《化學(xué)品稀有鮈鯽胚胎急性毒性試驗(yàn)》編制說(shuō)明一、編制背景與目的（一）背景隨著工業(yè)化學(xué)品、農(nóng)藥、消費(fèi)品等領(lǐng)域的快速發(fā)展，化學(xué)品進(jìn)入水環(huán)境后對(duì)水生生態(tài)系統(tǒng)的潛在風(fēng)險(xiǎn)日益凸顯。稀有鮈鯽（Gobiocyprisrarus）作為我國(guó)特有的本土小型淡水魚(yú)類(lèi)，具有繁殖周期短、胚胎透明易觀察、對(duì)污染物敏感等優(yōu)勢(shì)，已成為水生毒性測(cè)試的理想模式生物。目前，我國(guó)雖有GB/T27861《化學(xué)品魚(yú)類(lèi)急性毒性試驗(yàn)》等基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)，但缺乏針對(duì)稀有鮈鯽胚胎階段的專(zhuān)項(xiàng)試驗(yàn)規(guī)范，導(dǎo)致不同實(shí)驗(yàn)室的試驗(yàn)方法不統(tǒng)一，數(shù)據(jù)可比性差，難以滿足化學(xué)品環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的精準(zhǔn)化需求。2024年8月發(fā)布的GB/T44396-2024《化學(xué)品稀有鮈鯽胚胎急性毒性試驗(yàn)》填補(bǔ)了這一空白，本編制說(shuō)明旨在闡釋該標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)邏輯與實(shí)施要點(diǎn)。（二）目的明確試驗(yàn)方法的科學(xué)依據(jù)與適用范圍，為實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展稀有鮈鯽胚胎急性毒性測(cè)試提供標(biāo)準(zhǔn)化指導(dǎo)。規(guī)范試驗(yàn)流程中的關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)，包括親魚(yú)馴養(yǎng)、胚胎選擇、試驗(yàn)系統(tǒng)設(shè)置、數(shù)據(jù)處理等，保障試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性與可重復(fù)性。統(tǒng)一毒性評(píng)價(jià)指標(biāo)與報(bào)告要求，為化學(xué)品登記、環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及監(jiān)管決策提供可靠的數(shù)據(jù)支撐。二、編制依據(jù)與原則（一）編制依據(jù)法律法規(guī)與標(biāo)準(zhǔn)文件：依據(jù)《中華人民共和國(guó)環(huán)境保護(hù)法》《危險(xiǎn)化學(xué)品安全管理?xiàng)l例》等法規(guī)，參考GB/T27861《化學(xué)品魚(yú)類(lèi)急性毒性試驗(yàn)》、OECDNo.236《魚(yú)類(lèi)胚胎急性毒性試驗(yàn)》等國(guó)內(nèi)外權(quán)威標(biāo)準(zhǔn)，確保技術(shù)要求與國(guó)際接軌。科學(xué)研究成果：整合國(guó)內(nèi)高校、科研機(jī)構(gòu)關(guān)于稀有鮈鯽生物學(xué)特性、胚胎發(fā)育規(guī)律及毒性響應(yīng)機(jī)制的研究數(shù)據(jù)，驗(yàn)證試驗(yàn)方法的科學(xué)性。實(shí)踐應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)：吸納上海市毒理學(xué)會(huì)T/SHSOT002-2022等團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室實(shí)操反饋優(yōu)化技術(shù)參數(shù)。（二）編制原則科學(xué)性原則：以稀有鮈鯽胚胎發(fā)育的生物學(xué)特性為基礎(chǔ)，設(shè)定的試驗(yàn)條件（如溫度、光照、水質(zhì)）符合其生理需求，毒性終點(diǎn)的選擇（如卵凝結(jié)、無(wú)心跳等）具有明確的生物學(xué)意義。規(guī)范性原則：對(duì)試驗(yàn)全流程進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化界定，從受試物信息收集到報(bào)告編制均明確操作要求，減少人為誤差。實(shí)用性原則：兼顧不同實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備條件，提供靜態(tài)、半靜態(tài)、流水式三種試驗(yàn)方式選擇，同時(shí)明確參比物驗(yàn)證等質(zhì)量控制手段，確保方法可落地執(zhí)行。三、標(biāo)準(zhǔn)核心內(nèi)容說(shuō)明（一）適用范圍與術(shù)語(yǔ)定義適用范圍：本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類(lèi)化學(xué)品（包括農(nóng)藥、工業(yè)化學(xué)品、消費(fèi)品等）對(duì)稀有鮈鯽胚胎的急性毒性效應(yīng)評(píng)估，可用于化學(xué)品毒性分級(jí)與環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)篩查。關(guān)鍵術(shù)語(yǔ)：界定了靜態(tài)試驗(yàn)、半靜態(tài)試驗(yàn)、半數(shù)致死濃度（LC??）等核心術(shù)語(yǔ)，其中“板內(nèi)質(zhì)控”特指通過(guò)在24孔板中設(shè)置試驗(yàn)用水對(duì)照，驗(yàn)證容器污染風(fēng)險(xiǎn)與溫度梯度影響，這一術(shù)語(yǔ)為保障微孔板試驗(yàn)的準(zhǔn)確性提供了操作依據(jù)。（二）試驗(yàn)原理與核心技術(shù)要求試驗(yàn)原理：將發(fā)育至16細(xì)胞期以?xún)?nèi)的稀有鮈鯽胚胎暴露于梯度濃度的受試物溶液中，在（26±1）℃條件下觀測(cè)96小時(shí)，記錄卵凝結(jié)、體節(jié)缺失、尾部未分離、無(wú)心跳4類(lèi)死亡表征，通過(guò)統(tǒng)計(jì)分析計(jì)算LC??，反映化學(xué)品的急性毒性強(qiáng)度。受試物信息要求：明確需收集受試物的中英文名稱(chēng)、CAS號(hào)、水溶解度、穩(wěn)定性、正辛醇-水分配系數(shù)（Kow）等11項(xiàng)關(guān)鍵信息，其中水溶液定量分析方法與穩(wěn)定性數(shù)據(jù)直接決定試驗(yàn)方式選擇（如易降解化學(xué)品需采用流水式試驗(yàn)）。試驗(yàn)系統(tǒng)設(shè)置：親魚(yú)與胚胎：親魚(yú)需選擇6-24月齡、馴養(yǎng)2個(gè)月以上且無(wú)藥物處理的健康個(gè)體，胚胎挑選最晚發(fā)育至16細(xì)胞期的正常受精卵，備用量為試驗(yàn)用量的2倍以保障樣本質(zhì)量。水質(zhì)條件：試驗(yàn)用水硬度（以CaCO?計(jì)）30-300mg/L，pH6.5-8.5，溶解氧不低于飽和濃度的80%，且需提前曝氣恒溫，避免水質(zhì)波動(dòng)影響試驗(yàn)結(jié)果。試驗(yàn)方式：根據(jù)受試物穩(wěn)定性選擇試驗(yàn)類(lèi)型，濃度變化超過(guò)±20%時(shí)需采用流水式系統(tǒng)，半靜態(tài)試驗(yàn)則需定期更換溶液且避免胚胎損傷。（三）質(zhì)量控制與數(shù)據(jù)處理質(zhì)量控制措施：實(shí)驗(yàn)室需每年至少2次使用參比物3,4-二氯苯胺驗(yàn)證胚胎敏感性，初建實(shí)驗(yàn)室需通過(guò)能力驗(yàn)證方可出具監(jiān)管用數(shù)據(jù)。設(shè)立空白對(duì)照與溶劑對(duì)照組（溶劑濃度≤100μL/L），對(duì)照組胚胎死亡率需≤10%，否則試驗(yàn)無(wú)效。試驗(yàn)容器隨機(jī)擺放以消除位置效應(yīng)，每24小時(shí)記錄水質(zhì)參數(shù)（pH、溶解氧等），確保試驗(yàn)條件穩(wěn)定。數(shù)據(jù)處理方法：采用概率單位法或寇氏法計(jì)算24h、48h、72h、96h的LC??及95%置信區(qū)間，同時(shí)記錄胚胎發(fā)育異常率，當(dāng)對(duì)照組出現(xiàn)異常時(shí)需校正試驗(yàn)數(shù)據(jù)。（四）安全防護(hù)與報(bào)告要求安全防護(hù)：明確化學(xué)品儲(chǔ)存需符合危險(xiǎn)品管理規(guī)定，試驗(yàn)人員需佩戴防護(hù)手套、護(hù)目鏡等裝備，避免受試物接觸與吸入。報(bào)告內(nèi)容：需包含受試物信息、試驗(yàn)條件、質(zhì)量控制數(shù)據(jù)、LC??結(jié)果及毒性分級(jí)建議，同時(shí)說(shuō)明試驗(yàn)過(guò)程中的異常情況（如胚胎黏連、水質(zhì)波動(dòng)）及對(duì)結(jié)果的影響。四、與相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的銜接與GB/T27861的關(guān)系：本標(biāo)準(zhǔn)是GB/T27861在特定模式生物上的細(xì)化延伸，沿用其“LC??計(jì)算”“試驗(yàn)方式分類(lèi)”等核心框架，但針對(duì)稀有鮈鯽胚胎的特性?xún)?yōu)化了溫度（從20-28℃明確為26±1℃）、胚胎選擇標(biāo)準(zhǔn)等參數(shù)。與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的協(xié)調(diào)：技術(shù)要求與OECDNo.236保持一致，確保試驗(yàn)數(shù)據(jù)的國(guó)際互認(rèn)，同時(shí)結(jié)合我國(guó)本土物種特性補(bǔ)充了親魚(yú)馴養(yǎng)周期、水質(zhì)硬度范圍等適配性條款。與團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)的互補(bǔ)：吸納T/SHSOT002-2022的安全防護(hù)經(jīng)驗(yàn)，進(jìn)一步明確了參比物驗(yàn)證的操作細(xì)節(jié)與頻次要求，提升標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)操性。五、實(shí)施意義技術(shù)支撐：為化學(xué)品水生毒性測(cè)試提供標(biāo)準(zhǔn)化方法，解決本土模式生物試驗(yàn)