ICS65.020.01CCSB39ICS65.020.01CCSB39吉 林 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB22/T3312—2021柞蠶蛹蟲(chóng)草菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程CodeofpracticeforspawnproductionofCordycepsmilitarisinAntheraeapernyi20212021112620211215吉林省市場(chǎng)監(jiān)督管理廳發(fā)布前 言本文件按照GB/T1本文件起草單位：吉林省蠶業(yè)科學(xué)研究院。本文件主要起草人：周影、李森、朱興友、祝長(zhǎng)杰、王芹、劉娟。柞蠶蛹蟲(chóng)草菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程范圍本文件適用于柞蠶蛹蟲(chóng)草母種和液體菌種（栽培種）的生產(chǎn)。（）GB/T12728—2006食用菌術(shù)語(yǔ)NY/T528—2010食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程3.1柞蠶蛹蟲(chóng)草northcordyceps3.1柞蠶蛹蟲(chóng)草northcordyceps蛹蟲(chóng)草菌（Cordycepsmilitaris（L.exFr.）Link）3.2母種stockculture3.3出草growingfruitingbody菌絲在柞蠶蛹體內(nèi)生長(zhǎng)至表面形成原基，由原基發(fā)育成子實(shí)體的過(guò)程。3.4僵化fossilization柞蠶蛹接種蛹蟲(chóng)草菌種后，蛹體變僵硬的狀態(tài)。3.5液體菌種liquidspanw母種接種于液體培養(yǎng)基擴(kuò)繁而來(lái)的純菌絲體栽培種。3.6菌絲轉(zhuǎn)色myceliumchangecolour在有光條件下，菌絲由白色轉(zhuǎn)為橙黃或橙色。3.7氣生菌絲aerialhypha生長(zhǎng)在培養(yǎng)基表面空間的菌絲。[來(lái)源：GB/T12728—2006，2.2.7]柞蠶蛹蟲(chóng)草菌種的生產(chǎn)程序包括5個(gè)階段。程序流程圖如圖1所示。1生產(chǎn)條件（見(jiàn)5.1）1生產(chǎn)條件（見(jiàn)5.1）2菌種來(lái)源（見(jiàn)5.2）3母種生產(chǎn)（見(jiàn)5.3）3母種生產(chǎn)（見(jiàn)5.3）5包裝貯存運(yùn)輸（見(jiàn)6）5包裝貯存運(yùn)輸（見(jiàn)6）4液體菌種生產(chǎn)（見(jiàn)5.4）圖1柞蠶蛹蟲(chóng)草菌種生產(chǎn)程序5生產(chǎn)技術(shù)5生產(chǎn)技術(shù)場(chǎng)地環(huán)境應(yīng)符合NY/T528—2010中4.2的規(guī)定。設(shè)施設(shè)備應(yīng)符合NY/T528—2010中4.4的規(guī)定。3次重復(fù)，每次kg7040d～45dcm～8cm5.3母種生產(chǎn)配方及配制方法見(jiàn)附錄A.1。分裝18mm×180mm或20mm×200mm滅菌121℃維持3080℃～90冷卻1cmcm～5cm接種培養(yǎng)7培養(yǎng)7d～104℃冰箱中。檢驗(yàn)接種后第3d、第6d和菌絲體長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)基后逐個(gè)進(jìn)行檢驗(yàn)，挑出未活、污染和生長(zhǎng)不良的培養(yǎng)物，質(zhì)量應(yīng)符合表1的要求。表1試管擴(kuò)繁要求5.3.2三角瓶擴(kuò)繁項(xiàng)目要求檢驗(yàn)方法容器完整、潔凈、無(wú)破損、無(wú)裂紋肉眼觀察棉塞干燥、潔凈，松緊適中，透氣培養(yǎng)基灌入量試管總?cè)莘e的四分之一測(cè)量斜面長(zhǎng)度頂端距棉塞4cm～5cm菌絲生長(zhǎng)量長(zhǎng)滿(mǎn)斜面肉眼觀察菌種正面外觀潔白、粗壯、濃密、絨毛狀氣生菌絲，見(jiàn)光后菌絲24h內(nèi)變?yōu)槌赛S或橙色，均勻、無(wú)角變，無(wú)原基，表面無(wú)分泌物，無(wú)雜菌斜面背面外觀培養(yǎng)基無(wú)干縮，氣生菌絲與基質(zhì)結(jié)合部位呈黃色，均勻，無(wú)暗斑菌絲形態(tài)生長(zhǎng)5d～7d顯微鏡下觀察配方及配制方法見(jiàn)附錄A.1。分裝150mL40mL5cm～5.5cm滅菌℃維持3080℃～90冷卻趁熱擺放于潔凈臺(tái)面上進(jìn)行冷卻、凝固。接種3mm～5mm×3mm～5mm40瓶～508d～114℃冰箱中。5.3.2.7檢驗(yàn)接種后第3d、第7d和菌絲體長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)基后逐個(gè)進(jìn)行檢驗(yàn)，挑出未活、污染和生長(zhǎng)不良的培養(yǎng)物，質(zhì)量應(yīng)符合表2的要求。表2三角瓶擴(kuò)繁要求配方及配制方法見(jiàn)附錄A.2。項(xiàng)目要求檢驗(yàn)方法容器完整、潔凈、無(wú)破損、無(wú)裂紋肉眼觀察棉塞干燥、潔凈，松緊適中，透氣培養(yǎng)基灌入量40mL測(cè)量培養(yǎng)基上表面距棉塞的距離5cm～5.5cm菌絲生長(zhǎng)量長(zhǎng)滿(mǎn)容器肉眼觀察菌種外觀24h黃或橙色，均勻、無(wú)角變，無(wú)原基，無(wú)子實(shí)體，表面無(wú)分泌物，無(wú)雜菌菌絲形態(tài)生長(zhǎng)5d～7d顯微鏡下觀察分裝將液體培養(yǎng)基分裝至500mL無(wú)色耐高溫玻璃三角瓶中，每瓶分裝量為200mL，并加入20?！?514cm～15cm滅菌分裝后置于高壓蒸汽滅菌鍋，121℃維持30min，當(dāng)溫度降至80℃～90℃時(shí)，滅菌鍋放氣閥無(wú)蒸汽排出時(shí)，方可開(kāi)啟鍋蓋。冷卻將液體培養(yǎng)基擺放于潔凈臺(tái)面上，待冷卻至30℃以下進(jìn)行接種。接種4塊～63mm～5mm×3mm～5mm10～15培養(yǎng)置于（22±2）℃條件下避光靜止培養(yǎng)24h后，在150r/min、(22±2）℃條件下，避光震蕩培養(yǎng)96h，液體菌種應(yīng)隨制隨用。每天對(duì)液體菌種逐個(gè)檢驗(yàn)，挑出未萌發(fā)、渾濁和生長(zhǎng)不良的培養(yǎng)物，液體菌種質(zhì)量應(yīng)符合表3的要求。表3液體菌種要求每天對(duì)液體菌種逐個(gè)檢驗(yàn)，挑出未萌發(fā)、渾濁和生長(zhǎng)不良的培養(yǎng)物，液體菌種質(zhì)量應(yīng)符合表3的要求。表3液體菌種要求6包裝、貯存、運(yùn)輸包裝。6.2貯存項(xiàng)目要求檢驗(yàn)方法容器完整、潔凈、無(wú)破損、無(wú)裂紋肉眼觀察無(wú)棉塑料蓋干燥、潔凈，松緊適中，透氣培養(yǎng)基灌入量200mL測(cè)量培養(yǎng)基上表面距瓶口的距離14cm～15cm菌絲生長(zhǎng)時(shí)間96h記錄菌液外觀菌絲絮狀或球狀（0.5mm～2mm）的澄清懸濁液肉眼觀察雜菌無(wú)雜菌顯微鏡下觀察母種在4℃～10℃貯存不超過(guò)60d，液體菌種不宜貯存。6.3運(yùn)輸運(yùn)輸不得擠壓，碰撞，在4℃～25℃條件下運(yùn)輸。附錄A（規(guī)范性）培養(yǎng)基配方及配制方法馬鈴薯200g、葡萄糖10g、蛋白胨10g、磷酸二氫鈉2.5g，磷酸二氫鉀1.5g、硫酸鎂0.7g、瓊脂20g、水1000mL，pH自然。以配制1000mL200g1cm×1cm×1cm1000mL，15min，用41000mL馬鈴薯200g、葡萄糖10