1 生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué) 實(shí)驗(yàn)講義 中藥藥劑學(xué)教研室編寫 2006 年 12 月 2 目目 錄錄 實(shí)驗(yàn)一 片劑溶出度試驗(yàn) 4 實(shí)驗(yàn)二 尿藥法測定水楊酸鈉片劑的生物利用度 7 實(shí)驗(yàn)三 撲熱息痛血管外給藥的藥物動力學(xué)研究 10 實(shí)驗(yàn)四 大鼠在體小腸吸收實(shí)驗(yàn) 13 實(shí)驗(yàn)五 氨茶堿藥物動力學(xué)的研究 15 3 生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)實(shí)驗(yàn)須知 生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)屬于藥物臨床應(yīng)用學(xué)科的范疇 具有綜合性強(qiáng) 應(yīng)用性強(qiáng) 創(chuàng)新性強(qiáng) 等特點(diǎn) 生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)實(shí)驗(yàn)是教學(xué)的重要組成部分 是理論與實(shí)踐結(jié)合的主要方式之一 通過實(shí)驗(yàn)課不僅能印證 鞏固和擴(kuò)展教學(xué)內(nèi)容 還能訓(xùn)練基本操作技能 培養(yǎng)良好的實(shí)驗(yàn)作風(fēng) 為保證實(shí)驗(yàn)課順利進(jìn)行 并達(dá)到預(yù)期的目的 實(shí)驗(yàn)中必須做到以下六個方面 1 預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 通過預(yù)習(xí) 明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求 對實(shí)驗(yàn)內(nèi)容做到心中有數(shù) 并能合理安 排實(shí)驗(yàn)順序與時間 要明確每個處方中藥物與輔料的用途 2 遵守實(shí)驗(yàn)紀(jì)律 不遲到 不早退 不曠課 保持實(shí)驗(yàn)肅靜 未經(jīng)許可 不得將實(shí)驗(yàn)室物品 帶離實(shí)驗(yàn)室 3 重視藥劑衛(wèi)生 進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿整潔的白工作服 先將工作臺面擦洗干凈再開始做實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)始終注意臺面 地面的整潔 各種廢棄物應(yīng)投入指定位置 不能隨手亂丟 更不能棄 入水槽內(nèi) 完成實(shí)驗(yàn)后 應(yīng)將容器 儀器清潔 擺放整齊 臺面擦凈 經(jīng)教師同意后方能離開 值 日生負(fù)責(zé)整理公用器材 清掃實(shí)驗(yàn)室 關(guān)好水 電 門 窗 4 細(xì)心操作 勤于思考 稱量藥品 試劑時 要在稱量前 拿取時 稱量時和稱量后 放回 時 進(jìn)行三次核對 稱量完畢應(yīng)立即蓋好瓶塞 放回原處 對劇毒藥品更要仔細(xì)核對名稱與劑量 并準(zhǔn)確稱取 實(shí)驗(yàn)中要嚴(yán)格控制好實(shí)驗(yàn)條件 認(rèn)真操作每一道工序 以保證成品質(zhì)量 實(shí)驗(yàn)成品應(yīng) 標(biāo)明名稱 規(guī)格 配制者 配制時間 并交教師驗(yàn)收 實(shí)驗(yàn)中遇到問題應(yīng)先獨(dú)立思考 再請教他人 在實(shí)驗(yàn)中逐步形成整潔 細(xì)致 嚴(yán)謹(jǐn) 冷靜 善于觀察 善于思考 勤于動手的實(shí)驗(yàn)風(fēng)格 5 正確使用儀器 注意安全 使用儀器時要按使用方法正確操作 不熟悉操作方法時 應(yīng)在 教師指導(dǎo)下使用 各種儀器 容器使用時要注意輕拿 輕放 用畢要清潔后放回規(guī)定位置 6 寫好實(shí)驗(yàn)報告 實(shí)驗(yàn)報告是考察學(xué)生分析總結(jié)實(shí)驗(yàn)資料能力和寫作能力的重要方面 亦是 評定實(shí)驗(yàn)成績的重要依據(jù) 實(shí)驗(yàn)報告的格式如下所示 實(shí)驗(yàn)?zāi)康募霸?寫出實(shí)驗(yàn)?zāi)康募霸?實(shí)驗(yàn)操作 寫出具體實(shí)驗(yàn)步驟和實(shí)驗(yàn)條件 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 記錄各采樣時間點(diǎn)及采樣的狀態(tài) 按要求對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理 并將全班數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合 求其平均值和標(biāo)準(zhǔn)差 討論 闡述實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)收獲與教訓(xùn) 建議等 思考題 回答實(shí)驗(yàn)思考題 每一實(shí)驗(yàn)內(nèi)容逐一按以上順序書寫實(shí)驗(yàn)報告 4 實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一 片劑溶出度試驗(yàn)片劑溶出度試驗(yàn) 一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1 掌握片劑溶出度測定方法及數(shù)據(jù)處理方法 2 了解溶出度測定的重要意義及其應(yīng)用 二 實(shí)驗(yàn)提示 片劑溶出度是指片劑主藥在體外協(xié)助適當(dāng)裝置于適宜介質(zhì)中溶出的速度和程度 測定溶出度的依據(jù)是 Noyes Whitney 的擴(kuò)散理論 近年生物藥劑學(xué)的研究表明 難溶性藥物的 片劑 崩解時限不能作為判斷難溶性藥物片劑吸收的指示 因?yàn)槠瑒┍澜夂蟮姆哿＿€不能直接被機(jī) 體所吸收 溶解是吸收的主要過程 溶解度小于 0 1 1mg mL 的藥物 其體內(nèi)吸收常受其溶出速 度的影響 溶出速度除與藥物的晶型 粒經(jīng)大小有關(guān)外 還與制劑的生產(chǎn)工藝 輔料 儲存條件等 有關(guān) 所以為了控制這些片劑的質(zhì)量 需測定血藥濃度或尿藥濃度 對于一些體外溶出度與體內(nèi)血 藥濃度有相關(guān)性的藥物 則可測定其主藥成分的體外溶出度作為控制該片劑質(zhì)量的一項(xiàng)指標(biāo) 本實(shí)驗(yàn)以對乙酰氨基酚片為樣品 測定對乙酰氨基酚的溶出度 原理 對乙酰氨基酚在溶出介質(zhì)中 在 257nm 波長處有最大吸收 因此可用紫外分光光度法 進(jìn)行測定 測定其在 257nm 的吸收度 A 用標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算其對應(yīng)濃度 三 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1 測出比較法的 A 值 用 A W表示 作對照品 取樣品 10 片 精密稱定 計(jì)算平均片重 W 將稱定的片子研細(xì) 再精密稱取相當(dāng)于 W 的量 加約 600mL 溶出介質(zhì) 稀鹽酸 24mL 加水至 1000mL 水浴 40 50 中攪伴溶解 冷至室 溫 移入 1000mL 容量瓶中 加入介質(zhì)至足量 搖勻 過濾 精密吸取濾液 1mL 置 50mL 容量瓶中 加入 0 04 氫氧化鈉溶液稀釋至 50mL 搖勻 照分光光度法 中國藥典 2005 年版二部附錄 IVA 在 257nm 的波長處測定吸收度 A 值 用 A W 表示 2 對乙酰氨基酚片溶出度的測定 A 儀器準(zhǔn)備 轉(zhuǎn)籃是用 40 目不銹鋼制成的圓筒 高 3 66cm 直徑 2 5cm 頂部通過金屬棒連 接于變速小馬達(dá)上 轉(zhuǎn)籃懸吊于盛有溶媒的容器中 距溶出杯底 2 5cm 使用前安裝就緒 開動電 機(jī)空轉(zhuǎn) 檢查電路是否暢通 有無異常噪音 轉(zhuǎn)籃的轉(zhuǎn)動是否平穩(wěn) 加熱恒溫裝置及變速裝置是否 正常 如一切符合要求 就可以開始測定樣品 B 測定方法 取溶出介質(zhì) 稀鹽酸 24mL 加水至 1000mL 1000mL 加熱至 37 置溶出杯中 調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)籃轉(zhuǎn)速為 100 轉(zhuǎn) 分 將精密稱定重量的藥片一片 W 放在轉(zhuǎn)籃內(nèi) 以溶出介質(zhì)接觸藥片 時為零時刻開始計(jì)時 然后按 2 5 10 15 20 30 分鐘定時取樣 取樣位置固定在轉(zhuǎn)籃上端液 面中間 距離杯壁 1cm 處 每次取樣 5mL 將樣品液過濾 吸取濾液 1mL 余按實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1 測 出比較法 A 值項(xiàng)下 自 置 50mL 容量瓶 始 依法測定規(guī)定時間藥片溶出的 A 值 以 As 表 示 注 1 對所用的溶出度測定儀 應(yīng)預(yù)先檢查其是否運(yùn)轉(zhuǎn)正常 并檢查溫度的控制 轉(zhuǎn)速等是否精確 升降轉(zhuǎn)籃是否靈活等 2 溶出方法分轉(zhuǎn)籃法 槳法和小杯法三種 本實(shí)驗(yàn)選用轉(zhuǎn)籃法 轉(zhuǎn)籃的尺寸和結(jié)構(gòu)應(yīng)符合藥典 規(guī)定 3 每次取出樣品液后 應(yīng)同時補(bǔ)充相同體積的空白溶液 4 根據(jù)藥典規(guī)定 應(yīng)同時測定 6 片的溶出度 鑒于實(shí)驗(yàn)時間限制 每實(shí)驗(yàn)組僅要求完成 1 片的 測試 5 四 測定結(jié)果與數(shù)據(jù)處理 1 每片測定結(jié)果記錄 Aw 溶出度的計(jì)算 累計(jì)溶出 2 用普通坐標(biāo)紙作圖求 t50 以累計(jì)溶出百分比對溶出時間逐一描點(diǎn) 用圖估法擬合 平滑曲線 過累計(jì)溶出百分比 50 處引一 與 t 軸平行的直線 與溶出曲線相交于 A 過 A 點(diǎn)向 t 軸引垂線交于 t1 此 t1即為 t50 此值供方差分 析用 3 用威布爾分布概率求 t50 td和 m 三個參數(shù) 從上面所作溶出曲線所見 累計(jì)溶出百分比對相應(yīng)時間各數(shù)據(jù)在一般直角坐標(biāo)紙上作圖 并不 成直線關(guān)系 但可將累計(jì)溶出百分比與時間的關(guān)系看作統(tǒng)計(jì)學(xué)上的概率分布函數(shù) 用威布爾概率紙 使之直線化 從圖上即可極為方便的找到 t50 溶解 50 所需時間 td 溶解 63 2 所需時間 及 m 斜率 三個參數(shù) 在威布爾概率紙作圖的基本步驟如下 A 以 F t 尺代替累計(jì)溶出百分比 t 尺為釋放時間 用原數(shù)據(jù)描點(diǎn) 若各點(diǎn)基本上呈直線分布 則可直 接擬合一條直線 尤其注意照顧 F t 在 30 至 70 范圍內(nèi)的點(diǎn) 使之優(yōu)先貼近該直線 B 若各點(diǎn)排布呈曲線狀 則沿曲線趨勢延伸 與 t 尺交點(diǎn)的數(shù)值作為 的初步估計(jì)值 以 F t 對 t 再作圖 若所得各點(diǎn)的排列接近直線 則擬合成直線 若 F t 對 t 作圖仍為一曲線 則可用 類似的方法反復(fù)修改 直至作得一直線為止 C 在 F t 對 t 或 F t 對 t 所作圖上擬合一直線 有 X 1 和 Y 軸的交點(diǎn) 稱 m 點(diǎn) 作該直線 的平行線 該平行線和 Y 軸交點(diǎn)在 Y 尺上投影點(diǎn)的讀數(shù)即為 m 值 取絕對值 D 所擬合的直線與 X 軸的交點(diǎn)在 t 尺上投影點(diǎn)的讀數(shù)即為 m 的估計(jì)數(shù) 本實(shí)驗(yàn)中稱為 td 值 溶出 63 2 所需時間 與溶出 50 的交點(diǎn)在 t 尺上的投影點(diǎn)的讀數(shù)即為 t50 E 用威布爾概率紙求出 t50 td和 m 三個參數(shù)后 可利用方差分析 相關(guān)與回歸分析的數(shù)理統(tǒng)計(jì)法 來評定同類產(chǎn)品不同批號或不同廠家的片劑質(zhì)量 另外 還可以評定同一產(chǎn)品體內(nèi) 體外的相關(guān)程 度 4 用溶出參數(shù)作方差分析 將兩個批號共八片 按本實(shí)驗(yàn)方法測得的累計(jì)溶出百分比共八組數(shù)據(jù) 經(jīng)威布爾概率紙作圖得 八條直線 由圖中求出 t50 td和 m 值 將所得參數(shù)列表如下 供方差分析用 No 123456 取樣時間 min 2510152030 As Aw 累計(jì)溶出 5 6 思考題 檢查固體制劑的溶出度有何意義 哪些種類的制劑需檢查溶出度 參數(shù)方差來源自由度離差平方和方差F 值顯著性 t50 組間 組內(nèi) 合計(jì) td 組間 組內(nèi) 合計(jì) m 組間 組內(nèi) 合計(jì) 7 實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)二 尿藥法測定水楊酸鈉片劑的生物利用度尿藥法測定水楊酸鈉片劑的生物利用度 一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1 通過實(shí)驗(yàn)掌握用尿藥速率法求算體內(nèi)藥動學(xué)參數(shù) 2 通過實(shí)驗(yàn)掌握藥物的生物利用度的一般研究方法 3 通過測定求出水楊酸鈉的生物半衰期 二 實(shí)驗(yàn)原理 藥物在體內(nèi)的吸收 分布 代謝和排泄等過程既有區(qū)別 又有聯(lián)系 具有一定相關(guān)性 藥物在體 內(nèi)的速度過程變化規(guī)律及生物利用度等相關(guān)參數(shù)的提取 要通過實(shí)驗(yàn)采用血藥濃度法 尿藥濃度法 或唾液藥物濃度法等方法獲得 在多數(shù)情況下 尿藥濃度高于血藥濃度 定量分析精密度好 測定方法較易建立 且取樣方便 可免除受試者多次抽血的痛苦 因此 在體內(nèi)藥物大部分以原型從尿中排出的條件下 通?？捎媚?藥法提取消除速度常數(shù) 生物半衰期等動力學(xué)參數(shù) 生物利用度反應(yīng)藥物在體內(nèi)被吸收的速度和程度 它可分為相對生物利用度與絕對生物利用度 當(dāng)藥物的口服制劑與靜脈注射劑相比較 可求算絕對生物利用度 與其他制劑相比較 可求算相對 生物利用度 本實(shí)驗(yàn)采用口服真溶液劑為參比 測定水楊酸鈉片劑的相對生物利用度 三 實(shí)驗(yàn)方法 1 繪制水楊酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密稱取干燥恒重的水楊酸鈉 0 5g 置 100mL 容量瓶中 加蒸餾水溶解并稀釋至刻度 各精密 吸取此溶液 1 5 2 5 3 5 4 5 5 5mL 分別置 50mL 容量瓶中 加蒸餾水稀釋至刻度 搖勻 得濃 度分別為 0 15 0 25 0 35 0 45 0 55mg mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液 取干燥潔凈的帶塞玻璃試管 5 支 分別精密吸取以上各溶液的水楊酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 1mL 于試管 中 再分別加入 Fe NO3 3 試管 5mL 混合均勻 用 72 100 型分光光度計(jì)于 540nm 波長處測定吸 收度 將測得數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析 得吸收度對標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的回歸方程 即為標(biāo)準(zhǔn)直線 參比液以 蒸餾水 1mL 代替標(biāo)準(zhǔn)液 2 測定生物利用度 A 實(shí)驗(yàn)方法 I 選擇受試者的條件 II 對受試者的要求 a 服藥前 48 小時開始 不吃任何含水楊酸鹽類食物 b 小便應(yīng)按規(guī)定收集完全 不得損失 并保持尿樣不污染 在收集尿樣期間 內(nèi)不作劇烈運(yùn)動 c 早晨收集空白尿 空腹時口服水楊酸鈉片 0 6g 對照組口服相當(dāng)于 0 6g 的 水楊酸鈉真溶液 d 按以下時間喝水和收集尿樣 并記錄排尿量 服藥當(dāng)天 7 30 喝水 150mL 7 55 小便 收空白尿 8 00 用 250mL 溫開水吞服 0 3g 片的水楊酸鈉片兩片 8 30 收集尿樣 9 00 收集尿樣 10 00 收集尿樣 喝水 200mL 12 00 收集尿樣 喝水 150mL 8 14 00 收集尿樣 喝水 100mL 16 00 收集尿樣 喝水 100mL 18 00 收集尿樣 20 00 收集尿樣 喝水 100mL 22 00 收集尿樣 第二天 8 00 收集尿樣 22 00 收集尿樣 每次收集尿樣的時間必須小便一次 在上一次收集尿樣后所排出的小便 均要收集完全 作為 下一個時間尿樣 每次收尿容器必須洗凈 用蒸餾水清洗 瀝干備用 III 受試者服用樣品的安排 本實(shí)驗(yàn)僅作兩種劑型 同一受試者二次服藥之間應(yīng)間隔 4 天以上 IV 測定方法 每次尿樣測量體積后 精密吸取 1mL 于干燥潔凈的試管中 加 Fe NO3 3試管 5mL 按 繪制 標(biāo)準(zhǔn)曲線 項(xiàng)下進(jìn)行測定 參比液用空白尿 1mL 替代含藥尿樣 如顯色時發(fā)現(xiàn)色澤太深 則根據(jù) 情況將尿樣稀釋后取樣測定 如果氣候炎熱 須將空白尿及尿樣置冰箱中保存 以防長霉發(fā)酵 影 響結(jié)果的準(zhǔn)確性 B 數(shù)據(jù)處理 I 將所測各時間尿樣的吸收度代入標(biāo)準(zhǔn)直線 計(jì)算出該尿樣濃度 mg mL 再乘以尿量 如尿樣稀釋則需乘上稀釋倍數(shù) 計(jì)算出各時間的尿藥排泄量 II 以 lg x t 對相鄰兩時間的中點(diǎn)時間 t中 作尿藥排泄速度曲線 x 各時間的尿藥排泄量 t 相鄰兩次集尿時間的間隔時間 作圖 III 根據(jù)作出的尿藥排泄曲線求出水楊酸鈉片劑和真溶液的動力學(xué)參數(shù) 斜率 b Y2 Y1 X2 X1 或?qū)⑶€后部直線部分進(jìn)行回歸分析 求出直線斜率 b 消除速度常數(shù) k 2 303 b 生物半衰期 t1 2 0 693 k IV 生物利用度 以真溶液為參比 求片劑的相對生物利用度 生物利用度 V 尿藥法數(shù)據(jù)記錄 姓名 性別 產(chǎn)品廠家及批號 藥量 服藥時間 劑型消除速度常數(shù) k半衰期 小時 總排泄量 mg 片劑 真溶液 9 思考題 血藥濃度法與尿藥法測定藥物動力學(xué)參數(shù)各有何特點(diǎn) 口服水楊酸鈉真溶液口服水楊酸鈉片 序 號 集尿 時間 小 時 尿量 mL 稀釋 倍數(shù) 吸收 度 平均濃度 mg mL 排泄量 mg 尿量 mL 稀釋 倍數(shù) 吸收 度 平均濃度 mg mL 排泄量 mg 10 20 5 31 42 54 66 78 810 912 1014 1124 1238 累計(jì)累計(jì) 真溶液片劑 序 號 集尿時 間 h 中點(diǎn)時 間 t 中 間隔時 間 t 排泄量 X 平均尿藥 速度 X t Lg X t 排泄量 X 平均尿藥 速度 X t Lg X t 0 10 50 250 5 210 750 5 321 51 4432 5652 6872 71092 812112 914132 10241910 11383114 10 實(shí)驗(yàn)三實(shí)驗(yàn)三 撲熱息痛血管外給藥的藥物動力學(xué)研究撲熱息痛血管外給藥的藥物動力學(xué)研究 一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1 通過本實(shí)驗(yàn) 掌握生物樣品分析方法的基本要求 2 掌握撲熱息痛的血藥濃度測定方法及有關(guān)參數(shù)的計(jì)算 二 實(shí)驗(yàn)原理 撲熱息痛與亞硝酸發(fā)生親電取代反應(yīng) 生成 2 亞硝基 4 乙酰氨基苯酚 用氨基磺酸銨除去過 量的亞硝酸 在堿性條件下 2 亞硝基 4 乙酰氨基苯酚于 430nm 波長處有最大吸收 三 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1 標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密稱取撲熱息痛 100mg 以 95 乙醇 3mL 溶解加適量水 轉(zhuǎn)移于 100mL 容量瓶中 加水至 刻度 充分搖勻 得撲熱息痛儲備液 1mg mL 精密吸取儲備液 2 5mL 準(zhǔn)確稀釋至 10mL 得 250 g mL 的標(biāo)準(zhǔn)液 分別精密吸取 250 g mL 的標(biāo)準(zhǔn)液 0 3 0 6 0 9 1 2 1 5 1 8mL 于離心管中 分別加水使 成 2mL 各加家兔血漿 1 5mL 搖勻 再加入 2mL10 三氯醋酸 充分混合再離心 20 分鐘 3000rpm 吸取上清液 4mL 于 25mL 帶塞刻度試管中 加入 1mL6N 鹽酸 1mL20 NaNO2溶 液 搖勻 放置 5 分鐘 使反應(yīng)完全 慢慢加入 2mL15 氨基磺酸 振搖至無氣泡產(chǎn)生 流水冷卻 加入 2 5mL20 NaOH 搖勻 用 2cm 比色杯于 430nm 波長處測定吸收度 用蒸餾水 2mL 代替標(biāo)準(zhǔn) 液同法處理 作空白對照 求出回歸方程 標(biāo)準(zhǔn)曲線 回歸方程 2 回收率試驗(yàn) 分別精密吸取 250 g mL 的標(biāo)準(zhǔn)液 0 3 0 9 1 8mL 于離心管中各三份 分別加水使成 2mL 各加家兔血漿 1 5mL 搖勻 以下操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下 加入 2mL10 三氯醋酸 充分混合 起 依法操作 測定吸光度 代入回歸方程求其濃度 并與加入時濃度相比求出回收率 標(biāo)準(zhǔn)液 mL 0 30 60 91 21 51 8 濃度 g mL 50100150200250300 A 3 次 A 初始濃度 g mL 吸光度 測得濃度 g mL 回收率 回收率 均值 RSD 21 43 64 29 128 58 11 3 精密度試驗(yàn) 精密吸取 250 g mL 的標(biāo)準(zhǔn)液 0 3 0 9 1 8mL 于離心管中各 6 份 分別加水使成 2mL 各加 家兔血漿 1 5mL 搖勻 以下操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下 加入 2mL10 三氯醋酸 充分混合 起 依法 操作 測定吸光度 求其日內(nèi)精密度 4 樣品穩(wěn)定性考察 將上述標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下的 0 9mL 樣品處理好后于 0 5h 1h 2h 3h 4h 測定吸收度 考察處 理后樣品室溫放置時的穩(wěn)定性 5 樣品測定 取家兔 5 只 雌兔不得懷孕 每只體重 2 5 kg 3 kg 給藥前先從耳靜脈取血 3mL 留作對照 然后按 200mg kg 的劑量 肌注給藥 給藥前禁食 12 小時 給藥后按第 3 5 10 15 25 30 40 60 100 140 180 分鐘 定時從兔耳靜脈取血 3 mL 用干燥并帶有 適量肝素鈉的離心管集血 輕輕搖勻 離心 10 分鐘 3000rpm 吸取血漿于干燥試管中 置冰箱 中保存?zhèn)溆?取出無藥血漿與各時刻的含藥血漿 室溫解凍后進(jìn)行測定 吸取 1 5mL 血漿 置刻度離心管中 加水 2mL 混勻 以下操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下 加入 2mL10 三氯醋酸 充分混合 起 依法測定吸收度 代入標(biāo)準(zhǔn)曲線 計(jì)算出該時刻的血藥濃度 以無藥血漿按同法處理作對照 初始濃度 g mL 吸光度吸光度均值RSD 21 43 64 29 128 58 時間 h 00 51234 吸光度 均值 RSD 12 6 結(jié)果記錄 兔子體重 給藥劑量 測定記錄 尾段直線相斜率 K 殘數(shù)斜率 ka 四 數(shù)據(jù)處理 1 以血藥濃度 g mL 為縱坐標(biāo) 時間為橫坐標(biāo) 作吸收曲線圖 血藥濃度 時間曲線 2 以血藥濃度 g mL 的對數(shù)對時間作血藥濃度 時間的半對數(shù)圖 從圖中求出消除速度常數(shù) K 再用殘數(shù)法求出吸收速度常數(shù) ka 3 提取參數(shù) t1 2 吸收 t1 2 消除 tp Cp A 吸收半衰期 t1 2 吸收 0 693 ka B 消除半衰期 t1 2 消除 0 693 K C 血藥濃度 時間曲線下的總面積 AUC0 D 達(dá)峰時間 tp 根據(jù) ka 及 K 求出達(dá)峰時間 tp tp lnka lnK ka K 2 303 lgka lgK ka K 拋物線擬合法 用拋物線 C p Qt Rt2的峰段代替藥時曲線的峰段 選取實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中最大濃度 C I 左右三點(diǎn) ti 1 C I 1 ti Ci ti 1 C I 1 代入 則有 C I 1 P Q ti 1 R t2i 1 Ci P Q ti R t2i C I 1 P Q ti 1 R t2i 1 解上述方程組 求得 P Q R 的值 拋物線的峰丟按橫坐標(biāo) 峰時 為 tp Q 2R E 峰濃度 Cp Cp A e Ktp e Katp 編號1234567891011 T min 35101525304060100140180 A A C g mL lgC T min C g mL 尾段直線相外推線濃度 的對數(shù) lgC外推 外推線濃度 C外推 殘數(shù)濃度 g mL C殘 C外推 C 殘數(shù)濃度的對數(shù) lgC殘 13 A 截距 可以從 lgC t 圖中求得 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 思考題 血藥濃度法求算藥物動力學(xué)參數(shù)的原理 血藥濃度法測定藥物動力學(xué)參數(shù)的要求 14 實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)四 大鼠在體小腸吸收實(shí)驗(yàn)大鼠在體小腸吸收實(shí)驗(yàn) 一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1 掌握大鼠在體小腸吸收的實(shí)驗(yàn)方法 2 掌握計(jì)算藥物的吸收速度常數(shù) Ka 以及每小時吸收率的計(jì)算方法 二 實(shí)驗(yàn)原理 大多數(shù)藥物以被動擴(kuò)散方式從生物膜的高濃度側(cè)通過膜向低濃度側(cè)轉(zhuǎn)運(yùn) 被動擴(kuò)散可用 Fick 第一定律來描述 該定律指出 擴(kuò)散速度 dC dt 正比于膜兩側(cè)的濃度差 C 因此有 1 b dc Ka CKa CC dt 式中 C 是消化道中的藥物濃度 Cb是血液中藥物濃度 Ka 是吸收速度常數(shù) 其值大小取決于 藥物的擴(kuò)散常數(shù) 吸收膜的厚度與面積以及藥物對膜的穿透性 胃腸道吸收的生物學(xué)過程包括這樣 一個系統(tǒng) 即藥物從胃腸道屏障的一側(cè)向另一側(cè)擴(kuò)散 因?yàn)檫M(jìn)入血液的藥物很快分布到全身 故與 吸收部位比較 血中藥物濃度維持在很低的水平 幾乎在所有口服給藥的情況下 對于胃腸道來說 血液的作用猶如 水槽 并且在整個吸收相保持很大的濃度梯度 C Cb 則 C C 于是 1 式可以簡化為 2 dc KaC dt 此為一級速度方程式的標(biāo)準(zhǔn)形式 胃腸道按一級動力學(xué)從消化液中吸收大多數(shù)藥物 用消化液 中藥物量的變化 dXa dt 表示吸收速度 則 3 Xa KaX dt 將 3 式積分 并在方程兩側(cè)同取對數(shù) 4 lnln 0 XaXaKat 式中 Xa 為消化液中藥物量 Xa 0 為零時刻消化液中藥物量 Ka 為藥物吸收速度常數(shù) 以 lnXa 對 t 作圖得一條直線 其斜率為藥物在小腸中的吸收速度常數(shù) Ka 三 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1 實(shí)驗(yàn)操作 1 取 85ml 供試液 100ml Krobs Ringer 試液含 SD2mg 酚紅 2mg 加入循環(huán)裝置中 2 將實(shí)驗(yàn)前禁食一夜 體重 200g 左右的雄性大鼠 稱重 腹腔注射戊巴比妥鈉 劑量為 100g 體重注射 0 4ml 麻醉后并加以固定 3 沿腹中線打開腹腔 自十二指腸上部及回腸下部各剪開一個小口 各插入直徑為 0 5cm 的 玻璃管 用線扎緊 并用 37 的生理鹽水將小腸內(nèi)容物沖洗干凈 然后將大鼠串聯(lián)到循環(huán) 裝置中 4 開動蠕動泵 以 5ml 分的流速循環(huán) 10 分鐘后流速調(diào)至 2 5ml 分 5 自燒瓶中取樣 1 5ml 1ml 0 5ml 各一份 為 和酚紅零時間樣品 并補(bǔ)加 2ml 酚紅溶液 每毫升 Krobs Ringer 試液含酚紅 20 g 其后每 15 分鐘取樣 1ml 0 5ml 各一份 同 時補(bǔ)加酚紅溶液 2ml 由于酚紅不被小腸吸收 用以測定水被小腸吸收的量 2 定量方法 1 磺胺嘧啶的定量 取樣品 1ml 加入 1mol L 5ml 加入 0 1 NaNO2 1ml 搖勻 放置 3 分鐘 加入 0 5 氨基磺 酸氨 1ml 搖勻 放置 3 分鐘 加入 0 1 萘乙二胺 2ml 搖勻 放置 20 分鐘 在波長 555nm 處測 定吸收度 15 參比溶液的配制 取 1ml 供試液按磺胺嘧啶的定量方法不加萘乙二胺顯色劑 2 酚紅定量 取酚紅溶液 0 5ml 加入 0 2mol L NaOH 5ml 搖勻 在波長 555nm 處測定吸收度 參比溶液 0 2mol L NaOH 溶液 3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 1 酚紅的標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密稱取酚紅 100mg 置 1000ml 容量瓶內(nèi) 加 1 Na2CO3溶液溶解并稀釋至刻度 制成 100 g ml 的儲備液 取 1 2 3 4 5 6ml 的儲備液于 10ml 容量瓶中 加蒸餾水至刻度 自上 述各溶液中吸取 0 5ml 按酚紅的定量方法測定吸收度 并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 2 磺胺嘧啶標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密稱取磺胺嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品 10mg 置 100ml 容量瓶中 以蒸餾水溶解并稀釋至刻度 使成 100 g ml 的儲備液 取儲備液適量 稀釋成 20100 g ml 的溶液 分別吸取 2 4 6 8 10ml 于 10ml 容量瓶中 加蒸餾水至刻度 從上述溶液中吸取 1ml 按磺胺嘧啶定量方法測定吸收度 并 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 四 數(shù)據(jù)處理 1 將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)按表 1 中公式進(jìn)行計(jì)算 表表 1 大鼠在體小腸吸收量的計(jì)算式大鼠在體小腸吸收量的計(jì)算式 取樣時 間 h SD 吸收度 SD 濃度 酚紅 吸收度 酚紅 濃度 供試液體積剩余藥量 循環(huán)前A0C0A 0C 0V0 85mlP0 85C0 0A1C1A 1C 1 00 1 1 C V V C 11 1 PCV 0 25A2C2A 2C 2 11 2 2 1 5 40VC V C 1 1 1 5 n nnni i PC VC 0 5A3C3A 3C 3 22 3 3 1 5 40VC V C 33312 1 5 PC VCC tnAnCnA nC n 11 1 5 40 nn n n VC V C 1 1 1 5 n nnni i PC VC 2 以剩余藥量的對數(shù)對時間作圖 求出吸收速度常數(shù) Ka 和每小時吸收率 每小時吸收率 零時間剩余藥量 60 分鐘剩余藥量 零時間剩余藥量100 思考題 用小腸剩余藥量測定吸收速率常數(shù)的原理 16 17 實(shí)驗(yàn)五實(shí)驗(yàn)五 氨茶堿藥物動力學(xué)的研究氨茶堿藥物動力學(xué)的研究 一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1