44Codeofpracticeonbreedingofbacteriawilt-resistantcultivarofCasuarinaspp.I 2 2 3 6 7 8本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件主要起草人：張勇、馬海賓、魏永成、孟景祥、1木麻黃抗青枯病新品種選育技術(shù)規(guī)程3.1由青枯雷爾氏桿菌（Ralstoniasolanacearu3.2抗青枯病新品種newvarietyresistanttobacte3.3切枝水培接種法pathogenicbacteriainoculationusingwater-culturecutt察切枝的發(fā)病情況，統(tǒng)計(jì)分析該遺傳材料對(duì)青枯菌的3.4傷根接種法pathogenicbacteriainoculationthroughwoundedro2指不同來(lái)源的木麻黃遺傳材料，包括從木麻黃天然分布區(qū)和主要引種區(qū)收集引進(jìn)的種源/家系，或5.1.1病株選取部或全部變褐色；正發(fā)病植株的根、主干和5.1.2快速檢測(cè)使用快速檢測(cè)農(nóng)作物青枯病常用的免疫層析試紙條對(duì)發(fā)病植株根系橫切面溢出的菌膿進(jìn)行檢測(cè)，5.1.3樣本采集5.2分離5.2.1溢出分離法成平整的新鮮斷面，把其中一端浸泡于無(wú)菌水中，12h～36h后在病根的另一端斷面會(huì)溢出乳白色的菌5.2.2稀釋分離法恒溫培養(yǎng)48h。5.3純化培養(yǎng)在培養(yǎng)皿內(nèi)挑取不規(guī)則圓形、乳白色且中心部位淡紅色的單個(gè)菌落，在TTC培養(yǎng)基上30℃培養(yǎng)36h～48h。35.5.1.1材料使用2個(gè)～3個(gè)具不同抗青枯病能力的木麻黃無(wú)性系小苗（高50cm）進(jìn)行菌5.5.1.2接種方法液的容器中，置于30℃水浴鍋中培養(yǎng)1h促進(jìn)青枯菌的侵染。將青枯菌懸浮液換成無(wú)菌水作為對(duì)照。5.5.1.4發(fā)病率測(cè)定rate,IR）按公式（1）計(jì)算。5.5.1.5致病性判斷人工接種青枯菌的無(wú)性系苗達(dá)到如下發(fā)病率，可以判定該菌株為強(qiáng)致病性菌株，判定標(biāo)準(zhǔn)見4），發(fā)病率小于40%的待選材料可初選為抗病材料用于下6.2抗病材料復(fù)選經(jīng)初選后獲得的遺傳材料采用嫩枝水培（或沙培）生根的方法繁殖無(wú)性系小苗，一般培養(yǎng)6個(gè)月高度達(dá)50cm～70cm后，從中選擇生長(zhǎng)健壯、根系發(fā)達(dá)、大小一致的小苗用于青枯菌接種試驗(yàn)。用黃心土:河沙:蛭石按體積比2:2:1混合，加2%～3%復(fù)合肥（氮磷鉀15-15-15）公式（1感病指數(shù)（diseaseindex,DI）參考地標(biāo)DB44/5每塊林地面積根據(jù)測(cè)定品系的數(shù)量確定，每品系需要面積160m2～200m2。經(jīng)小苗傷根接種法復(fù)選出的抗病品系，采用嫩枝水培（或沙培）的方法繁殖無(wú)性系小苗，培養(yǎng)6個(gè)試驗(yàn)采用隨機(jī)完全區(qū)組設(shè)計(jì)，各無(wú)性系種植10株/區(qū)組，重復(fù)4次～5次，每無(wú)性系共種植40株～50樹體病害分級(jí)參考DB44/T2414，采用田間試驗(yàn)開展5年后（二分之一個(gè)輪伐期）即可66,4抗病新品種評(píng)定7定容至1000mL，調(diào)節(jié)pH值至7.0，高壓滅菌鍋121℃蒸汽滅菌20m