wb實(shí)驗(yàn)考試及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.WB實(shí)驗(yàn)中，轉(zhuǎn)膜時(shí)常用的膜是（）A.硝酸纖維素膜B.聚偏氟乙烯膜C.二者均可D.以上都不對(duì)2.WB實(shí)驗(yàn)中封閉的作用是（）A.防止抗體非特異性結(jié)合B.促進(jìn)蛋白結(jié)合C.清洗膜D.標(biāo)記蛋白3.進(jìn)行WB實(shí)驗(yàn)時(shí)，蛋白上樣量一般取決于（）A.蛋白濃度B.抗體濃度C.膜的大小D.電泳時(shí)間4.通常WB實(shí)驗(yàn)中，二抗的作用是（）A.直接識(shí)別目的蛋白B.識(shí)別一抗C.標(biāo)記一抗D.標(biāo)記目的蛋白5.蛋白樣品在進(jìn)行WB實(shí)驗(yàn)前通常需要進(jìn)行（）處理。A.加熱變性B.冷凍C.離心D.過(guò)濾6.WB實(shí)驗(yàn)中，常用的顯色方法不包括（）A.化學(xué)發(fā)光法B.熒光法C.放射性自顯影法D.比色法7.轉(zhuǎn)膜過(guò)程中，電壓過(guò)高可能導(dǎo)致（）A.蛋白轉(zhuǎn)膜不完全B.膜上蛋白丟失C.轉(zhuǎn)膜時(shí)間延長(zhǎng)D.條帶變形8.封閉液一般不選用以下哪種（）A.脫脂奶粉B.BSAC.明膠D.蔗糖9.WB實(shí)驗(yàn)中，SDS電泳的作用是（）A.分離蛋白B.標(biāo)記蛋白C.溶解蛋白D.濃縮蛋白10.一抗稀釋液中常添加的成分是（）A.甲醇B.乙醇C.Tween-20D.丙酮答案：1.C2.A3.A4.B5.A6.C7.D8.D9.A10.C二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.WB實(shí)驗(yàn)的主要步驟包括（）A.蛋白樣品制備B.SDS電泳C.轉(zhuǎn)膜D.封閉E.抗體孵育和顯色2.影響WB實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素有（）A.蛋白樣品質(zhì)量B.抗體的特異性和效價(jià)C.轉(zhuǎn)膜條件D.封閉時(shí)間和條件E.顯色方法的選擇3.以下哪些屬于WB實(shí)驗(yàn)中常用的緩沖液（）A.Tris-HCl緩沖液B.PBS緩沖液C.TBS緩沖液D.檸檬酸緩沖液E.硼酸緩沖液4.進(jìn)行WB實(shí)驗(yàn)時(shí)，選擇抗體需要考慮的因素有（）A.抗體的來(lái)源B.抗體的類型C.抗體的特異性D.抗體的效價(jià)E.抗體的品牌5.在WB實(shí)驗(yàn)中，可能出現(xiàn)的問(wèn)題有（）A.條帶模糊B.背景過(guò)高C.無(wú)條帶出現(xiàn)D.條帶大小異常E.條帶拖尾6.關(guān)于轉(zhuǎn)膜，正確的說(shuō)法是（）A.有半干法和濕法等方式B.轉(zhuǎn)膜時(shí)間越長(zhǎng)越好C.電壓和電流影響轉(zhuǎn)膜效果D.不同蛋白轉(zhuǎn)膜條件有差異E.轉(zhuǎn)膜緩沖液成分很關(guān)鍵7.WB實(shí)驗(yàn)中封閉的常用試劑有（）A.脫脂奶粉B.BSAC.酪蛋白D.聚乙烯吡咯烷酮E.葡聚糖8.以下哪些操作可以降低WB實(shí)驗(yàn)的背景（）A.適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間B.增加洗滌次數(shù)C.降低一抗?jié)舛菵.優(yōu)化轉(zhuǎn)膜條件E.選擇合適的封閉試劑9.SDS電泳中，影響蛋白遷移率的因素有（）A.蛋白的分子量大小B.蛋白的電荷性質(zhì)C.凝膠的濃度D.電場(chǎng)強(qiáng)度E.緩沖液的pH值10.WB實(shí)驗(yàn)中顯色方法的選擇依據(jù)是（）A.實(shí)驗(yàn)儀器B.目的蛋白表達(dá)量C.抗體標(biāo)記類型D.實(shí)驗(yàn)成本E.實(shí)驗(yàn)室習(xí)慣答案：1.ABCDE2.ABCDE3.ABC4.ABCD5.ABCDE6.ACDE7.ABC8.ABCE9.ABCDE10.ABCDE三、判斷題（每題2分，共20分）1.WB實(shí)驗(yàn)只能檢測(cè)一種蛋白。（）2.轉(zhuǎn)膜時(shí)，膜和凝膠的放置順序不影響結(jié)果。（）3.抗體孵育溫度越高，結(jié)合效果一定越好。（）4.封閉時(shí)間過(guò)長(zhǎng)不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。（）5.SDS電泳中，蛋白分子量越小遷移越快。（）6.化學(xué)發(fā)光法比熒光法靈敏度低。（）7.蛋白樣品反復(fù)凍融不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。（）8.二抗可以直接與目的蛋白結(jié)合。（）9.不同廠家的抗體，使用方法完全相同。（）10.WB實(shí)驗(yàn)中，膜的孔徑大小對(duì)蛋白轉(zhuǎn)膜無(wú)影響。（）答案：1.×2.×3.×4.×5.√6.×7.×8.×9.×10.×四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共20分）1.簡(jiǎn)述WB實(shí)驗(yàn)中封閉的重要性。答案：封閉可防止抗體與膜上非特異性位點(diǎn)結(jié)合，降低背景干擾。使抗體能特異性識(shí)別并結(jié)合目的蛋白，提高實(shí)驗(yàn)的特異性和準(zhǔn)確性，保證結(jié)果的可靠性。2.說(shuō)明SDS電泳分離蛋白的原理。答案：SDS能使蛋白變性并帶上大量負(fù)電荷，消除蛋白原有電荷差異。在電場(chǎng)作用下，不同分子量的蛋白在聚丙烯酰胺凝膠的分子篩作用下，按分子量大小實(shí)現(xiàn)分離，小分子量蛋白遷移快。3.轉(zhuǎn)膜過(guò)程中需要注意哪些要點(diǎn)？答案：注意膜與凝膠的緊密貼合，避免產(chǎn)生氣泡。控制好轉(zhuǎn)膜的電壓、電流和時(shí)間，不同蛋白需優(yōu)化條件。選擇合適的轉(zhuǎn)膜緩沖液，且轉(zhuǎn)膜時(shí)保持低溫，防止蛋白降解和膜的損壞。4.如何選擇合適的一抗用于WB實(shí)驗(yàn)？答案：要考慮抗體來(lái)源、類型，確保特異性針對(duì)目的蛋白。查看抗體效價(jià)，效價(jià)高結(jié)合力強(qiáng)。參考抗體說(shuō)明書(shū)適用的WB實(shí)驗(yàn)種屬、樣本類型等，結(jié)合預(yù)實(shí)驗(yàn)效果來(lái)選擇。五、討論題（每題5分，共20分）1.當(dāng)WB實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)背景過(guò)高的情況，你認(rèn)為可能有哪些原因及解決辦法？答案：原因可能是封閉不充分、抗體濃度過(guò)高、洗滌不徹底等。解決辦法有延長(zhǎng)封閉時(shí)間，優(yōu)化抗體稀釋比例，增加洗滌次數(shù)和時(shí)間，選擇合適封閉試劑，重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)等。2.在WB實(shí)驗(yàn)中，如何確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性？答案：要嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，如蛋白樣品制備方法一致，包括提取、濃度測(cè)定等。抗體的選擇、孵育條件固定。轉(zhuǎn)膜、電泳等儀器參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)化，操作手法規(guī)范，多人操作時(shí)需統(tǒng)一培訓(xùn)，必要時(shí)多做平行實(shí)驗(yàn)。3.比較化學(xué)發(fā)光法和熒光法在WB實(shí)驗(yàn)中的優(yōu)缺點(diǎn)。答案：化學(xué)發(fā)光法優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高，無(wú)需特殊成像設(shè)備；缺點(diǎn)是發(fā)光信號(hào)持續(xù)時(shí)間短，難準(zhǔn)確定量。熒光法優(yōu)點(diǎn)是信號(hào)穩(wěn)定，可多通道檢測(cè)，利于定