石家莊市中醫(yī)院免疫組化技術(shù)考核一、單選題（每題2分，共20題）要求：選擇最符合題意的選項(xiàng)。1.石家莊市中醫(yī)院免疫組化檢測(cè)中，常用于標(biāo)記細(xì)胞核的抗體是？A.CD3B.Ki-67C.VimentinD.CD342.以下哪種方法不屬于免疫組化技術(shù)中常用的封閉方法？A.5%脫脂奶粉封閉B.山羊血清封閉C.蛋白質(zhì)A封閉D.乙醇固定封閉3.石家莊市中醫(yī)院病理科在進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí)，若發(fā)現(xiàn)某抗體反應(yīng)弱，可能的原因是？A.抗體濃度過(guò)高B.標(biāo)本固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)C.溫度控制在37℃以下D.滅菌不徹底4.免疫組化技術(shù)中，辣根過(guò)氧化物酶（HRP）顯色劑最常用的底物是？A.DABB.AECC.HRPD.FITC5.石家莊市中醫(yī)院病理科常用哪種方法進(jìn)行免疫組化抗原修復(fù)？A.蒸汽修復(fù)B.冷修復(fù)C.酚醛溶液修復(fù)D.乙醇修復(fù)6.免疫組化技術(shù)中，若出現(xiàn)非特異性染色，可能的原因是？A.抗體稀釋比例過(guò)高B.標(biāo)本固定時(shí)間不足C.封閉不充分D.抗體質(zhì)量差7.石家莊市中醫(yī)院病理科進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí)，常用的抗體稀釋液是？A.0.01MPBSB.甲醇C.甲醛溶液D.蒸餾水8.免疫組化技術(shù)中，若發(fā)現(xiàn)染色背景過(guò)深，可能的原因是？A.抗體濃度過(guò)低B.溫度控制在42℃以上C.蒸餾水清洗次數(shù)過(guò)多D.抗體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)9.石家莊市中醫(yī)院病理科進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí)，常用的抗原修復(fù)液是？A.Tris-EDTA緩沖液B.甲醇溶液C.甲醛溶液D.丙酮溶液10.免疫組化技術(shù)中，常用的封片劑是？A.明膠封片劑B.封片膠C.甘油溶液D.乙醇溶液二、多選題（每題3分，共10題）要求：選擇所有符合題意的選項(xiàng)。1.石家莊市中醫(yī)院病理科進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí)，常用的抗體有？A.CD20B.CK19C.HER2D.CD342.免疫組化技術(shù)中，影響染色結(jié)果的因素包括？A.抗體質(zhì)量B.標(biāo)本固定時(shí)間C.溫度控制D.封閉不充分3.石家莊市中醫(yī)院病理科進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí)，常用的封閉方法有？A.5%脫脂奶粉封閉B.山羊血清封閉C.蛋白質(zhì)A封閉D.乙醇封閉4.免疫組化技術(shù)中，常用的顯色劑包括？A.DABB.AECC.HRPD.FITC5.石家莊市中醫(yī)院病理科進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí)，常用的抗原修復(fù)方法有？A.蒸汽修復(fù)B.冷修復(fù)C.酚醛溶液修復(fù)D.乙醇修復(fù)6.免疫組化技術(shù)中，可能導(dǎo)致染色結(jié)果假陰性的原因包括？A.抗體稀釋比例過(guò)高B.標(biāo)本固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)C.封閉不充分D.抗體質(zhì)量差7.石家莊市中醫(yī)院病理科進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí)，常用的抗體稀釋液有？A.0.01MPBSB.甲醇C.甲醛溶液D.蒸餾水8.免疫組化技術(shù)中，影響染色結(jié)果的因素包括？A.抗體濃度B.溫度控制C.孵育時(shí)間D.清洗次數(shù)9.石家莊市中醫(yī)院病理科進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí)，常用的封片劑有？A.明膠封片劑B.封片膠C.甘油溶液D.乙醇溶液10.免疫組化技術(shù)中，可能導(dǎo)致染色結(jié)果假陽(yáng)性的原因包括？A.抗體濃度過(guò)低B.溫度控制在42℃以上C.封閉不充分D.抗體質(zhì)量差三、判斷題（每題2分，共10題）要求：判斷下列說(shuō)法的正誤。1.石家莊市中醫(yī)院病理科進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí)，抗體稀釋比例越高，染色效果越好。（×）2.免疫組化技術(shù)中，常用的抗原修復(fù)液是甲醛溶液。（×）3.免疫組化技術(shù)中，封閉不充分會(huì)導(dǎo)致非特異性染色。（√）4.石家莊市中醫(yī)院病理科進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí)，常用的抗體稀釋液是0.01MPBS。（√）5.免疫組化技術(shù)中，若發(fā)現(xiàn)染色背景過(guò)深，可能的原因是抗體濃度過(guò)低。（×）6.石家莊市中醫(yī)院病理科進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí)，常用的封片劑是封片膠。（√）7.免疫組化技術(shù)中，常用的顯色劑是HRP。（×）8.免疫組化技術(shù)中，若出現(xiàn)非特異性染色，可能的原因是抗體質(zhì)量差。（√）9.石家莊市中醫(yī)院病理科進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí)，常用的抗原修復(fù)方法是蒸汽修復(fù)。（√）10.免疫組化技術(shù)中，溫度控制在37℃以下會(huì)導(dǎo)致染色結(jié)果假陰性。（×）四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共5題）要求：簡(jiǎn)述相關(guān)知識(shí)點(diǎn)或操作步驟。1.簡(jiǎn)述石家莊市中醫(yī)院病理科進(jìn)行免疫組化檢測(cè)的步驟。2.簡(jiǎn)述免疫組化技術(shù)中，抗原修復(fù)的目的是什么？3.簡(jiǎn)述免疫組化技術(shù)中，封閉不充分會(huì)導(dǎo)致哪些問(wèn)題？4.簡(jiǎn)述免疫組化技術(shù)中，常用的抗體有哪些？5.簡(jiǎn)述免疫組化技術(shù)中，影響染色結(jié)果的因素有哪些？五、論述題（每題10分，共2題）要求：結(jié)合實(shí)際工作，詳細(xì)論述相關(guān)知識(shí)點(diǎn)或操作步驟。1.結(jié)合石家莊市中醫(yī)院病理科的實(shí)際工作，論述免疫組化技術(shù)中，如何避免非特異性染色？2.結(jié)合石家莊市中醫(yī)院病理科的實(shí)際工作，論述免疫組化技術(shù)中，如何提高染色結(jié)果的準(zhǔn)確性？答案與解析一、單選題答案與解析1.B解析：Ki-67是核抗原，常用于標(biāo)記細(xì)胞增殖狀態(tài)，而CD3是T細(xì)胞標(biāo)志物，Vimentin是間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物，CD34是造血干細(xì)胞標(biāo)志物。2.D解析：乙醇固定是組織固定方法，不屬于封閉方法。封閉方法通常使用5%脫脂奶粉、山羊血清或蛋白質(zhì)A。3.C解析：溫度控制在37℃以下會(huì)導(dǎo)致抗體結(jié)合效率降低，從而出現(xiàn)反應(yīng)弱的情況。4.A解析：DAB是免疫組化中最常用的HRP顯色劑，呈棕褐色。5.A解析：石家莊市中醫(yī)院病理科常用蒸汽修復(fù)法，效果較好。6.C解析：封閉不充分會(huì)導(dǎo)致抗體非特異性結(jié)合，出現(xiàn)背景染色。7.A解析：0.01MPBS是常用的抗體稀釋液，pH值接近生理環(huán)境，有利于抗體活性。8.B解析：溫度控制在42℃以上會(huì)導(dǎo)致背景染色加深。9.A解析：Tris-EDTA緩沖液是常用的抗原修復(fù)液，能有效暴露抗原決定簇。10.B解析：封片膠是常用的封片劑，能長(zhǎng)期保存染色結(jié)果。二、多選題答案與解析1.A,B,C,D解析：CD20是B細(xì)胞標(biāo)志物，CK19是上皮細(xì)胞標(biāo)志物，HER2是乳腺癌標(biāo)志物，CD34是造血干細(xì)胞標(biāo)志物，均常用。2.A,B,C,D解析：抗體質(zhì)量、標(biāo)本固定時(shí)間、溫度控制和封閉不充分都會(huì)影響染色結(jié)果。3.A,B,C解析：脫脂奶粉、山羊血清和蛋白質(zhì)A是常用的封閉方法。乙醇封閉不常用。4.A,B,C,D解析：DAB、AEC、HRP和FITC都是免疫組化中常用的顯色劑或熒光標(biāo)記物。5.A,B,C,D解析：蒸汽修復(fù)、冷修復(fù)、酚醛溶液修復(fù)和乙醇修復(fù)都是抗原修復(fù)方法。6.A,C,D解析：抗體稀釋比例過(guò)高、封閉不充分和抗體質(zhì)量差會(huì)導(dǎo)致假陰性。標(biāo)本固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性。7.A,D解析：0.01MPBS和蒸餾水是常用的抗體稀釋液。甲醇和甲醛溶液不常用。8.A,B,C,D解析：抗體濃度、溫度控制、孵育時(shí)間和清洗次數(shù)都會(huì)影響染色結(jié)果。9.B,C解析：封片膠和甘油溶液是常用的封片劑。明膠封片劑和乙醇溶液不常用。10.A,B,C解析：抗體濃度過(guò)低、溫度控制在42℃以上和封閉不充分會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性?？贵w質(zhì)量差會(huì)導(dǎo)致假陰性。三、判斷題答案與解析1.×解析：抗體稀釋比例過(guò)高會(huì)導(dǎo)致結(jié)合效率降低，染色效果變差。2.×解析：甲醛溶液是固定液，常用抗原修復(fù)液是Tris-EDTA緩沖液。3.√解析：封閉不充分會(huì)導(dǎo)致抗體非特異性結(jié)合，出現(xiàn)背景染色。4.√解析：0.01MPBS是常用的抗體稀釋液。5.×解析：背景過(guò)深可能是抗體濃度過(guò)高或溫度控制不當(dāng)。6.√解析：封片膠是常用的封片劑。7.×解析：HRP是酶，DAB是顯色底物。8.√解析：抗體質(zhì)量差會(huì)導(dǎo)致非特異性染色。9.√解析：蒸汽修復(fù)是常用的抗原修復(fù)方法。10.×解析：溫度過(guò)低會(huì)導(dǎo)致抗體結(jié)合效率降低，但42℃以上更易導(dǎo)致背景染色。四、簡(jiǎn)答題答案與解析1.石家莊市中醫(yī)院病理科進(jìn)行免疫組化檢測(cè)的步驟-標(biāo)本固定：使用10%甲醛溶液固定4小時(shí)以上。-脫水與包埋：梯度乙醇脫水，石蠟包埋。-切片：切片厚度4μm，貼片。-脫蠟水化：二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化。-抗原修復(fù)：使用Tris-EDTA緩沖液蒸汽修復(fù)。-封閉：使用5%脫脂奶粉封閉30分鐘。-一抗孵育：4℃過(guò)夜孵育。-二抗孵育：室溫孵育30分鐘。-顯色：使用DAB顯色劑顯色。-復(fù)水透明：梯度乙醇脫水，二甲苯透明。-封片：使用封片膠封片。2.抗原修復(fù)的目的是什么？抗原修復(fù)的目的是通過(guò)化學(xué)或物理方法暴露抗原決定簇，提高抗體結(jié)合效率，從而增強(qiáng)染色信號(hào)。常用的方法有蒸汽修復(fù)和冷修復(fù)。3.封閉不充分會(huì)導(dǎo)致哪些問(wèn)題？封閉不充分會(huì)導(dǎo)致抗體非特異性結(jié)合，出現(xiàn)背景染色，影響染色結(jié)果的準(zhǔn)確性。4.石家莊市中醫(yī)院病理科進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí)，常用的抗體有哪些？常用的抗體包括CD3、CD20、Ki-67、CK19、HER2、CD34等。5.石家莊市中醫(yī)院病理科進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí)，影響染色結(jié)果的因素有哪些？影響因素包括抗體質(zhì)量、標(biāo)本固定時(shí)間、溫度控制、封閉方法、孵育時(shí)間、清洗次數(shù)等。五、論述題答案與解析1.結(jié)合石家莊市中醫(yī)院病理科的實(shí)際工作，論述免疫組化技術(shù)中，如何避免非特異性染色？-優(yōu)化封閉方法：使用5%脫脂奶粉或山羊血清進(jìn)行封閉，避免抗體非特異性結(jié)合。-選擇高質(zhì)量抗體：使用經(jīng)驗(yàn)證的抗體，避免使用過(guò)期或質(zhì)量差的抗體。-控制孵育條件：避免抗體濃度過(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，減少非特異性結(jié)合。-優(yōu)化清洗步驟：使用PBS或Tris-TBS緩沖液進(jìn)行充分清洗，減少背景染色。-使用阻斷劑：在封閉液中添加BSA或牛血清白蛋白，減少非特異性結(jié)合。2.結(jié)合石家莊市中醫(yī)院病理科的實(shí)際工作，論述免疫組化技術(shù)中，如何提高染色結(jié)果的準(zhǔn)確性？-優(yōu)化抗原修復(fù)：使用Tris-ED