1、生物化學(xué)實(shí)用技術(shù)主講老師：劉名江生物與生態(tài)工程學(xué)院（一）生物大分子的制備和保存技術(shù) 蛋白質(zhì)、核酸的分離和提純 研究生物大分子，首先要得到高度純化并具有生物活性研究生物大分子，首先要得到高度純化并具有生物活性的的目的物質(zhì)目的物質(zhì)。 基本原理不外乎兩方面：基本原理不外乎兩方面：n 一是利用混合物中幾個(gè)一是利用混合物中幾個(gè)組分分配率組分分配率的差別，把它們分配到的差別，把它們分配到可用機(jī)械方法分離的兩個(gè)或幾個(gè)物相中，如可用機(jī)械方法分離的兩個(gè)或幾個(gè)物相中，如鹽析、有機(jī)溶劑鹽析、有機(jī)溶劑提取、提取、層析層析和結(jié)晶等；和結(jié)晶等；n二是將混合物置于二是將混合物置于單一物相單一物相中，通過(guò)物理力場(chǎng)的作用使各組

2、中，通過(guò)物理力場(chǎng)的作用使各組分分配于不同區(qū)域而達(dá)到分離的目的分分配于不同區(qū)域而達(dá)到分離的目的 ，如，如電泳電泳、超速離心超速離心、超濾等。、超濾等。n 而在所有這些方法的應(yīng)用中必須注意保存生物而在所有這些方法的應(yīng)用中必須注意保存生物大分子的大分子的完整性完整性，防止，防止酸、堿、高溫酸、堿、高溫及及劇烈機(jī)械作劇烈機(jī)械作用用而導(dǎo)致所提物質(zhì)而導(dǎo)致所提物質(zhì)生物活性的喪失。生物活性的喪失。 生物大分子的制備一般分為以下四個(gè)階段：生物大分子的制備一般分為以下四個(gè)階段： 選擇選擇材料和預(yù)處理材料和預(yù)處理； 細(xì)胞的細(xì)胞的破碎及細(xì)胞器的分離破碎及細(xì)胞器的分離； 提取和純化提取和純化； 濃縮濃縮干燥和保存干燥和

3、保存( (冷凍干燥冷凍干燥) )。（二）色譜分離技術(shù)n色譜分離技術(shù)，又稱層析分離技術(shù)或色層分離技術(shù)，是一種分離復(fù)雜混合物中各個(gè)組分的有效方法。它是利用混合物中各組分的理化性質(zhì)（溶解度、吸附力、分子極性、分子形狀和大小等）的不同，使各組分以不同程度在兩個(gè)相中，其中一個(gè)相是固定的。不同物質(zhì)在由固定相和流動(dòng)相構(gòu)成的體系中具有不同的分配系數(shù)，當(dāng)兩相作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，這些物質(zhì)隨流動(dòng)相一起運(yùn)動(dòng)，并在兩相間進(jìn)行反復(fù)多次的分配，從而使各物質(zhì)達(dá)到分離色譜分析法的由來(lái) 1906年，俄國(guó)植物學(xué)家Tsweet將CaCO3固體粉末裝入豎立的玻璃管中，從頂端倒入植物色素的石油醚浸出液，并用石油醚連續(xù)地沖洗。結(jié)果在柱中出現(xiàn)了顏

4、色不同的色帶。因此，Tsweet把這種方法稱為色譜法。n如今，色譜法不僅用于有色物質(zhì)的分離，而且大量用于無(wú)色物質(zhì)的分離。所以色譜法已經(jīng)失去原來(lái)的含義。但是，現(xiàn)在仍沿用色譜法這個(gè)名稱。n色譜法具有分離及分析兩種功能。它是分析混合物最有力的手段。n色譜分離是目前應(yīng)用最廣泛的分離方法。已廣泛地用于石油化工、有機(jī)合成、生理生化、醫(yī)藥衛(wèi)生、環(huán)境監(jiān)測(cè)、刑事偵查、生產(chǎn)在線控制，乃至空間探索等許多領(lǐng)域，以解決各種分離分析課題。工業(yè)色譜分離技術(shù)原理n色譜分離技術(shù)是基于不同物質(zhì)在由固定相和流動(dòng)相構(gòu)成的體系中具有不同的分配系數(shù)，在采用流動(dòng)相洗脫過(guò)程中呈現(xiàn)不同保留時(shí)間，從而實(shí)現(xiàn)分離。傳統(tǒng)色譜分離技術(shù)采用固定的色譜塔進(jìn)

5、行，先進(jìn)入一定量物料，然后采用洗脫劑不斷洗脫，在同一出口在不同時(shí)間段就可接到不同的產(chǎn)品組分，此過(guò)程費(fèi)時(shí)費(fèi)力。經(jīng)過(guò)分析并加以改進(jìn)，我們把固定相的樹(shù)脂做成可以連續(xù)流動(dòng)的系統(tǒng)，利用物質(zhì)與固定相的相對(duì)運(yùn)動(dòng)速度不同實(shí)現(xiàn)分離。類似龜兔賽跑的原理，我們把固定相必成一個(gè)傳送帶，把兔子烏龜分別必成快慢不同的兩組份，只要使固定相加上一個(gè)與洗脫方向相反的驅(qū)動(dòng)力，使傳送帶運(yùn)動(dòng)速度處于兔子和烏龜速度中間，跑的快的兔子比固定相快從前頭得到，跑得慢的烏龜被傳送帶帶到后面得到。凝膠色譜分離技術(shù)原理2、色譜法的特點(diǎn)（1 1）分離效率高：）分離效率高：可在很短的時(shí)間內(nèi)分離多達(dá)二、三百個(gè)組分的復(fù)雜物質(zhì)，柱效能可達(dá)106的理論板。（

6、2 2）檢測(cè)能力強(qiáng)：）檢測(cè)能力強(qiáng)：可以檢測(cè)出10-1110-15克級(jí)的痕量組分，能滿足環(huán)境檢測(cè)、農(nóng)藥殘留等大量日常檢測(cè)分析的需要。（3 3）樣品用量少：）樣品用量少：樣品用量一般為微升級(jí)，少的可達(dá)納克級(jí)。（4 4）適用范圍廣：）適用范圍廣：幾乎所有與化學(xué)有關(guān)的領(lǐng)域都有其用武之地。3、色譜分類氣 固 色 譜氣 相 色 譜氣 液 色 譜液 固 色 譜液 相 色 譜液 液 色 譜超 臨 界 流 體 色 譜毛 細(xì) 管 電 泳流動(dòng)相與固定相流動(dòng)相與固定相聚集態(tài)聚集態(tài)（1）按兩相所處的物態(tài)分類（2）按分離機(jī)理分類利用組分在吸附劑（固定相）上的吸附能力強(qiáng)弱不同而得以分離的方法，稱為吸附色譜法。利用組分在固定

7、液（固定相）中溶解度不同而達(dá)到分離的方法稱為分配色譜法。利用組分在離子交換劑（固定相）上的親和力大小不同而達(dá)到分離的方法，稱為離子交換色譜法。利用大小不同的分子在多孔固定相中的選擇滲透而達(dá)到分離的方法，稱為凝膠色譜法或尺寸排阻色譜法。 最近，又有一種新分離技術(shù)，利用不同組分與固定相（固定化分子）的高專屬性親和力進(jìn)行分離的技術(shù)稱為親和色譜法，常用于蛋白質(zhì)的分離。（3）按固定相的外型分類固定相裝于柱內(nèi)的色譜法，稱為柱色譜。固定相呈平板狀的色譜，稱為平板色譜，它又可分為薄層色譜和紙色譜。（4）按照展開(kāi)程序分類 按照展開(kāi)程序的不同，可將色譜法分為洗脫法、頂替法、和迎頭法。 洗脫法也稱沖洗法。工作時(shí)，首

8、先將樣品加到色譜柱頭上，然后用吸附或溶解能力比試樣組分弱得多的氣體或液體作沖洗劑。由于各組分在固定相上的吸附或溶解能力不同，被沖洗劑帶出的先后次序也不同，從而使組分彼此分離。流出曲線下圖AB 這種方法能使樣品的各組分獲得良好的分離，色譜峰清晰。此外，除去沖洗劑后，可獲得純度較高的物質(zhì)。目前，這種方法是色譜法中最常用的一種方法。頂替法是將樣品加到色譜柱頭后，在惰性流動(dòng)相中加入對(duì)固定相的吸附或溶解能力比所有試樣組分強(qiáng)的物質(zhì)為頂替劑（或直接用頂替劑作流動(dòng)相），通過(guò)色譜柱，將各組分按吸附或溶解能力的強(qiáng)弱順序，依次頂替出固定相。 很明顯，吸附或溶解能力最弱的組分最先流出，最強(qiáng)的最后流出。頂替法的流出曲線

9、如下圖AB 此法適于制備純物質(zhì)或濃縮分離某一組分；其缺點(diǎn)是經(jīng)一次使用后，柱子就被樣品或頂替劑飽和，必須更換柱子或除去被柱子吸附的物質(zhì)后，才能再使用。迎頭法是將試樣混合物連續(xù)通過(guò)色譜柱迎頭法是將試樣混合物連續(xù)通過(guò)色譜柱，吸附或溶解能力最弱的組分首先以純物質(zhì)吸附或溶解能力最弱的組分首先以純物質(zhì)的狀態(tài)流出，其次則以第一組分和吸附或的狀態(tài)流出，其次則以第一組分和吸附或溶解能力較弱的第二組分混合物，以此類溶解能力較弱的第二組分混合物，以此類推。流出曲線如下圖推。流出曲線如下圖 該法在分離多組分混合物時(shí)，除第一組分外，該法在分離多組分混合物時(shí)，除第一組分外，其余均非純態(tài)，因此僅適用于從含有微量雜質(zhì)的混其余

10、均非純態(tài)，因此僅適用于從含有微量雜質(zhì)的混合物中切割出一個(gè)高純組分（組分合物中切割出一個(gè)高純組分（組分A A），），而不適用而不適用于對(duì)混合物進(jìn)行分離。于對(duì)混合物進(jìn)行分離。按流動(dòng)相分按流動(dòng)相分氣相色譜（GC）液相色譜（LC）超臨界流體色譜（SFC）按機(jī)理分按機(jī)理分吸附色譜分配色譜離子交換色譜排阻色譜按固定相在支持按固定相在支持 體中的形狀分體中的形狀分柱色譜平板色譜紙色譜薄層色譜按分離效率分按分離效率分經(jīng)典液相色譜高效液相色譜 液-固色譜1、概念 分光光度法（Absorption Photometry）是一種基于物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收而建立起來(lái)的一種分析方法。是利用物質(zhì)所特有的吸收光譜對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定

11、性或定量分析的一項(xiàng)技術(shù)。包括可見(jiàn)吸光光度法、紫外-可見(jiàn)吸光光度法和紅外光譜法等。 （二）分光光度技術(shù)2、特點(diǎn) 吸光光度法同滴定分析法、重量分析法相比，有以下一些特點(diǎn)： (1)靈敏度高 吸光光度法測(cè)定物質(zhì)的濃度下限(最低濃度)一般可達(dá)1-10-3%的微量組分。對(duì)固體試樣一般可測(cè)到10-4%。如果對(duì)被測(cè)組分事先加以富集，靈敏度還可以提高1-2個(gè)數(shù)量級(jí)。(2)準(zhǔn)確度較高 一般吸光光度法的相對(duì)誤差為2-5%，其準(zhǔn)確度雖不如滴定分析法及重量法，但對(duì)微量成分來(lái)說(shuō)，還是比較滿意的，因?yàn)樵谶@種情況下，滴定分析法和重量法也不夠準(zhǔn)確了，甚至無(wú)法進(jìn)行測(cè)定。(3)操作簡(jiǎn)便，測(cè)定速度快(4)應(yīng)用廣泛 幾乎所有的無(wú)機(jī)離子

12、和有機(jī)化合物都可直接或間接地用吸光光度法進(jìn)行測(cè)定。3、光的本質(zhì)與溶液顏色的關(guān)系（1）光的基本性質(zhì) 光是電磁波。 通常用波長(zhǎng)、頻率來(lái)描述。（2）物質(zhì)的顏色與吸收光的關(guān)系 從光本身來(lái)說(shuō)、有些波長(zhǎng)的光線，作用于眼睛引起了顏色的感覺(jué)，我們把人眼所能看見(jiàn)有顏色的光叫做可見(jiàn)光，其波長(zhǎng)范圍大約在400-760nm之間。實(shí)驗(yàn)證明：白光(日光、白熾電燈光、日光燈光等)是由各種不同顏色的光按一定的強(qiáng)度比例混合而成的。如果讓一束白光通過(guò)三棱鏡，就分解為紅、橙、黃、綠、青、藍(lán)、紫七種顏色的光，這種現(xiàn)象稱為光的色散。每種顏色的光具有一定的波長(zhǎng)范圍。我們把白光叫做復(fù)合光；把只具有一種顏色的光，叫做單色光。n 實(shí)驗(yàn)還證明，

13、不僅七種單色光可以混合成白光，如果把適當(dāng)顏色的兩種單色光按一定的強(qiáng)度比例混合，也可以成為白光。這兩種單色光就叫做互補(bǔ)色。如綠光和紫光互補(bǔ)，藍(lán)光和黃光互補(bǔ)，等等。n 對(duì)固體物質(zhì)來(lái)說(shuō)，當(dāng)白光照射到物質(zhì)上時(shí)，物質(zhì)對(duì)于不同波長(zhǎng)的光線吸收、透過(guò)、反射、折射的程度不同而使物質(zhì)呈現(xiàn)出不同的顏色。如果物質(zhì)對(duì)各種波長(zhǎng)的光完全吸收，則呈現(xiàn)黑色；如果完全反射，則呈現(xiàn)白色；如果對(duì)各種波長(zhǎng)的光吸收程度差不多，則呈現(xiàn)灰色；如果物質(zhì)選擇性地吸收某些波長(zhǎng)的光，那么，這種物質(zhì)的顏色就由它所反射或透過(guò)光的顏色來(lái)決定。 對(duì)溶液來(lái)說(shuō)，溶液呈現(xiàn)不同的顏色，是由于溶液中的質(zhì)點(diǎn)(分子或離子)選擇性的吸收某種顏色的光所引起的。如果各種顏色的

14、光透過(guò)程度相同，這種物質(zhì)就是無(wú)色透明的。如果只讓一部分波長(zhǎng)的光透過(guò)，其他波長(zhǎng)的光被吸收，則溶液就呈現(xiàn)出透過(guò)光的顏色，也就是溶液呈現(xiàn)的是與它吸收的光成互補(bǔ)色的顏色。例如硫酸銅溶液因吸收了白光中的黃色光而呈藍(lán)色；高錳酸鉀溶液因吸收了白光中的綠色光而呈現(xiàn)紫色。其實(shí)，任何一種溶液對(duì)不同波長(zhǎng)的光的吸收程度是不相等的。如果將某種波長(zhǎng)的單色光依次通過(guò)一定濃度的某一溶液，測(cè)量該溶液對(duì)各種單色光的吸收程度，以波長(zhǎng)為縱坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)可以得到一條曲線，叫做吸收光譜曲線或光吸收曲線。它清楚地描述了溶液對(duì)不同波長(zhǎng)的光的吸收情況。4、光的吸收定律n（1）透光率和吸光度 當(dāng)一束單色光透過(guò)均勻、無(wú)散射的溶液時(shí)，一部分

15、被吸收，一部分透過(guò)溶液，即I0IaIt式中：I0為入射光的強(qiáng)度，Ia為溶液吸收光的強(qiáng)度，It為透過(guò)光強(qiáng)度。n透光率，用符號(hào)T表示，即：TIt/I0100%n透光度率的倒數(shù)反映了物質(zhì)對(duì)光的吸收程度，應(yīng)用時(shí)取它的對(duì)數(shù)做為吸光度，用A表示。即：AlgI0/Itlg1/TlgT0IIt0IIt0IIt（2）光的吸收定律：朗伯比爾定律n當(dāng)一束平行的單色光通過(guò)均勻、無(wú)散射現(xiàn)象的溶液時(shí)，在單色光強(qiáng)度、溶液的溫度等條件不變的情況下，溶液吸光度與溶液的濃度及液層厚度的乘積成正比。AKcL朗伯比爾定律不僅適用于有色溶液，也適用于無(wú)色溶液及氣體和固體的非散射均勻體系；不僅適用于可見(jiàn)光區(qū)的單色光，也適用于紫外和紅外光

16、區(qū)的單色光。（3）吸光系數(shù)n摩爾吸光系數(shù)指波長(zhǎng)一定時(shí)，溶液的濃度為1mol/L時(shí)，液層厚度為1cm的吸光度，單位為L(zhǎng)/(molcm)，用表示。 A/cLn比吸光系數(shù)指波長(zhǎng)一定時(shí)，溶液濃度為g/L，液層厚度為1cm的吸光度，單位為L(zhǎng)/(gcm)，用表示。 A/cLn可以通過(guò)下式換算： M M為摩爾質(zhì)量5、吸收光譜n吸收光譜又稱吸收光譜曲線，它是在濃度一定的條件下，以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，所繪制的曲線。曲線上吸光度最大的地方稱為最大吸收峰，它所對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)稱為最大吸收波長(zhǎng)，用表示。 KMnO4吸收光譜曲線6、定量分析方法（1）單組分的定量nA、標(biāo)準(zhǔn)曲線法n測(cè)定時(shí)，先取與被測(cè)物質(zhì)含有相同組分

17、的標(biāo)準(zhǔn)品，配成一系列濃度不同的標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于相同厚度的吸收池中，分別測(cè)其吸光度。然后以溶液濃度c為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制Ac曲線圖，如果符合比爾定律，該曲線為通過(guò)原點(diǎn)的一條直線-標(biāo)準(zhǔn)曲線，如右圖所示。在相同條件下測(cè)出樣品溶液的吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上便可查出與此吸光度對(duì)應(yīng)的樣品溶液的濃度。標(biāo)準(zhǔn)曲線（A-c曲線）B、對(duì)照法n對(duì)照法又稱比較法。在相同條件下在線性范圍內(nèi)配制樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液，在選定波長(zhǎng)處，分別測(cè)量吸光度。根據(jù)比爾定律A樣K樣c樣L樣 A標(biāo)K標(biāo)c標(biāo)L標(biāo)因是同種物質(zhì)，同臺(tái)儀器，相同厚度吸收池及同一波長(zhǎng)測(cè)定，故K樣K標(biāo)，L樣L標(biāo)，所以： c樣 A樣/ A標(biāo) c標(biāo) 為了減少誤差

18、，比較法配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度常與樣品溶液的濃度相接近。n當(dāng)測(cè)定不純樣品中某純品的含量時(shí)，可先配制相同濃度的不純樣品溶液（c原樣）和標(biāo)準(zhǔn)品溶液，即c原樣 c標(biāo)，c樣為c原樣溶液中純被測(cè)物的濃度。在最大吸收峰處分別測(cè)定其吸光度A值，便可直接計(jì)算出樣品的含量。標(biāo)樣原樣標(biāo)樣標(biāo)原樣樣純被測(cè)組分AAcAAccc（2）多組分的定量根據(jù)吸光度的加和性，可以在同一試樣中不經(jīng)分離同時(shí)測(cè)定兩個(gè)以上的組分 n上圖（a）表明，A、B組分互不干擾，因此可分別在處測(cè)定A、B組分的吸光度，從而求出各自的含量。上圖（b）則說(shuō)明溶液中A、B組分彼此相互干擾，這時(shí)可在波長(zhǎng)處分別測(cè)定A、B兩組分的總的吸光度A1和A2，然后再根據(jù)吸光度

19、的加和性聯(lián)立方程BBAAbcbcA111BBAAbcbcA2227、吸光度的測(cè)量原理 分光光度計(jì)實(shí)際上測(cè)得的是光電流或電壓，通過(guò)轉(zhuǎn)換器將測(cè)得的電流或電壓轉(zhuǎn)換為對(duì)應(yīng)的吸光度A。測(cè)定時(shí)，只要將待測(cè)物質(zhì)推入光路，即可直接讀出吸光度值。測(cè)定步驟測(cè)定步驟：n （1）調(diào)節(jié)檢測(cè)器零點(diǎn)，即儀器的機(jī)械零點(diǎn)。n （2）應(yīng)用不含待測(cè)組分的參比溶液調(diào)節(jié)吸光零點(diǎn)。n （3）待測(cè)組分吸光度的測(cè)定。附：吸光光度法的儀器 一般由光源、單色器（分光系統(tǒng)）、吸收池、檢測(cè)系統(tǒng)和信號(hào)顯示系統(tǒng)等五部分組成。（1）光源 常用的光源為6-12伏低壓鎢絲燈，電源由溫器供給，為了保持光源強(qiáng)度的穩(wěn)定，以獲得準(zhǔn)確的測(cè)定果，電壓必須穩(wěn)定。（2）單色

20、器（分光系統(tǒng)） 單色器的作用從光源發(fā)出的復(fù)合光中分出所需要的單色光。 單色器通常由由入射狹縫、準(zhǔn)直鏡、色散元件、聚焦鏡和出射縫組成。（3）吸收池（比色皿） 比色皿是用透明無(wú)色的光學(xué)玻璃制作的。大多數(shù)比色皿為長(zhǎng)方形，也有圓柱形的。一般厚度為0.5、1、2和3厘米。（4）檢測(cè)系統(tǒng)(又叫光電轉(zhuǎn)化器) 在光度計(jì)中，常用的是硒光電池。曬光電池和眼睛相似，對(duì)于各種不同波長(zhǎng)的光線，靈敏度是不同的。對(duì)于波長(zhǎng)為500-600nm的光線最靈敏。而對(duì)紫外線，紅外線則不能應(yīng)用。 光電管和光電倍增管用于較精密的分光光度計(jì)中。具有靈敏度高、光敏范圍廣及不易疲勞等特點(diǎn)。（5）信號(hào)顯示系統(tǒng) 早期使用的是檢流計(jì)、微安表、電位計(jì)

21、、數(shù)字電壓表、自動(dòng)記錄儀等?，F(xiàn)代的分光光度計(jì)廣泛采用數(shù)字電壓表、函數(shù)記錄儀、示波器及數(shù)據(jù)處理臺(tái)等。 測(cè)量光電流的檢流計(jì)常用懸鏡式檢流計(jì)(也稱作直流復(fù)射式檢流計(jì))，其靈敏度可達(dá)10-9安培格。為了保護(hù)檢統(tǒng)計(jì)，使用中要防止震動(dòng)或大電流通過(guò)。檢流計(jì)標(biāo)尺上有兩種刻度，等刻度的是表示百分透光率(T)，對(duì)數(shù)刻度表示吸光度(A)。 根據(jù)透光率T，如果把入射光強(qiáng)度IO當(dāng)作IO光強(qiáng)單位，透過(guò)光強(qiáng)度當(dāng)作100光強(qiáng)單位中的一部分，這一數(shù)值為百分透光度，亦稱為百分透光率。(四)電泳技術(shù) 電泳技術(shù)是一種先進(jìn)的檢測(cè)手段，與其它先進(jìn)技術(shù)相配合，能創(chuàng)造出驚人的成果，可使人們用較少代價(jià)獲得最優(yōu)效益。比如它對(duì)解決當(dāng)前人類所面臨的

22、食品、能源、環(huán)境和疾病等一系列迫切問(wèn)題，都有積極作用，顯示出強(qiáng)大的生命力。因此電泳技術(shù)正越來(lái)越多地為人們所重視，廣泛應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域。電泳（electrophoresis）是指帶電荷的溶質(zhì)或粒子在電場(chǎng)中向著與其本身所帶電荷相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象。利用電泳現(xiàn)象將多組分物質(zhì)分離、分析的技術(shù)叫做電泳技術(shù)（electrophoresis technique）?？梢詫?shí)現(xiàn)電泳分離技術(shù)的儀器稱之為電泳儀（electrophoresister）。 臨床常用的電泳分析方法主要有醋酸纖維素薄臨床常用的電泳分析方法主要有醋酸纖維素薄膜電泳、凝膠電泳、等電聚焦電泳、雙向電泳和毛膜電泳、凝膠電泳、等電聚焦電泳、雙向電泳和毛

23、細(xì)管電泳等。細(xì)管電泳等。 目前，電泳技術(shù)已廣泛用于蛋白質(zhì)、多肽、氨目前，電泳技術(shù)已廣泛用于蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、核苷酸、無(wú)機(jī)離子等成份的分離和鑒定，甚基酸、核苷酸、無(wú)機(jī)離子等成份的分離和鑒定，甚至還用于細(xì)胞與病毒的研究。至還用于細(xì)胞與病毒的研究。 第一節(jié)第一節(jié) 電泳原理電泳原理 一、電泳的基本原理一、電泳的基本原理 物質(zhì)分子在正常情況下一般不帶電，即所帶正負(fù)電荷物質(zhì)分子在正常情況下一般不帶電，即所帶正負(fù)電荷量相等，故不顯示帶電性。但是在一定的物理作用或化學(xué)量相等，故不顯示帶電性。但是在一定的物理作用或化學(xué)反應(yīng)條件下，某些物質(zhì)分子會(huì)成為帶電的離子（或粒子），反應(yīng)條件下，某些物質(zhì)分子會(huì)成為帶電的離

24、子（或粒子），不同的物質(zhì)，由于其帶電性質(zhì)、顆粒形狀和大小不同，因不同的物質(zhì)，由于其帶電性質(zhì)、顆粒形狀和大小不同，因而在一定的電場(chǎng)而在一定的電場(chǎng) 中它們的移動(dòng)方向和移中它們的移動(dòng)方向和移 動(dòng)速度也不同，因此可動(dòng)速度也不同，因此可 使它們分離。使它們分離。 電泳現(xiàn)象和電滲流現(xiàn)象第一節(jié)第一節(jié) 電泳原理電泳原理 若將帶凈電荷若將帶凈電荷Q Q的粒子放入電場(chǎng)，則該粒子所受到的電荷引力為：的粒子放入電場(chǎng)，則該粒子所受到的電荷引力為：F F引引=E Q =E Q （16-116-1） 在溶液中在溶液中, ,運(yùn)動(dòng)粒子與溶液之間存在阻力運(yùn)動(dòng)粒子與溶液之間存在阻力F F阻阻 F F阻阻=6rV =6rV （16-

25、216-2） 當(dāng)當(dāng)F F引引=F=F阻阻時(shí)時(shí) EQ= 6rVEQ= 6rV V = EQ/6r V = EQ/6r （16-316-3） 由上式可以看出由上式可以看出, ,粒子的移動(dòng)速度粒子的移動(dòng)速度( (泳動(dòng)速度泳動(dòng)速度V)V)與電場(chǎng)強(qiáng)度與電場(chǎng)強(qiáng)度(E)(E)和粒子所帶電荷量和粒子所帶電荷量(Q)(Q)成正比成正比, ,而與粒子的半徑而與粒子的半徑(r)(r)及溶液的及溶液的粘度粘度()()成反比。成反比。第一節(jié)第一節(jié) 電泳原理電泳原理 二、影響電泳的外界因素二、影響電泳的外界因素 （一）電場(chǎng)強(qiáng)度（一）電場(chǎng)強(qiáng)度 （二）溶液的（二）溶液的pHpH值值 （三）溶液的離子強(qiáng)度（三）溶液的離子強(qiáng)度

26、（四）電滲作用（四）電滲作用 （五）粒子的遷移率（五）粒子的遷移率 （六）吸附作用（六）吸附作用V = EQ/6r第二節(jié)第二節(jié) 常用電泳方法常用電泳方法一、紙電泳一、紙電泳 指用濾紙作為支持載體的電泳方法。是最早指用濾紙作為支持載體的電泳方法。是最早使用的區(qū)帶電泳。使用的區(qū)帶電泳。 將濾紙條水平地架設(shè)在兩個(gè)裝有緩沖溶液的容器之間，樣品點(diǎn)于濾紙中央。當(dāng)濾紙條被緩沖液潤(rùn)濕后，再蓋上絕緣密封罩，即可由電泳電源輸入直流電壓（100V1000V）進(jìn)行電泳。 平臥式電泳槽裝置示意圖第二節(jié)第二節(jié) 常用電泳方法常用電泳方法二、醋酸纖維素薄膜電泳二、醋酸纖維素薄膜電泳 電泳時(shí)經(jīng)過(guò)膜的預(yù)處理、加樣、電泳、染色、電

27、泳時(shí)經(jīng)過(guò)膜的預(yù)處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。此電泳的脫色與透明即可得到滿意的分離效果。此電泳的特點(diǎn)是分離速度快、特點(diǎn)是分離速度快、 電泳時(shí)間短、樣品電泳時(shí)間短、樣品 用量少。因此特別用量少。因此特別 適合于病理情況下適合于病理情況下 微量異常蛋白的檢測(cè)。微量異常蛋白的檢測(cè)。 血清蛋白的電泳圖譜第二節(jié)第二節(jié) 常用電泳方法常用電泳方法三、凝膠電泳三、凝膠電泳 由區(qū)帶電泳中派生出的一種用凝膠物質(zhì)作支持物由區(qū)帶電泳中派生出的一種用凝膠物質(zhì)作支持物進(jìn)行電泳的方式。進(jìn)行電泳的方式。 凝膠電泳中的瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠凝膠電泳中的瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳是普通電

28、泳中應(yīng)用最多電泳是普通電泳中應(yīng)用最多 的兩種形式。的兩種形式。 目前，這種辦法被廣泛目前，這種辦法被廣泛用來(lái)分析蛋白質(zhì)和核酸。用來(lái)分析蛋白質(zhì)和核酸。 凝膠電泳圖第二節(jié)第二節(jié) 常用電泳方法常用電泳方法四、等電聚焦電泳四、等電聚焦電泳 1 1等電聚焦電泳過(guò)程等電聚焦電泳過(guò)程 一種利用有一種利用有pHpH值梯度的介質(zhì)，值梯度的介質(zhì)，分離等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。分離等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。 在一個(gè)穩(wěn)定連續(xù)的線性在一個(gè)穩(wěn)定連續(xù)的線性pHpH梯度的溶液（兩性載體電梯度的溶液（兩性載體電解質(zhì)）中進(jìn)行分離，每一種被解質(zhì)）中進(jìn)行分離，每一種被分離的兩性物質(zhì)都移向與它的等分離的兩性物質(zhì)都移向與它的等電

29、點(diǎn)相一致的電點(diǎn)相一致的pHpH位置，在那里不位置，在那里不再移動(dòng)（稱為聚焦）。再移動(dòng)（稱為聚焦）。 凈電荷與PH的關(guān)系曲線第二節(jié)第二節(jié) 常用電泳方法常用電泳方法 2 2等電聚焦電泳的特點(diǎn)等電聚焦電泳的特點(diǎn) 使用兩性載體電解質(zhì)，在電極之間形成穩(wěn)定、使用兩性載體電解質(zhì)，在電極之間形成穩(wěn)定、連續(xù)、線性的連續(xù)、線性的pHpH梯度；由于梯度；由于“聚焦效應(yīng)聚焦效應(yīng)”，即使很，即使很小的樣品也能獲得清晰、鮮明的區(qū)帶界面；電泳速小的樣品也能獲得清晰、鮮明的區(qū)帶界面；電泳速度快度快; ;分辨率高分辨率高; ;加入樣品的位置可任意選擇；加入樣品的位置可任意選擇；可用于測(cè)定蛋白質(zhì)類物質(zhì)的等電點(diǎn)可用于測(cè)定蛋白質(zhì)類物

30、質(zhì)的等電點(diǎn); ;適用于中、大適用于中、大分子量（如蛋白質(zhì)、肽類、同工酶等）生物組分的分分子量（如蛋白質(zhì)、肽類、同工酶等）生物組分的分離分析。離分析。第二節(jié)第二節(jié) 常用電泳方法常用電泳方法五、等速電泳五、等速電泳 采用兩種不同濃度的電解質(zhì)，一種為前導(dǎo)電解質(zhì)，采用兩種不同濃度的電解質(zhì)，一種為前導(dǎo)電解質(zhì)，充滿整個(gè)毛細(xì)管柱；另一種為尾隨電解質(zhì)，置于一端充滿整個(gè)毛細(xì)管柱；另一種為尾隨電解質(zhì)，置于一端的電泳槽中。前導(dǎo)電解質(zhì)的遷移率高于任何樣品組分，的電泳槽中。前導(dǎo)電解質(zhì)的遷移率高于任何樣品組分，尾隨電解質(zhì)則低于任何樣品組分，被分離的組分按其尾隨電解質(zhì)則低于任何樣品組分，被分離的組分按其不同的遷移率夾在中不

31、同的遷移率夾在中間，在強(qiáng)電場(chǎng)的作用下，各被間，在強(qiáng)電場(chǎng)的作用下，各被分離組分在前導(dǎo)電解質(zhì)與尾隨分離組分在前導(dǎo)電解質(zhì)與尾隨電解質(zhì)之間的空隙中移動(dòng)，實(shí)電解質(zhì)之間的空隙中移動(dòng)，實(shí)現(xiàn)分離。現(xiàn)分離。 等速電泳示意圖 第二節(jié)第二節(jié) 常用電泳方法常用電泳方法六、雙向凝膠電泳（二維電泳）六、雙向凝膠電泳（二維電泳） 第一向采用等電聚焦第一向采用等電聚焦 根據(jù)復(fù)雜的蛋白質(zhì)成分中根據(jù)復(fù)雜的蛋白質(zhì)成分中各個(gè)蛋白質(zhì)的各個(gè)蛋白質(zhì)的PIPI的不同，將蛋白質(zhì)進(jìn)行分離。的不同，將蛋白質(zhì)進(jìn)行分離。 第二向采用了十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠第二向采用了十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳電泳 （SDS-PAGESDS-PAGE）

32、就是按蛋）就是按蛋白質(zhì)分子量的大小使其在垂直白質(zhì)分子量的大小使其在垂直方向進(jìn)行分離。其結(jié)果不再是方向進(jìn)行分離。其結(jié)果不再是條帶狀，而是呈現(xiàn)為斑點(diǎn)狀。條帶狀，而是呈現(xiàn)為斑點(diǎn)狀。等電聚焦儀 雙向凝膠電泳示意圖第二節(jié)第二節(jié) 常用電泳方法常用電泳方法第一向IEF第二向SDS-PAGE18cm玻璃板MarkerIPG膠條等電聚焦電泳槽六、雙向凝膠電泳（二維電泳）第二節(jié)第二節(jié) 常用電泳方法常用電泳方法六、雙向凝膠電泳儀器結(jié)構(gòu) 制膠板、電泳槽、電源、計(jì)算機(jī)、掃描儀等第二節(jié)第二節(jié) 常用電泳方法常用電泳方法七、免疫電泳七、免疫電泳 免疫電泳是瓊脂平板電泳和雙相免疫擴(kuò)散兩種免疫電泳是瓊脂平板電泳和雙相免疫擴(kuò)散兩種

33、方法的結(jié)合。將抗原樣品在瓊脂平板上先進(jìn)行電泳，方法的結(jié)合。將抗原樣品在瓊脂平板上先進(jìn)行電泳，使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而彼此分開(kāi)；使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而彼此分開(kāi)；然后加入抗體做雙相免疫擴(kuò)散，把已分離的各抗原然后加入抗體做雙相免疫擴(kuò)散，把已分離的各抗原成分與抗體在瓊脂中擴(kuò)散而相遇，在二者比例適當(dāng)成分與抗體在瓊脂中擴(kuò)散而相遇，在二者比例適當(dāng)?shù)牡胤?，形成肉眼可?jiàn)的沉淀弧。的地方，形成肉眼可見(jiàn)的沉淀弧。 第三節(jié)第三節(jié) 常用電泳儀的基本結(jié)構(gòu)及技術(shù)指標(biāo)常用電泳儀的基本結(jié)構(gòu)及技術(shù)指標(biāo)一、常用電泳設(shè)備的基本結(jié)構(gòu)一、常用電泳設(shè)備的基本結(jié)構(gòu) （一）電源（一）電源 （二）電泳槽（二）電泳槽 （

34、三）附加裝置（三）附加裝置 垂直電泳儀器裝置示意圖實(shí)驗(yàn)室常用電泳槽和電泳 第三節(jié) 常用電泳儀的基本結(jié)構(gòu)及技術(shù)指標(biāo)垂直板電泳槽和電源垂直板電泳槽和電源水平電泳槽、電泳儀 第三節(jié)第三節(jié) 常用電泳儀的基本結(jié)構(gòu)及技術(shù)指標(biāo)常用電泳儀的基本結(jié)構(gòu)及技術(shù)指標(biāo)二、電泳儀的主要技術(shù)指標(biāo)二、電泳儀的主要技術(shù)指標(biāo) 1 1輸出電壓輸出電壓 6 6功率穩(wěn)定度功率穩(wěn)定度 2 2輸出電流輸出電流 7 7連續(xù)工作時(shí)間連續(xù)工作時(shí)間 3 3輸出功率輸出功率 8 8顯示方式顯示方式 4 4電壓穩(wěn)定度電壓穩(wěn)定度 9 9定時(shí)方式定時(shí)方式 5 5電流穩(wěn)定度電流穩(wěn)定度 第四節(jié)第四節(jié) 常用電泳儀簡(jiǎn)介常用電泳儀簡(jiǎn)介一、穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀一、穩(wěn)壓穩(wěn)流

35、電泳儀 穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀是穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀是目前國(guó)內(nèi)中、穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀是穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀是目前國(guó)內(nèi)中、低壓電泳實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用最廣泛的電泳儀之一。其輸出電低壓電泳實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用最廣泛的電泳儀之一。其輸出電壓的調(diào)節(jié)范圍為壓的調(diào)節(jié)范圍為0V0V600V600V、輸出電流為、輸出電流為0 mA0 mA100mA100mA。這種電泳儀工作穩(wěn)定性好、調(diào)節(jié)范圍寬，并設(shè)有完善這種電泳儀工作穩(wěn)定性好、調(diào)節(jié)范圍寬，并設(shè)有完善的短路保護(hù)電路和過(guò)流保護(hù)電路。的短路保護(hù)電路和過(guò)流保護(hù)電路。 穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀第四節(jié)第四節(jié) 常用電泳儀簡(jiǎn)介常用電泳儀簡(jiǎn)介二、全自動(dòng)醋纖膜電泳儀二、全自動(dòng)醋纖膜電泳儀 全自動(dòng)醋纖膜電泳儀為全自動(dòng)電泳儀，有可見(jiàn)光

36、全自動(dòng)醋纖膜電泳儀為全自動(dòng)電泳儀，有可見(jiàn)光單系統(tǒng)，使用醋酸纖維薄膜電泳片，優(yōu)點(diǎn)為自動(dòng)化程單系統(tǒng)，使用醋酸纖維薄膜電泳片，優(yōu)點(diǎn)為自動(dòng)化程度高。只需將樣品、試劑、電泳片放好，人員可離機(jī)度高。只需將樣品、試劑、電泳片放好，人員可離機(jī)完成實(shí)驗(yàn)并得到結(jié)果。完成實(shí)驗(yàn)并得到結(jié)果。第四節(jié)第四節(jié) 常用電泳儀簡(jiǎn)介常用電泳儀簡(jiǎn)介三、全自動(dòng)熒光三、全自動(dòng)熒光/ /可見(jiàn)光雙系統(tǒng)電泳儀可見(jiàn)光雙系統(tǒng)電泳儀 全自動(dòng)熒光全自動(dòng)熒光/ /可見(jiàn)光雙系統(tǒng)電泳儀只需將樣品、可見(jiàn)光雙系統(tǒng)電泳儀只需將樣品、試劑和瓊脂糖凝膠電泳膠片放好后，其最大優(yōu)點(diǎn)是熒試劑和瓊脂糖凝膠電泳膠片放好后，其最大優(yōu)點(diǎn)是熒光系統(tǒng)全自動(dòng)，只需要光系統(tǒng)全自動(dòng)，只需要2

37、0min20min即可完成電泳分析，速即可完成電泳分析，速度非常快。操作人員可離機(jī)完成實(shí)驗(yàn)并得到結(jié)果。度非?？?。操作人員可離機(jī)完成實(shí)驗(yàn)并得到結(jié)果。 第四節(jié)第四節(jié) 常用電泳儀簡(jiǎn)介常用電泳儀簡(jiǎn)介四、全自動(dòng)瓊脂糖電泳儀四、全自動(dòng)瓊脂糖電泳儀 全自動(dòng)瓊脂糖電泳儀，有可見(jiàn)光單系統(tǒng)，使全自動(dòng)瓊脂糖電泳儀，有可見(jiàn)光單系統(tǒng)，使用瓊脂糖凝膠電泳膠片。靈敏度高，可適用于低用瓊脂糖凝膠電泳膠片。靈敏度高，可適用于低濃度蛋白檢驗(yàn)，如尿蛋白、腦脊液蛋白、同工酶濃度蛋白檢驗(yàn)，如尿蛋白、腦脊液蛋白、同工酶的分離。但其自動(dòng)化程度較差。的分離。但其自動(dòng)化程度較差。 由于這類電泳儀所能做的項(xiàng)目較多，且靈敏由于這類電泳儀所能做的項(xiàng)

38、目較多，且靈敏度較高，仍為許多實(shí)驗(yàn)室所接受。度較高，仍為許多實(shí)驗(yàn)室所接受。第四節(jié)第四節(jié) 常用電泳儀簡(jiǎn)介常用電泳儀簡(jiǎn)介五、全自動(dòng)電泳分析系統(tǒng)五、全自動(dòng)電泳分析系統(tǒng) 全自動(dòng)電泳分析系統(tǒng)，將上述儀器的優(yōu)點(diǎn)集于一全自動(dòng)電泳分析系統(tǒng)，將上述儀器的優(yōu)點(diǎn)集于一身，儀器自動(dòng)點(diǎn)樣、電泳、呈色（或染色、脫色）、身，儀器自動(dòng)點(diǎn)樣、電泳、呈色（或染色、脫色）、烘干，自動(dòng)化程度非常高。可用各種電泳片，包括瓊烘干，自動(dòng)化程度非常高?？捎酶鞣N電泳片，包括瓊脂片、醋酸片、聚丙烯酰胺等，采用可見(jiàn)光及熒光呈脂片、醋酸片、聚丙烯酰胺等，采用可見(jiàn)光及熒光呈色雙系統(tǒng)，是一種較理想的電泳儀。色雙系統(tǒng)，是一種較理想的電泳儀。 全自動(dòng)電泳儀

39、第五節(jié)第五節(jié) 毛細(xì)管電泳毛細(xì)管電泳一、毛細(xì)管電泳的基本工作原理一、毛細(xì)管電泳的基本工作原理 溶液中的帶電粒子以高壓電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，沿毛細(xì)溶液中的帶電粒子以高壓電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，沿毛細(xì)管通道，以不同速度向與其所帶電荷相反的電極方向管通道，以不同速度向與其所帶電荷相反的電極方向遷移，并依據(jù)樣品中各遷移，并依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為組分之間淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離。上的差異而實(shí)現(xiàn)分離。 高效毛細(xì)管電泳儀第五節(jié)第五節(jié) 毛細(xì)管電泳毛細(xì)管電泳 毛細(xì)管電泳儀裝置示意圖第五節(jié)第五節(jié) 毛細(xì)管電泳毛細(xì)管電泳三、毛細(xì)管電泳的特點(diǎn) 1. 高靈敏度 2. 高速度 3. 高分辨率 4. 樣品少 5. 自動(dòng)化程度

40、高 6. 應(yīng)用范圍廣 TriSepTM-2010GV pCEC System第五節(jié)第五節(jié) 毛細(xì)管電泳毛細(xì)管電泳三、毛細(xì)管電泳的分離模式三、毛細(xì)管電泳的分離模式 （一）毛細(xì)管區(qū)帶電泳（一）毛細(xì)管區(qū)帶電泳 它是通過(guò)在充滿電解質(zhì)溶液的毛細(xì)管中，不同質(zhì)它是通過(guò)在充滿電解質(zhì)溶液的毛細(xì)管中，不同質(zhì)荷比大小的組分，在電場(chǎng)的作用下，依遷移速度的不荷比大小的組分，在電場(chǎng)的作用下，依遷移速度的不同而進(jìn)行分離。同而進(jìn)行分離。 根據(jù)組分的遷移時(shí)間進(jìn)行根據(jù)組分的遷移時(shí)間進(jìn)行 定性，根據(jù)電泳峰的峰面定性，根據(jù)電泳峰的峰面 積或峰高進(jìn)行定量分析。積或峰高進(jìn)行定量分析。 毛細(xì)血管區(qū)帶電泳原理圖第五節(jié)第五節(jié) 毛細(xì)管電泳毛細(xì)管電

41、泳（二）毛細(xì)管凝膠電泳（二）毛細(xì)管凝膠電泳 毛細(xì)管凝膠電泳毛細(xì)管凝膠電泳(CGE) (CGE) 常用聚丙烯酰胺在毛細(xì)常用聚丙烯酰胺在毛細(xì)管內(nèi)交聯(lián)制成凝膠柱，依據(jù)分離支撐物的分離作用管內(nèi)交聯(lián)制成凝膠柱，依據(jù)分離支撐物的分離作用不同，不同，CGECGE又分為非變性又分為非變性CGECGE和變性和變性CGECGE，前者以分，前者以分子篩、電荷質(zhì)量比的作用進(jìn)行分離；后者則以質(zhì)子篩、電荷質(zhì)量比的作用進(jìn)行分離；后者則以質(zhì)量、分子篩的作用進(jìn)行分離。量、分子篩的作用進(jìn)行分離。 適用于分離、測(cè)定肽類、蛋白質(zhì)、適用于分離、測(cè)定肽類、蛋白質(zhì)、DNADNA類物質(zhì)類物質(zhì)的分離。的分離。 第五節(jié)第五節(jié) 毛細(xì)管電泳毛細(xì)管電

42、泳（三）毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜（三）毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜(MECC)(MECC) MECC MECC系統(tǒng)中存在兩個(gè)相：流動(dòng)的水相和起到固定系統(tǒng)中存在兩個(gè)相：流動(dòng)的水相和起到固定相作用的膠束相。相作用的膠束相。 在含有膠束的流動(dòng)相中，溶質(zhì)在在含有膠束的流動(dòng)相中，溶質(zhì)在“水相水相”和和“膠膠束相束相”( (準(zhǔn)固定相準(zhǔn)固定相) )之間進(jìn)行分配，即使是中性溶質(zhì)，之間進(jìn)行分配，即使是中性溶質(zhì)，因其本身疏水性不同，在二者之間的分配也會(huì)有差異，因其本身疏水性不同，在二者之間的分配也會(huì)有差異，疏水性強(qiáng)的溶質(zhì)在疏水性強(qiáng)的溶質(zhì)在“膠束相膠束相”中停留時(shí)間長(zhǎng)，遷移速中停留時(shí)間長(zhǎng)，遷移速度就慢。反之，親水性強(qiáng)的溶質(zhì)遷移速度

43、就快，最終度就慢。反之，親水性強(qiáng)的溶質(zhì)遷移速度就快，最終中性溶質(zhì)將依其疏水性不同而得以分離。中性溶質(zhì)將依其疏水性不同而得以分離。 第五節(jié)第五節(jié) 毛細(xì)管電泳毛細(xì)管電泳 毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜原理圖第五節(jié)第五節(jié) 毛細(xì)管電泳毛細(xì)管電泳（四）毛細(xì)管等電聚焦電泳（四）毛細(xì)管等電聚焦電泳 不同等電點(diǎn)的分子分別聚集在不同的位置上，不不同等電點(diǎn)的分子分別聚集在不同的位置上，不作遷移而彼此分離，這就是等電聚焦分離過(guò)程。毛細(xì)作遷移而彼此分離，這就是等電聚焦分離過(guò)程。毛細(xì)管的等電聚焦是在毛細(xì)管內(nèi)實(shí)現(xiàn)的等電聚焦過(guò)程，具管的等電聚焦是在毛細(xì)管內(nèi)實(shí)現(xiàn)的等電聚焦過(guò)程，具有極高的分辨率，通?？梢苑蛛x等電點(diǎn)差異小于有極高的分辨率，

44、通?？梢苑蛛x等電點(diǎn)差異小于 0.01pH0.01pH單位的兩種蛋白質(zhì)，例如肽類、蛋白質(zhì)的分離。單位的兩種蛋白質(zhì)，例如肽類、蛋白質(zhì)的分離。第五節(jié)第五節(jié) 毛細(xì)管電泳毛細(xì)管電泳（五）毛細(xì)管等速電泳（五）毛細(xì)管等速電泳 毛細(xì)管內(nèi)首先導(dǎo)入具有比被分離各組分高電泳毛細(xì)管內(nèi)首先導(dǎo)入具有比被分離各組分高電泳淌度的前導(dǎo)電解質(zhì)，然后進(jìn)樣，隨后再導(dǎo)入比各分淌度的前導(dǎo)電解質(zhì)，然后進(jìn)樣，隨后再導(dǎo)入比各分離組份低電泳淌度的尾隨電解質(zhì)，在強(qiáng)電場(chǎng)的作用離組份低電泳淌度的尾隨電解質(zhì)，在強(qiáng)電場(chǎng)的作用下，各被分離組分在前導(dǎo)電解質(zhì)與尾隨電解質(zhì)之間下，各被分離組分在前導(dǎo)電解質(zhì)與尾隨電解質(zhì)之間的空隙中發(fā)生分離。的空隙中發(fā)生分離。 第五節(jié)

45、第五節(jié) 毛細(xì)管電泳毛細(xì)管電泳 （六）毛細(xì)管電色譜（六）毛細(xì)管電色譜 它包含了電泳和色譜兩種機(jī)制，是在毛細(xì)管中填充它包含了電泳和色譜兩種機(jī)制，是在毛細(xì)管中填充 或在毛細(xì)管壁或在毛細(xì)管壁 上鍵合（或涂壁）固上鍵合（或涂壁）固 定相，從而構(gòu)成毛細(xì)定相，從而構(gòu)成毛細(xì) 管色譜柱，依靠電滲管色譜柱，依靠電滲 流推動(dòng)流動(dòng)相，攜帶流推動(dòng)流動(dòng)相，攜帶 樣品遷移，根據(jù)樣品樣品遷移，根據(jù)樣品 分子的質(zhì)荷比、分子分子的質(zhì)荷比、分子 尺寸及分配系數(shù)的差尺寸及分配系數(shù)的差 別而分離。別而分離。 CEC-加壓毛細(xì)管電色譜儀第五節(jié)第五節(jié) 毛細(xì)管電泳毛細(xì)管電泳（七）毛細(xì)管電泳芯片（七）毛細(xì)管電泳芯片 毛細(xì)管電泳芯片是在常規(guī)毛細(xì)

46、管電泳的原理和技毛細(xì)管電泳芯片是在常規(guī)毛細(xì)管電泳的原理和技術(shù)基礎(chǔ)上，利用微加工技術(shù)在平方厘米級(jí)大小的芯片術(shù)基礎(chǔ)上，利用微加工技術(shù)在平方厘米級(jí)大小的芯片上加工出各種微細(xì)結(jié)構(gòu)，如通道和其它功能單元，通上加工出各種微細(xì)結(jié)構(gòu)，如通道和其它功能單元，通過(guò)不同的通道、反應(yīng)器、檢測(cè)單元等的設(shè)計(jì)和布局，過(guò)不同的通道、反應(yīng)器、檢測(cè)單元等的設(shè)計(jì)和布局，實(shí)現(xiàn)樣品的進(jìn)樣、反應(yīng)、分離和檢測(cè)，是一種多功能實(shí)現(xiàn)樣品的進(jìn)樣、反應(yīng)、分離和檢測(cè)，是一種多功能化的快速、高效和低耗的微型實(shí)驗(yàn)裝置。化的快速、高效和低耗的微型實(shí)驗(yàn)裝置。 第五節(jié)第五節(jié) 毛細(xì)管電泳毛細(xì)管電泳四、毛細(xì)管電泳儀的基本結(jié)構(gòu)四、毛細(xì)管電泳儀的基本結(jié)構(gòu) 毛細(xì)管電泳儀

47、的結(jié)構(gòu)并不復(fù)雜，主要有高壓毛細(xì)毛細(xì)管電泳儀的結(jié)構(gòu)并不復(fù)雜，主要有高壓毛細(xì)管柱、檢測(cè)器，以及兩個(gè)管柱、檢測(cè)器，以及兩個(gè)供毛細(xì)管兩端插入而又可和電供毛細(xì)管兩端插入而又可和電源相連的緩沖液槽。源相連的緩沖液槽。 （一）毛細(xì)管柱（一）毛細(xì)管柱 （二）檢測(cè)器（二）檢測(cè)器 （三）毛細(xì)管電泳（三）毛細(xì)管電泳 法的進(jìn)樣技術(shù)法的進(jìn)樣技術(shù) 毛細(xì)管電泳儀 第六節(jié)第六節(jié) 電泳儀的維護(hù)保養(yǎng)及故障排除電泳儀的維護(hù)保養(yǎng)及故障排除 一、電泳儀的維護(hù)保養(yǎng)一、電泳儀的維護(hù)保養(yǎng) （一）每日維護(hù)（一）每日維護(hù) （二）每周維護(hù)（二）每周維護(hù) （三）每月維護(hù)（三）每月維護(hù) （四）按需進(jìn)行的維護(hù)（四）按需進(jìn)行的維護(hù) TriSep 毛細(xì)管電

48、泳儀 第六節(jié)第六節(jié) 電泳儀的維護(hù)保養(yǎng)及故障排除電泳儀的維護(hù)保養(yǎng)及故障排除二、電泳儀的故障排除二、電泳儀的故障排除 電泳儀是精密儀器，在操作過(guò)程中要嚴(yán)格遵電泳儀是精密儀器，在操作過(guò)程中要嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，但不可避免會(huì)出現(xiàn)各種各樣的故障，守操作規(guī)程，但不可避免會(huì)出現(xiàn)各種各樣的故障，當(dāng)儀器提示有故障時(shí)，應(yīng)立即處理。當(dāng)儀器提示有故障時(shí)，應(yīng)立即處理。 BECKMAN COULTER毛細(xì)管電泳儀 第六節(jié)第六節(jié) 電泳儀的維護(hù)保養(yǎng)及故障排除電泳儀的維護(hù)保養(yǎng)及故障排除故障信息故障信息引起故障可能原因引起故障可能原因解決方法解決方法轉(zhuǎn)盤識(shí)別錯(cuò)誤轉(zhuǎn)盤識(shí)別錯(cuò)誤細(xì)微灰塵吸附在燈上細(xì)微灰塵吸附在燈上 儀器關(guān)機(jī)，用潔凈棉簽

49、輕輕拭去燈上面的儀器關(guān)機(jī)，用潔凈棉簽輕輕拭去燈上面的灰塵。儀器開(kāi)機(jī)后再進(jìn)行測(cè)定。灰塵。儀器開(kāi)機(jī)后再進(jìn)行測(cè)定。 樣品識(shí)別錯(cuò)誤樣品識(shí)別錯(cuò)誤血清分離不好或者有灰塵吸附血清分離不好或者有灰塵吸附 關(guān)機(jī)狀態(tài)，拆開(kāi)儀器內(nèi)透明有機(jī)玻璃，關(guān)機(jī)狀態(tài)，拆開(kāi)儀器內(nèi)透明有機(jī)玻璃，用無(wú)水乙醇擦拭加樣針外壁，然后安用無(wú)水乙醇擦拭加樣針外壁，然后安裝好，再用儀器內(nèi)程序進(jìn)行加樣針清裝好，再用儀器內(nèi)程序進(jìn)行加樣針清洗，洗完洗，洗完 12 次后，進(jìn)行加樣針加樣次后，進(jìn)行加樣針加樣感應(yīng)定位。感應(yīng)定位。 儀器報(bào)警出現(xiàn)缺少稀儀器報(bào)警出現(xiàn)缺少稀釋杯或稀釋杯感應(yīng)釋杯或稀釋杯感應(yīng)錯(cuò)誤錯(cuò)誤儀器稀釋杯位置錯(cuò)誤儀器稀釋杯位置錯(cuò)誤 觀察稀釋杯位置，如果沒(méi)有處于正常位置，觀察稀釋杯位置，如果沒(méi)有處于正常位置，可手動(dòng)將其移動(dòng)到其原來(lái)位置，可手動(dòng)將其移動(dòng)到其原來(lái)位置， 然后然后進(jìn)行稀釋杯感應(yīng)定標(biāo)。進(jìn)行稀釋杯感應(yīng)定標(biāo)。曲線不理想，顯示不穩(wěn)曲線不理想，顯示不穩(wěn)定定毛細(xì)管的長(zhǎng)期使用出現(xiàn)不清潔毛細(xì)管的長(zhǎng)期使用出現(xiàn)不清潔 毛細(xì)管清洗程序進(jìn)行清洗，然后按激活程毛細(xì)管清