1、ICS 65.020.01B 05DB13河北省地方標準DB13/T 14712011黃瓜耐鹽性鑒定技術規(guī)程Rules for identifying salt tolerance of cucumber lines2011 - 11 - 15 發(fā)布2011 - 11 - 30 實施河北省質(zhì)量技術監(jiān)督局發(fā) 布DB13/T 14712011I前言本標準依據(jù) GB/T 1.12009 的規(guī)定編寫。本標準由滄州市質(zhì)量技術監(jiān)督局提出。本標準起草單位：天津市農(nóng)業(yè)生物技術研究中心、滄州市農(nóng)林科學院。本標準主要起草人：張越、劉仲齊、閻旭東。 PAGE 2黃瓜耐鹽性鑒定技術規(guī)程范圍本標準規(guī)定了利用葉表皮細胞進

2、行黃瓜耐鹽性鑒定的方法及評價指標。本標準適用于黃瓜品種資源和育種材料的耐鹽性鑒定及評價。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB 4404.1糧食作物種子第 1 部分：禾谷類術語和定義下列術語和定義適用于本標準。3.1葉片表皮細胞死亡率指從黃瓜葉片上剝離下來的表皮細胞，浸泡在一定濃度的 NaCl 溶液中脅迫一段時間后，表皮細胞死亡的數(shù)量占觀察細胞總數(shù)的比率。耐鹽性鑒定原理用葉表皮細胞的死亡率能快速鑒定黃瓜耐鹽潛力。黃瓜的葉表皮細胞在高鹽環(huán)境中，發(fā)生質(zhì)壁分離，

3、最后導致細胞質(zhì)膜的破裂。耐鹽能力不同的細胞，在鹽脅迫環(huán)境中發(fā)生質(zhì)膜破裂的程度不同。以染料中性紅為指示劑，對黃瓜的葉表皮細胞進行染色，質(zhì)膜沒有破裂的活細胞，其液泡內(nèi)的微酸性環(huán)境使中性紅變成櫻桃紅色。質(zhì)膜破裂的死細胞不著色。根據(jù)著色細胞的多少可以區(qū)分耐鹽能力不同的黃瓜品種。耐鹽性鑒定方法鑒定準備培養(yǎng)器皿的選擇選擇 72 孔的育苗盤進行育苗，穴孔直徑 2.5 cm、深度 3 cm。種子選擇選取籽粒飽滿、整齊一致的種子，種子的品質(zhì)應符合 GB 4404.1 標準要求。培養(yǎng)基質(zhì)的準備選擇粒徑為 1 mm 的蛭石和優(yōu)質(zhì)草炭作為培養(yǎng)基質(zhì)，蛭石和草炭在試驗前 100高溫滅菌 2 h。鹽溶液的配置將 175.5

4、 g 分析純 NaCl 溶解在 1 000 ml 去離子水中，配制成 3.0 molL-1 NaCl 溶液。染色劑的配置將 0.3 g 中性紅溶解在 1000 ml 去離子水中，配制成 0.03的中性紅（3-氨基-6 甲氨基-2-甲基吩嗪鹽酸鹽，分子式 C15H16N4HCl）溶液。鑒定步驟種子的催芽將準備好的種子置于培養(yǎng)箱內(nèi)催芽，溫度 251，催芽時間 16 h24 h。播種待種子發(fā)芽后播于裝有蛭石：草炭（1:1）的育苗盤中育苗。培養(yǎng)培養(yǎng)溫度為晝溫 251、夜溫 181，培養(yǎng)濕度為 60。鹽脅迫及染色處理當黃瓜幼苗長出 2 片真葉時，選取黃瓜幼苗的第一片真葉，剝離葉片下表皮，放在 0.03中性紅溶液中染色 10 min，置于濃度為 3.0 molL-1 的 NaCl 溶液中處理 10 min。耐鹽性評價葉片表皮細胞死亡率的計算把染色后的葉表皮放在 1010 倍的光學顯微鏡下觀察，用 C5 型 0.5 網(wǎng)形目鏡尺在（55）mm2 范圍內(nèi)統(tǒng)計活細胞數(shù)量和細胞總數(shù)。葉片表皮細胞死亡率的計算公式如下：細胞死亡率（）=（單位面積細胞總數(shù)-單位面積活細胞數(shù)）/單位面積細胞總數(shù)100耐鹽性評價根據(jù)單位面積葉片