高級中學(xué)名校試卷PAGEPAGE1河北省保定市六校聯(lián)盟2024-2025學(xué)年高二下學(xué)期4月期中考試本卷命題范圍：人教版選擇性必修3.一、單項(xiàng)選擇題：本題共13小題，每小題2分，共26分。在每小題給出的四個(gè)選項(xiàng)中，只有一項(xiàng)是符合題目要求的。1.發(fā)酵工程是指采用現(xiàn)代工程技術(shù)手段，利用微生物的某些特定功能，為人類生產(chǎn)有用的產(chǎn)品，或直接把微生物應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)過程的一種新技術(shù)。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A.發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié)是發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵B.利用發(fā)酵工程可以從酵母細(xì)胞內(nèi)獲得單細(xì)胞蛋白C.在菌種確定后再選擇原料制備培養(yǎng)基D.發(fā)酵工程與傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的主要區(qū)別是菌種是否單一【答案】B〖祥解〗發(fā)酵工程，是指采用現(xiàn)代工程技術(shù)手段，利用微生物的某些特定功能，為人類生產(chǎn)有用的產(chǎn)品，或直接把微生物應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)過程的一種新技術(shù)。啤酒發(fā)酵是一個(gè)復(fù)雜的物質(zhì)轉(zhuǎn)化過程。酵母的主要代謝產(chǎn)物是乙醇和二氧化碳，但也會產(chǎn)生副產(chǎn)物，如其他醇、醛、酯等物質(zhì)，共同決定了啤酒的口感、泡沫和顏色。【詳析】A、發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié)是發(fā)酵罐中發(fā)酵，A正確；B、單細(xì)胞蛋白是指微生物的菌體，因而酵母細(xì)胞本身可以制成單細(xì)胞蛋白，B錯(cuò)誤；C、不同菌種所需原料不同，在菌種確定后再選擇原料制備培養(yǎng)基，C正確；D、發(fā)酵工程與傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的主要區(qū)別是菌種是否單一，發(fā)酵規(guī)模也是主要區(qū)別之一，D正確。故選B。2.我國具有悠久的釀酒文化和歷史。《天工開物》中有“古來曲造酒，蘗造醴”的記載，“曲”指由谷物培養(yǎng)微生物所制成的發(fā)酵劑，“蘗”指發(fā)芽的谷物，“醴”指甜酒。古人在冬季釀酒時(shí)，常將谷物封存在陶器中并埋藏于地下進(jìn)行保溫。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A.“曲”中含有大量的酵母菌，溫度是影響酵母菌生長的重要因素B.釀酒過程中密封的主要目的是避免雜菌污染，從而提高酒的品質(zhì)C.“造醴”時(shí)選擇“蘗”的原因是發(fā)芽的谷物會釋放更多的淀粉酶D.“蘗造醴”時(shí)大部分糖的分解和代謝物的生成都在主發(fā)酵階段完成【答案】B〖祥解〗果酒的制作離不開酵母菌，酵母菌是兼性厭氧微生物，在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在無氧條件下，酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵?！驹斘觥緼、"曲”是指由谷物培養(yǎng)微生物所制成的發(fā)酵劑，其中起作用的主要是酵母菌，溫度可以通過影響酶的活性等影響酵母菌生長，A正確；B、釀酒過程中密封的主要目的是為酵母菌無氧呼吸創(chuàng)造無氧環(huán)境，從而提高酒的品質(zhì)，B錯(cuò)誤；C、“蘗”是指發(fā)芽的谷物，其中會產(chǎn)生較多的淀粉酶，有利于將淀粉水解，因此“造醴”（制作甜酒）時(shí)選擇“蘗”，C正確；D、“蘗造醴”時(shí)大部分糖的分解和代謝物的生成都在主發(fā)酵階段完成，此后需要在低溫、密閉的條件下保存一段時(shí)間繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)發(fā)酵，D正確。故選B。3.微生物培養(yǎng)過程中要使用無菌技術(shù)且要對微生物進(jìn)行純化培養(yǎng)。下列敘述正確的是（）A.利用生物或其代謝物除去環(huán)境中部分微生物的方法屬于消毒B.微生物、動物細(xì)胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染C.稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)時(shí)用臺盼藍(lán)染色更準(zhǔn)確D.平板劃線法純化細(xì)菌時(shí)必須對樣品菌液進(jìn)行多倍稀釋【答案】A【詳析】A、利用生物或其代謝物除去環(huán)境中部分微生物的方法屬于生物消毒法，A正確；B、微生物培養(yǎng)基中如果添加抗生素也會抑制微生物自身的生長，B錯(cuò)誤；C、稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)是根據(jù)菌落數(shù)來統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)，不需要再添加臺盼藍(lán)染色，C錯(cuò)誤；D、平板劃線法純化細(xì)菌本身就是通過多次劃線來進(jìn)行逐步稀釋，不需要先行稀釋，D錯(cuò)誤。故選A。4.植酸磷是植物或飼料中磷的主要儲存形式，由于動物體內(nèi)缺少分解植酸磷的植酸酶，導(dǎo)致植酸磷在動物體內(nèi)的利用率很低，造成磷的浪費(fèi)。科研人員從土壤中分離了五種能產(chǎn)生植酸酶的細(xì)菌菌株，培養(yǎng)基中能出現(xiàn)分解植酸磷的透明圈，操作過程如圖所示。下列敘述正確的是（）A.該過程的接種方法為平板劃線法B.A菌株是產(chǎn)植酸酶的理想菌株，應(yīng)對其擴(kuò)大培養(yǎng)C.土樣的稀釋過程不需要無菌操作D.若平板中平均菌落為150，則1g土壤中含有細(xì)菌1.5×108個(gè)【答案】D〖祥解〗題意分析，由于植酸鈣的不溶解性，使培養(yǎng)基中形成白色渾濁，產(chǎn)植酸酶的菌株會水解植酸鈣，菌落的周圍將形成透明的區(qū)域，根據(jù)透明區(qū)域的有無，可初步判斷該菌是否產(chǎn)植酸酶?！驹斘觥緼、該過程的接種方法為稀釋涂布平板法，A錯(cuò)誤；B、E菌株是產(chǎn)植酸酶的理想菌株，應(yīng)對其擴(kuò)大培養(yǎng)，因?yàn)樵撊郝滹@示的透明圈和菌落直徑的比例最大，B錯(cuò)誤；C、為了避免雜菌污染，土樣的稀釋過程需要無菌操作，C錯(cuò)誤；D、若平板中平均菌落為150，圖示實(shí)驗(yàn)所用的涂布菌液稀釋了105倍，則1g土壤中含有細(xì)菌150÷0.1×105=1.5×108個(gè)，D正確。故選D。5.中藥材懷菊含有多種活性物質(zhì)，具有清熱、明目等功效。植物組織培養(yǎng)技術(shù)可用于懷菊的脫毒和快速繁殖。下列敘述正確的是（）A.利用懷菊任何部位的細(xì)胞進(jìn)行植物細(xì)胞培養(yǎng)均可獲得次生代謝物B.懷菊快速繁殖過程中產(chǎn)生的體細(xì)胞突變可通過無性生殖遺傳C.利用懷菊的莖段作為外植體，應(yīng)對外植體進(jìn)行滅菌處理以防止培養(yǎng)基及愈傷組織污染D.生芽培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素與生長素的比值比生根培養(yǎng)基中的小【答案】B〖祥解〗植物組織培養(yǎng)是指將離體的植物器官、組織或細(xì)胞等，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其形成完整植株的技術(shù)?！驹斘觥緼、次生代謝物是由植物特定部位產(chǎn)生，通常不是植物基本生命活動所必需的物質(zhì)，A錯(cuò)誤；B、懷菊快速繁殖是通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)實(shí)現(xiàn)的，這一過程中產(chǎn)生的體細(xì)胞突變同樣可以通過植物組織培養(yǎng)（無性生殖）遺傳，B正確；C、外植體要保持細(xì)胞活性，不能滅菌處理，C錯(cuò)誤；D、生芽培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素與生長素的比值較高，而生根培養(yǎng)基中該比值較小，D錯(cuò)誤。故選B。6.科學(xué)家用蝸牛提取液處理煙草葉片和擬南芥根得到原生質(zhì)體，兩種原生質(zhì)體經(jīng)PEG處理后篩選出雜種細(xì)胞，其分裂產(chǎn)生的愈傷組織經(jīng)誘導(dǎo)形成再生植株。經(jīng)鑒定，再生植株同時(shí)表現(xiàn)出煙草和擬南芥的部分性狀。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A.蝸牛提取液具有纖維素酶和果膠酶活性，可去除細(xì)胞壁獲得原生質(zhì)體B.利用PEG處理可誘導(dǎo)兩種原生質(zhì)體的融合C.誘導(dǎo)愈傷組織期間一定要給予適宜的光照和溫度，以利于愈傷組織形成D.雜種細(xì)胞誘導(dǎo)形成具有雙親部分性狀的再生植株是基因選擇性表達(dá)的結(jié)果【答案】C〖祥解〗植物體細(xì)胞雜交技術(shù)是指將不同來源的植物體細(xì)胞，在一定條件下融合成雜種細(xì)胞，并把雜種細(xì)胞培育成新的植物體的技術(shù)。【詳析】A、根據(jù)題意，用蝸牛提取液處理煙草葉片和擬南芥根得到原生質(zhì)體，由此可知蝸牛提取液具有纖維素酶和果膠酶活性，可去除細(xì)胞壁，A正確；B、細(xì)胞融合時(shí)常用PEG處理，可提高細(xì)胞膜的流動性，從而促進(jìn)兩種原生質(zhì)體的融合，B正確；C、誘導(dǎo)愈傷組織期間需要黑暗處理，光照不利于愈傷組織形成，C錯(cuò)誤；D、雜種細(xì)胞誘導(dǎo)形成的再生植株具有雙親部分性狀，說明相關(guān)的基因可以在再生植株中表達(dá)，是基因選擇性表達(dá)的結(jié)果，D正確。故選C。7.辣椒素的獲得途徑如圖所示。下列敘述正確的是（）A.實(shí)現(xiàn)①過程的條件是外植體細(xì)胞發(fā)生基因突變B.①過程受外源激素的調(diào)控，②過程只受內(nèi)源激素的調(diào)控C.用幼嫩的根和莖作為外植體，獲得的脫毒苗具有更強(qiáng)的抗病毒能力D.通過細(xì)胞培養(yǎng)獲得辣椒素的過程未體現(xiàn)細(xì)胞的全能性【答案】D〖祥解〗由題圖信息分析可知，過程①是脫分化，過程②是再分化的過程。上面一種途徑是通過植物組織培養(yǎng)獲得脫毒苗，再從果實(shí)中獲取相應(yīng)的產(chǎn)物；下面一種途徑是采用植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)獲得大量的細(xì)胞產(chǎn)物?！驹斘觥緼、①過程是外植體細(xì)胞脫分化，失去高度分化的狀態(tài)，沒有發(fā)生基因突變，A錯(cuò)誤；B、①脫分化和②過程再分化都會受外源激素調(diào)控，B錯(cuò)誤；C、獲得脫毒苗常用的外植體是幼嫩的根和莖，脫毒苗是含病毒少，不代表具有抗病毒能力，C錯(cuò)誤；D、通過細(xì)胞培養(yǎng)獲得辣椒素的過程中獲得大量細(xì)胞即可，不需要實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的全能性，D正確。故選D。8.如圖是利用體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆優(yōu)質(zhì)奶牛的簡易流程圖，下列敘述錯(cuò)誤的是（）A.過程①細(xì)胞培養(yǎng)液中通常需要添加血清等物質(zhì)B.過程①需要提供95%空氣和5%CO2的混合氣體C.過程②常對受精卵進(jìn)行去核D.過程③后，胚胎分割獲得同卵雙胎屬于無性繁殖【答案】C〖祥解〗分析圖解：圖示過程為體細(xì)胞克隆過程，取甲牛體細(xì)胞，對處于減數(shù)分裂Ⅱ中期的卵母細(xì)胞去核，然后進(jìn)行細(xì)胞核移植；融合后的細(xì)胞激活后培養(yǎng)到早期胚胎，再進(jìn)行胚胎移植，最終得到克隆牛?！驹斘觥緼、動物血清含有動物細(xì)胞生長所必需營養(yǎng)物質(zhì)，故過程①細(xì)胞培養(yǎng)液中通常需要添加血清等物質(zhì)，A正確；B、動物細(xì)胞培養(yǎng)中需要提供95%空氣和5%CO2的混合氣體，其中95%空氣是維持細(xì)胞的正常代謝，5%CO2用于維持培養(yǎng)液的pH，B正確；C、過程②常使用顯微操作去核法對卵母細(xì)胞進(jìn)行處理，C錯(cuò)誤；D、過程③胚胎分割獲得同卵雙胎屬于無性繁殖，D正確。故選C。9.研究人員將胰島素B鏈的第28位氨基酸替換為天冬氨酸，抑制了胰島素聚合，從而獲得速效胰島素類似物。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A.該產(chǎn)品不能通過直接改造胰島素來生產(chǎn)的B.改變氨基酸的種類可能會影響胰島素的空間結(jié)構(gòu)C.該技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程，可通過定向誘導(dǎo)胰島素基因堿基增添達(dá)到改造目的D.胰島素改造的基本思路與天然蛋白質(zhì)合成過程相反【答案】C〖祥解〗蛋白質(zhì)工程概念及基本原理：（1）蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過基因修飾或基因合成，對現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。（基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì)）。（2）蛋白質(zhì)工程崛起的緣由：基因工程只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì)。（3）蛋白質(zhì)工程的基本原理：它可以根據(jù)人的需求來設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，又稱為第二代的基因工程。（4）基本途徑：預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有氨基酸序列→找到對應(yīng)的脫氧核苷酸序列（基因），最終還是回到基因工程上來解決蛋白質(zhì)的合成?！驹斘觥緼、蛋白質(zhì)工程最終還是回到基因工程上來解決蛋白質(zhì)的合成，即改造胰島素的過程實(shí)際是改造胰島素基因的過程，不能直接改造胰島素，A正確；B、氨基酸的數(shù)目、種類及排列順序均會影響胰島素的空間結(jié)構(gòu)，B正確；C、可通過定向誘導(dǎo)胰島素基因堿基替換達(dá)到第28位氨基酸替換為天冬氨酸的目的，C錯(cuò)誤；D、蛋白質(zhì)工程的基本途徑為預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有氨基酸序列→找到對應(yīng)的脫氧核苷酸序，胰島素改造的基本思路與天然蛋白質(zhì)合成過程剛好相反，D正確。故選C。10.自然條件下，甲、乙兩種魚均通過體外受精繁殖后代，甲屬于國家保護(hù)的稀有物種，乙的種群數(shù)量多且繁殖速度較甲快。我國科學(xué)家通過如圖所示流程進(jìn)行相關(guān)研究，以期用于瀕危魚類的保護(hù)。下列敘述正確的是（）A.該實(shí)驗(yàn)中，子一代的遺傳物質(zhì)來源于物種甲B.囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)將來發(fā)育成胎膜和胎盤C.誘導(dǎo)后的iPGCs具有胚胎干細(xì)胞的特性D.通過該實(shí)驗(yàn)可以獲得甲的克隆【答案】A〖祥解〗胚胎移植的基本程序主要包括：①對供、受體的選擇和處理。②配種或人工授精。③對胚胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存。④對胚胎進(jìn)行移植。⑤移植后的檢查。體外受精主要包括：卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng)、精子的采集和獲能、受精。【詳析】A、由圖可知，將物種甲的囊胚期的iPGCs移植到阻止PGCs形成的乙魚的胚胎中，培育出的乙魚的生殖腺中的細(xì)胞由甲魚的iPGCs增殖分化而來，該乙魚再與物種甲雜交，配子均是由物種甲的生殖腺細(xì)胞產(chǎn)生，故子一代的遺傳物質(zhì)來源于物種甲，A正確；B、囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)將來發(fā)育成胎兒的各種組織，B錯(cuò)誤；C、胚胎干細(xì)胞具有發(fā)育的全能性，iPGCs是誘導(dǎo)型原始生殖細(xì)胞，具有成為卵原細(xì)胞或精原細(xì)胞的潛能，誘導(dǎo)后的iPGCs不具有胚胎干細(xì)胞的特性，C錯(cuò)誤；D、克隆屬于無性繁殖，該實(shí)驗(yàn)過程中涉及到有性生殖，D錯(cuò)誤。故選A。11.關(guān)于DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定的實(shí)驗(yàn)，下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A.PCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管、蒸餾水和微量移液器等在使用前都必須進(jìn)行高壓滅菌處理B.電泳槽中添加的凝膠的濃度需考慮DNA分子的大小C.電泳鑒定PCR產(chǎn)物時(shí)加樣緩沖液中的指示劑可提示終止時(shí)刻D.可用PCR技術(shù)檢測抗蟲棉花的細(xì)胞中Bt基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA【答案】A〖祥解〗RCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)。原理：DNA復(fù)制?！驹斘觥緼、為避免外源DNA等因素的污染，PCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管、槍頭、蒸餾水等在使用前都必須進(jìn)行高壓滅菌處理，移液器不需要高壓蒸汽滅菌，A錯(cuò)誤；B、電泳槽中添加的凝膠的濃度會影響DNA分子的移動，需考慮DNA分子的大小，B正確；C、電泳鑒定PCR產(chǎn)物時(shí)加樣緩沖液中指示劑可指示樣液到達(dá)的位置，提示終止時(shí)刻，C正確；D、檢測抗蟲棉花的細(xì)胞中Bt基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，可先逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，再用PCR技術(shù)擴(kuò)增，D正確。故選A。12.質(zhì)粒是基因工程中最常用的載體，質(zhì)粒有標(biāo)記基因（如圖所示），通過標(biāo)記基因可以推知外源基因（目的基因）是否轉(zhuǎn)移成功。質(zhì)粒上箭頭表示三種限制酶的酶切位點(diǎn)。外源基因插入的位置不同，細(xì)菌在培養(yǎng)基上的生長情況不同。如表是外源基因插入（插入點(diǎn)有a、b、c）后細(xì)菌的生長情況。下列有關(guān)敘述正確的是（）項(xiàng)目細(xì)菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長情況細(xì)菌在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長情況①能生長不能生長②能生長能生長③不能生長能生長A.質(zhì)粒的復(fù)制原點(diǎn)是轉(zhuǎn)錄的起始位點(diǎn)B.①②③三種重組后細(xì)菌的外源基因插入點(diǎn)①是a，②是c，③是bC.質(zhì)粒被一個(gè)限制酶切開時(shí)，被水解的磷酸二酯鍵有2個(gè)D.將外源基因與質(zhì)粒連接時(shí)需用DNA聚合酶【答案】C〖祥解〗分析題圖和表格：a是抗氨芐青霉素基因，如果外源基因插入到a中，會破壞此基因結(jié)構(gòu)，使細(xì)菌在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上不能生長；b是抗四環(huán)素基因，如果外源基因插入到b中，會破壞此基因結(jié)構(gòu)，使細(xì)菌在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上不能生長。則①插入的是b位點(diǎn)，②插入的是c位點(diǎn)，③插入的是a位點(diǎn)?！驹斘觥緼、質(zhì)粒的復(fù)制原點(diǎn)上復(fù)制的起始位點(diǎn)，轉(zhuǎn)錄的起始位點(diǎn)是啟動子，A錯(cuò)誤；B、如果外源基因插入到a中，會破壞此基因結(jié)構(gòu)，使細(xì)菌在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上不能生長；同理如果外源基因插入到b中，使細(xì)菌在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上不能生長，①②③三種重組后細(xì)菌的外源基因插入點(diǎn)①是b②是c③是a，B錯(cuò)誤；C、質(zhì)粒被一種限制酶切開時(shí)，有兩條鏈斷裂，被水解的磷酸二酯鍵有2個(gè)，C正確；D、將外源基因與質(zhì)粒連接時(shí)需用DNA連接酶，D錯(cuò)誤。故選C。13.公眾從網(wǎng)絡(luò)和自媒體獲得的信息眾多。請利用生物學(xué)知識甄別以下信息，其中錯(cuò)誤的是（）A.當(dāng)今社會的普遍觀點(diǎn)是禁止克隆人的實(shí)驗(yàn)，但不反對治療性克隆B.消費(fèi)者對轉(zhuǎn)基因食品有知情權(quán)和選擇權(quán)C.為防止轉(zhuǎn)基因花粉的傳播，科學(xué)家將來自玉米的α-淀粉酶基因與目的基因一起轉(zhuǎn)入植物中D.生物武器是用微生物、毒素、干擾素及重組致病菌等來形成殺傷力【答案】D〖祥解〗轉(zhuǎn)基因生物的安全性問題：食物安全（滯后效應(yīng)、過敏源、營養(yǎng)成分改變）、生物安全（對生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響）。對待轉(zhuǎn)基因技術(shù)的利弊，正確的做法應(yīng)該是趨利避害，不能因噎廢食?！驹斘觥緼、治療性克隆有助于疾病的治療，較少涉及倫理道德問題，當(dāng)今社會的普遍觀點(diǎn)是禁止克隆人的實(shí)驗(yàn)，但不反對治療性克隆，A正確；B、轉(zhuǎn)基因食品的安全性尚存爭議，消費(fèi)者對轉(zhuǎn)基因食品有知情權(quán)和選擇權(quán)，B正確；C、我國科學(xué)家將來自玉米的α-淀粉酶基因與目的基因一起轉(zhuǎn)入植物中，由于α-淀粉酶基因可以阻斷淀粉儲藏使花粉失去活性，因而可以防止轉(zhuǎn)基因花粉的傳播，C正確；D、生物武器是用致病菌、病毒、生化毒劑，以及經(jīng)過基因重組的致病菌等來形成殺傷力，干擾素是免疫活性物質(zhì)，D錯(cuò)誤。故選D。二、多項(xiàng)選擇題：本題共5小題，每小題3分，共15分。在每小題給出的四個(gè)選項(xiàng)中，有兩個(gè)或兩個(gè)以上選項(xiàng)符合題目要求，全部選對得3分，選對但不全的得1分，有選錯(cuò)的得0分。14.發(fā)酵工程利用微生物的特定功能規(guī)模化生產(chǎn)對人類有用的產(chǎn)品。下列關(guān)于發(fā)酵工程的敘述，錯(cuò)誤的有（）A.白酒、味精和腐乳的生產(chǎn)所需要的微生物均為真核生物B.用平板劃線法進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)時(shí)，結(jié)果往往比實(shí)際值偏小C.啤酒生產(chǎn)時(shí)，加入糖漿和啤酒花后蒸煮的目的是產(chǎn)生風(fēng)味物質(zhì)、終止酶的進(jìn)一步作用、滅菌D.現(xiàn)代發(fā)酵工程生產(chǎn)谷氨酸需要嚴(yán)格控制酸性條件【答案】ABD〖祥解〗發(fā)酵工程一般包括菌種的選育、擴(kuò)大培養(yǎng)、培養(yǎng)基的配制、滅菌、接種、發(fā)酵、產(chǎn)品的分離、提純等方面?！驹斘觥緼、白酒釀造使用的菌種是酵母菌，為真核生物；生產(chǎn)味精用的菌種是谷氨酸棒狀桿菌，為原核生物；腐乳使用的主要菌種是毛霉，為真核生物，A錯(cuò)誤；B、平板劃線法不能用于微生物計(jì)數(shù)，因?yàn)樵趧澗€過程中，每次劃線的菌種都來自上一次劃線的末端，且每次劃線后菌種會越來越少，所以無法準(zhǔn)確計(jì)數(shù)，B錯(cuò)誤；C、啤酒生產(chǎn)時(shí)，加入糖漿和啤酒花后蒸煮的目的是產(chǎn)生風(fēng)味組分，終止酶的進(jìn)一步作用，并對糖漿滅菌，C正確；D、現(xiàn)代發(fā)酵工程生產(chǎn)谷氨酸需要嚴(yán)格控制溶氧、pH等條件，谷氨酸發(fā)酵的最適pH為7-8，不是酸性條件，D錯(cuò)誤。故選ABD。15.蛭弧菌能使污水中的嗜水氣單胞菌（異養(yǎng)型）裂解，將蛭弧菌接種在長滿嗜水氣單胞菌的平板上會出現(xiàn)噬菌斑。某興趣小組將嗜水氣單胞菌接種到固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)形成薄層，再接種采集的污水用以分離蛭弧菌。下列敘述正確的是（）A.可用干熱滅菌法對平板進(jìn)行滅菌B.可用涂布平板法或平板劃線法接種嗜水氣單胞菌C.出現(xiàn)噬菌斑一定是蛭弧菌作用的結(jié)果D.污水可為自然環(huán)境中的嗜水氣單胞菌提供碳源【答案】BD〖祥解〗微生物常見的接種的方法:（1）平板劃線法:將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板,接種,劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分,微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少,最后可能形成單個(gè)菌落。（2）稀釋涂布平板法:將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后,均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落?！驹斘觥緼、平板應(yīng)該指的是凝固后的培養(yǎng)基，不能用干熱滅菌，A錯(cuò)誤；B、接種方法有稀釋涂布平板法和平板劃線法，都可接種嗜水氣單胞菌，B正確；C、出現(xiàn)噬菌斑說明有能分解嗜水氣單胞菌的微生物，不一定是蛭弧菌作用的結(jié)果，C錯(cuò)誤；D、嗜水氣單胞菌為異養(yǎng)型，污水中含有機(jī)物，可以為微生物提供碳源，D正確。故選BD。16.如圖為某生物工程的操作流程模式圖，下列敘述錯(cuò)誤的是（）A.若此圖表示植物體細(xì)胞雜交流程圖，則①表示脫分化，②表示再分化B.若此圖表示克隆羊的培育流程圖，則①涉及核移植技術(shù)C.若此圖表示單克隆抗體的制備流程圖，則①只可用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo)D.若此圖表示試管牛的培育流程圖，則②涉及對囊胚或原腸胚進(jìn)行分割處理【答案】ACD〖祥解〗單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體?！驹斘觥緼、若此圖表示植物體細(xì)胞雜交流程圖，則①表示植物細(xì)胞融合，②表示植物組織培養(yǎng)，A錯(cuò)誤；B、在克隆羊的培育過程中，首先需要將供體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到去核的卵母細(xì)胞中，形成重構(gòu)胚。然后，這個(gè)重構(gòu)胚會通過細(xì)胞分裂和發(fā)育，最終形成克隆羊。因此，若此圖表示克隆羊的培育流程圖，則①涉及核移植技術(shù)，B正確；C、在單克隆抗體的制備過程中，首先需要將B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，形成雜交瘤細(xì)胞。這個(gè)融合過程可以通過多種方法實(shí)現(xiàn)，包括物理方法（如電融合）、化學(xué)方法（如聚乙二醇PEG）以及生物方法（如滅活的病毒）。因此，若此圖表示單克隆抗體的制備流程圖，則①不僅可以用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo)，還可以用其他方法進(jìn)行誘導(dǎo)，C錯(cuò)誤；D、若此圖表示試管牛的培育，不能對原腸胚進(jìn)行分割處理，D錯(cuò)誤。故選ACD。17.華西牛是我國育種專家培育的具有完全自主知識產(chǎn)權(quán)的專門化肉牛新品種，打破了我國肉牛種源嚴(yán)重依賴進(jìn)口的局面?？蒲腥藛T在生產(chǎn)中采取體外受精、胚胎移植等技術(shù)手段實(shí)現(xiàn)了華西牛的快速繁育。下列敘述正確的是（）A.新生犢牛的遺傳性狀由華西牛公牛及母牛決定，不受受體母牛的影響B(tài).可以采用孕激素對華西牛母牛進(jìn)行超數(shù)排卵處理，以發(fā)揮其繁殖潛力C.受體母牛需健康且具有正常的繁殖能力，胚胎移植前需要對其進(jìn)行同期發(fā)情處理D.胚胎移植后，囊胚進(jìn)一步擴(kuò)大，導(dǎo)致囊胚腔破裂的過程稱為孵化【答案】AC〖祥解〗胚胎移植的基本程序主要包括：①對供、受體的選擇和處理（選擇遺傳特性和生產(chǎn)性能優(yōu)良的供體，有健康的體質(zhì)和正常繁殖能力的受體，用激素進(jìn)行同期發(fā)情處理，用促性腺激素對供體母牛做超數(shù)排卵處理）；②配種或人工授精；③對胚胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存（對胚胎進(jìn)行質(zhì)量檢查，此時(shí)的胚胎應(yīng)發(fā)育到桑葚胚或囊胚階段）；④對胚胎進(jìn)行移植；⑤移植后的妊娠檢查。【詳析】A、犢牛的遺傳物質(zhì)來自華西牛公牛及母牛，因此遺傳性狀由華西牛公牛及母牛決定，不受受體母牛性狀的影響，A正確；B、應(yīng)采用促性腺激素對華西牛母牛進(jìn)行超數(shù)排卵處理，B錯(cuò)誤；C、受體母牛需健康且具有正常的繁殖能力，胚胎移植前需要對其進(jìn)行同期發(fā)情處理，確保胚胎移植后能正常生長，C正確；D、胚胎移植后，囊胚進(jìn)一步擴(kuò)大，導(dǎo)致透明帶破裂，胚胎從其中伸展出來，這一過程叫作孵化，D錯(cuò)誤。故選AC。18.某科研小組采用PCR技術(shù)構(gòu)建了紅色熒光蛋白基因（dsred2）和α-淀粉酶基因（amy）的dsred2-amy融合基因，其過程如圖所示，其中引物②和引物③中部分序列（深色區(qū)域）可互補(bǔ)配對。下列說法正確的是（）A.利用PCR技術(shù)擴(kuò)增基因時(shí)不需要解旋酶來打開DNA雙鏈B.不能在同一反應(yīng)體系中進(jìn)行dsred2基因和amy基因的擴(kuò)增C.dsred2基因和amy基因混合后只能得到一種類型的雜交鏈D.雜交鏈延伸得到dsred2-amy融合基因的過程不需要加引物【答案】ABD〖祥解〗PCR技術(shù)：（1）定義：PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)；（2）原理：DNA復(fù)制；（3）前提條件：要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成引物；（4）條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、耐高溫的DNA聚合酶、能量；（5）過程：高溫變性，DNA雙鏈解旋；低溫復(fù)性，引物與互補(bǔ)鏈DNA結(jié)合；中溫延伸，在耐高溫的DNA聚合酶作用下合成子鏈?！驹斘觥緼、利用PCR

技術(shù)擴(kuò)增基因時(shí)，高溫變性使DNA雙鏈解旋，不需要解旋酶來打開

DNA

雙鏈，A正確；B、引物之間的結(jié)合會干擾引物和模板鏈的結(jié)合，從而影響PCR過程，因此不能在同一個(gè)反應(yīng)體系中進(jìn)行dsred2

基因和amy基因的擴(kuò)增，B正確；C、dsred2基因和amy

基因混合可以得到兩種類型雜交鏈，只有一種可以延伸，C錯(cuò)誤；D、雜交鏈延伸得到

dsred2-amy融合基因的過程中，不需要加入引物，兩條母鏈的起始位置的堿基序列即為引物，可以作為子鏈合成的引物，D正確。故選ABD。三、非選擇題：本題共5小題，共59分。19.孔雀石綠（簡稱MG）是廣泛使用的有機(jī)染料，在自然環(huán)境中極難降解，容易引起土壤污染，進(jìn)而危害人體健康。因此從土壤中分離和篩選出高效的MG降解菌有非常重要的意義。已知MG在水中溶解度低，含過量MG的固體培養(yǎng)基不透明。（1）培養(yǎng)基的配制：MG降解菌富集培養(yǎng)基需含有NaH2PO4、KH2PO4、NaCl、NH4Cl、CaCl2、MgSO4、水等，再加________作為唯一碳源。培養(yǎng)基制備好后需立即滅菌，目的是_______。（2）MG高效降解菌株的分離和純化：圖中所示的分離純化細(xì)菌的方法是_______，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)每隔24h統(tǒng)計(jì)一次，選取________的記錄作為結(jié)果；活菌的實(shí)際數(shù)目比用該方法統(tǒng)計(jì)樣品的菌落數(shù)目________（填“少”或“多”），原因是_______。（3）黑曲霉是一種絲狀真菌，黑曲霉的PDA液體產(chǎn)酶培養(yǎng)基組成為：麩皮、豆粉餅、（NH4）2SO4、MgSO4·7H2O、KH2PO4，培養(yǎng)時(shí)需要通氣振蕩。黑曲霉的代謝類型是________；若要分離黑曲霉菌落，上述培養(yǎng)基中還需要添加________，在培養(yǎng)基滅菌前需將培養(yǎng)基調(diào)至________（填“酸性”“中性”或“堿性”）。（4）以大豆為主要原料，利用黑曲霉產(chǎn)生的蛋白酶可將原料中的蛋白質(zhì)水解成________，然后經(jīng)淋洗、調(diào)制可得到醬油。【答案】（1）①.孔雀石綠②.防止雜菌污染（2）①.稀釋涂布平板法②.菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)③.多④.當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落（3）①.異養(yǎng)需氧型②.瓊脂③.酸性（4）小分子的肽和氨基酸〖祥解〗微生物常見的接種的方法①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落?！窘馕觥浚?）要篩選出能降解MG（孔雀石綠）的微生物，培養(yǎng)基的配制需要以MG（孔雀石綠）作為唯一碳源。培養(yǎng)基制備好后需立即滅菌，以防止雜菌的污染。（2）稀釋涂布平板法可用于統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目，圖中所示的分離純化細(xì)菌的方法（需要計(jì)數(shù)）是稀釋涂布平板法。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落的數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落數(shù)目；活菌的實(shí)際數(shù)目比用該方法（稀釋涂布平板法）統(tǒng)計(jì)樣品的菌落數(shù)目多，原因是當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。（3）根據(jù)黃曲霉的培養(yǎng)基成分以及培養(yǎng)時(shí)需要通氣振蕩，可知黑曲霉的代謝類型是異養(yǎng)需氧型，即需要利用有機(jī)物作為碳源和能源，并在有氧條件下進(jìn)行生長和代謝。若要分離黑曲霉菌落，由于黑曲霉在pH呈酸性的環(huán)境中生長良好，因此需要在上述培養(yǎng)基中添加瓊脂作為凝固劑，制成固體培養(yǎng)基。同時(shí)，在培養(yǎng)基滅菌前，還需將培養(yǎng)基調(diào)至酸性，以滿足黑曲霉的生長需求。（4）酶具有專一性，且蛋白質(zhì)的基本單位是氨基酸，若以大豆為主要原料，利用黑曲霉產(chǎn)生的蛋白酶可將原料中的蛋白質(zhì)水解成小分子肽和氨基酸，然后經(jīng)淋洗、調(diào)制可得到醬油。20.犬細(xì)小病毒（CPV）主要感染幼犬，傳染性極強(qiáng)，死亡率也高。利用小鼠制備抗CPV單克隆抗體的基本流程如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：（1）制備單克隆抗體依賴的生物技術(shù)有_______（答出2點(diǎn)）。與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合前，已免疫的B淋巴細(xì)胞________（填“需要”或“不需要”）通過原代培養(yǎng)擴(kuò)大細(xì)胞數(shù)量；步驟①中，用滅活的CPV免疫小鼠需要在一定時(shí)間內(nèi)間隔注射3次，其目的是_______。（2）經(jīng)過步驟②后獲得的是多種類型的雜交細(xì)胞，原因是_______。對雜交細(xì)胞等用特定的選擇培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基對_______和_______生長具有抑制作用，此次篩選得到雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)是_______；對雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行________經(jīng)過多次篩選才能獲得足夠數(shù)量的能分泌抗CPV抗體的細(xì)胞。（3）體外培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞后從培養(yǎng)基中提取到抗CPV單克隆抗體，也可將雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖，從_______中獲取抗CPV單克隆抗體。（4）對疑似感染CPV的幼犬進(jìn)行確診時(shí)，可用獲得的抗CPV單克隆抗體進(jìn)行_______檢測。【答案】（1）①.動物細(xì)胞培養(yǎng)、動物細(xì)胞融合②.不需要③.加強(qiáng)免疫，刺激小鼠機(jī)體產(chǎn)生更多已免疫的B淋巴細(xì)胞（2）①.細(xì)胞融合是隨機(jī)的②.未融合的親本細(xì)胞③.融合的具有同種核的細(xì)胞④.既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生抗體⑤.克隆化培養(yǎng)、抗體檢測（3）小鼠腹水（4）抗原—抗體雜交〖祥解〗單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體?！窘馕觥浚?）制備單克隆抗體依賴的生物技術(shù)有動物細(xì)胞培養(yǎng)和動物細(xì)胞融合（誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合）等技術(shù)；已免疫的B淋巴細(xì)胞本身數(shù)量相對較多，且在后續(xù)與骨髓瘤細(xì)胞融合等操作中會有進(jìn)一步的處理和篩選，所以不需要通過原代培養(yǎng)擴(kuò)大細(xì)胞數(shù)量。步驟①中，滅活的CPV屬于抗原，用滅活的CPV免疫小鼠，小鼠會產(chǎn)生體液免疫，產(chǎn)生B淋巴細(xì)胞，所以用滅活的CPV免疫小鼠需要在一定時(shí)間內(nèi)間隔注射3次，其目的是加強(qiáng)免疫，刺激小鼠機(jī)體產(chǎn)生更多已免疫的B淋巴細(xì)胞。（2）經(jīng)過步驟②細(xì)胞融合后，由于細(xì)胞融合是隨機(jī)結(jié)合，會獲得多種類型的雜交細(xì)胞，包括B淋巴細(xì)胞相互融合形成的細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞相互融合形成的細(xì)胞以及B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合形成的雜交瘤細(xì)胞。為了篩選出能分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，需要使用特定的選擇培養(yǎng)基。在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長。因此，通過選擇培養(yǎng)基的篩選，可以得到既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生抗體的雜交瘤細(xì)胞。然而，初次篩選出的雜交瘤細(xì)胞并不都能產(chǎn)生抗CPV的抗體，因此還需要對雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)、抗體檢測，經(jīng)過多次篩選才能獲得足夠數(shù)量的能分泌抗CPV抗體的細(xì)胞。（3）體外培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞后從培養(yǎng)基中提取到抗CPV單克隆抗體，也可將雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖，從小鼠腹水中獲取抗CPV單克隆抗體。（4）對疑似感染CPV的幼犬進(jìn)行確診時(shí)，可以使用獲得的抗CPV單克隆抗體進(jìn)行抗原-抗體雜交檢測。這種方法利用抗原與抗體之間的特異性結(jié)合原理，通過檢測樣本中是否存在與抗CPV單克隆抗體特異性結(jié)合的抗原（即CPV），來判斷幼犬是否感染了CPV。21.研究表明，羊乳中的β-乳球蛋白（BLG）是人體主要過敏源，圖1為研究人員利用基因編輯技術(shù)敲除山羊中BLG基因，同時(shí)導(dǎo)入人乳鐵蛋白（hLF）基因并獲得轉(zhuǎn)基因山羊的操作過程。圖1中sgBLG/Cas9復(fù)合物中，sgBLG是能準(zhǔn)確識別圖1中母羊甲DNA特定序列的RNA，并引導(dǎo)Cas9蛋白對DNA進(jìn)行切割?；卮鹣铝袉栴}：（1）上述操作過程中的目的基因是_______。Cas9蛋白作用于目標(biāo)DNA的________（填化學(xué)鍵）使其斷裂。（2）圖中③應(yīng)用到的技術(shù)為________。（3）獲取母羊丙的卵母細(xì)胞后需將其培養(yǎng)至________期后去核，去核的目的是_______。⑤過程需將早期胚胎移植到母羊丁的子宮中，進(jìn)行胚胎移植的優(yōu)勢是________。（4）研究人員利用人乳鐵蛋白基因的mRNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄得到了cDNA，已知mRNA的序列為5′—UUACUUCCUG……（中間序列）…CAAGUUUCAU—3′。在目的基因兩端加上相應(yīng)的限制酶識別序列后利用PCR技術(shù)擴(kuò)增，目的基因和圖2中的質(zhì)粒連接構(gòu)建表達(dá)載體。請分別寫出PCR擴(kuò)增時(shí)所需兩種DNA引物按5′到3′方向的前12個(gè)堿基序列______。（5）篩選后得到的早期胚胎細(xì)胞中不能檢測到該藥用蛋白，________（填“能”或“不能”）作為目的基因是否成功導(dǎo)入并表達(dá)的依據(jù)，理由是_______?！敬鸢浮浚?）①.人乳鐵蛋白（hLF）基因②.磷酸二酯鍵（2）顯微操作去核（3）①.MⅡ（中）（減數(shù)分裂Ⅱ中期/減數(shù)第二次分裂中期）②.確保重構(gòu)胚的核遺傳物質(zhì)來自供體細(xì)胞③.充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個(gè)體的繁殖潛力（4）5′—GAATTCTTACTT—3′，5′—CTGCAGATGAAA—3′（5）①.不能②.人乳鐵蛋白（目的）基因只能在轉(zhuǎn)基因動物的乳腺細(xì)胞內(nèi)表達(dá)〖祥解〗基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！窘馕觥浚?）依據(jù)題意：利用基因編輯技術(shù)敲除山羊中BLG基因同時(shí)導(dǎo)入人乳鐵蛋白（hLF）基因并獲得轉(zhuǎn)基因山羊，可知目的基因是人乳鐵蛋白基因。題干中“引導(dǎo)Cas9蛋白對DNA進(jìn)行切割”，說明Cas9蛋白可以切割DNA分子，作用于目標(biāo)DNA的磷酸二酯鍵，與限制性內(nèi)切核酸酶（限制酶）作用類似。（2）圖中③對母羊的卵母細(xì)胞進(jìn)行去核操作，應(yīng)用到的技術(shù)為顯微操作去核。（3）對獲取的卵母細(xì)胞需進(jìn)行培養(yǎng)至減數(shù)第二次分裂中期后去核，去核的目的是確保重構(gòu)胚的核（遺傳物質(zhì)）來自供體細(xì)胞。胚胎移植能讓優(yōu)良母畜只負(fù)責(zé)提供胚胎，而讓普通受體母畜（如母羊?。┏袚?dān)妊娠和育仔任務(wù)，優(yōu)良母畜可不斷產(chǎn)生胚胎，所以充分發(fā)揮了雌性優(yōu)良個(gè)體的繁殖潛力，大大提高了繁殖效率。（4）題干信息可知，mRNA的序列為5’-UUACUUCCUG…（中間序列）…CAAGUUUCAU-3’，通過逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA雙鏈（目的基因），其模板鏈序列為3’-AATGAAGGAC…（中間序列）…GTTCAAAGTA-5’，對應(yīng)的編碼鏈序列為5’-TTACTTCCTG…（中間序列）…CAAGTTTCAT-3’；設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，引物需要從5’到3’，且已知雙鏈cDNA的兩端序列，設(shè)計(jì)的引物從cDNA的兩端向中間方向擴(kuò)增，則引物1序列為5’-TTACTTCCTG-3’，引物2序列為5’-ATGAAACTTG-3’；根據(jù)圖2載體中乳腺蛋白基因的啟動子和終止子的位置及限制酶識別序列位點(diǎn)可知，cDNA（目的基因）需要插入EcoRⅠ和PstⅠ所在的位置，由于EcoRⅠ位于乳腺蛋白基因的啟動子一側(cè)，又依據(jù)cDNA的模板鏈序列，可知擴(kuò)增的目的基因引物1所在的一端應(yīng)該靠近乳腺蛋白基因的啟動子，引物2所在的一端應(yīng)該靠近終止子；cDNA（目的基因）沒有EcoRⅠ和PstⅠ的識別序列，故設(shè)計(jì)引物時(shí)需要在引物的5’端添加相應(yīng)的識別序列，根據(jù)上述分析，引物15’端增添EcoRⅠ識別序列，而引物25’端增添PstⅠ識別序列，即引物1添加限制酶后序列為5'-GAATTCTTACTT-3'（下圖左側(cè)的引物），引物2限制酶后序列為5'-CTGCAGATGAAA-3'（下圖右側(cè)的引物）。如圖所示：（5）由于人乳鐵蛋白（目的）基因只能在轉(zhuǎn)基因動物的乳腺細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，篩選后得到的早期胚胎細(xì)胞中不能檢測到該藥用蛋白，不能作為目的基因是否成功導(dǎo)入并表達(dá)的依據(jù)。22.反芻動物的瘤胃中含有分解纖維素的微生物，科研小組從瘤胃中分離培養(yǎng)分解纖維素的微生物的流程如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：（1）菌落特征可作為鑒定菌種的依據(jù)，觀察分離到的菌落將菌落特征如________（答出一點(diǎn)）記錄下來。（2）將Ⅰ過程得到菌液接種到充滿N2的密閉試管中進(jìn)行Ⅱ過程，培養(yǎng)一段時(shí)間后可在試管壁的薄層培養(yǎng)基上獲得單菌落。培養(yǎng)瘤胃微生物時(shí)，除考慮營養(yǎng)物質(zhì)外，還要考慮________、________和滲透壓等條件。（3）分離出某真菌的W基因可編碼一種可高效降解纖維素的酶，已知圖中W基因轉(zhuǎn)錄方向是從左向右，為使大腸桿菌產(chǎn)生該酶，以圖中質(zhì)粒為載體，進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作。不同限制酶的識別序列及切割位點(diǎn)如表所示。限制酶BamHIEcoRIMfeIKpnIHindⅢ識別序列和切割位點(diǎn)G↓GATTCG↓AATTCC↓AATTGGGTAC↓CA↓AGCTT①W基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈?zhǔn)莀_______。利用PCR技術(shù)對W基因進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)子鏈延伸的方向是________。②啟動子通常具有物種特異性，在質(zhì)粒中插入W基因，其上游啟動子應(yīng)選擇________的啟動子。③限制酶主要是從________中分離純化出來的。應(yīng)使用限制酶________切割圖中質(zhì)粒，使用限制酶________切割圖中含W基因的DNA片段，以獲得能正確表達(dá)W基因的重組質(zhì)粒?！敬鸢浮浚?）形狀、大小、顏色等（2）①.溫度②.pH（3）①.乙鏈②.5′→3′③.大腸桿菌④.原核生物⑤.MfeⅠ、HindⅢ⑥.EcoRⅠ、HindⅢ〖祥解〗一個(gè)基因表達(dá)載體的組成，除目的基因、標(biāo)記基因外，還必須有啟動子、終止子等。啟動子是一段有特殊序列結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的上游緊挨轉(zhuǎn)錄的起始位點(diǎn)，它是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位。有了它才能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終表達(dá)出人類需要的蛋白質(zhì)。【解析】（1）菌落特征，如菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等，都可以作為鑒定菌種的依據(jù)。在觀察分離到的菌落時(shí)，需要詳細(xì)記錄這些特征，以便后續(xù)的分析和鑒定。（2）微生物的培養(yǎng)條件有適宜的營養(yǎng)物質(zhì)(碳源、氮源、無機(jī)鹽等)、溫度、pH、滲透壓(控制培養(yǎng)液的濃度)等，因此培養(yǎng)瘤胃微生物時(shí)，除考慮營養(yǎng)物質(zhì)外，還要考慮溫度、pH和滲透壓等條件。（3）①W基因轉(zhuǎn)錄方向是從左向右，mRNA鏈的合成方向?yàn)?'→3'，與乙鏈從左向右3'→5'互補(bǔ)，故W基因轉(zhuǎn)錄的