尿液化學(xué)成分檢查五、尿液膽紅素定性檢查（BIL）

膽紅素是膽汁中的主要成分之一，正常成年人膽紅素約80%來(lái)源于衰老紅細(xì)胞破壞后釋放的血紅素，約20%來(lái)源于肌紅蛋白、細(xì)胞色素的分解。肝臟是膽紅素代謝的主要器官，經(jīng)肝臟處理的膽紅素稱結(jié)合膽紅素（直接膽紅素），未經(jīng)肝臟處理的膽紅素稱未結(jié)合膽紅素（間接膽紅素）。人血液中主要是未結(jié)合膽紅素，膽汁中主要是結(jié)合膽紅素。如果血中結(jié)合膽紅素水平升高，導(dǎo)致尿膽紅素定性陽(yáng)性，稱為膽紅素尿。結(jié)合膽紅素與未結(jié)合膽紅素的區(qū)別未結(jié)合膽紅素結(jié)合膽紅素別名間接膽紅素直接膽紅素與葡萄糖醛酸結(jié)合未結(jié)合結(jié)合與重氮試劑反應(yīng)慢或間接反應(yīng)迅速、直接反應(yīng)溶解度脂溶性、小水溶性、大經(jīng)腎隨尿排出不能能細(xì)胞毒作用大無(wú)五、尿液膽紅素定性檢查（BIL）（一）測(cè)定方法及評(píng)價(jià)

1.Harrison法：氧化法，用氧化劑將膽紅素氧化為膽綠素，反應(yīng)呈綠色為陽(yáng)性反應(yīng)。盡管操作較為復(fù)雜，但準(zhǔn)確性高。2.干化學(xué)試帶法：重氮法結(jié)合膽紅素在強(qiáng)酸性介質(zhì)中，與2,4-二氯苯胺重氮鹽起偶氮反應(yīng)而呈紫紅色。本法敏感度不高，但操作簡(jiǎn)單、快速，具有半定量作用，已在臨床上廣泛應(yīng)用。（二）參考區(qū)間陰性（三）臨床意義1.肝細(xì)胞性黃疸：黃疸性肝炎、肝硬化、毛細(xì)膽管阻塞。2.阻塞性黃疸：肝內(nèi)膽汁淤積和膽道占位性病變。3.溶血性黃疸4.先天性高膽紅素血癥六、尿膽原定性檢查（URO）

膽紅素經(jīng)膽管排泄至腸道后，在腸道細(xì)菌的作用下生成尿膽原，其中大部分經(jīng)肝腸循環(huán)被肝細(xì)胞攝取，只有少部分進(jìn)入血液由尿中排出。當(dāng)尿膽原合成增加或肝細(xì)胞攝取、轉(zhuǎn)化尿膽原的能力下降時(shí)，尿中尿膽原排出增加；而由于膽管阻塞，膽紅素不能排泄入腸道時(shí)，則沒(méi)有尿膽原生成，尿中尿膽原減少甚至陰性。（一）測(cè)定方法及評(píng)價(jià)

1.濕化學(xué)Ehrlich法：醛反應(yīng)法，尿膽原在酸性溶液中，與對(duì)二甲氨基甲醛反應(yīng)，生成櫻紅色化合物。尿液：Ehrlich=10：1。2.干化學(xué)法（1）以Ehrlich醛反應(yīng)為基礎(chǔ)的試帶（2）尿膽原與重氮化合物的偶氮反應(yīng)試帶法簡(jiǎn)單快速，可以半定量，不受尿中膽紅素的影響（二）參考區(qū)間弱陽(yáng)性；尿液1：20稀釋陰性（三）質(zhì)量控制1.尿標(biāo)本采集前應(yīng)囑咐患者口服少量NaHCO3使尿液堿化，留取午餐后2～4小時(shí)尿可提高檢出率。2.尿膽原排出后易氧化為尿膽素，故應(yīng)以新鮮尿作及時(shí)檢查，否則導(dǎo)致結(jié)果假陰性。3.維生素C會(huì)阻止醛反應(yīng)進(jìn)行，使結(jié)果呈假陰性。（三）質(zhì)量控制4.如尿中含有結(jié)合膽紅素，加Ehrlich試劑后顯綠色，干擾尿膽原檢測(cè)。可加氯化鋇溶液吸附膽紅素，離心沉淀后用上清進(jìn)行試驗(yàn)。5.顯色速度受溫度影響較大，一般要求在20左右，室溫過(guò)低時(shí)需加溫。（四）臨床意義1.黃疸的鑒別：溶血性黃疸時(shí)尿膽原生成及排出明顯增加；肝細(xì)胞性黃疸時(shí)尿膽原排出增加；完全阻塞性黃疸時(shí)尿膽原陰性。2.反映肝細(xì)胞損傷的敏感指標(biāo)：急性黃疸性肝炎時(shí)，尿膽原排泄量首先增加，早于黃疸癥狀出現(xiàn)之前。3.長(zhǎng)時(shí)間大劑量應(yīng)用抗生素可抑制腸道菌群，造成尿膽原陰性；常時(shí)間便秘容易使尿膽原陽(yáng)性程度增加。七、尿液血紅蛋白定性檢查正常尿液中Hb含量甚微，化學(xué)定性為陰性。尿中Hb來(lái)源有兩個(gè)，一個(gè)是血管內(nèi)溶血，紅細(xì)胞破壞，血紅蛋白增多，超出了結(jié)合珠蛋白的結(jié)合能力，則由腎小球?yàn)V過(guò)，隨尿液排出；另一個(gè)是上尿路出血，紅細(xì)胞在低滲、高滲或酸性環(huán)境中溶血。當(dāng)尿液中Hb含量較少時(shí)，肉眼看不出尿的顏色變化，但隱血試驗(yàn)（BLD)陽(yáng)性.（一）測(cè)定方法及評(píng)價(jià)

1.濕化學(xué)法：Hb所含的亞鐵血紅素有類似過(guò)氧化物酶活性，能催化過(guò)氧化氫和色原（苯胺或酚）物質(zhì)脫氫，并使之發(fā)生分子結(jié)構(gòu)的變化而顯色。2.干化學(xué)試帶法：與濕化學(xué)法原理相同，試劑模塊主要含有過(guò)氧化物、鄰聯(lián)甲苯胺、聯(lián)苯胺或其衍生物。3.單克隆抗體免疫膠體金法：采用膠體金標(biāo)記的抗人血紅蛋白單克隆抗體進(jìn)行隱血檢測(cè)。敏感性高，操作簡(jiǎn)單、快速，特異性強(qiáng)。（二）參考區(qū)間陰性（三）臨床意義1.輔助診斷泌尿系統(tǒng)疾病2.輔助診斷腎前性溶血性疾病：各種血管內(nèi)溶血疾病，如陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿、血型不合輸血等均可能出現(xiàn)尿隱血試驗(yàn)陽(yáng)性。八、尿液亞硝酸鹽定性檢查（NIT）

當(dāng)尿液中有病原微生物增殖，且尿液在膀胱中存留足夠長(zhǎng)時(shí)間的情況下，某些含有硝酸鹽還原酶的病原菌（如大腸埃希菌）可將尿液中的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽。亞硝酸鹽定性試驗(yàn)可作為泌尿系統(tǒng)感染的篩選指標(biāo)之一。八、尿液亞硝酸鹽定性檢查（NIT）（一）測(cè)定方法及評(píng)價(jià)

NIT測(cè)定基本上都是利用Griss原理，即NIT先與對(duì)氨基苯磺酸或氨基苯磺酰胺反應(yīng)形成重氮鹽，再與萘胺結(jié)合形成紅色偶氮化合物。1.濕化學(xué)法2.干化學(xué)法（二）參考區(qū)間陰性（三）臨床意義NIT檢查可作為泌尿系感染的過(guò)篩試驗(yàn)，但NIT陽(yáng)性取決于三個(gè)條件①尿液中存在硝酸鹽②感染的病原微生物能產(chǎn)生亞硝酸還原酶③尿液膀胱內(nèi)滯留4小時(shí)以上,所以NIT陰性不能排除診斷九、尿液白細(xì)胞酯酶定性檢查（LEU）（一）干化學(xué)試帶法

中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞胞質(zhì)中均含有酯酶，能水解吲哚酚酯生成吲哚酚和有機(jī)酸，吲哚酚與重氮鹽反應(yīng)，生成紫紅色縮合物，顏色深淺與粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的數(shù)量成正比。本試驗(yàn)主要針對(duì)中性粒細(xì)胞酯酶進(jìn)行定性檢查。（二）參考區(qū)間陰性（白細(xì)胞<5/HP）（三）臨床意義白細(xì)胞增多見(jiàn)于泌尿系統(tǒng)感染和腎小球病變。如鏡檢法和化學(xué)法結(jié)果不一致時(shí)，應(yīng)結(jié)合臨床資料及NIT結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。十、尿液維生素C定性檢查（VitC）檢測(cè)尿中維生素C的主要目的在于對(duì)其他檢測(cè)項(xiàng)目干擾的評(píng)估。尿液中高濃度的維生素C可使（1）葡萄糖班氏法呈假陽(yáng)性（2）葡萄糖氧化酶法、膽紅素、亞硝酸鹽、白細(xì)胞酯酶、隱血試驗(yàn)呈假陰性。也可降低酮體和尿膽原的敏感性。十一、尿液本周蛋白定性檢查（BJP）1、概念本-周蛋白是一種免疫球蛋白的輕鏈單體或二聚體，屬于不完全抗體球蛋白，分為κ型和λ型。又稱凝-溶蛋白。2.特點(diǎn)（1）本質(zhì)是免疫球蛋白的輕鏈單體，通常出現(xiàn)于尿中的是輕鏈的二聚體，醋酸纖維電泳可出現(xiàn)M帶，多位于α2和γ區(qū)帶之間。（2）在PH4.5～5.5條件下，加熱到56℃時(shí)沉淀，繼續(xù)加熱到90～100℃時(shí)沉淀溶解，而溫度下降到56℃時(shí)恢復(fù)凝固。⑴熱沉淀-溶解法原理※

尿+熱(40-60℃凝固90-100℃溶解)評(píng)價(jià):靈敏度不高BJP>300mg/L才檢出，必需嚴(yán)格控制PH值(PH4.5-5.5)。⑵對(duì)-甲苯磺酸法(TSA)原理※

尿BJP+對(duì)-甲苯磺酸—沉淀評(píng)價(jià):簡(jiǎn)單/靈敏度高(BJP=5mg/L)，但特異性差(受球蛋白影響)，僅作為BJP的過(guò)篩試驗(yàn)。（一）測(cè)定方法及評(píng)價(jià)⑶電泳法原理：蛋白電泳分離的原理，尿液蛋白在載體（醋酸纖維膜、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠）上經(jīng)電泳，BJP可在α2至γ之間出現(xiàn)M帶。評(píng)價(jià):①檢出率達(dá)97%②但Mb、溶菌酶等也可出現(xiàn)類似于M帶，仍需進(jìn)行免疫電泳

⑷免疫電泳（IFP）原理※瓊脂電泳+特異抗原抗體反應(yīng)—沉淀弧評(píng)價(jià)①簡(jiǎn)單，樣品用量少特異性強(qiáng)`②不同抗原含量大時(shí)，不能全部顯示⑸免疫固定電泳（IFE）原理※電泳+抗原抗體反應(yīng)(抗血清加于電泳后區(qū)上)—沉淀于固相物中評(píng)價(jià):比⑶/⑷更敏感BJP最好的驗(yàn)證試驗(yàn)

⑹免疫速率散射濁度(IRN)原理※BJP+抗κ和抗λ抗血清——光散射(強(qiáng)度與復(fù)合物量成正比)評(píng)價(jià):①速度快、靈敏、精確度高②能定量測(cè)定κ和λ輕鏈，結(jié)果可靠光（二）臨床意義※

⑴正常（-）⑵輔助診斷①多發(fā)性骨髓瘤κ/λ=2:1②巨球蛋白血癥80%-輕鏈③原發(fā)性腎淀粉樣變70-89%—單克隆蛋白⑶

預(yù)后觀察:尿中大量BJP伴清蛋白和其他球蛋白時(shí)—易發(fā)腎功能不全十二、尿液肌紅蛋白定性檢查1、概念

肌紅蛋白（myoglobinMb）是存在于橫紋肌中的一種色素蛋白質(zhì)，每個(gè)肌紅蛋白分子由一條蛋白肽鏈和一個(gè)亞鐵血紅素組成，分子量1.745萬(wàn)，約為Hb分子量的1/4，有種屬特異性，與氧可逆性結(jié)合，為肌肉組織供能。2、Mb的特性

（1）Mb分子量小，可自由透過(guò)腎小球形成Mb尿；

（2）Mb的血紅素具有類似過(guò)氧化物酶的活性，故隱血試驗(yàn)陽(yáng)性；

（3）可溶于80%硫酸銨溶液中，而Hb不能，這是Mb區(qū)別于Hb的一個(gè)特性。（一）測(cè)定方法及評(píng)價(jià)（1）化學(xué)法此法檢查方便，敏感性較高。80%硫酸銨沉淀Hb尿液上清液隱血試驗(yàn)（2）分光光度法Hb與Mb的一氧化碳結(jié)合物各自吸收光譜完全不同，借此可將二者區(qū)別開，但不夠敏感(30mg／L)。此外超濾法、層析法和電泳法等，均不敏感而且影響因素較多，未能在臨床推廣。（3）單克隆抗體免疫法

包括酶聯(lián)免疫、膠體金試帶法，是最為敏感、特異的方法，既可作為確證試驗(yàn)又可進(jìn)行尿中Mb定量分析。（二）參考值

陰性（三）質(zhì)量控制（1）標(biāo)本要新鮮，否則肌紅蛋白將因變性而被硫酸銨沉淀，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。（2）宜將硫酸銨緩慢加入尿中，輕微振蕩，防止同時(shí)沉淀肌紅蛋白引起假陰性。（四）臨床意義

肌紅蛋白尿見(jiàn)于：