關(guān)于離子交換色譜展示第1頁(yè)，共21頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)46分，星期五基本原理：離子交換色譜（ionexchangechromatography，IEC）

以離子交換樹(shù)脂作為固定相，樹(shù)脂上具有固定離子基團(tuán)及可交換的離子基團(tuán)。當(dāng)流動(dòng)相帶著組分電離生成的離子通過(guò)固定相時(shí)，組分離子與樹(shù)脂上可交換的離子基團(tuán)進(jìn)行可逆變換。根據(jù)組分離子對(duì)樹(shù)脂親合力不同而得到分離。第2頁(yè)，共21頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)46分，星期五主要用于分離離子或可離解的化合物，包括氨基酸，多肽，核酸，核苷等各種生物大分子。離子交換色譜的運(yùn)用：第3頁(yè)，共21頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)46分，星期五分離純化生物大分子Po+ZDo=Pb+ZDb重視Po:流動(dòng)相中溶質(zhì)的濃度；Pb:填料表面上被吸附的溶質(zhì)濃度;Do:流動(dòng)相中洗脫劑的濃度；Db:填料表面上洗脫劑的濃度；Z:蛋白質(zhì)在吸附過(guò)程中從填料表面上被置換的洗脫劑的數(shù)目；第4頁(yè)，共21頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)46分，星期五以離子交換色譜快速純化8一淀粉酶為例研究探討離子交換色譜第5頁(yè)，共21頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)46分，星期五

本研究利用合成的強(qiáng)陰離子交換柱很好地分離了a-淀粉酶粗品,其活性回收率高達(dá)96%,比活性達(dá)388ug/mg蛋白質(zhì)純度提高30倍。此法的研究成功為大規(guī)模制備高純度a-淀粉酶提供了一個(gè)新工藝路線(xiàn)。

高純度的8一淀粉酶可作為酶試劑,研究生物作用的特性、酶反應(yīng)機(jī)理,測(cè)定生化反應(yīng)的平衡常數(shù)。1.0摘要：第6頁(yè)，共21頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)46分，星期五2.0實(shí)驗(yàn)部分

2.1標(biāo)準(zhǔn)酶液配制

用微量天平準(zhǔn)確稱(chēng)取5mg高純度的a-淀粉酶試劑,于小離心試管中,準(zhǔn)確加1.0ml水,溶解后,在1300r/min的高速離心機(jī)上離心5min,小心轉(zhuǎn)移上部清液于另一離心試管中,此液相當(dāng)于1062u/ml活力.第7頁(yè)，共21頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)46分，星期五第8頁(yè)，共21頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)46分，星期五第9頁(yè)，共21頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)46分，星期五第10頁(yè)，共21頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)46分，星期五3.0結(jié)果與討論

3.1洗脫劑為獲得高的洗脫效率,本實(shí)驗(yàn)選用0.02mol/LTris-2mol/LNacl(PH6.0)體系作為洗脫劑.（Tris-指三羥甲基氨基甲烷）第11頁(yè)，共21頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)46分，星期五第12頁(yè)，共21頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)46分，星期五第13頁(yè)，共21頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)46分，星期五由圖2可知,在2.0mol/L以下,隨鹽濃度的增加,洗脫能力增大,活性回收率提高。洗脫液中離子強(qiáng)度對(duì)洗脫效率的影響可歸結(jié)為離子交換平衡的移動(dòng),這種色譜行為表明該固定相具有典型的陰離子交換特性,符合離子交換色譜的洗脫規(guī)律。但在2.0mol/L以上,隨鹽濃度增加洗脫能力下降。這種反?，F(xiàn)象,可能是由于離子交換柱的多功能特性引起。第14頁(yè)，共21頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)46分，星期五實(shí)驗(yàn)證明,離子交換柱不僅有離子交換的作用,而且還表現(xiàn)一定的疏水作用的。并且這種疏水作用,隨溶液離子強(qiáng)度發(fā)生變化。當(dāng)洗脫劑濃度大于2.0mol/L時(shí),由于溶液的表面張力過(guò)大,離子交換劑的疏水作用變得明顯,對(duì)蛋白質(zhì)疏水締合作用增強(qiáng),故被吸附的蛋白質(zhì)難以洗脫,因而活性回收率下降。所以選擇抓Nacl濃度為2.0mol/L.第15頁(yè)，共21頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)46分，星期五3.3PH對(duì)活性回收率的影響第16頁(yè)，共21頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)46分，星期五第17頁(yè)，共21頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)46分，星期五第18頁(yè)，共21頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)46分，星期五第19頁(yè)，共21頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)46分，星期五總結(jié)凡在溶液中能夠電離的物質(zhì)通常都可以用離子交換色譜法進(jìn)行分離。它不僅適用于無(wú)機(jī)離子混合物的分離，亦可用于有機(jī)物的分離，例如氨基酸、蛋白質(zhì)等生物大分子，因此應(yīng)用