44SpecificationforcollectionandpreservationofterrestrialwildlifesamplesI 2 3 5 5 5 5 5 6 8本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件起草單位：廣東省野生動物監(jiān)測救護中心、廣州1陸生野生動物樣品采集和保存技術(shù)規(guī)范GB/T37864—2019生物樣本庫質(zhì)量和能力通用GB/Z44314—2024生物技術(shù)生物樣本保藏動物生物樣本保藏要求LY/T2359—2014陸生野生動物疫源疫病監(jiān)NY/T541—2016獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運輸技術(shù)規(guī)范NY/T561—2024動物炭疽診斷技術(shù)NY/T4302動物疫病診斷實驗室檔案管理規(guī)范SN/T3592實驗室化學(xué)藥品和樣品廢棄物處WS/T225臨床化學(xué)檢驗血液標本的收集與處理3.1學(xué)鑒定等而采集的與陸生野生動物相關(guān)的糞便、拭子、血4基本要求急性死亡動物，懷疑發(fā)生炭疽桿菌等烈性傳染病，按NY/T561—2024中5的要求執(zhí)行。排除炭24.3采樣時限若采集死亡動物的病料，宜于動物死亡后2h內(nèi)采集。無法實現(xiàn)時，夏天不應(yīng)超過6h，4,4無菌操作4.5有效性4,6減少應(yīng)激和損害4.7生物安全防護中9的要求穿戴必須的個人衛(wèi)生安全防護裝備（如戴防護服、手套、護目鏡等），嚴格遵守生物安全操5.1.1操作人員應(yīng)經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)或從事相關(guān)工作，掌握動物保定技巧、5.1.5操作人員宜通過防火、防毒、防爆及其他應(yīng)急措施培訓(xùn)等，確保在出現(xiàn)意外時能夠立即采取有5.2場所35.3.1根據(jù)采集樣品的目的，選擇適合的工具、器5.4保存液應(yīng)根據(jù)所采樣品的種類和要求，準備不同類型并分裝成適量的保存液，如PBS緩沖液、30%甘油PBS6.1.1應(yīng)根據(jù)動物大小、生理狀態(tài)、健康狀態(tài)以及檢測目的等信息，確定樣品采集方案、采集量，以6.1.2樣品采集前，動物宜避免使用抗生素或類固醇類等藥物，如不可避免，宜推遲取樣或詳細記錄6.1.4在采集過程中，如不可避免產(chǎn)6.1.5發(fā)生病變部位的樣品采集，盡量覆蓋正常部位和病變6.1.6樣品采集后，將樣品置于無菌保存容器（離心管、凍存管、收集管、收集杯、采集杯、采集袋6.1.9樣品編號應(yīng)具有唯一性，在設(shè)計樣品編號時保持統(tǒng)一性和持續(xù)性?？蓪⒍喾N信息用數(shù)字化的形6.2不同類型樣品的采集6.2.1.1選擇適合采集部位大小、長度的拭子，從包裝尾部打開，不應(yīng)觸碰拭子頭部，可用無菌生理雜質(zhì)或病損表面分泌物。如遇污染，應(yīng)棄掉污染46.2.2.1皮膚樣品：宜根據(jù)需求，使用手術(shù)刀或手術(shù)剪采取正?；虿∽儾课坏钠つw。采集用于真菌、至輕微出血（疥螨等外寄生蟲取樣完畢后用碘酒處理取樣部位。6.2.2.2毛發(fā)、羽毛、皮張、蛇蛻等附屬6.2.3.2宜避開炎癥、水腫、發(fā)紺、給藥等部位，消毒采血部位，待動物相對放松后進行穿刺，使用立即注入收集管、抗凝管或血培養(yǎng)瓶，采集過程注意避免污染。在采血部位覆蓋紗布或藥棉并壓迫30采用假陰道、人工按摩或電刺激等方法采集精液。分段射精6.2.7.1采集活體動物胃液樣品時，宜用石蠟油潤滑消毒后的多孔胃管的前段，沿口腔或鼻孔插入胃胃管外端持續(xù)抽吸胃液，抽滿后注入容器內(nèi)，再接管繼續(xù)抽6.2.7.2采集反芻動物胃內(nèi)容物樣品時，可當食團從食道逆流入口腔時，立即開口拉住舌頭，伸入口6.2.8.1封閉性部位的液體病料：應(yīng)用碘酊或75%的乙醇消毒，使用滅菌注射器或吸管抽取或吸取深6.2.8.3瘺管的液體病料，可在無菌條件下取組織碎6.2.8.4組織或臟器內(nèi)的液體病料，宜用燙56.2.9.1可用骨鉗截取所需骨骼樣品，置于無菌容6.2.9.2需要完整的骨骼標本時，應(yīng)將附著的肌肉和韌帶等全部除去，表面撒上食鹽，然后包入浸過宜在無菌條件下，使用手術(shù)刀或手術(shù)剪取適合大小的新鮮組織7.3樣品采集信息表應(yīng)一式兩份，一份隨樣品轉(zhuǎn)移，另一7,4樣品采集信息表宜電子信息化，必要時建立生物樣本庫，以便管理、查閱和追溯。樣品采集時產(chǎn)生的廢棄樣品及其它廢棄物應(yīng)按照GB19489、GB1WS/T225的有關(guān)規(guī)定進行無害化處理。重復(fù)使箱宜有“請勿倒置”和“易碎物品”等明顯標識。樣品運輸?shù)钠渌蟀凑誑Y/T541—2016中9的要求10.1用于細菌檢測的樣品，放入30%～50%甘油緩沖溶液中，于4℃可保存24h；超過24h時，宜氮中冷凍保存。經(jīng)過核酸保存液保存的樣品，僅用于核酸10.5用于細胞培養(yǎng)的樣品，放入組織保存液中，于4℃可保存24h～48h，無法長期保存。陸生野生動物生物樣品的檔案管理宜參考GB/T36A.1.4集精杯：不銹鋼內(nèi)膽或玻璃內(nèi)膽保溫。A.1.6血培養(yǎng)瓶：標準需氧瓶、標準厭氧瓶、樹脂需氧瓶、樹脂厭氧瓶、兒童樹脂瓶、含溶血素厭氧瓶、含溶血素分支桿菌/真菌瓶，在2℃~25℃環(huán)境中貯存。A.1.10量杯：量程10mL～200A.1.11移液器：量程100μL～1000A.1.12接種針、接種環(huán)。A.1.13酒精燈。A.1.15離心機：半徑22.5cm、3000r/min，離心時相對離心力為2260g。KA.1.24無菌棉簽、無菌棉球、無菌紗布。A.1.25一次性無菌口罩、一次性無菌N95口罩。A.1.27保溫箱、保溫瓶、冰袋、干冰桶。7A.1.29護目鏡、防護服。A.2.2磷酸鹽緩沖生理鹽水：0.01mol/LpH9.0磷酸鹽-生A.2.3DNA保存液：糞便、尿液、血液、拭子、動物組織等DNA保存液，市售試劑，4℃保存。A.2.4RNA保存液：市售試劑，4℃保存。A.2.5精液保存液：市售保護劑或自主配方保護劑，以糖類、鹽類、抗生素、抗氧化劑及其他保護劑A.2.6轉(zhuǎn)運培養(yǎng)基：市售試劑，4℃保存。A.2.1075%酒精：市售。A.2.11石蠟油：分析純。A.2.12福爾馬林：10%中性福爾馬林固定液。A.2.13多聚甲醛：市售試劑，室溫保存。A.2.14利多卡因膏劑：復(fù)方制劑，每克本品含丙胺卡因25mg，利多卡因25mg。潔爾滅，市售試劑，有效成分苯扎溴銨27g/L～33g/L的液體。常溫保存。使