基孔肯雅熱實驗室檢測方案2025年8月為指導(dǎo)各級醫(yī)療機構(gòu)、疾控機構(gòu)和相關(guān)實驗室檢測機構(gòu)開展基孔肯雅熱實驗室檢測工作，規(guī)范檢測程序，提高檢測質(zhì)量，制定本方案。前言導(dǎo)讀目錄CONTENTS01檢測對象02樣本采集、保存和運輸03病例實驗室檢測04蚊媒實驗室檢測05結(jié)果報送和反饋06生物安全檢測對象01一、檢測對象基孔肯雅熱病例、排查對象，媒介伊蚊成蚊和幼蟲。檢測對象樣本采集、保存和運輸02二、樣本采集、保存和運輸1.血清樣本。（1）病例急性期血清。用無菌真空干燥管，采集患者非抗凝血5mL，及時分離血清，分裝2份保存于做好標(biāo)記的、帶螺旋蓋、內(nèi)有墊圈的凍存管內(nèi)。（2）病例恢復(fù)期血清。必要時，用無菌真空干燥管，采集發(fā)病7日后恢復(fù)期患者靜脈血5ml（非抗凝血），及時分離血清，分裝2份保存于做好標(biāo)記的、帶螺旋蓋、內(nèi)有墊圈的凍存管內(nèi)。采集時間與急性期血清間隔時間不少于3天。2.蚊媒樣本。收集雙層疊帳法監(jiān)測捕獲的媒介伊蚊成蚊和布雷圖指數(shù)法監(jiān)測獲得的幼蚊，增加引誘劑捕蚊器法采集媒介伊蚊成蚊，分類鑒定后，填寫媒介伊蚊樣本采集信息表，按照采集地點分裝，每管10～20只，低溫保存。（一）樣本采集。二、樣本采集、保存和運輸24小時內(nèi)檢測的樣本可置于4℃環(huán)境中保存，1周內(nèi)檢測的樣本應(yīng)置于-20℃環(huán)境中保存，需長期使用的樣本應(yīng)置于-70℃或以下環(huán)境中保存。（二）樣本保存。二、樣本采集、保存和運輸基孔肯雅病毒的危害程度屬第二類病原微生物，血清和伊蚊標(biāo)本應(yīng)采用A類包裝（編號：UN2814）。樣本運輸時應(yīng)遵守國家相關(guān)生物安全規(guī)定，采用低溫運輸，避免反復(fù)凍融。用于開展病原學(xué)監(jiān)測的樣本，應(yīng)于48小時內(nèi)運送至地市級或省級疾控中心。（三）樣本運輸。病例實驗室檢測03三、病例實驗室檢測1.核酸檢測。一般發(fā)病后7天內(nèi)血液樣本病毒核酸檢出率較高，常采用實時熒光RT-PCR基于核酸擴增的方法進行檢測，可用于早期診斷。2.病毒培養(yǎng)分離。一般發(fā)病后5天內(nèi)血液樣本病毒培養(yǎng)分離率較高，通常將樣本接種至哺乳動物細胞（Vero、BHK21）中進行分離與培養(yǎng)，待其出現(xiàn)病變特征后，采用抗原或核酸檢測手段鑒定病毒種類。3.抗原檢測。常用雙抗體夾心ELISA法或免疫層析法進行抗原檢測，一般適用于發(fā)病后5天以內(nèi)血液樣本，檢出陽性可用于早期診斷。4.基因組序列分析。采用一代Sanger法或擴增子技術(shù)進行病毒E2和E1蛋白編碼基因序列或全基因組測序，測序技術(shù)經(jīng)質(zhì)控合格后，方可用于后續(xù)生物信息分析。二代測序平臺覆蓋深度應(yīng)不低于10×，三代測序平臺覆蓋深度應(yīng)不低于50×，全基因組測序覆蓋度應(yīng)不低于98%。（一）病原學(xué)檢測。三、病例實驗室檢測1.特異性IgM抗體。采用ELISA、免疫層析等方法檢測，是輔助診斷基孔肯雅熱急性期或近期感染的重要指標(biāo)。2.特異性IgG抗體。采用ELISA、免疫熒光（IFA）、免疫層析等方法檢測?；颊呋謴?fù)期血清IgG抗體陽轉(zhuǎn)或滴度較急性期呈4倍及以上升高可以確診。3.中和抗體。采用空斑減少中和實驗、微量中和實驗等方法檢測，可用于分型?；颊呋謴?fù)期血清中和抗體陽轉(zhuǎn)或滴度較急性期呈4倍及以上升高可以確診。（二）血清學(xué)檢測。蚊媒實驗室檢測04四、蚊媒實驗室檢測將分類分裝后的媒介伊蚊成蚊或幼蟲進行研磨，開展核酸檢測，病毒核酸陽性的樣本可由有能力或資質(zhì)的地市級或省級疾控中心進行病毒培養(yǎng)分離和基因組序列分析。蚊媒核酸檢測、病毒分離培養(yǎng)和基因組序列分析的檢測方法同病例檢測。將分類分裝后的媒介伊蚊成蚊或幼蟲進行研磨，開展核酸檢測。結(jié)果報送和反饋05五、結(jié)果報送和反饋各縣（市、區(qū)）實驗室檢測結(jié)果應(yīng)在24小時內(nèi)反饋樣本送檢單位。本地疫情發(fā)生后，省級疾控中心應(yīng)于每月中旬將上月基孔肯雅熱實驗室檢測與病原學(xué)監(jiān)測結(jié)果匯總報送至中國疾控中心。各縣（市、區(qū)）實驗室檢測結(jié)果應(yīng)在24小時內(nèi)反饋樣本送檢單位。生物安全06六、生物安全基孔肯雅熱實驗室檢測應(yīng)按照《人