學(xué)習(xí)和初步掌握油菜苗期菌核病抗性鑒定技術(shù)方法。一、目的學(xué)習(xí)和初步掌握油菜苗期菌核病抗性鑒實驗室苗期菌絲接種鑒定法方法簡單易行，鑒定周期短，不受自然環(huán)境影響，適于對大量材料的篩選。另據(jù)初步研究，苗期菌絲接種鑒定表現(xiàn)抗菌材料，在花期仍表現(xiàn)抗病。在本實驗中只學(xué)習(xí)和掌握苗期菌絲塊接種鑒定法。二、內(nèi)容說明實驗室苗期菌絲接種鑒定法方法簡單（一）用品油菜不同品種種子（包括抗病品種如中油821，感病品種如84039的種子）、生長室、平底塑料盤（60×30×4cm）、園土、綠高一號液（北京北農(nóng)綠高科技發(fā)展有限公司出產(chǎn)）、馬鈴薯、紗布、葡萄糖、瓊脂膠、試管、三角瓶、解剖刀、接種環(huán)等。三、所需用品和操作方法

（一）用品三、所需用品和操作方法（1）土壤準(zhǔn)備：取較肥沃的菜園土，清除石塊，曬干敲碎，然后裝入塑料盤中（需裝滿）。（二）、主要作法－－1.供試苗的種植（1）土壤準(zhǔn)備：取較肥沃的菜園土，清除石塊，曬干敲碎，然后裝（2）油菜播種：保證出苗后能保留生長一致苗30株。每10個品種設(shè)對照。（二）、主要作法－－1.供試苗的種植（2）油菜播種：保證出苗后能保留生長一致苗30株。每10個品（3）土壤消毒：播種后用2000—3000倍的綠亨一號溶液澆透土壤進(jìn)行消毒。（二）、主要作法－－1.供試苗的種植（3）土壤消毒：播種后用2000—3000倍的綠亨一號溶液澆（4）播后管理：播后將塑料盤放于生長室內(nèi)，在出苗期間，室內(nèi)溫度控制在20℃以下，在出真葉后，控制20—24℃左右，每2天噴水一次。（二）、主要作法－－1.供試苗的種植（4）播后管理：（二）、主要作法－－1.供試苗的種植生長室生生長室外管理生長室外管理（1）PDA培養(yǎng)基的制作：取馬鈴薯200g，洗凈去皮切碎，加水1000mL，煮沸30min，用紗布過濾，將濾液加水補(bǔ)足到1000mL，加葡萄糖10—20g和瓊脂膠17—20g，加熱溶化，用紗布過濾。然后依需要，分別裝入試管（用作貯藏菌種），或裝入培養(yǎng)皿（用作培養(yǎng)菌絲接種菌），然后在高壓滅菌鍋內(nèi)進(jìn)行滅菌。（二）、主要作法－－2.菌絲的培養(yǎng)（1）PDA培養(yǎng)基的制作：（二）、主要作法－－2.菌絲的培養(yǎng)（2）菌絲的培養(yǎng)：取貯存平板菌核病的菌絲，在無菌條件下移下裝有PDA培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿上，每皿一小塊，放在培養(yǎng)皿中間，在22—25℃下培養(yǎng)3—4天，以菌絲長滿，而又沒有結(jié)核為宜。（二）、主要作法－－2.菌絲的培養(yǎng)（2）菌絲的培養(yǎng)：（二）、主要作法－－2.菌絲的培養(yǎng)（1）接種：待油菜苗3—5片真葉時，將菌絲平板以無菌解剖刀切成0.5×0.5cm小塊，將有菌絲的一面貼于葉片上（注意不要貼在葉脈上），每株接種1片葉，每葉接種1小塊。

見下圖

（二）、主要作法－－3.菌絲塊的接種與管理（1）接種：（二）、主要作法－－3.菌絲塊的接種與管理油菜苗期菌核病抗性鑒定課件（2）管理：接種后在23—26℃溫度和85%—95%相對濕度下培養(yǎng)5—7天后即可調(diào)查（注意接種后前2天相對濕度應(yīng)保持95%以上，以確保發(fā)病，后3—5天保持85%左右，使接種菌不致于腐爛）。（二）、主要作法－－3.菌絲塊的接種與管理（2）管理：接種后在23—26℃溫度和85%—95%相對濕度油菜苗期菌核病抗性鑒定課件油菜苗期菌核病抗性鑒定課件油菜苗期菌核病抗性鑒定課件油菜苗期菌核病抗性鑒定課件油菜苗期菌核病抗性鑒定課件

在試驗中當(dāng)感病品種的發(fā)病率超過40%以上方為有效鑒定。一般將病害等級分為5個等級，即：0級：無病。1級：病斑面積占接種葉面積10%以下。2級：病斑面積占接種葉面積10—30%。3級：病斑面積占接種葉面積30—50%。4級：病斑面積占接種葉面積50%以上。（二）、主要作法－－4.病害等級調(diào)查在試驗中當(dāng)感病品種的發(fā)病率超過40%以上（1）計算發(fā)病率（二）、主要作法－－5.統(tǒng)計方法和抗性分級標(biāo)準(zhǔn)

（1）計算發(fā)病率（二）、主要作法－－5.統(tǒng)計方法和抗性分（2）計算病情指數(shù)式中：Gi為病害級別；Ni為調(diào)查株數(shù)；i為0、1、2…k,GK為最高級別。（二）、主要作法－－5.統(tǒng)計方法和抗性分級標(biāo)準(zhǔn)

（2）計算病情指數(shù)式中：Gi為病害級別；Ni為調(diào)查株數(shù)；（二（3）計算相對抗性指數(shù)（RRI）式中：m為供試材料；CK為對照。

RRI，即Relativeresistantindex（二）、主要作法－－5.統(tǒng)計方法和抗性分級標(biāo)準(zhǔn)

（3）計算相對抗性指數(shù)（RRI）式中：m為供試材料；CK為對（4）抗性分級標(biāo)準(zhǔn)：RRI≤-1.2≤-0.7<0≥0>0.9>2.0抗性分?jǐn)?shù)高抗中抗低抗低感中感高感代號HRMRLRLSMSHS（二）、主要作法－－5.統(tǒng)計方法和抗性分級標(biāo)準(zhǔn)

（4）抗性分級標(biāo)準(zhǔn)：RRI≤-1.2≤-0.7<0≥0>01、供試苗的種植、菌絲的培養(yǎng)和接種后管理中應(yīng)如何掌握好溫濕度條件？2、供試品種抗性屬于哪個等級？3、你認(rèn)為這種接種鑒定方法有何優(yōu)缺點？四、作業(yè)四、作業(yè)

學(xué)習(xí)和初步掌握油菜苗期菌核病抗性鑒定技術(shù)方法。一、目的學(xué)習(xí)和初步掌握油菜苗期菌核病抗性鑒實驗室苗期菌絲接種鑒定法方法簡單易行，鑒定周期短，不受自然環(huán)境影響，適于對大量材料的篩選。另據(jù)初步研究，苗期菌絲接種鑒定表現(xiàn)抗菌材料，在花期仍表現(xiàn)抗病。在本實驗中只學(xué)習(xí)和掌握苗期菌絲塊接種鑒定法。二、內(nèi)容說明實驗室苗期菌絲接種鑒定法方法簡單（一）用品油菜不同品種種子（包括抗病品種如中油821，感病品種如84039的種子）、生長室、平底塑料盤（60×30×4cm）、園土、綠高一號液（北京北農(nóng)綠高科技發(fā)展有限公司出產(chǎn)）、馬鈴薯、紗布、葡萄糖、瓊脂膠、試管、三角瓶、解剖刀、接種環(huán)等。三、所需用品和操作方法

（一）用品三、所需用品和操作方法（1）土壤準(zhǔn)備：取較肥沃的菜園土，清除石塊，曬干敲碎，然后裝入塑料盤中（需裝滿）。（二）、主要作法－－1.供試苗的種植（1）土壤準(zhǔn)備：取較肥沃的菜園土，清除石塊，曬干敲碎，然后裝（2）油菜播種：保證出苗后能保留生長一致苗30株。每10個品種設(shè)對照。（二）、主要作法－－1.供試苗的種植（2）油菜播種：保證出苗后能保留生長一致苗30株。每10個品（3）土壤消毒：播種后用2000—3000倍的綠亨一號溶液澆透土壤進(jìn)行消毒。（二）、主要作法－－1.供試苗的種植（3）土壤消毒：播種后用2000—3000倍的綠亨一號溶液澆（4）播后管理：播后將塑料盤放于生長室內(nèi)，在出苗期間，室內(nèi)溫度控制在20℃以下，在出真葉后，控制20—24℃左右，每2天噴水一次。（二）、主要作法－－1.供試苗的種植（4）播后管理：（二）、主要作法－－1.供試苗的種植生長室生生長室外管理生長室外管理（1）PDA培養(yǎng)基的制作：取馬鈴薯200g，洗凈去皮切碎，加水1000mL，煮沸30min，用紗布過濾，將濾液加水補(bǔ)足到1000mL，加葡萄糖10—20g和瓊脂膠17—20g，加熱溶化，用紗布過濾。然后依需要，分別裝入試管（用作貯藏菌種），或裝入培養(yǎng)皿（用作培養(yǎng)菌絲接種菌），然后在高壓滅菌鍋內(nèi)進(jìn)行滅菌。（二）、主要作法－－2.菌絲的培養(yǎng)（1）PDA培養(yǎng)基的制作：（二）、主要作法－－2.菌絲的培養(yǎng)（2）菌絲的培養(yǎng)：取貯存平板菌核病的菌絲，在無菌條件下移下裝有PDA培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿上，每皿一小塊，放在培養(yǎng)皿中間，在22—25℃下培養(yǎng)3—4天，以菌絲長滿，而又沒有結(jié)核為宜。（二）、主要作法－－2.菌絲的培養(yǎng)（2）菌絲的培養(yǎng)：（二）、主要作法－－2.菌絲的培養(yǎng)（1）接種：待油菜苗3—5片真葉時，將菌絲平板以無菌解剖刀切成0.5×0.5cm小塊，將有菌絲的一面貼于葉片上（注意不要貼在葉脈上），每株接種1片葉，每葉接種1小塊。

見下圖

（二）、主要作法－－3.菌絲塊的接種與管理（1）接種：（二）、主要作法－－3.菌絲塊的接種與管理油菜苗期菌核病抗性鑒定課件（2）管理：接種后在23—26℃溫度和85%—95%相對濕度下培養(yǎng)5—7天后即可調(diào)查（注意接種后前2天相對濕度應(yīng)保持95%以上，以確保發(fā)病，后3—5天保持85%左右，使接種菌不致于腐爛）。（二）、主要作法－－3.菌絲塊的接種與管理（2）管理：接種后在23—26℃溫度和85%—95%相對濕度油菜苗期菌核病抗性鑒定課件油菜苗期菌核病抗性鑒定課件油菜苗期菌核病抗性鑒定課件油菜苗期菌核病抗性鑒定課件油菜苗期菌核病抗性鑒定課件

在試驗中當(dāng)感病品種的發(fā)病率超過40%以上方為有效鑒定。一般將病害等級分為5個等級，即：0級：無病。1級：病斑面積占接種葉面積10%以下。2級：病斑面積占接種葉面積10—30%。3級：病斑面積占接種葉面積30—50%。4級：病斑面積占接種葉面積50%以上。（二）、主要作法－－4.病害等級調(diào)查在試驗中當(dāng)感病品種的發(fā)病率超過40%以上（1）計算發(fā)病率（二）、主要作法－－5.統(tǒng)計方法和抗性分級標(biāo)準(zhǔn)

（1）計算發(fā)病率（二）、主要作法－－5.統(tǒng)計方法和抗性分（2）計算病情指數(shù)式中：Gi為病害級別；Ni為調(diào)查株數(shù)；i為0、1、2…k,GK為最高級別。（二）、主要作法－－5.統(tǒng)計方法和抗性分級標(biāo)準(zhǔn)

（2）計算病情指數(shù)式中：Gi為病害級別；Ni為調(diào)查株數(shù)；（二（3）計算相對抗性指數(shù)（RRI）式中：m為供試材料；CK為對照。

RRI，即Relativeresistantindex（二）、主要作法－－5.統(tǒng)計方法和抗性分級標(biāo)準(zhǔn)

（3）計算相對抗性指數(shù)（RRI）式中：m為