第二十五章 厭氧菌的鑒定 Anaerobicbacteria檢驗(yàn)系劉濤 掌握厭氧芽胞梭菌的生物學(xué)特性掌握厭氧芽胞梭菌的檢驗(yàn)程序掌握厭氧菌的培養(yǎng)方法熟悉常用厭氧菌鑒定試驗(yàn) 學(xué)習(xí)目標(biāo) 厭氧菌的概念與分類 厭氧菌是指有氧條件下不能生長 無氧條件 不是絕對 下才可以生長的一類細(xì)菌 根據(jù)結(jié)構(gòu)分厭氧芽胞梭菌和無芽胞厭氧菌厭氧芽胞性梭菌屬包括130個(gè)種的細(xì)菌 無芽胞厭氧菌有40多個(gè)菌屬 300多個(gè)菌種和亞種 厭氧菌在正常人體內(nèi)的分布 分布廣泛 包括口腔 上呼吸道 胃腸道及泌尿生殖道粘膜和皮膚 絕大多數(shù)為無芽孢厭氧菌當(dāng)機(jī)體防御功能減弱時(shí) 可能成為條件致病菌 致病的原因 組織缺氧或氧化還原電勢降低穿刺傷等封閉性傷口 血管壓迫 腫瘤壓迫等等機(jī)體免疫力低下機(jī)體局部屏障破壞 臨床癥狀 感染部位產(chǎn)生大量氣體 組織膿腫和壞死 皮下有捻發(fā)音 是產(chǎn)氣夾莢膜梭菌感染的特征分泌物有惡臭 或?yàn)榘导t色 分泌物涂片經(jīng)革蘭染色 發(fā)現(xiàn)細(xì)菌 而培養(yǎng)陰性發(fā)生在粘膜附近的感染深部外傷 厭氧菌標(biāo)本的采集和送檢 標(biāo)本的采集和送檢1 標(biāo)本決不能被正常菌群污染 2 應(yīng)盡量避免空氣3 培養(yǎng)的最佳標(biāo)本為組織標(biāo)本 標(biāo)本的采集 標(biāo)本的送運(yùn)與處理 針筒運(yùn)送法無菌小瓶運(yùn)送法棉拭運(yùn)送法標(biāo)本充盈運(yùn)送法 適合大量液體標(biāo)本的運(yùn)送組織塊運(yùn)送法厭氧袋運(yùn)送法 分離鑒定程序 第三節(jié) 厭氧芽孢梭菌 重點(diǎn)掌握 大多為嚴(yán)格厭氧菌 G 芽胞直徑比菌體粗 使菌體膨大呈梭狀 對熱 干燥和消毒劑均有強(qiáng)大的抵抗力 除產(chǎn)氣莢膜梭菌等極少數(shù)例外 均有周鞭毛 無莢膜 一 破傷風(fēng)梭菌 破傷風(fēng) tetanus 的病原菌 發(fā)病后機(jī)體呈強(qiáng)直性痙攣 抽搐 可因窒息或呼吸衰竭死亡 一 形態(tài)與染色菌體細(xì)長 有周身鞭毛 無莢膜 形成芽胞后 使細(xì)菌呈鼓槌狀 G 破傷風(fēng)梭菌的芽胞 一 生物學(xué)性狀 純培養(yǎng)初期 18 24h 涂片革蘭染色形態(tài) 破傷風(fēng)梭菌 純培養(yǎng)后 24 48h 涂片革蘭染色形態(tài) 轉(zhuǎn)陰 二 培養(yǎng)特性 嚴(yán)格厭氧血平板上 有 溶血菌落2 4mm 扁平 半透明 灰白色 邊緣不齊 周邊呈疏松羽毛狀 破傷風(fēng)梭菌在BA上的羽毛狀菌落 在皰肉培養(yǎng)基上的生長現(xiàn)象 皰肉培養(yǎng)基肉湯輕度混濁 肉渣部分消化 微變黑 產(chǎn)生少量氣體 有腐敗惡臭 生化反應(yīng) 不發(fā)酵糖類 分解蛋白質(zhì)液化明膠 產(chǎn)生H2S多數(shù)菌株吲哚陽性不還原硝酸鹽對蛋白質(zhì)有微弱的消化作用 芽胞抵抗力很強(qiáng)75 80 10min仍保持活力100 1小時(shí)可完全被破壞在干燥的土壤和塵埃中可存活數(shù)年 三 抵抗力 致病條件 傷口需形成厭氧微環(huán)境傷口窄而深 如刺傷 有泥土或異物污染大面積創(chuàng)傷 燒傷 壞死組織多 局部組織缺血有需氧菌或兼性厭氧菌混合感染的傷口無侵襲力 僅在局部繁殖 外毒素致病 二 致病物質(zhì)對氧敏感的破傷風(fēng)溶血毒素質(zhì)粒編碼的破傷風(fēng)痙攣毒素屬神經(jīng)毒 毒性極強(qiáng) 小鼠LD50為0 015ng 對人致死量 1 g 為蛋白質(zhì) 不耐熱 可被蛋白酶破壞 二 致病性 破傷風(fēng)痙攣毒素 分子量約150kDa B鏈 重鏈 是與神經(jīng)節(jié)苷脂結(jié)合的單位 A鏈 輕鏈 具有毒性作用 阻止抑制性神經(jīng)介質(zhì) 氨基丁酸的釋放 使肌肉活動的興奮與抑制失調(diào) 造成強(qiáng)直性痙攣 破傷風(fēng)典型癥狀 典型癥狀苦笑面容角弓反張其他 破傷風(fēng)典型癥狀 破傷風(fēng)典型癥狀 破傷風(fēng)免疫屬外毒素免疫 主要是抗毒素發(fā)揮中和作用 一般病后不會獲得牢固免疫力 獲得有效抗毒素的途徑是人工免疫 免疫性 一般不進(jìn)行涂片 鏡檢和分離培養(yǎng) 典型的癥狀和病史即可作出診斷 微生物學(xué)檢查法 1 正確處理創(chuàng)口及清創(chuàng) 擴(kuò)創(chuàng) 2 注射白百破三聯(lián)疫苗進(jìn)行人工主動免疫 3 對可疑病人可立即注射破傷風(fēng)抗毒素 tetanusantitoxin TAT 進(jìn)行緊急預(yù)防 4 發(fā)病早期可足量使用抗毒素進(jìn)行特異性治療 5 抗生素 防治原則 二 產(chǎn)氣莢膜梭菌 C perfringens 所致疾病 氣性壞疽 一 形態(tài)與染色 兩端幾乎平切的G 粗大桿菌 芽胞位于次極端 呈橢圓形 不大于菌體 無鞭毛 在體內(nèi)有明顯的莢膜 一 生物學(xué)性狀 二 培養(yǎng)特性 厭氧 繁殖周期為8分鐘 血瓊脂平板上 圓形 凸起 表面光滑 邊緣整齊 雙層溶血 內(nèi)環(huán)完全溶血 毒素外環(huán)不完全溶血 毒素 在乳糖蛋黃牛奶血瓊脂上分解乳糖 雙溶血環(huán) 一 生物學(xué)性狀 Nagler反應(yīng) 蛋黃瓊脂平板上 由于此菌產(chǎn)生的卵磷脂酶分解蛋黃中的卵磷脂 被特異性的抗血清所中和 使菌落周圍出現(xiàn)乳白色混濁圈 Nagler反應(yīng) 洶涌發(fā)酵 代謝活躍 分解多種糖類 產(chǎn)酸產(chǎn)氣 在牛乳培養(yǎng)基中分解乳糖 大量產(chǎn)氣 將棉塞沖開 氣勢兇猛 出現(xiàn)所謂 洶涌發(fā)酵 stormyfermentation 在皰肉 左 和牛乳 右 培養(yǎng)基中生長 生化反應(yīng) 發(fā)酵多種糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣液化明膠產(chǎn)生H2S吲哚陰性 三 分型 根據(jù)4種主要毒素 的產(chǎn)生情況 可分為5個(gè)毒素型 對人致病的主要為A型 生物學(xué)性狀 致病物質(zhì) 產(chǎn)氣莢膜梭菌能產(chǎn)生10余種外毒素 有些外毒素即為胞外酶 致病性 一 致病物質(zhì) 1 毒素以A型產(chǎn)生量最大 分解細(xì)胞膜上磷脂和蛋白形成的復(fù)合物 造成細(xì)胞溶解 引起血管通透性增加伴大量溶血 組織壞死 肝臟 心功能受損 組織壞死 組織壞死 致病物質(zhì) 2 腸毒素不耐熱的蛋白質(zhì) 100 瞬時(shí)即被破壞 整段肽鏈嵌入細(xì)胞膜 破壞膜離子運(yùn)輸功能 所致疾病 1 氣性壞疽戰(zhàn)傷 工傷 車禍 氣性壞疽潛伏期短 發(fā)展迅速 病情險(xiǎn)惡 氣腫 捻發(fā)音 及組織壞死 致毒血癥 休克 2 食物中毒 致病性 產(chǎn)氣莢膜梭菌 產(chǎn)氣莢膜梭菌 一 直接涂片鏡檢深部創(chuàng)口取材涂片G 大桿菌 大莢膜白細(xì)胞甚少且形態(tài)不典型伴其它雜菌 二 分離培養(yǎng)及動物實(shí)驗(yàn)血平板 鏡檢及生化反應(yīng)動物實(shí)驗(yàn)本菌引起的食物中毒在發(fā)病后1日內(nèi) 檢出大于105病菌 克食品或106病菌 克糞便 即可確立診斷 微生物學(xué)檢查法 一 預(yù)防及時(shí)處理傷口 破壞和消除厭氧微環(huán)境 預(yù)防性的使用抗生素 二 治療局部擴(kuò)創(chuàng) 清創(chuàng)抗生素 抗毒素高壓氧艙法 防治原則 三 肉毒梭菌 C botulinum G 粗短桿菌 芽胞呈橢圓形 使細(xì)胞呈湯匙狀或網(wǎng)球拍狀 厭氧 肉毒毒素不耐熱 煮沸1分鐘即可被破壞 一 生物學(xué)性狀 一 致病性 肉毒毒素 對人致死量為0 1 g 肉毒毒素作用于外周膽堿能神經(jīng) 抑制神經(jīng)肌肉接點(diǎn)處神經(jīng)介質(zhì)乙酰膽堿的釋放 導(dǎo)致弛緩性麻痹 二 致病性與免疫性 肉毒毒素作用機(jī)理 肉毒毒素減肥 二 所致疾病 1 食物中毒本病是單純性毒素中毒而非細(xì)菌感染 臨床表現(xiàn)與其它食物中毒不同 主要為神經(jīng)末稍麻痹 2 嬰兒肉毒病 二 致病性與免疫性 鑒定依據(jù) 涂片鏡檢為革蘭陽性近極端芽胞 呈湯匙狀厭氧 消化肉渣變黑 產(chǎn)生惡臭味菌落邊緣有皺褶肉毒毒素測定陽性 三 微生物學(xué)檢查法 加強(qiáng)食品衛(wèi)生管理和監(jiān)督 提高防范意識 盡早根據(jù)癥狀作出診斷 迅速注射A B E三型多價(jià)抗毒素 五 防治原則 四 艱難梭菌 C difficile 對氧極為敏感 很難分離培養(yǎng) 新生兒腸道中正常菌群 可因長期使用抗生素引起的偽膜性腸炎 G 粗大桿菌 有鞭毛 有芽胞 一 生物學(xué)性狀 產(chǎn)生A B兩種毒素 即腸毒素和細(xì)胞毒素 因長期使用抗生素導(dǎo)致菌群失調(diào)后可引起內(nèi)源性感染 二 致病性與免疫性 第四節(jié)無芽胞厭氧菌 屬人體內(nèi)的正常菌群 包括革蘭陽性和革蘭陰性的球菌和桿菌在某些特定狀態(tài)下 這些厭氧菌作為條件致病菌可導(dǎo)致內(nèi)源性感染 與人類疾病相關(guān)的主要無芽胞厭氧菌 一 主要種類 性狀和在感染中的作用 1 革蘭陰性厭氧桿菌脆弱類桿菌 B fragilis 臨床上最常見的無芽胞厭氧菌分離株 韋榮菌屬最重要 咽喉部主要厭氧菌 常為混合感染菌之一 一 生物學(xué)性狀 一 主要種類 性狀和在感染中的作用 2 革蘭陽性厭氧球菌消化鏈球菌屬 在臨床厭氧菌分離株中僅次于脆弱類桿菌 主要寄居于陰道 丙酸桿菌 能發(fā)酵糖類產(chǎn)生丙酸 痤瘡丙酸桿菌 P acnes 雙歧桿菌屬 正常腸道菌群 在大腸中起重要的調(diào)節(jié)作用 真桿菌屬 一 生物學(xué)性狀 一 致病條件寄居部位改變宿主免疫力下降菌群失調(diào)厭氧微環(huán)境 二 致病性與免疫性 二 感染特征內(nèi)源性感染 呈慢性大多為化膿性感染分泌物或膿液粘稠 有惡臭 使用氨基糖苷類抗生素長期無效 分泌物直接涂片可見細(xì)菌 但普通培養(yǎng)法無細(xì)菌生長 二 致病性與免疫性 三 所致疾病敗血癥中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染腦膿腫口腔與牙齒感染呼吸道感染腹部和會陰部感染女性生殖道感染 二 致病性與免疫性 1 標(biāo)本采取采取后