1、山藥多糖提取物對葡 萄糖苷酶的抑制實驗U!.所需試劑(1) PBS緩沖液稱取 8g NaC、0.2g KCl 1.44g NafeHPQ和 0.24g KfPOk,溶于 800ml蒸餾水中，用HCI調節(jié)溶液的pH值至6.8，最后加蒸餾水定容至1L稱取 NaCI 8g KCl 0.2g NazHPQ?12H2O 3.63g, KH2PC4 0.24g,溶于 900ml雙蒸水中，用鹽酸調pH值至6.8，加水定容至1L,常溫保存?zhèn)溆谩嶋H配制500ML即可。(2)3 mmol/L谷胱甘肽溶液谷胱甘肽分子量：307.32，稱取46.1mg谷胱甘肽定容至50ml蒸餾水中，即 為3 mmol/L谷胱甘肽溶

2、液。(3) 0.01 moI/L PNPG 溶液4-硝基苯-aD-吡喃葡萄糖苷分子量：301.25,稱取150.6mg定容至50ml蒸餾水水中，即為0.01 mol/L PNPG溶液。(4) 0.2 mol/L NS2CQ 溶液Na2CC3分子量：105.99,稱取 2.12g 定容至 100ml，即為 0.2 mol/L NazCQ 溶液一.實驗流程1】酶活性的測定1. 檢測樣配置取67 mmol/L磷酸鹽緩沖液(pH 6.8) 1.4 mL 3 mmol/L谷胱甘肽溶液40叮0.01 mg/mL a-葡萄糖苷酶溶液60叮 37 °C保溫 10 min 后, 加0.01 mol/L

3、 PNPG溶液100卩L搖勻,37 C保溫繼續(xù)反應10 min.加入0.2 mol/L Na2CQ溶液800卩L終止反應,于400 nm波長處測定吸光值.2. 參比配置取67 mmol/L磷酸鹽緩沖液(pH 6.8) 1.4 mL3 mmol/L谷胱甘肽溶液40卩丄水60卩,37 C保溫10 min后,力卩0.01 mol/L PNPG溶液100卩,搖勻,37 C保溫繼續(xù)反應10 min.加入0.2 mol/L Na2CQ溶液800卩L終止反應,于400 nm波長處測定吸光值.檢測樣吸光值為參比吸光值為2】多糖提取物抑制a葡萄糖苷酶活性的測定1.待測樣配置配置濃度為2 mg/mL的多糖酸性水提

4、取物分別取溶液20、40、60、80、100、150、200卩,于10mL塑料試管中 各加入67 mmol/L pH 6.8的磷酸緩沖液至1.4mL加3 mmol/L谷胱甘肽溶液40 0.01 mg/mL a葡萄糖苷酶溶液60卩, 37 C 保溫 10 min力卩0.01 mol/L PNPG溶液100卩,搖勻 37 C保溫繼續(xù)反應10 min加入0.2 mol/L Na2CQ溶液0.8 mL終止反應于波長400 nm處測定吸光值配置濃度為2 mg/mL的多糖酸性氯化鈉提取物分別取溶液20、40、60、80、100、150、200卩,于10mL塑料試管中各加入67 mmol/L pH 6.8的

5、磷酸緩沖液至1.4mL加3 mmol/L谷胱甘肽溶液40 0.01 mg/mL -葡萄糖苷酶溶液60卩, 37 C 保溫 10 min力卩0.01 mol/L PNPG溶液100卩,搖勻 37 C保溫繼續(xù)反應10 min加入0.2 mol/L Na2CQ溶液0.8 mL終止反應于波長400 nm處測定吸光值配置濃度為2 mg/mL的多糖中性水提取物分別取溶液20、40、60、80、100、150、200卩,于10mL塑料試管中 各加入67 mmol/L pH 6.8的磷酸緩沖液至1.4mL加3 mmol/L谷胱甘肽溶液40 L 0.01 mg/mL -葡萄糖苷酶溶液60卩, 37 C 保溫 1

6、0 min力卩0.01 mol/L PNPG溶液100 口,搖勻37 C保溫繼續(xù)反應10 min加入0.2 mol/L Na2CQ溶液0.8 mL終止反應于波長400 nm處測定吸光值2.空白樣配置取水100 各加入67 mmol/L pH 6.8的磷酸緩沖液至1.4mL加3 mmol/L谷胱甘肽溶液40 L 0.01 mg/mL -葡萄糖苷酶溶液60卩, 37 C 保溫 10 min力卩0.01 mol/L PNPG溶液100卩,搖勻 37 C保溫繼續(xù)反應10 min加入0.2 mol/L Na2CQ溶液0.8 mL終止反應于波長400 nm處測定吸光值空白樣吸光度3. 參比配置、分別取水2

7、0、40、60、80、100、150、200卩,于lOmL塑料試管中 各加入67 mmol/L pH 6.8的磷酸緩沖液至1.4mL加3 mmol/L谷胱甘肽溶液40 0.01 mg/mL -葡萄糖苷酶溶液60卩, 37 C 保溫 10 min力卩0.01 mol/L PNPG溶液100卩,搖勻 37 C保溫繼續(xù)反應10 min加入0.2 mol/L Na2CQ溶液0.8 mL終止反應于波長400 nm處測定吸光值對a葡萄糖苷酶活抑制率計算公式如下:抑制率 = I 1樣L 松!| X 100%注：A樣品為加有樣品反應后的吸光度；A本底為只加有樣品的吸光度；A空白為不加入樣品反應后的吸光度。本底吸光度（磷酸緩沖液