1、殳ELISA簡介及HIV抗體篩查實驗質(zhì)量管理太原市疾病預(yù)防控制中心王驥濤EUSA簡介壁原理，方法類型齡操作要點1/15/2014-檢測抗體雙抗原夾心法捕獲法間接法I雙抗體夾心法/雙抗原夾心法測抗體等雙抗體夾心法測抗原料捕獲法測抗體e間接法測抗體競爭法測抗原、抗體第一代：使用HlV全病毒裂解物為抗原，應(yīng)用間接法原理檢測HIV抗體。如日本富士公司生產(chǎn)的HIV-PA試劑。，第二代：使用在細菌或真菌中表達的人工重組或化學(xué)合成多肽HIV抗原，應(yīng)用間接法原理檢測HIV抗體。基因重組通常易于在培養(yǎng)基中生產(chǎn)大量同源性抗原，產(chǎn)品為單一目的基因而非多樣性抗原混合，特異性高于第一代試劑。酶標記的HIV-1/-2型抗

2、原待檢抗體體，此類試劑的敏感性和I高純度的HIV-1/-2型抗原第三代：使用合成多肽HIV抗原（少數(shù)用重組抗原），應(yīng)用雙抗原夾心法原理檢測HIV抗體。由于標記HIV抗原可同時檢測血清中HIV-1lgG>lgM>IgA抗特異性均優(yōu)于標記抗人免疫球蛋白的間接法。第四代：此類試劑在第三代試劑盒基礎(chǔ)上，將針對P24抗原的抗體與HIW1抗原一起包被固相載體，可同時檢測HIV-1IgG、IgM、IgA抗體和P24抗原。增加了敏感性和特異性。e完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:(1)(2)(3)(4)已包被抗原或抗體的固相載體;酶標記的抗原或抗體;酶的底物;陰性對照品和陽性對照品(定性測定中

3、)，參考標準品和控制血清(定量測定中)；(5)標本(和結(jié)合物)的稀釋液;(6)洗滌液;(7)酶反應(yīng)終止液。固相載體：常用聚苯乙烯固相載體形狀主要有三種：微量滴定板、小珠和小試管。以微量滴定板最為常用，專用于日LSA的產(chǎn)品稱為ELISA板，國際上標準的微量滴定板為8X12的96孔式。結(jié)合物（酶標記的抗體或抗原）常用的酶:辣根過氧化物酶（horseradishperoxidase,HRP)堿性磷酸酶(alkalinephosohatase,AP)年底物eHRP：常見的有鄰苯二胺(OPD)反應(yīng)后呈橙紅色，用酸終止酶反應(yīng)后為橙黃色，在492nm處有最高吸收峰四甲基聯(lián)苯胺(TMB)反應(yīng)后顯藍色，終止后呈

4、黃色，最適吸收波長為450nm。洗滌液常用含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水o終止液HRP常用強酸，最常見2mol/L硫酸軟洗滌顯色與終止標本的采取和保存e避免溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標記的ELISA測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。標本的采取和保存凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡。藪混濁或有沉淀的血清標本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測。反復(fù)凍融過程中的機械剪切力會破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，使抗體效價下降，因此血清標本如需作多次檢測，宜少量分裝凍

5、存。加樣準確加到微孔板底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡,加入后及時放入孵箱。孵育羲孵育的時間要掌握好，嚴格按照說明書操作。車注意封板，避免蒸發(fā)。反應(yīng)板不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡注意孵育中邊緣效應(yīng)洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應(yīng)步驟，但卻決定著實驗的成敗。森ELSIA就是靠洗滌來達到分離游離和酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)Oe聚苯乙烯等材質(zhì)對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，所以在洗滌時應(yīng)把這種非特異性的干擾物質(zhì)洗滌下來。羲各種試劑盒的洗液不要混用。按要求稀釋，洗液如果結(jié)晶應(yīng)待

6、其融解后配制。痂孔內(nèi)液體被洗板機吸收得越干凈洗滌效果更好，手工洗板防止洗液在孔內(nèi)形成殳泡。顯色與終止羲顯色劑不用過期顯色劑, 色的TMB顯色劑不可用肉眼可見淺藍，加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。如產(chǎn)生較多氣泡，則會導(dǎo)致假陽性。羲嚴謹?shù)脑O(shè)計，優(yōu)質(zhì)的試劑、正確的操作和良好的儀器是保證ELISA必要條件。嚴格遵照規(guī)定操作，必能得出準確的結(jié)果。HIV抗體篩查實驗質(zhì)量管理質(zhì)量保證質(zhì)量控制質(zhì)量評價行政支持應(yīng)將艾滋病檢測實驗室的建設(shè)、發(fā)展和質(zhì)量管理納入地方衛(wèi)生行政規(guī)劃，保證實驗室負責人和主要技術(shù)人員隊伍的穩(wěn)定，保證實驗室建筑和設(shè)備需要，給予充足的經(jīng)費支持，并進行經(jīng)常性監(jiān)督檢查。檢測技術(shù)人員需經(jīng)過上崗培訓(xùn)和在崗持續(xù)

7、培訓(xùn)。e上崗培訓(xùn)內(nèi)容至少應(yīng)包括：艾滋病檢測相關(guān)基礎(chǔ)知識,艾滋病相關(guān)檢測技術(shù)及管理要求，實驗操作，質(zhì)量保證與質(zhì)量控制，生物安全。要求掌握相關(guān)專業(yè)知識和技能，能獨立熟練地操作，并經(jīng)考核合格，持證上崗。在崗持續(xù)培訓(xùn)指在工作中要根據(jù)需要接受復(fù)培訓(xùn)，確證實驗室技術(shù)人員每年至少1次，篩查實驗室技術(shù)人員至少每2年1次，除接受檢測基本培訓(xùn)內(nèi)容外，要求了解相關(guān)技術(shù)、質(zhì)控及安全要求的新進展。實驗室在使用新方法前，須對技術(shù)人員進行培訓(xùn)，獲得資格后方可開展相應(yīng)工作oe檢測人員應(yīng)分為檢驗者、復(fù)核者、簽發(fā)者。復(fù)核者、簽者應(yīng)具備對檢測過程進任分析和解決問題的能力。環(huán)境條件艾滋病確證實驗室及篩查實驗室的設(shè)置及其建應(yīng)符合二級管

8、理罷HIV<7空間和凌藩，應(yīng)避免交叉污染。HCV,HBV及梅毒等血清學(xué)檢測在滿足實驗室環(huán)境：室溫1825樣品采集、運送和處理（略）檢測方法和試劑的選擇應(yīng)使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準的0應(yīng)選擇敏感性各實驗室更換試劑批號時，應(yīng)進行平行試驗,即新批號試劑在測定質(zhì)控品（已知結(jié)果）時能 夠獲得與原試劑相同的結(jié)果。所有試劑盒須嚴曹髓求藉翻衿解髓薯最遍蠲拆設(shè)備維護與校準設(shè)備校準實驗室應(yīng)設(shè)立常用儀器的維護及校準制度，以保證檢測工作正常運轉(zhuǎn)。必須經(jīng)國家法定部門定期（每年至少1次）校準的儀器至少包括：酶標儀/洗板機，加樣器，溫度計，高壓滅菌器。加樣器、溫濕度計須經(jīng)計量部門校準。必要時可根據(jù)需求每12

9、個季度進行期間核查。其他精密儀器及出具實驗結(jié)果的儀器，如生物安全柜、離心機等也必須定期（每年1次）校準,可請生產(chǎn)廠家校準。設(shè)備維護與校準 設(shè)備維護及使用記錄 酶標讀數(shù)儀、洗板機每個工作日核對濾光片波長，檢查洗板機管道是否通暢，是否有位良好；負壓是否符合規(guī)定要求。定期（每年至少1次）檢查、，SO現(xiàn)囁矍感售虛怒里塞Q根逅便矍內(nèi)曇有畛校用校程疑，對濾光并的常密度進擰稷準并保留記箓。驗過程中發(fā)現(xiàn)異常情況，應(yīng)隨時進行處理，可根據(jù)使用情況更必要的部件。 移液器定期（每年至少1次）一校準，.發(fā)現(xiàn)異常情況應(yīng)隨時進行校準。移液器的精密度應(yīng)在廠家說明書規(guī)定的范圍內(nèi)。設(shè)備維護與校準設(shè)備維護及使用記錄冰箱和孵育箱/水

10、浴箱每天檢查和記錄冰箱溫度，每個工作日檢查記錄孵育箱/水浴箱溫和孵育箱/水浴笄對溫度要求不同,要求冰箱溫度低于15C；放置要求4C保存的試劑盒的冰箱溫度應(yīng)在28C。霸其它儀器離心機，生物安全柜，高壓滅菌器等，每次使用前檢查儀器是否鼾亶翳露哮鶻懿播整爵整噩鐮瞥實驗耗材實驗室需選購質(zhì)量優(yōu)良的耗材，以保證檢測工作安全和結(jié)果的可靠性，并定期（每批次）或在更換產(chǎn)品時對耗材進行質(zhì)量評價。文件和文件管理e標準操作程序（sop）各級艾滋病實驗室要建立覆蓋主要工作內(nèi)容的sop文件，篩查及確證實驗室SOP文件至少應(yīng)包括：（1）樣品的接收、登記、處理、保存和運輸；（2）檢測方法和步驟；（3）試劑使用和保存；（4）儀

11、器的使用維護和校準；（5）質(zhì)量控制要求及程序；（6）結(jié)果解釋與報告;（7）保密程序；（8）實驗室數(shù)據(jù)、相關(guān)文件記錄與保存；（9）不確定樣品追蹤和處理；（10）實驗室安全防護及實驗室的清理和消毒。(9)附錄，包括相關(guān)的附加文、設(shè)備和試劑盒說明書等。文件和文件管理標準操作程序(SOP)"SOP至少應(yīng)包括以下內(nèi)容/(1)標題和編號(圖本?)；(2)編寫和修T訂日期(批準日期曲；(3)編寫和修訂人員(批準人？)姓、(4)方法、目的和應(yīng)用范圍；(5)檢測設(shè)備；(6)試劑及有效期;(7)安全防護相關(guān)步驟；(8)結(jié)果文件和文件管理標準操作程序（SOP）SOP編寫及修訂由各崗位工作人員起草，實驗室主

12、任審定，每年修訂一次。修訂應(yīng)該在實驗室主管人員（技術(shù)負責人）的領(lǐng)導(dǎo)下進行。所有工作人員要在所從事工作的SOP文件上簽名表示已經(jīng)閱讀并掌握了有關(guān)內(nèi)容。實驗過程中應(yīng)嚴格執(zhí)行標準操作程序（SOP），不得擅自修改。e文件和文件管理實驗原始記錄表應(yīng)按實驗要求，設(shè)計試驗操作原始記錄表，標明空白對照、陽性對照、陰性對照、外部對照以及待檢樣品的位置，便于指導(dǎo)實驗人員加樣。要注明試劑盒廠家、測定方法、批號、效期、操作人員和復(fù)核人員姓名及檢測日期。文件和文件管理結(jié)果報告分析結(jié)果及發(fā)出檢測報告前，應(yīng)注意須在試劑盒及外部質(zhì)控品結(jié)果滿足要求的前提下，對樣品進行分析。試劑盒及外部質(zhì)控品不合格，樣品需要重新檢測；復(fù)核人對檢

13、測結(jié)果進行仔細復(fù)核并對結(jié)果提出結(jié)論、簽發(fā)人對試驗結(jié)論進行審核、分析、總結(jié)、簽字。e文件和文件管理實驗原始記錄表應(yīng)按實驗要求，設(shè)計試驗操作原始記錄表，標明空白對照、陽性對照、陰性對照、外部對照以及待檢樣品的位置，便于指導(dǎo)實驗人員加樣。要注明試劑盒廠家、測定方法、批號、效期、操作人員和復(fù)核人員姓名及檢測日期。e文件和文件管理勤樣品登記和保存收到樣品后,建立唯一編碼,及時登記有關(guān)信息，包括受檢者姓名或代號、試管編號、性別、年齡、職業(yè)、送檢單位、人群類別、檢驗結(jié)果、送檢日期、報告日期、備注（必要時記錄通信地址）等。運送樣品必須有記錄。e文件和文件管理，文件存檔實驗原始記錄表、打印數(shù)據(jù)（熱敏紙不宜長期保

14、存）、檢測記錄表、樣品登記以及儀器設(shè)備維修和校準記錄、人員培訓(xùn)記錄等都應(yīng)該妥善存檔保存1。年以上。最好同時使用計算機保存各種文件和記錄。質(zhì)量控制是監(jiān)視全過程,排除誤差，防止變化,維持標準化現(xiàn)狀的一個管理過程。這一過程是通過一個反饋環(huán)路進行的。1）確定控制的對象；2）規(guī)定控制對象的標準（預(yù)期值）；3）制定或選擇控制方法和手段；3）測量實際數(shù)據(jù)；4）比較或較對實際數(shù)據(jù)與預(yù)期值之間的差異,并說明產(chǎn)生這一差異的原因。超出預(yù)定誤差范圍,報警系發(fā)出信號，反饋通道中斷。5）采取行動，解決差異。恢復(fù)原狀（原標準狀態(tài)）的手段發(fā)揮作用。試劑內(nèi)對照在質(zhì)控窗口內(nèi)出現(xiàn)質(zhì)控帶，該質(zhì)控帶是試劑自帶的內(nèi)部過程質(zhì)控，說明實驗操

15、作全部完成并且實驗所用材料處于工作狀態(tài)。清潔的檢測區(qū)背景是內(nèi)部陰性過程質(zhì)控。如實驗完成后未呈現(xiàn)紅色質(zhì)控帶，說明試劑盒內(nèi)質(zhì)控無效，該試驗結(jié)果無效，樣品須重檢。外部質(zhì)控品對照采用商用質(zhì)控品或自制質(zhì)控品。質(zhì)控品應(yīng)包含抗體陽性樣品和陰性樣品。自制質(zhì)控品可使用本室保留的陽性樣品。不能使用酶聯(lián)試驗的外部質(zhì)控品O下列情況需做質(zhì)量控制：更換試劑批號;更換檢測人員；更換包裝；每個檢測日;更換試劑廠家。出現(xiàn)以下問題，提示存在質(zhì)量隱患,應(yīng)引起重視:運輸包裝、內(nèi)盒或試劑盒的物理損傷；在單包裝內(nèi)存在混雜物質(zhì)；標簽出現(xiàn)錯誤、缺失或字跡模糊（特別是產(chǎn)品名稱或出產(chǎn)廠家名稱，批號和貨號，失效期或/和生產(chǎn)日期）；缺失目錄；泄漏或

16、污染；不適宜的存放條件；保護包裝紙破損或污染；未達到質(zhì)量控制標準（陽性/陰性控制結(jié)果以及質(zhì)控條帶出現(xiàn)與否等標志）建議：每個檢測日檢測一次陽性和陰性質(zhì)控品;如果日檢測量大于50份樣品，至少應(yīng)作2次質(zhì)控?；虻厥屑塁DC組織的實驗室能力驗證。開展快速檢測的篩查實驗室及檢測點須參加省級抗體檢測的統(tǒng)計學(xué)室內(nèi)質(zhì)量控制（質(zhì)量控制）該質(zhì)量控制主要采用質(zhì)控圖進行。質(zhì)控圖是把某一檢驗的性能數(shù)據(jù)與所計算出來的預(yù)期的“控制限”進行比較的圖。這種性能數(shù)據(jù)是在按規(guī)程正常進行時，按時間順序而抽選出來的，其目的是檢測檢驗過程中變異的“可追逆“性原因?！笨勺纺妗毙缘恼`差原因，是指除去隨機誤差以外的其他原因。試劑盒內(nèi)部對照質(zhì)控品

17、：即為試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清。每次實驗試劑盒內(nèi)部對照用于判斷每次實驗的有效性，但不能作為室內(nèi)質(zhì)控品使用。每一次檢測樣品時，必須按試劑盒說明書使用內(nèi)部對照，且不同批次不可混用。內(nèi)部對照結(jié)果無效，必須重新試驗。室內(nèi)質(zhì)控品為非試劑盒組份的外部質(zhì)控品，是為了監(jiān)控檢測的重復(fù)性而設(shè)置的，包括強陽性、弱陽性和陰性質(zhì)控血清。也可以只設(shè)置一個弱陽性質(zhì)控,以該試劑盒臨界值（Cutoff）的23倍為宜（目前國內(nèi)實驗室主要使用）。外部質(zhì)控品的作用是，判斷該批臨床樣品檢測的有效性，因此，每次實驗必須包含室內(nèi)質(zhì)控品，其結(jié)果無效，必須重新試驗。室內(nèi)質(zhì)控品可以是商品或?qū)嶒炇易孕兄苽?。室?nèi)質(zhì)控品的使用和質(zhì)量要求每一次

18、實驗必須使用室內(nèi)質(zhì)控品，以便監(jiān)控實驗的重復(fù)性。同時可以了解各批試劑盒的批間或孔間差異。室內(nèi)質(zhì)控品的管間或瓶間變異必須小于監(jiān)測系統(tǒng)預(yù)期的變異（CW20%）,并且質(zhì)控品應(yīng)穩(wěn)定、無菌，且不含有影響試劑反應(yīng)的防腐劑。e按照一周實驗用量分裝、標記、封口，-20凍存，質(zhì)控血清融化后不可反復(fù)凍融，存放28C冰箱，一周內(nèi)使用完畢。外部質(zhì)控品稀釋問題：多份無感染源、無污染、無溶血血清稀釋統(tǒng)計室內(nèi)質(zhì)控的主要表示方法一建立質(zhì)控圖,最常用的質(zhì)控圖是Levey-Jennings質(zhì)控圖，該圖使用累計和技術(shù)或趨勢分析技術(shù)的圖形提供系統(tǒng)偏移和漂移的狀況。eELISA方法檢測HIV抗體建立質(zhì)控圖步驟:建立質(zhì)控圖參數(shù)外部質(zhì)控品的

19、均值和標準差應(yīng)建立在實驗室常規(guī)使用方法對外部質(zhì)控品重復(fù)測定的基礎(chǔ)上。一般采用在不同批次檢測取得至少20個數(shù)據(jù)；如果僅做少量批次的檢測，也至少做5個批次的檢測,每個批次中不少于4個質(zhì)控血清測定結(jié)果，以建立一個臨時性的均值和標準差，當達到如批次數(shù)據(jù)后，替代臨時性的均值和標準差。建立質(zhì)控圖參數(shù):1）算術(shù)平均值（國）：代表一組質(zhì)控血清測定的S/CO值的均值。為了統(tǒng)計學(xué)上有顯著性意義，應(yīng)該采少20發(fā)（天）所測得的外部對照質(zhì)控血清S/CO4色2）標準差（s）：是描述樣品與均數(shù)之間離散程度的個指標，是與W O整3）變異系數(shù)（CU）：是反映各次S/CO值相對于均值一組S/CO值的標準差以謹示0計算出平均值。嘉

20、瞽覆度的一個指標，可以用來衡量檢測的重復(fù)性或限：由實驗室根據(jù)對外部質(zhì)控品檢測結(jié)果的均之差來確定。k量控制:IYe建立質(zhì)控圖參數(shù)-Vxx一iis=f"對CV=£xl00%X繪制質(zhì)控圖質(zhì)控圖是把檢測數(shù)據(jù)與已確定的（計算出的）“控制限”進勺比較的圖，包禽一條史心橫線和其上、下兩twwwa,笠援蔚凰胭序點人天寒驗塞每批次試驗質(zhì)控血清的測定樓。扇控圖繪制方驟包括：1）在常規(guī)條件下，對同一批血清連續(xù)測定20次（天）或以上，獲得一組S/CO值，求均數(shù)（）和標準差（s）,超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。2）將均值（）和標型差（s）分別在質(zhì)控框架圖中標示出來。以S/CO值作縱座標（Y軸），每一

21、批次試驗作橫座標（X軸），繪制質(zhì)控圖。3）從第21 ?該質(zhì)控框架,將每次質(zhì)控血清的檢測結(jié)果依次點入,檢驗進入質(zhì)控狀態(tài)。質(zhì)控規(guī)則及其使用實驗室在報告實驗結(jié)果之前必須評價質(zhì)控數(shù)據(jù),可通過圖形記錄的檢查或由計算機審核結(jié)果來決定。目前有許多質(zhì)控規(guī)則，常用的是12s和13s規(guī)則。質(zhì)控規(guī)則-3SD-2SD-SD質(zhì)控規(guī)則及其使用率，所以一般不采用。1）告警（12S）：當外部質(zhì)控品的S/CO值超出+2s范圍瓢辱糠告I鼠噓貢麝瓢是普需詈®2）失控（13S）：當外部質(zhì)控品的S/CO值超出+3s范工時，系統(tǒng)處于失控狀蠶本次實蟹結(jié)果不能被融，可能顯系統(tǒng)誤差、隨抗誤壁或外的質(zhì)強品穩(wěn)定性禧所致。3）漂移：連續(xù)幾

22、次（35次）外部質(zhì)控品的S/C。值都篥憑均值的一側(cè)則稱為漂移，提示實驗條件發(fā)生了較大的箕化。4）趨勢：連續(xù)幾次（57次）外部質(zhì)控品的S/CO值幾乎按一個方向分布時稱為趨勢，通常由參數(shù)的緩慢改變引起。質(zhì)控規(guī)則的使用應(yīng)檢出隨機誤差和系統(tǒng)誤差，即具有質(zhì)控規(guī)則及其使用高的檢出分析誤差的能力，同時應(yīng)具有較低的假失控概率?？疾煸囼炏到y(tǒng)的可靠性應(yīng)采用多規(guī)則質(zhì)擅方案,鑫則懿鍛能提高誤差檢出，并具有低的假失控e出現(xiàn)一次2s范圍的變化時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進一步觀察。出現(xiàn)下列情況時，應(yīng)暫停檢測查找原因：（1）出現(xiàn)一次急出3s范圍的變化；（2）連續(xù)兩次出現(xiàn)同一方向超出2s范圍的變化；（

23、3）連續(xù)四次出現(xiàn)同一方向的超出1s范圍的變化；（4）連續(xù)10次結(jié)果都在1s范圍內(nèi)，但落在均值線的同一側(cè)。e質(zhì)控圖的分析及失控處理實驗室應(yīng)建立質(zhì)控圖分析及失控情況處理程序。當質(zhì)控已有計劃并恰當?shù)貓?zhí)行時，要求可靠的均值和標準差用于計算質(zhì)控限，將假失控概率降到最低。當出現(xiàn)失控時，對原有外部質(zhì)控品重復(fù)測定或更換新的外部質(zhì)控品進行測定不是最有效的方法，必須找出問題發(fā)生的原因，找出解除問題的方法，并消除原因，防止將來出現(xiàn)同樣的問題。«質(zhì)控圖的分析及失控處理繪制和分析質(zhì)控圖的要點:1）分析數(shù)據(jù)時，超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。2）由專人負責建立質(zhì)控圖，每月定期召開質(zhì)控分析會，討論本月的質(zhì)量控制情況

24、。3）建議長期和穩(wěn)定地使用一種質(zhì)量好的試劑，更換不同廠家的試劑后，須重新繪制質(zhì)控圖。改用新批號試劑如外部質(zhì)控品測定出現(xiàn)較大變化也應(yīng)重新制作質(zhì)控圖。使用新批號或不同廠家的試劑，必須在質(zhì)控圖上注明使用日期。4）發(fā)現(xiàn)質(zhì)控結(jié)果失控，應(yīng)填寫報告單，上交質(zhì)量負責人，分析原因并決定是否發(fā)出檢測報告。5）使用新批次的外部質(zhì)控品時，如測定值出現(xiàn)較大變化，須重新繪制質(zhì)控圖。變異系數(shù)（cu）小于20%,表示外部質(zhì)控品處于穩(wěn)定狀態(tài)。“即刻法”質(zhì)控:在對同一外部質(zhì)控血清連續(xù)測定3次后，即可對第3次檢測結(jié)果進行質(zhì)控。步驟:計算國和s。計算SI上限和SI下限SI上限和SI下限與SI值表比較“即刻法”質(zhì)控:1）當SI上限和S

25、I下限vn2s時表示處于控制范圍內(nèi),可以繼續(xù)測定。繼續(xù)重復(fù)以上各項計算。2）當SI上限和SI下限有一值處于n2sn3s值之間時說明該值在2s3s范圍，處于“告警”狀態(tài)。3）當SI上限和SI下限有一值n3s值時說明該值已在3s范圍之外，屬“失控”?！凹纯谭ā敝荒茉谇?0次內(nèi)使用，超出即可采用LJ質(zhì)控圖方法。交質(zhì)量控制中常見的問題：1）只會用程序生成質(zhì)控圖進行質(zhì)控2）臨時框架一用到底3）以月為單位的質(zhì)控圖能否反映實際質(zhì)控狀態(tài)4）不對質(zhì)控中的異常進行分析5）無質(zhì)控分析報告k/質(zhì)量控制;推薦質(zhì)控方法：即亥U 法+Levey-Jen nings 質(zhì)控內(nèi)部質(zhì)量評價內(nèi)部質(zhì)量評價指由本實驗室組織的質(zhì)量評價,實

26、驗室應(yīng)定期組織內(nèi)部質(zhì)量評價，應(yīng)包括樣品接收、檢測、保存至發(fā)出檢測報告的各個環(huán)節(jié)。確證中心實驗室應(yīng)通過實驗室認證認可，并按照認證認可的相關(guān)要求建立質(zhì)量評價機制；鼓勵確證實驗室及篩查實驗室通過實驗室認證認可或按照認證認可的有關(guān)條款建立適宜的內(nèi)部質(zhì)量評價機制。外部質(zhì)量評價外部質(zhì)量評價由本實驗室之外的機構(gòu)或單位組織,包括對質(zhì)量保證和質(zhì)量控制工作的評價，職能工作考核主要是評價實驗室質(zhì)量保證工作，能力驗證(PT)或室間質(zhì)量評價主要是評價實驗室質(zhì)量控制工作，是檢驗實驗室對未知樣品獲得正確結(jié)果的能力。所有艾滋病檢測實驗室必須參加外部質(zhì)量評價，其中篩查實驗室應(yīng)參加省級職能工作考核和PT。職能工作考核組織者：參比

27、實驗室負責組織確證中心實驗室職能工作考核，確證中心實驗室負責組織轄區(qū)內(nèi)艾滋病確證實驗室和篩查實驗室的職能工作考核。頻度：每年對實驗室進行一次職能工作考核。方式：職能工作考核采取問卷調(diào)查和現(xiàn)場評價相結(jié)合的方式進行。所有實驗室必須接受問卷調(diào)查,可對部分實驗室(5-10%)進行現(xiàn)場抽查。問卷調(diào)查1）省級考核至少應(yīng)包括以下內(nèi)容：人員培訓(xùn)及能力，環(huán)境條件，儀器設(shè)備使用及校準，管理性文件及實驗記錄，檢測報告，試劑使用情況，樣品接受及保存情況，質(zhì)量保證和質(zhì)量控制。根據(jù)需要問卷內(nèi)容可進行合理調(diào)整?？?）考核程序:由組織者發(fā)放問卷,各參評實驗室應(yīng)嚴格按照要求，根據(jù)當年實際情況逐項如實填寫實驗室問卷調(diào)查表，并在規(guī)

28、定時間內(nèi)反饋。3）考核結(jié)果判定：組織者接到調(diào)查問卷后，根據(jù)評分標準對各實驗室的問卷進行匯總、統(tǒng)計、分析和評估。必要合格,時可調(diào)用有關(guān)實驗的原始記錄進行分析核查。分析各實驗室考核結(jié)果，并進行評分和評價：優(yōu)秀，良好,不合格?，F(xiàn)場評價1）評價內(nèi)容實驗室人員組成及其職責分工；實驗室分區(qū)、布局、恒溫設(shè)施；儀器設(shè)備及其使用、校準記錄;質(zhì)量保證文件、實驗室SOP文件及原始記錄；實驗室的安全防護措施，安全用品及安全規(guī)程；消毒與污物處理方法及設(shè)施；HIV檢測資料數(shù)據(jù)庫的建設(shè)、存檔、備份、安全和保密；樣品保存和安全；開展的HIV檢測項目和檢測試劑。其它：包括檢測對象，各人群檢測情況，檢測前后咨詢，檢測中遇到的難題

29、一?，F(xiàn)場評價2）工作程序?qū)嶒炇胰藛T全部到場，匯報人員組成及其職責分工、正常情況下實驗室收樣、檢測、直至發(fā)出報杳的全過程（專家組可隨時提問）。全面聽取上級主管部門和實驗室人員介紹歷年檢測工作情況匯報、存在照懶蠡組的工作建議和今后工作的設(shè)想。實驗室應(yīng)提供相應(yīng)的文對實驗室人員業(yè)務(wù)素質(zhì)、儀器設(shè)備、場地布局、室內(nèi)質(zhì)控及檢測對象、安全防護措施等進行現(xiàn)場評價。討論分析年度考核中存在的問題和經(jīng)驗，指出不正確或有出入的結(jié)果，共同分種原因（可隨時提出問題）。專家組對評價情況進行討論，根據(jù)評價全面情況寫出實驗室現(xiàn)場抽查報告并簽字。（當?shù)貙嶒炇胰藛T回避）。式兩份，一份保留在實驗室；另現(xiàn)場反饋：專家組向被評價單位及上級主管部門匯報評價情況及發(fā)現(xiàn)問驗有PT實&定盛確.愿It'包的要負演間主室確津驗油驗程實HC心中k證川證。鬻i.篩次1少至國用10由商一可置5O.播品成或河樣年。每詼構(gòu).藕級y及攘省”源搏rT、a、置11111者病。：織來室門性1織滋核度組品驗測陽實室組艾考頻年樣著,能力驗證（PT）考核結(jié)果及判定標準1）抗體檢測：實驗室檢驗結(jié)果評價采用PT得分實驗室PT得分=該項目檢測結(jié)果可接受樣品數(shù)該項目總的檢測