飼料中風險物質的篩查與確認技術指南液相色譜-串聯(lián)質譜法本文件確立了飼料、飼料添加劑和飼料原料中風險物質篩查與確認的技術要求，描述了373種風險物質的液相色譜-串聯(lián)質譜篩查確認方法。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T20195動物飼料試樣的制備3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。按GB/T20195制備試樣，稱取樣品至少200g,粉碎后通過0.425mm孔徑的試驗篩，充分混勻，裝入密閉容器中保存，備用。選取類型相同、均勻一致且在目標物保留時間處的儀器響應值小于方法檢出限30%的飼料樣品，作為空白試樣。5串聯(lián)質譜儀儀器配備電噴霧離子源；正模式下對利血平的檢出限小于50fg,負模式下對氯霉素的檢出限小于10fg。6質譜數據庫在儀器正常條件下，依次測定標準溶液，通過質譜全掃描和二級子離子掃描模式，依據目標物名稱、母離子質荷比、兩個以上特征碎片離子質荷比、保留時間等信息建立目標物質譜數據庫。373種目標物的質譜數據庫及相關信息表見附錄A。7試驗步驟7.1試樣處理樣品前處理方法一般包含提取、凈化、稀釋(或濃縮)等操作。提取試劑可參考使用附錄A中的溶劑。為提高樣品凈化效果，可選用具有除脂、除水等功能的凈化材料。373種目標物的樣品前處理參考條件示例見附錄B。7.2液相色譜-串聯(lián)質譜條件7.2.1液相色譜條件液相色譜條件應滿足但不限于以下條件：a)色譜柱：依據篩查目標物性質及數量，選擇填料、柱長、內徑、粒度等適宜的色譜柱。進樣分析中盡可能使各組分充分分離，獲得適合質譜定性分析的總離子流色譜圖；b)流動相：有利于目標物離子化，以獲取良好的儀器響應信號；c)保留時間：目標物色譜峰保留時間應大于等于色譜柱死時7.2.2串聯(lián)質譜條件串聯(lián)質譜條件應滿足但不限于以下條件：a)有利于獲得目標物母離子和二級特征碎片離子；b)目標物二級特征碎片離子不少于2個(五氯酚等特殊化合物除外);c)單個目標物特征離子峰不少于10個數據點。在儀器正常條件下，試樣溶液上機測定，試樣溶液中待測物與質譜數據庫中目標物色譜峰的保留時間相對偏差應在±2.5%之內，且至少兩個定性離子對的信噪比不小于3,則認為篩查到疑似陽性樣品，應進行確認。若出現(xiàn)儀器信號飽和等色譜峰異常情況，應將試樣溶液稀釋后再進行確認?？瞻自嚇影锤戒汢中B.3操作，制得空白基質溶液。將目標物的標準溶液添加到空白基質溶液中配制成基質匹配標準溶液，其儀器響應值應與樣品中目標物響應值相差不超過30%。試樣溶液與基質匹配標準溶液中目標物色譜峰的保留時間相對偏差應在±2.5%之內，試樣溶液與基質匹配標準溶液中選取兩對或兩對以上離子進行定性確證，且偏差不超過表1規(guī)定的范圍，則確認為樣品中存在對應的目標物，報告為陽性結果，否則為陰性結果。10定量陽性樣品使用現(xiàn)行有效標準或經驗證的方法進行定量。附錄A373種目標物的質譜數據庫及相關信息表保留時間1阿苯達唑甲醇2奧苯達唑甲醇3阿苯達唑甲醇4阿苯達唑砜甲醇5阿苯達唑亞砜甲醇6甲醇7奧比沙星甲醇89奧芬達唑甲醇Mebendazoleamine甲醇乙腈阿莫西林保留時間安普樂定甲醇阿奇霉素甲醇奧沙西泮甲醇阿托品乙腈阿維菌素Bia乙腈安西奈德乙腈奧西那林甲醇氨溴索甲醇奧硝唑甲醇阿扎哌醇甲醇阿扎哌隆甲醇巴胺磷乙腈Nandrolonephenylpropion乙腈班布特羅甲醇吡布特羅甲醇--8保留時間吡蟲隆乙腈勃地酮甲醇乙腈甲醇吡喹酮乙腈丙卡特羅甲醇乙腈乙腈乙腈乙腈甲醇吡利霉素甲醇吡羅昔康乙腈甲醇吡哌酸甲醇◎◎保留時間丙酸睪酮乙腈丙酸諾龍乙腈甲醇甲醇乙腈丙酰二甲氨基甲醇水甲醇甲醇甲醇赤霉素乙腈乙腈乙腈醋酸氟孕酮甲醇醋酸甲地孕酮乙腈保留時間醋酸甲羥孕酮甲醇甲醇醋酸氯地孕酮乙腈醋酸美倫孕酮甲醇常山酮甲醇甲醇敵百蟲乙腈乙腈乙腈甲醇乙腈地克珠利甲醇甲醇多拉菌素甲醇乙腈保留時間甲醇甲醇地昔尼爾乙腈甲醇甲醇甲醇甲醇恩諾沙星甲醇水二氫吡啶乙腈二嗪磷乙腈二硝托胺甲醇甲醇甲醇保留時間甲醇甲醇甲醇乙腈乙腈乙腈乙腈乙腈甲醇甲醇乙腈甲醇福莫特羅甲醇呋喃苯烯酸鈉乙腈甲醇保留時間非諾特羅乙腈呋喃它酮甲醇呋喃妥因甲醇呋喃西林甲醇甲醇非那西汀甲醇呋喃唑酮甲醇甲醇氟哌利多甲醇泛昔洛韋甲醇甲醇睪酮甲醇甲醇甲醇甲醇保留時間甲醇甲醇甲醇甲醇嘧啶甲醇甲醇甲醇甲醇甲醇甲醇甲醇甲醇甲醇嘧啶甲醇甲醇保留時間甲醇甲醇甲醇甲醇乙腈甲醇紅霉素甲醇乙腈哈西奈德乙腈間氨基苯乙醚甲醇甲苯咪唑甲醇甲醇甲砜霉素甲醇甲醇甲基吡啶磷甲醇保留時間甲基睪酮乙腈甲基潑尼松龍甲醇甲基炔酮乙腈甲基鹽霉素甲醇甲基異噻唑啉酮甲醇乙腈甲醇甲滅酸Mefenamicacid乙腈吉米沙星甲醇交沙霉素甲醇吉他霉素甲醇甲醇甲硝唑甲氧芐啶甲氧芐喹酯保留時間甲醇甲醇卡布特羅甲醇克百威乙腈甲醇可的松甲醇可爾特羅甲醇可樂定甲醇乙腈克拉霉素甲醇克林霉素甲醇克倫普羅甲醇克倫塞羅甲醇克倫特羅甲醇Malachitegreen甲醇保留時間喹烯酮甲醇甲醇喹乙醇甲醇癸氧喹酯咔唑心安甲醇甲醇拉貝洛爾甲醇甲醇甲醇甲醇甲醇利多卡因甲醇龍膽紫甲醇利福霉素SRifamycinS甲醇氯化氮氨菲啶甲醇保留時間甲醇氯己定甲醇甲醇甲醇氯霉素甲醇雷尼替丁甲醇氯羥吡啶甲醇拉沙洛西鈉甲醇甲醇水甲醇甲醇甲醇馬波沙星甲醇馬布特羅甲醇保留時間馬杜霉素甲醇甲醇美金剛甲醇咪喹莫特甲醇米諾地爾甲醇嗎啉胍乙腈馬拉硫磷乙腈乙腈莫能菌素甲醇馬噴特羅甲醇甲醇美托洛爾甲醇莫奈太爾乙腈莫西菌素甲醇莫西沙星甲醇保留時間美雄酮甲醇Nalidixicacid甲醇甲醇甲醇甲醇乙腈甲醇甲醇甲醇噴布特羅甲醇培氟沙星甲醇普魯卡因乙腈哌拉西林甲醇普荼洛爾甲醇保留時間潑尼松甲醇甲醇曲安奈德乙腈曲安西龍甲醇乙腈甲醇醛固酮乙腈青蒿琥酯甲醇甲醇甲醇多西環(huán)素甲醇甲醇PenicillinG水甲醇乙腈保留時間炔諾酮乙腈齊帕特羅甲醇噻苯達唑甲醇水殺蟲脒乙腈甲醇蘇丹紅I甲醇蘇丹紅Ⅱ甲醇甲醇甲醇甲醇甲醇四環(huán)素甲醇甲醇甲醇保留時間甲醇乙腈甲醇乙腈沙拉沙星甲醇甲醇甲醇虱螨脲甲醇洛美沙星甲醇噻霉酮甲醇沙美特羅甲醇司帕沙星甲醇雙羥萘酸噻嘧啶乙腈司坦唑醇保留時間乙腈頭孢喹肟頭孢克洛頭孢拉定頭孢洛寧頭孢孟多頭孢哌酮頭孢曲松頭孢噻肟頭孢噻吩甲醇妥布特羅甲醇保留時間頭孢他美酯頭孢西丁乙腈甲醇替諾昔康甲醇甲醇替米考星甲醇甲醇乙腈乙腈脫氫異雄酮乙腈妥曲珠利甲醇甲醇甲醇保留時間替硝唑甲醇甲醇替扎尼定甲醇維吉霉素M?甲醇乙腈555甲醇溴布特羅甲醇西布特羅甲醇甲醇乙腈溴代克倫特羅甲醇甲醇溴化新斯的明乙腈辛硫磷乙腈保留時間新螺旋霉素I甲醇溴莫尼定甲醇西馬特羅甲醇西諾沙星甲醇溴氰菊酯乙腈甲醇甲醇乙腈吲哚美辛乙腈氧氟沙星甲醇甲醇依諾沙星甲醇甲醇Amproliumhydrochlor甲醇甲醇保留時間甲醇Clenpenterolhydroc甲醇隱色孔雀石綠甲醇隱色龍膽紫甲醇Valnemulinhydrochlo甲醇鹽酸賽庚啶甲醇甲醇異噻唑啉酮甲醇茚酮苯丙酸乙腈乙腈甲醇乙酰丙嗪甲醇乙酰甲喹乙腈乙氧酰胺苯甲酯甲醇甲醇保留時間乙腈1-甲基-5-硝基甲醇甲醇甲醇甲醇3-氨基-2-甲基胺乙腈甲醇3-羥基克百威乙腈乙腈甲醇甲醇乙腈乙腈保留時間5-羥基噻苯咪唑甲醇5-羥基甲苯咪唑甲醇啉甲醇19-去甲-4-雄烯二酮甲醇B.1試劑或材料除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑。B.1.65%甲酸乙腈溶液：量取50mL甲酸，用乙腈稀釋至1B.1.7流動相A:稱取0.126g甲酸銨，加適量水溶解，加入2mL甲酸，用水稀釋并定容至1000mL,混勻。B.1.8流動相B:移取2mL甲酸，用乙腈稀釋至1000mL,混勻。B.1.9乙酸銨溶液I(200mmol/L):稱取3.1g乙酸銨，用水溶解并定容至200mL,混勻。B.1.10乙酸銨溶液(5mmol/L):移取12.5mL乙酸銨溶液I(B.1.9),用水稀釋并定容至500mL,混勻。B.1.110.1%甲酸乙腈溶液：量取25mL乙腈，加入0.2mL甲酸，用水稀釋至100mL,混勻。B.1.12標準品：純度均不低于95%,CAS號及相關信息見附錄A?；蛸徺I有證標準物質。B.1.13標準儲備溶液(100μg/mL):分別稱取適量標準品(精確至0.01mg),采用附錄A中溶劑配制。-18℃以下避光保存。B.1.14混合標準中間溶液(10μg/mL):準確移取適量標準儲備溶液(B.1.13),用甲醇稀釋并定容，混勻。-18℃以下避光保B.1.15混合標準工作溶液(50ng/mL):準確移取混合標準中間溶液(B.1.14)50μL,用0.1%甲酸乙腈溶液(B.1.11)稀釋并定容至10mL,混勻。臨用現(xiàn)配。B.1.16基質匹配標準溶液：空白試樣按B.3操作，制得空白基質溶液。將目標物的標準溶液添加到空白基質溶液中制成基質匹配標準溶液，其儀器響應值應與樣品中目標物響應值接近。臨用現(xiàn)B.1.17QuEChERS凈化吸附劑：具有除水和除脂功能。B.2.1液相色譜-串聯(lián)質譜儀：配電噴霧離子源。B.2.2分析天平：精度0.01g和0.01mg。B.2.3離心機：轉速不低于8000r/min。B.2.4超聲波清洗器。B.3試驗步驟B.3.1提取稱取試樣2g(精確至0.01g)于50mL離心管中，加入10mL5%甲酸乙腈溶液(B.1.6),渦旋混勻，振蕩20min,8000r/min離心5min,轉移上清液5mL至15mL離心管，加入5mL乙酸銨溶液(B.1.10),渦旋混勻，作為備用液。備用液(B.3.1)中加入QuEChERS凈化吸附劑(B.1.17)2g,振蕩2min,8