1、不同溶劑竹葉提取物的抗氧化活性研究摘要：依次采用石油醚、氯仿、乙醇和水作為提取溶劑，竹葉提取物分別從對OH和O2-的清除率和還原力比較研究其抗氧化活性。結(jié)果表明:不同溶劑竹葉提取物對OH和O2-具有一定的清除能力, 且隨濃度的增大而抗氧化性增強；隨著不同溶劑竹葉提取物濃度的增大，其還原力顯著增強。該研究為竹葉提取物在食品和醫(yī)藥行業(yè)的應(yīng)用提供了科學依據(jù)。關(guān)鍵詞：竹葉 提取物 抗氧化活性 Study on the Antioxidant Activity of Different Solvent Extracts of Bamboo LeavesAbstract: Bamboo leaves we

2、re sequentially extracted with petroleum, chloroform, methanol and water, and the antioxidant abilities of the extracts of different solvent from bamboo leaves finally the scavenging effect on superoxide anion and hydroxyl radical and reducing power were determined. Result showed that the scavenging

3、 rate of bamboo leaves extracts to superoxide anion radical and hydroxyl radical assumed rise trend with the increase of extracts concentration. This study provided scientific basis for the application of cassia seed extracts in the line of food and medicineKey Words: Bamboo Leaves Extract Antioxida

4、nt activity 【引言】目前，抗氧化劑已廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)、醫(yī)藥行業(yè)、和化妝品行業(yè)。許多現(xiàn)代文明病與人體缺乏抗氧化營養(yǎng)物質(zhì)有關(guān)，而補充抗氧化營養(yǎng)物質(zhì)則有助于對這些疾病的預防治療，因此尋找天然、安全、有效的抗氧化劑資源就顯得尤為重要。自由基是一類外層軌道上具有不配對價電子的原子、原子團或分子。自由基在體內(nèi)積聚會引起生物大分子如脂質(zhì)、蛋白和核酸的氧化損傷，導致多種疾病的發(fā)生。由于化學合成的抗氧化劑如BHA、BHT和PG等由于安全性原因, 應(yīng)用范圍受到限制，因此從自然界中尋找天然的抗氧化物質(zhì)非常重要。中國素有“竹子王國”之稱，種類，面積和竹材產(chǎn)量均占世界的三分之一左右，但相對于竹木和竹筍的利

5、用來說，竹葉作為剩余產(chǎn)物往往被拋棄造成了極大的資源浪費，大量研究表明竹葉中含有黃酮類 1，酚酸類，蒽醌類化合物，具有顯著的抗自由基、抗氧化、抗菌、抗病毒等生理活性2-5 ，最早由李慧珍等發(fā)現(xiàn)竹葉具有優(yōu)良的防腐性能，能加入食品作為天然的保鮮劑、防腐劑，穩(wěn)定性好，毒性小。楊英、楊衛(wèi)東和倪向梅研究了竹葉黃酮提取物的抑菌活性，發(fā)現(xiàn)竹葉黃酮提取物水解產(chǎn)物的抑菌和殺菌效果較好6-8。倪向梅、曹光群等人研究竹葉提取物的抗氧化性活性，發(fā)現(xiàn)三氯甲烷和乙酸乙酯部分萃取物的抗氧化性明顯優(yōu)于水提物8。羅宇倩等發(fā)現(xiàn)竹葉黃酮清除超氧負離子自由基和DPPH自由基的能力比茶多酚強；竹葉黃酮在清除羥自由基效果與茶多酚相當，比V

6、c效果好。竹葉黃酮對DPPH自由基、超氧負離子自由基和對羥自由基的有效清除作用表明其具有較好的抗氧化功能，可作為一種新的食品天然抗氧化劑9。袁珂, 薛月芹等采用回流提取、超聲波提取、滲漉提取、冷浸提取、微波提取和索氏提取6種不同的方法進行提取,并對提取物的收率進行比較，結(jié)果表明,不同提取方法所得的提取物中總黃酮的收率大小次序為:超聲波法微波法回流法滲漉法索氏法冷浸法10。對于竹葉提取物抗氧化的研究較多，但對不同溶劑竹葉抗氧化性的比較研究卻鮮有報道。本試驗通過竹葉不同溶劑提取物對OH和O2-的清除作用以及還原能力的比較, 研究提取物的抗氧化活性。該研究為竹葉進一步應(yīng)用開發(fā)和天然抗氧化物質(zhì)的利用提

7、供依據(jù)。1 實驗 1.1 儀器與材料1.1.1 儀器721分光光度計（上海精密科學儀器有限公司）；FA2004N電子天平（上海精密科學儀器有限公司）；RE5299旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；DHG-9076A型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設(shè)備有限公司）；KQ500DE超聲清洗器（江蘇省昆山市淀山湖鎮(zhèn)）；SHB-IV雙循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）1.1.2 材料水楊酸（天津試劑六廠）；30%過氧化氫（洛陽昊華化學試劑有限公司）；三氯乙酸（天津市凱通化學試劑有限公司）；鐵氰化鉀（天津市凱通化學試劑有限公司）；鄰苯三酚（天津市凱通化學試劑有限公司）；濃鹽酸（西安三浦精細化工

8、廠）；無水乙醇（天津市河東區(qū)紅巖試劑廠）；七水合硫酸亞鐵；竹葉（采于天水師范學院校園內(nèi)干燥后備用）；石油醚(西安三浦精細化工廠)； 三羥甲基氨基甲烷(Tris，上?；瘜W試劑采購供應(yīng)站)；其余試劑均為分析純，實驗用水為蒸餾水。1.2抗氧化實驗1.2.1 不同溶劑竹葉提取物的提取稱取四份5g（干基）竹葉粉，分別加入100mL的石油醚，氯仿、乙醇和蒸餾水，在30超聲強度90%下超聲萃取30min后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至浸膏狀，用無水乙醇定容止10mL, 4下保存待用。1.2.2 總黃酮含量的測定分別取四種提取物樣品溶液各0.02mL，各加入5%的亞硝酸鈉溶液0.15mL，搖勻，放置6min后再加入1

9、0%的硝酸鋁溶液各0.15mL，搖勻，放置6min，再加入1mol/L的氫氧化鈉溶液2mL，用95%乙醇稀釋至刻度5mL, 搖勻，放置15min，在510nm處測定吸光度11。1.2.3 對羥基自由基的清除清除羥基自由基的能力是體外常用的評估抗氧化方法之一。本實驗采用了水楊酸捕獲法，利用Fenton體系產(chǎn)生羥自由基，加入水楊酸來捕獲，能在510nm產(chǎn)生強吸收的有色物質(zhì)，通過測定其吸光度來判定。取2mmol/L的硫酸亞鐵溶液1mL，6mmol/L過氧化氫1mL，水楊酸1mL，加入樣品1mL，靜置30min，以蒸餾水為參比，在510nm處測定吸光度，計算羥自由基的清除率E。E(%)=(A0-AX+

10、Ay)/A0100%式中：A0為以溶劑代替藥液的試劑空白管的吸光度；AX為加了藥液的吸光度；Ay為不加顯色劑藥液本底光密度，是為了減去藥液本身顏色對于實驗的影響。1.2.4對超氧自由基的清除取0.05mol/L pH= 8.2 的Tris-HCl緩沖液4.6mL置于試管中，于25水浴加熱20min加不同濃度供樣品試液1.0mL，10mmol/L鄰苯三酚0.4mL，混勻，于25水浴4min，加8mmol/L HCl 0.1mL終止反應(yīng)，以pH=8.2的Tris-HCl緩沖液調(diào)零，在325nm處測定吸光度AX，模型對照組(A0)用溶劑代替供試液?？紤]試液本身的吸光度值，用溶劑代替鄰苯三酚溶液作為樣

11、品對照組(AX0)。每個濃度組平行測定3次，求其平均值。測定結(jié)果以清除率(E)表示，計算公式如下：E(%)=A0-(AX- AX0)/ A0100%1.2.5還原能力的測定 還原能力的強弱，可以反映試液的潛在抗氧化性能，是抗氧化的一個重要指標。本實驗用的是鐵氰化鉀法，取2mL的樣品，加入2mL的磷酸緩沖液（pH為6.6）和1%的鐵氰化鉀溶液2ml, 振蕩混合后取的混合液, 加入去離子水和0.1%的三氯化鐵溶液, 靜置10min, 用去離子水為空白, 在700nm下進行比色, 吸光度的值越大, 說明還原能力強。2 結(jié)果與討論2.1不同溶劑提取所得提取物量及提取率的比較不同溶劑提取所得提取物量及提

12、取率的比較如圖1所示，石油醚，氯仿，乙醇和水提取物量有所不同，其中氯仿水乙醇石油醚。圖1不同溶劑提取所得提取物量及提取率的比較Table 1 Comparison of mass and yields of extracts obtainedwith different solvents提取溶劑提取物質(zhì)量/g提取率/%石油醚0.075680.01512氯仿0.74240.1485乙醇0.3080.06157水0.68290.13652.2不同溶劑提取物中總黃酮提取率的比較根據(jù)參考文獻11, 吸光度和黃酮含量關(guān)系滿足：Y=3.9768X-0.0003 (Y為吸光度，X為黃酮含量), 由實驗測得不

13、同溶劑竹葉提取物的總黃酮含量如表2可知，不同溶劑提取物中總黃酮的總含量不同，在濃度一定時，其中提取量水石油醚乙醇氯仿。黃酮的提取量與其在510nm處的吸光度有關(guān)，吸光度越大，總黃酮含量越大。不同溶劑提取物的紫外吸收光譜如圖1所示。表2不同溶劑提取物中總黃酮提取率的比較Table 2 Comparison of flavonoids yields obtained with different solvents提取溶劑總黃酮含量/g總黃酮提取率/%石油醚0.0740.01479氯仿0.0022190.0004439乙醇0.002710.0005417水0.4900.09796 圖1 不同溶劑竹葉

14、提取物的紫外光譜(1)乙醇 (2)水 (3)氯仿 (4)石油醚Fig.1 UV spectrum of extracts of bamboo leaves obtained with different solvents 2.3不同溶劑竹葉提取物對羥基自由基的清除從圖2可以看出竹葉提取物對OH具有一定的清除能力，不同濃度使其吸光度不同，且隨著竹葉提取物濃度的依次增大，其對OH的清除能力依次增強。當濃度相同時清除能力氯仿乙醇石油醚水。氯仿的清除能力最強，當氯仿的濃度達到37mg/ml時對OH的清除率達到30%。且隨著濃度的變化，其清除能力的變化也明顯，水的清除能力受濃度的影響較小，石油醚受濃度的

15、影響最大。圖2 不同溶劑竹葉提取物對羥基自由基的清除Fig.2 The scavenging effect of OH of different solvents extracts of bamboo leaves 2.4不同溶劑竹葉提取物對超氧負自由基的清除從圖3可以看出竹葉提取物對O2-具有一定的清除能力，隨著竹葉提取物濃度的依次增大，其對O2-的清除能力呈增大的趨勢。當濃度相等時，清除能力氯仿乙醇石油醚水。當竹葉提取物濃度增大到37mg/mL時，對O2-的清除率為92.9%。四種提取物都受濃度的影響較小，濃度增大時，其吸光度幾乎呈平穩(wěn)狀態(tài)。圖3不同溶劑提取物對超氧負自由基的清除Fig.3

16、 The scavenging effect of O2- of extracts obtained with different solvents2.5不同溶劑提取物的還原能力還原能力的強弱，可以反映藥物潛在的抗氧化性能，吸光度是重要指標，在此方法中吸光度的值越大，則其還原能力越強，由圖4可知，隨著竹葉提取物濃度的增大，其還原力顯著增強。當濃度相同時，其還原能力為氯仿乙醇石油醚水，其中石油醚的吸光度受濃度的影響最大，其次為氯仿，乙醇和水。圖4不同溶劑提取物的還原能力Fig.4 The effective reducing power of extracts obtained with dif

17、ferent solvents3 結(jié)論3.1 竹葉提取物當中含有一定量的黃酮，其中蒸餾水對黃酮的提取率最高；3.2 不同溶劑竹葉提取物能夠有效清除OH和O2-, 并具有一定的還原能力，表明竹葉提取物具有一定的抗氧化和清除自由基的功能；【參考文獻】1 周建新.植物源天然食品防腐劑的研究現(xiàn)狀、存在問題及前景J.食品科學,2006,27(1):263-2642 Bahorun T, Luximon-Ramma A, Crozier A, et al. Total phenol, flavonoid, proanthocyanidin and vitamin Clevels and antioxida

18、nt activities of Mauritian vegetablesJ. Journal of the Science of Food and Agriculture, 2004, 84(12):1553-15613 Burns J, Gardner P T, ONeil J, et al. Relationship among antioxidant activity, vasodilation capacity, and phenolic content of red wines J. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2000, 48(2):220-2304 Engler M B, Engler M M. The emerging role of flavonoidrich