【基本要求】

1．了解生化藥物和基因工程藥物定義、種類和特點。2．熟悉該類藥物的質(zhì)量檢驗的基本程序與方法。3．掌握常用的定量分析方法中的色譜分析法。返回化學藥物Chemicaldrugs生物藥物Biopharmaceuticals中藥TraditionalChineseMedicineTCM第一節(jié)：概述生物藥物：是指利用生物體、生物組織或器官等，綜合運用生物學、生物化學、免疫學和藥學等原理與方法制得的一類藥物。生化藥物Biochemicaldrugs生物合成藥物Biosyntheticdrugs生物制品Biologicalproducts生化藥物：生化藥物是指從動物、植物及微生物中提取的,或采用生物化學合成和現(xiàn)代生物技術制得的生命基本物質(zhì)及其衍生物、降解產(chǎn)物以及大分子的結構修飾物等，如氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)等。生物合成藥物：利用現(xiàn)代生物技術研制的一類藥物，包括基因工程藥物?；蚬こ趟幬铮涸诖_定對某種疾病具有預防和治療作用的蛋白質(zhì)，進而控制該蛋白質(zhì)合成過程的基因進行分離、純化或人工合成，利用重組DNA技術加以改造，最后將該基因導入可以大量生產(chǎn)的受體細胞中，在受體中不斷繁殖和表達，進而生產(chǎn)大規(guī)模具有復方和治療疾病的蛋白質(zhì)。生物制品：是應用普通的生物技術獲得的微生物、細胞及組織等生物材料制備用于人類疾病預防、治療和診斷的藥品。生化藥物和基因工程藥物的分類生化藥物氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)酶和輔酶類多糖類脂質(zhì)類藥物核酸及其降解產(chǎn)物基因工程藥物激素和神經(jīng)遞質(zhì)類胰島素、生長激素細胞因子類人干擾素、人白細胞素、促紅細胞生成素酶及凝血因子類單克隆抗體、基因藥物、反義核酸生物制品的種類和特點1、疫苗類藥物：細菌疫苗、病毒疫苗、聯(lián)合疫苗、多價疫苗2、抗毒素及抗血清類藥物：被動免疫制劑3、血液制品4、重組DNA制品：細胞因子、生長因子、酶、抗體5、診斷制品6、其他制品生化藥物和基因工程藥物的特點◆◆都是來自生物體或通過生物手段獲得◆分子量都較大幾十KD～幾千KD，不是固定值化學結構式難以確認，單單是光譜分析方法難以進行◆在生產(chǎn)過程中需要全面的質(zhì)量控制在生產(chǎn)過程中要求進行生物活性檢查往往需要進行安全性檢查熱源、過敏、異常毒性、致突變、生殖毒性往往需要進行效價（含量）測定◆◆◆生化藥物和基因工程藥物質(zhì)量檢驗的基本程序于方法鑒別試驗雜質(zhì)檢查安全性檢查效價測定鑒別試驗理化鑒別試驗

化學反應法光譜鑒別法－UV

色譜鑒別法－HPLC生物化學鑒別法

酶法電泳法等電點聚焦法生物鑒別法對比吸收光譜和特征吸收的一致性對比色譜保留行為的一致性第二節(jié)：鑒別實驗鏈激酶理化鑒別▲高效液相色譜法：1、反相高效液相色譜法2、分子排阻色譜法毛細管電泳1、毛細管區(qū)帶電泳CZE▲生化鑒別雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)檢查安全性檢查第三節(jié)：雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)檢查1、宿主細胞蛋白殘留量的檢查目的：控制異源蛋白的含量以防超量后引起機體免疫反應測定法：酶聯(lián)免疫吸附劑測定法－ELISA2、外源性DNA殘留量的檢查目的：防止外源性DNA對人類的危害測定法：分子雜交技術、基于DNA結合蛋白分析系統(tǒng)、實時定量PCR技術3、產(chǎn)品相關雜質(zhì)的檢查－同系物、異構體、降解產(chǎn)物等測定法：HPLC和CE4、殘余抗生素的檢查目的：控制生物制品制備時抗生素的用量測定法：抑菌試驗安全性檢查常規(guī)熱源和細菌內(nèi)毒素的檢查異常毒性試驗過敏試驗降壓物質(zhì)試驗無菌試驗一些特殊污染物的檢查致突變試驗生殖毒性試驗異常毒性試驗：是用一定劑量的藥物按照指定的操作方法和途徑給予規(guī)定體重的某試驗動物，觀察其極性毒性反應。小鼠、LD50過敏試驗：是對生化藥物和基因工程藥物中的異性蛋白進行進檢查。豚鼠、皮膚過敏和腹腔注射降壓物質(zhì)檢查：檢查藥物中能夠導致血壓降低的物質(zhì)，如組胺類。貓或狗無菌檢查：對于不能進行高溫滅菌的生物藥品，必須進行無菌檢查。一些特殊污染物的檢查：主要考慮外源性DNA、一些雜蛋白等。致突變試驗：回復突變試驗、染色體畸變試驗等生殖毒性試驗含量測定HPLCSDSUVorFlueserence效價測定第四節(jié)：含量（效價）測定常用的定量分析方法及應用理化分析法生化分析法生物檢定法理化分析法化學分析方法電化學分析法光譜分析法色譜分析法重量法容量分析法重量法：根據(jù)樣品中分離出來的單體或化合物的重量測定所含成分的含量的方法。提取法：用適宜的溶劑提取樣品中的某成分后揮去溶劑進行測定的方法。揮發(fā)法：利用被測組分的揮發(fā)性，或經(jīng)過衍生化后將其轉化成揮發(fā)性物質(zhì)來進行測定的方法。沉淀法：將被測組分轉化成沉淀，稱定沉淀的重量來計算含量的方法。比色法

利用樣品與顯色劑發(fā)生現(xiàn)色反應，根據(jù)反應產(chǎn)物的顏色強度來測定含量。Elson-Morgan

硫酸軟骨素的比色法測定：在酸性條件下使樣品水解成氨基己糖，再在堿性條件下與乙酰丙酮和二甲氨基苯甲醛反應生成紅色的產(chǎn)物，該產(chǎn)物在525nm處有最大吸收。光譜分析方法具體試驗操作：1、制備對照品溶液－氨基葡萄糖2、制備供試品溶液－硫酸軟骨素3、反應和測定－縮合反應和比色測定A平為供試品溶液的吸收度As平為對照品溶液的吸收度Ws為對照品溶液的濃度（mg/ml）W為稱樣量（mg）0.8309為校正因子500為稀釋倍數(shù)以氨基葡萄糖計≥24.0％高效液相色譜法反相高效液相色譜法RP-HPLCReversed-phasehigh-performanceliquidchromatography高效離子交換色譜法HPIECHigh-performanceIon-exchangechromatography高效凝膠過濾色譜法HPGFCHigh-performanceGel-filterchromatography反相高效液相色譜法

基本原理：利用ODS或C18等極性較小的鍵合硅膠為填料，以極性較大的methanol-water、CH3CN-H2O為流動相，根據(jù)樣品在固定相和流動相中的不同保留行為而實現(xiàn)高效分離的一種方法。

可以應用UV、DAD、FD、ELSD、ECD、MS等作為檢測器，分離化合物范圍廣泛。用HPLC法和氨基酸分析儀測定多維氨基酸片中18種氨基酸

高效離子交換色譜法：主要用于蛋白質(zhì)、多肽和氨基酸等的分離分析，它是根據(jù)相應的離子化程度對樣品進行分離的，常用鹽濃度逐漸增大的方式進行梯度洗脫的。2～10mmol/l的離子對試劑高效凝膠過濾色譜法

根據(jù)生物藥物的分子量及其極性來對成分進行分離測定，主要用于生化藥物的分離和分子量的測定研究。分離產(chǎn)物可以回收、可以用少量表面活性劑來改善分離效果、可根據(jù)化合物的形狀和分子量大小來預測出峰順序。具有簡便、快速、重現(xiàn)性好、樣品用量少等優(yōu)點。電泳

electrophoresis是指溶液中帶電粒子在電場作用下發(fā)生遷移的電動現(xiàn)象。毛細管電泳

capillaryelectrophoresis是利用被分析離子在電場作用下移動的速率不同而達到分離的目的，這種技