2025人民醫(yī)院「熒光原位雜交」技術(shù)操作與報(bào)告解讀考核一、單選題（每題2分，共20題）1.熒光原位雜交（FISH）技術(shù)中，用于標(biāo)記探針的熒光染料不包括以下哪種？A.異硫氰酸熒光素（FITC）B.藻紅蛋白（AlexaFluor）C.TexasRedD.尼羅紅（NileRed）2.在FISH實(shí)驗(yàn)中，下列哪種方法常用于提高雜交信號的特異性？A.增加探針濃度B.提高雜交溫度C.使用預(yù)雜交液D.以上都是3.以下哪種組織或細(xì)胞類型最適合進(jìn)行FISH檢測？A.新鮮組織切片B.石蠟包埋組織切片C.冰凍組織切片D.以上均可4.FISH報(bào)告中，"2copies/cell"表示什么含義？A.每個(gè)細(xì)胞檢測到2個(gè)雜交信號B.每個(gè)細(xì)胞檢測到2個(gè)拷貝數(shù)正常C.每個(gè)細(xì)胞檢測到2個(gè)擴(kuò)增區(qū)域D.每個(gè)細(xì)胞檢測到2個(gè)缺失區(qū)域5.以下哪種熒光顯微鏡最適合進(jìn)行FISH信號觀察？A.普通正置顯微鏡B.倒置顯微鏡C.激光共聚焦顯微鏡D.以上均可6.FISH實(shí)驗(yàn)中，固定劑的選擇對雜交效果的影響不包括？A.乙醇濃度B.甲醇含量C.甲醛濃度D.聚乙二醇（PEG）7.以下哪種探針類型常用于檢測染色體數(shù)目異常？A.全基因組探針B.特異性區(qū)域探針C.脈沖場染色質(zhì)凝集探針（PFCH）D.以上均可8.FISH報(bào)告中，"mosaic"通常指什么？A.染色體結(jié)構(gòu)異常B.細(xì)胞間基因拷貝數(shù)不一致C.探針雜交失敗D.染色體缺失9.以下哪種方法可用于減少FISH信號的背景熒光？A.優(yōu)化探針濃度B.使用封閉液C.降低雜交溫度D.以上都是10.FISH技術(shù)在臨床應(yīng)用中最常用于檢測？A.染色體易位B.基因擴(kuò)增C.基因缺失D.以上都是二、多選題（每題3分，共10題）1.FISH實(shí)驗(yàn)中，以下哪些步驟需要嚴(yán)格控制？A.組織切片厚度B.探針變性條件C.雜交溫度D.熒光顯微鏡曝光時(shí)間2.以下哪些因素可能導(dǎo)致FISH雜交信號減弱？A.探針濃度過低B.雜交時(shí)間過長C.固定劑過度使用D.封閉液不充分3.FISH報(bào)告中，以下哪些指標(biāo)可用于評估檢測準(zhǔn)確性？A.陽性細(xì)胞率B.信號強(qiáng)度C.信號均勻性D.探針特異性4.以下哪些探針類型可用于檢測基因表達(dá)？A.mRNAFISH探針B.DNAFISH探針C.蛋白質(zhì)FISH探針D.反義RNA探針5.FISH技術(shù)在腫瘤診斷中的應(yīng)用包括？A.檢測基因擴(kuò)增（如HER2）B.檢測染色體缺失（如P53）C.檢測染色體易位（如BCR-ABL）D.以上都是6.以下哪些方法可用于提高FISH信號的穩(wěn)定性？A.優(yōu)化封閉液配方B.使用抗熒光衰減封片劑C.降低雜交溫度D.增加探針濃度7.FISH實(shí)驗(yàn)中，以下哪些試劑需要無菌操作？A.探針溶液B.固定液C.熒光染料D.封閉液8.FISH報(bào)告中，以下哪些術(shù)語與染色體數(shù)目異常相關(guān)？A.TrisomyB.MonosomyC.AneuploidyD.Deletion9.以下哪些因素會影響FISH信號的定量分析？A.細(xì)胞核大小B.熒光顯微鏡性能C.探針雜交效率D.圖像采集參數(shù)10.FISH技術(shù)在遺傳病診斷中的應(yīng)用包括？A.檢測染色體微缺失B.檢測單基因病C.檢測嵌合體D.以上都是三、判斷題（每題2分，共20題）1.FISH實(shí)驗(yàn)中，探針的標(biāo)記熒光顏色越多越好。（×）2.石蠟包埋組織可以直接進(jìn)行FISH檢測。（×）3.FISH報(bào)告中，"normal"表示檢測到2個(gè)雜交信號。（√）4.激光共聚焦顯微鏡比普通熒光顯微鏡更適合FISH信號觀察。（√）5.固定劑濃度過高會導(dǎo)致探針變性不充分。（×）6.FISH技術(shù)可以用于檢測活細(xì)胞內(nèi)的基因表達(dá)。（√）7.FISH報(bào)告中，"mosaic"表示部分細(xì)胞存在異常。（√）8.封閉液可以減少非特異性雜交信號。（√）9.FISH實(shí)驗(yàn)中，雜交溫度越高越好。（×）10.FISH技術(shù)可以用于檢測基因突變。（×）四、簡答題（每題5分，共6題）1.簡述FISH實(shí)驗(yàn)的基本步驟。2.解釋FISH報(bào)告中"signalintensity"的含義。3.列舉三種FISH技術(shù)在臨床應(yīng)用中的常見場景。4.說明如何減少FISH信號的背景熒光。5.描述FISH報(bào)告中"aneuploidy"的檢測方法。6.解釋嵌合體在FISH檢測中的意義。五、論述題（每題10分，共2題）1.比較FISH技術(shù)與PCR技術(shù)在腫瘤基因檢測中的優(yōu)缺點(diǎn)。2.結(jié)合2025人民醫(yī)院的實(shí)際情況，論述FISH技術(shù)在臨床診斷中的價(jià)值。答案與解析一、單選題1.D尼羅紅（NileRed）主要用于脂質(zhì)染色，不適用于FISH探針標(biāo)記。2.D提高特異性需要綜合優(yōu)化探針濃度、雜交溫度和封閉液使用。3.B石蠟包埋組織切片最適合FISH檢測，因?yàn)槠浔４鏁r(shí)間長且易于處理。4.A"2copies/cell"表示每個(gè)細(xì)胞檢測到2個(gè)雜交信號，通常指正?？截悢?shù)。5.C激光共聚焦顯微鏡能更好分離熒光信號，減少背景干擾。6.D聚乙二醇（PEG）主要用于核酸沉淀，不屬于固定劑。7.CPFCH探針專門用于檢測染色體數(shù)目異常。8.B"mosaic"表示細(xì)胞間基因拷貝數(shù)不一致，常見于嵌合體。9.D優(yōu)化多重因素可有效減少背景熒光。10.DFISH可檢測易位、擴(kuò)增和缺失，廣泛應(yīng)用于臨床。二、多選題1.A,B,C,D所有步驟均需嚴(yán)格控制，影響雜交效果。2.A,C,D探針濃度低、固定劑過度或封閉液不足均導(dǎo)致信號減弱。3.A,B,C陽性細(xì)胞率、信號強(qiáng)度和均勻性反映檢測準(zhǔn)確性。4.A,B,DmRNA、反義RNA可用于檢測基因表達(dá)，蛋白質(zhì)FISH較少見。5.A,B,C,DFISH技術(shù)廣泛應(yīng)用于腫瘤基因檢測。6.A,B優(yōu)化封閉液和抗熒光衰減封片劑可提高信號穩(wěn)定性。7.A,B,C探針、固定液和熒光染料需無菌操作。8.A,B,CTrisomy、Monosomy和Aneuploidy與染色體數(shù)目異常相關(guān)。9.A,B,C,D細(xì)胞核大小、顯微鏡性能、雜交效率和采集參數(shù)均影響定量分析。10.A,B,C,DFISH可用于檢測微缺失、單基因病和嵌合體。三、判斷題1.×過多的熒光顏色會導(dǎo)致信號難以區(qū)分。2.×石蠟組織需脫蠟、水化后再進(jìn)行FISH。3.√正?？截悢?shù)為2，雜交信號通常為2個(gè)。4.√激光共聚焦能更好分離熒光信號。5.×過度固定會破壞DNA結(jié)構(gòu)，影響雜交。6.√mRNAFISH可檢測活細(xì)胞基因表達(dá)。7.√"mosaic"表示部分細(xì)胞存在異常。8.√封閉液可結(jié)合非特異性位點(diǎn)，減少背景。9.×過高溫度會導(dǎo)致探針變性，信號減弱。10.×PCR更適用于基因突變檢測，F(xiàn)ISH檢測擴(kuò)增/缺失。四、簡答題1.FISH實(shí)驗(yàn)基本步驟a.組織切片處理（脫蠟、水化）；b.探針變性；c.雜交（組織+探針+雜交液）；d.清洗（降低溫度逐步清洗）；e.封片（抗熒光衰減封片劑）；f.熒光顯微鏡觀察。2."signalintensity"含義指雜交信號的熒光亮度，反映探針與靶序列結(jié)合效率，可用于定量分析。3.FISH臨床應(yīng)用場景a.腫瘤基因檢測（如HER2、P53）；b.遺傳病診斷（如染色體微缺失）；c.嵌合體檢測（如白血病）。4.減少背景熒光方法a.優(yōu)化封閉液（含BSA、魚精蛋白）；b.使用抗熒光衰減封片劑；c.降低雜交溫度；d.增加探針特異性。5."aneuploidy"檢測方法使用多色探針覆蓋目標(biāo)染色體，通過熒光顯微鏡觀察信號數(shù)量異常（如三體、單體）。6.嵌合體檢測意義嵌合體指體內(nèi)存在兩種或多種基因型細(xì)胞，F(xiàn)ISH可檢測嵌合比例，指導(dǎo)治療決策。五、論述題1.FISH與PCR技術(shù)比較-FISH：可視化檢測染色體/基因位置，適用于體細(xì)胞和固定組織；-PCR：定量檢測