100mg小鼠肝臟組織，液氮中研磨，組織碎末立即倒入3ml裂解液內。加入苯酚后離心，分三管收集上層水相，TE稀釋40倍測OD。共收集1.5ml。異丙醇沉淀后，可以看見大量白色沉淀，三管合并，600ul裂解液溶解沉淀，TE稀釋160倍測OD。此步共收集600ul。異丙醇再次沉淀，75％乙醇洗滌兩次，盡量洗干液體，超凈臺干燥5min，加入100ulDEPC水溶解RNA。TE稀釋40倍測OD。RNA濃度為：1.23ug/ul，共有100ul，總產量為123ug。100mg組織RNA的含量為400－700ug。5ul裂解液對OD260有非常大的影響，RNA溶于水會導致OD260/280降低。產率不高的原因：1.研磨組織時有損失。2.兩次異丙醇沉淀會有大量損失。3.乙醇洗滌時為避免長時間干燥，吸的很干。沒有計算出回收率，改進辦法：實驗過程中測OD做控制時，使用5ul裂解液＋195ulTE調零。1％瓊脂糖凝膠，舊的緩沖液。10ulRNA+5ulRNA酶，37℃孵育1h，加入等體積氯仿，振蕩后離心取上層水相直接電泳。

1.道：5ul1號管＋15ulDEP水。2.道：5ul1號管＋15ulDEP水，70℃孵育1h。3道：5ul1號管＋20ulDEP水，37℃孵育1h。加入25ul氯仿，漩渦振蕩10s，1000g離心3min，吸取上層水相電泳。4道：5ul1號管＋15ulDEP水＋5ulRNA酶，37℃孵育1h。加入25ul氯仿，漩渦振蕩10s，1000g離心3min，吸取上層水相電泳。5.道：5ul4號管＋15ulDEP水。6道：5ul1號管＋20ulDEP水，37℃孵育1h。加入25ul氯仿，漩渦振蕩10s，1000g離心3min，吸取上層水相電泳。7道：5ul1號管＋15ulDEP水＋5ulRNA酶，37℃孵育1h。加入25ul氯仿，漩渦振蕩10s，1000g離心3min，吸取上層水相電。電泳結果說明：1.RNA酶有作用，代表提出的是RNA。2.37℃孵育，氯仿抽提，振蕩對電泳結果沒有影響，但RNA有損失。RNA的消失是酶作用的，而與操作無關。3.第2道目的在于確認RNA溶液是否有殘留的RNA酶。結果說明70℃孵育對結果有影響，RNA有降解。酶解后進行電泳證明確實提出了RNA，但是電泳條代還是不正常，RNA分子量偏小（在溴酚藍附近）。兩種可能，RNA在提取過程中斷裂和出現(xiàn)降解。Trizol試劑提取RNA，2.5×106個細胞，異丙醇沉淀后看到了明顯的白色沉淀，30ulDEPC水溶解后，取5ulTE稀釋30倍測OD。

RNA濃度為0.522ug/ul，共得到15.7ugRNA。5ul提取的RNA，1％瓊脂糖凝膠，新電泳緩沖液。與前幾次的電泳結果一樣，還是看不到28S、18S兩條帶。1.換了一種裂解液，但電泳結果還是很像，說明問題不出在裂解這一步。2.提取時間大大縮短，但電泳結果還是很像，說明長提取時間對結果沒有影響。3.分析用到的有機溶劑，異丙醇和氯仿是在有裂解液的體系里沉淀RNA的，即使有RNA酶污染也不會降解RNA，異丙醇和氯仿污染可以被排除。剩下的就是乙醇了，兩種方法里，加入乙醇操作的時間是相同的，如果乙醇有RNA酶污染，兩種方法提取時RNA被裂解的效率是相同的，可以合理解釋兩次的電泳結果很類似。4.70℃保溫實驗的結果顯示，RNA溶液中殘留的RNA酶能把稍高分子量的RNA降解，以至于條代集中在膠的