨菪堿取本品，按干燥品計算，加水溶解并制成每1ml中含50mg的溶液，依法測定(附錄ⅥE)，旋光度不得過-0.40°。有關(guān)物質(zhì)取本品，加水溶解并稀釋制成每1ml中含0.5mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為比照溶液。照高效液相色譜法(附錄VD)試驗。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0.05m