152022-09-09發(fā)布本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（SAM/TC1李學(xué)朋、劉敏、郜晉楠、胡建華、陳曉妮、王典I玉米皮固態(tài)發(fā)酵菌體蛋白飼料技術(shù)規(guī)程GB/T6432飼料中粗蛋白的測定凱GB/T6434飼料中粗纖維的含量測定GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和GB10648《飼料標(biāo)簽》國家標(biāo)準(zhǔn)第1號(hào)修玉米經(jīng)過浸泡、破碎后分離出來的玉米表皮，經(jīng)烘干、擠水、烘干等工序加工而124要求枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基：蛋白胨10g,酵母提取粉5g,氯化鈉10g,蒸餾水1L,pH為7.0～7.4,酵母菌培養(yǎng)基：蛋白胨20g,酵母提取粉10g,葡萄糖20g,蒸餾水1L,pH為7.0～7.4,115℃4.5菌液細(xì)胞數(shù)枯草芽孢桿菌細(xì)胞數(shù)均培養(yǎng)至1×10?cfu/mL～2×10?cfu/mL時(shí)使用；酵母菌細(xì)胞數(shù)培養(yǎng)至1×10?~飼料級(jí)硫酸銨5kg、糖蜜(10°Brix)5L、飼料級(jí)磷酸二氫鉀0.5kg、飼料級(jí)氯化鈉0.25kg。3圖1生產(chǎn)工藝流程5.2菌種培養(yǎng)菌種選用中國微生物普通菌種保藏中心的枯草芽孢桿菌BacillussubtilisCGMCC1.7417、產(chǎn)骯假絲酵母CandidautilisCGMCC2.2878以及中國工業(yè)微生物菌種保藏中心的枯草芽孢桿菌BacillussubtilisCICC10090和釀5.2.2發(fā)酵菌劑制備5.2.2.1以1%接種量將枯草芽孢桿菌B.subtilisCGMCC1.7417和枯草芽孢桿菌B.subtilisCICC10090種子液接種至LB培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)至種子液細(xì)胞數(shù)達(dá)到1×10?~2×10?CFU/ml。5.2.2.2以1%接種量將產(chǎn)骯假絲酵母C.utilisCGMCC2.2878和釀酒酵母S.cerevisiaeCICC32236種子液接種至YPD培養(yǎng)基中30℃培養(yǎng)至種子液細(xì)胞數(shù)達(dá)到1×10?~2×10?個(gè)/ml。5.2.2.3將菌種(枯草芽孢桿菌B.subtilisCGMCC1.7417:枯草芽孢桿菌B.subtilisCICC10090:合均勻作為發(fā)酵菌劑備用。發(fā)酵底物與發(fā)酵菌劑充分混合均勻后置于發(fā)酵設(shè)施，菌劑接種總量為15%,接種量為菌劑體積與發(fā)酵底物質(zhì)量的比。5.4.1發(fā)酵條件發(fā)酵應(yīng)在好氧條件下進(jìn)行，料層厚度保持在發(fā)酵設(shè)施高度的2/3處，發(fā)酵室溫度在25℃~30℃,相對(duì)濕度不低于95%,發(fā)酵品溫控制在30℃~35℃,發(fā)酵72h±2h。5.4.2發(fā)酵過程控制5.4.2.1發(fā)酵過程中每12h翻拌一次。5.4.2.2冬季發(fā)酵應(yīng)采取增溫、保溫措施，夏季發(fā)酵應(yīng)采取降溫措施，避免陽光直射。5.4.2.3在發(fā)酵過程中，采用間歇通風(fēng)調(diào)節(jié)品溫在30℃~35℃;當(dāng)品溫高于35℃且連續(xù)通風(fēng)仍不能降至35℃以下時(shí)，則應(yīng)翻拌一次。5.5取樣及檢測46.4.1符合感官要求及衛(wèi)生指標(biāo)后,再6.4.2根據(jù)品質(zhì)定級(jí)時(shí)，當(dāng)樣品的各項(xiàng)品質(zhì)指標(biāo)同時(shí)符合某一等級(jí)時(shí)，則判定所代表的該批次產(chǎn)品為產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)合格后，裝入帶有單向閥的呼吸袋進(jìn)行密封5A.2試劑或材料A.2.1水GB/T6682，三A.2.6混合催化劑。稱取0.4g五水硫酸銅、6.0g硫酸鉀或硫酸鈉，研磨均勻；或購買商品化的凱式A.2.7硼酸吸收液Ⅰ。稱取20g硼酸，用水溶解并稀釋1000mL。A.2.8硼酸吸收液Ⅱ。1%硼酸水溶液1000mL，加入0.1%溴甲酚綠乙醇溶液10mL，0.1%甲基紅乙醇溶液7mL，4%氫氧化鈉水溶液0.5mA.2.9氫氧化鈉溶液Ⅰ。稱取40.0g氫氧化鈉，用水溶解，冷卻至室溫稀釋至1000A.2.10氫氧化鈉溶液Ⅱ。稱取25.0g氫氧化鈉，用水溶解，冷卻至室溫稀釋至1000A.2.11硫酸銅溶液。稱取100.0g五水硫酸銅，用水溶解，冷卻至室溫稀釋至1000mL。A.3儀器設(shè)備A.3.1分析天平：感量0.0001g。A.3.6定氮儀：以凱式原理制造的各類型半自動(dòng)、全自動(dòng)定氮儀。A.4樣品碎，全部通過0.42mm試驗(yàn)篩，混勻，裝入密閉容器6準(zhǔn)確稱取玉米皮0.5g～1g，加入75mL蒸餾水，記錄刻度線，加熱75mL處，加入2.5%氫氧化鈉溶液20mL，10%硫酸銅溶液20mL，微沸10待試樣靜置至室溫時(shí)，使用65℃~75℃熱水沖洗，沖洗至濾液使用5%氯化鋇溶液5滴和數(shù)滴鹽酸A.5.3烘干消煮