2025年動(dòng)物檢疫實(shí)驗(yàn)室操作指南與常見問題解答一、選擇題（每題2分，共20題）1.動(dòng)物檢疫實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備的首要條件是？A.高級(jí)顯微鏡B.完善的生物安全設(shè)施C.自動(dòng)化采樣設(shè)備D.大型冷藏庫答案：B2.采樣過程中，檢測(cè)狂犬病病毒時(shí)應(yīng)優(yōu)先選擇哪種組織？A.肝臟B.腦組織（海馬體）C.腎臟D.血液答案：B3.布魯氏菌病血清學(xué)檢測(cè)中，最常用的抗原是？A.O抗原B.M抗原C.539抗原D.S抗原答案：A4.豬瘟病毒（CSFV）RT-PCR檢測(cè)中，內(nèi)標(biāo)的作用是？A.提高靈敏度B.監(jiān)測(cè)樣本降解C.降低成本D.增強(qiáng)特異性答案：B5.檢測(cè)禽流感病毒時(shí)，以下哪個(gè)環(huán)節(jié)需嚴(yán)格避免氣溶膠污染？A.病毒提純B.病毒裂解C.樣本勻漿D.PCR擴(kuò)增答案：D6.結(jié)核病菌落計(jì)數(shù)時(shí)，1ml菌液含多少個(gè)菌落判為強(qiáng)陽性？A.≥10CFUB.≥100CFUC.≥1000CFUD.≥10^4CFU答案：C7.采血檢測(cè)藍(lán)耳病病毒時(shí)，首選哪種抗凝劑？A.EDTAB.肝素C.檸檬酸鈉D.草酸鉀答案：B8.檢測(cè)細(xì)小病毒時(shí)，糞便樣本保存需加入？A.氯化鈉B.碳酸氫鈉C.甲醛D.蛋白酶K答案：A9.偽狂犬病病毒ELISA檢測(cè)中，臨界值（Cutoff）確定依據(jù)是？A.平均值+2SDB.平均值-2SDC.中位數(shù)+1.5IQRD.最高值+最低值答案：A10.樣本運(yùn)輸過程中，炭疽芽孢應(yīng)使用哪種容器？A.帶透氣孔的塑料袋B.密封玻璃瓶C.防滲漏金屬罐D(zhuǎn).軟質(zhì)紙質(zhì)容器答案：C二、判斷題（每題1分，共10題）1.動(dòng)物檢疫實(shí)驗(yàn)室廢棄物必須高溫高壓滅菌后才能排放。（正確）2.檢測(cè)瘋牛病時(shí)，可使用ELISA方法直接檢測(cè)腦組織樣本。（錯(cuò)誤）3.口蹄疫病毒在干燥環(huán)境下可存活數(shù)周。（正確）4.PCR實(shí)驗(yàn)中，引物設(shè)計(jì)應(yīng)避免二聚體形成。（正確）5.檢測(cè)弓形蟲時(shí)，小鼠肝組織比脾組織檢出率更高。（正確）6.禽流感病毒對(duì)熱敏感，56℃加熱30分鐘可滅活。（正確）7.豬肺疫血清學(xué)檢測(cè)需用平板凝集法。（錯(cuò)誤，應(yīng)為試管凝集法）8.樣本前處理時(shí)，均質(zhì)器轉(zhuǎn)速越高越好。（錯(cuò)誤，需根據(jù)樣本特性調(diào)節(jié)）9.馬鼻疽菌苗接種后，可使用ELISA檢測(cè)抗體。（正確）10.實(shí)驗(yàn)室空氣潔凈度應(yīng)達(dá)到ISO5級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。（錯(cuò)誤，需ISO7級(jí)）答案：√×√√√××√√三、簡(jiǎn)答題（每題5分，共6題）1.簡(jiǎn)述豬瘟病毒實(shí)驗(yàn)室確診的三個(gè)主要方法及其原理。答案要點(diǎn)：-病毒分離培養(yǎng)（細(xì)胞病變或免疫熒光）-抗原檢測(cè)（ELISA或免疫組化）-核酸檢測(cè)（RT-PCR）2.解釋布魯氏菌病兩階段血清學(xué)檢測(cè)的流程及意義。答案要點(diǎn)：-第一階段：SAT-試管凝集法篩查-第二階段：補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)或虎紅平板凝集法確認(rèn)3.描述狂犬病病毒采樣規(guī)范，包括采樣部位和保存條件。答案要點(diǎn)：-采樣部位：腦干（海馬體、延髓）-保存條件：-80℃保存，避免反復(fù)凍融4.列舉禽流感病毒檢測(cè)中常見的陽性對(duì)照類型。答案要點(diǎn)：-病毒原液對(duì)照-標(biāo)準(zhǔn)陽性血清-混合陽性樣本5.說明結(jié)核病菌落計(jì)數(shù)時(shí)，如何排除污染假陽性。答案要點(diǎn)：-設(shè)置陰性對(duì)照-涂片抗酸染色復(fù)核-分離培養(yǎng)純化6.分析藍(lán)耳病抗體檢測(cè)時(shí)，假陽性可能的原因。答案要點(diǎn)：-混合感染（如豬瘟）-感染時(shí)間不足-交叉反應(yīng)四、操作題（每題10分，共4題）1.樣品前處理：描述從生鮮血液樣本到可用于ELISA檢測(cè)的血漿制備步驟。答案要點(diǎn)：-采集抗凝血（肝素或EDTA）-3000rpm離心10分鐘-分裝血漿于無菌管--20℃保存?zhèn)溆?.PCR實(shí)驗(yàn)：簡(jiǎn)述實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)細(xì)小病毒的加樣順序。答案要點(diǎn)：-試劑：提取液→反應(yīng)管→內(nèi)標(biāo)混合液→上樣-嚴(yán)格避免加樣器頭交叉污染3.菌落計(jì)數(shù)：解釋如何使用麥?zhǔn)媳葷岱ㄅ渲坪剪斒暇木鷳乙?。答案要點(diǎn)：-稱取1g菌體溶于9ml生理鹽水-比濁至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)（約10^9CFU/ml）4.安全操作：針對(duì)炭疽芽孢實(shí)驗(yàn)，列出采樣后的環(huán)境消毒步驟。答案要點(diǎn)：-通風(fēng)櫥內(nèi)用聚維酮碘噴霧-消毒液（含有效氯500mg/L）擦拭工作臺(tái)-高壓滅菌廢棄物五、論述題（每題15分，共2題）1.比較ELISA和PCR技術(shù)在禽流感檢測(cè)中的優(yōu)缺點(diǎn)及適用場(chǎng)景。答案要點(diǎn)：-ELISA：操作簡(jiǎn)便、成本較低，適合大批量篩查-PCR：靈敏度高、特異性強(qiáng)，適合早期診斷-適用場(chǎng)景：ELISA用于抗體檢測(cè)，PCR用于病毒核酸2.論述實(shí)驗(yàn)室生物安全在動(dòng)物檢疫中的重要性及具體措施。答案要點(diǎn)：-重要性：防止人畜共患病傳播-措施：分區(qū)管理（清潔區(qū)/污染區(qū)）、個(gè)人防護(hù)（三級(jí)防護(hù)）、廢棄物規(guī)范處置-法律依據(jù)：《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》#答案匯總一、選擇題答案1.B2.B3.A4.B5.D6.C7.B8.A9.A10.C二、判斷題答案1.√2.×3.√4.√5.√6.√7.×8.×9.√10.×三、簡(jiǎn)答題答案（部分要點(diǎn)）1.豬瘟檢測(cè)方法：病毒分離培養(yǎng)（細(xì)胞病變/免疫熒光）、抗原檢測(cè)（ELISA/免疫組化）、核酸檢測(cè)（RT-PCR）2.布魯氏菌兩階段檢測(cè)：SAT試管凝集（篩查）→補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)/虎紅平板凝集（確認(rèn)）3.狂犬病采樣規(guī)范：腦干（海馬體/延髓），-80℃保存，避免反復(fù)凍融4.禽流感陽性對(duì)照：病毒原液、標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、混合陽性樣本5.結(jié)核病污染排除：陰性對(duì)照設(shè)置、涂片抗酸染色復(fù)核、分離培養(yǎng)純化6.藍(lán)耳病假陽性原因：混合感染（如豬瘟）、感染時(shí)間不足、交叉反應(yīng)四、操作題答案（部分要點(diǎn)）1.血漿制備步驟：抗凝血采集→3000rpm離心10分鐘→分裝血漿→-20℃保存2.PCR加樣順序：提取液→反應(yīng)管→內(nèi)標(biāo)混合液→上樣，避免加樣器頭交叉污染3.布魯氏菌菌懸液配制：稱1g菌體→溶9ml生理鹽水→比濁至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)（10^9CFU/ml）4.炭疽芽孢消毒步驟：聚