動(dòng)脈粥樣硬化中T細(xì)胞克隆演變及l(fā)et-7e對(duì)血管內(nèi)皮功能調(diào)控機(jī)制探究一、引言1.1研究背景與意義動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）是一種嚴(yán)重威脅人類健康的慢性疾病，是全球心腦血管疾病的主要病理基礎(chǔ)。其病變特征為動(dòng)脈管壁增厚變硬、失去彈性和管腔縮小，主要累及大動(dòng)脈和中等動(dòng)脈，如主動(dòng)脈、冠狀動(dòng)脈、腦動(dòng)脈等。據(jù)統(tǒng)計(jì)，心血管疾病每年導(dǎo)致全球約1790萬人死亡，其中大部分與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)。在中國，心血管疾病的發(fā)病率和死亡率也呈上升趨勢(shì)，給社會(huì)和家庭帶來了沉重的負(fù)擔(dān)。動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的過程，涉及多種細(xì)胞和分子機(jī)制。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為，動(dòng)脈粥樣硬化主要與脂質(zhì)代謝紊亂、高血壓、高血糖等因素有關(guān)，這些因素導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，促進(jìn)脂質(zhì)在血管壁的沉積，進(jìn)而引發(fā)炎癥反應(yīng)和血栓形成。然而，越來越多的研究表明，免疫系統(tǒng)在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中也起著關(guān)鍵作用。其中，T細(xì)胞作為免疫系統(tǒng)的重要組成部分，近年來受到了廣泛關(guān)注。T細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用機(jī)制十分復(fù)雜，不同類型的T細(xì)胞亞群在動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程中發(fā)揮著不同甚至相反的作用。輔助性T細(xì)胞1（Th1）和Th17細(xì)胞能夠分泌促炎細(xì)胞因子，如干擾素-γ（IFN-γ）、白細(xì)胞介素-17（IL-17）等，促進(jìn)炎癥反應(yīng)，加劇動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展；而輔助性T細(xì)胞2（Th2）和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）則分泌抗炎細(xì)胞因子，如IL-4、IL-10等，抑制炎癥反應(yīng)，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化具有保護(hù)作用。T細(xì)胞的克隆變化在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中也具有重要意義。研究發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中，T細(xì)胞呈現(xiàn)出克隆性擴(kuò)增的現(xiàn)象，這些克隆性擴(kuò)增的T細(xì)胞可能針對(duì)斑塊中的特定抗原產(chǎn)生免疫反應(yīng)，進(jìn)一步促進(jìn)炎癥和斑塊的進(jìn)展。深入研究T細(xì)胞克隆變化在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用機(jī)制，對(duì)于揭示動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制、尋找新的治療靶點(diǎn)具有重要意義。血管內(nèi)皮細(xì)胞是血管壁的重要組成部分，它不僅作為血液與血管壁之間的物理屏障，還具有多種重要的生理功能，如調(diào)節(jié)血管張力、維持血液的流動(dòng)性和抗凝性、參與炎癥反應(yīng)等。正常的血管內(nèi)皮功能對(duì)于維持血管的健康至關(guān)重要，而血管內(nèi)皮功能障礙則是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的早期關(guān)鍵事件。當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞受到各種危險(xiǎn)因素的刺激時(shí)，其功能會(huì)發(fā)生改變，分泌多種生物活性物質(zhì)，如一氧化氮（NO）、內(nèi)皮素-1（ET-1）、血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）等，這些物質(zhì)的失衡會(huì)導(dǎo)致血管收縮、炎癥細(xì)胞黏附、血栓形成等，進(jìn)而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。微小RNA（miRNA）是一類內(nèi)源性非編碼單鏈RNA分子，長(zhǎng)度約為22個(gè)核苷酸，通過與靶mRNA的互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá)。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，miRNA在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，其中l(wèi)et-7e是研究較為廣泛的一種miRNA。let-7e可以通過調(diào)控多個(gè)靶基因的表達(dá)，影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能。研究表明，let-7e可以靶向調(diào)控ET-1的表達(dá)，從而調(diào)節(jié)血管張力；還可以通過抑制VCAM-1的表達(dá)，減少炎癥細(xì)胞的黏附，發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。深入研究let-7e對(duì)血管內(nèi)皮功能的調(diào)控機(jī)制，對(duì)于理解動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制、開發(fā)新的治療策略具有重要意義。綜上所述，T細(xì)胞克隆變化和let-7e對(duì)血管內(nèi)皮功能的調(diào)控在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中均具有重要作用，但目前對(duì)于它們之間的相互關(guān)系以及具體的分子機(jī)制仍不清楚。本研究旨在探討動(dòng)脈粥樣硬化中T細(xì)胞克隆變化的特征及其與疾病進(jìn)展的關(guān)系，同時(shí)研究let-7e通過調(diào)控血管內(nèi)皮功能在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用機(jī)制，為動(dòng)脈粥樣硬化的防治提供新的理論依據(jù)和治療靶點(diǎn)。1.2研究目的與內(nèi)容本研究旨在深入探究動(dòng)脈粥樣硬化中T細(xì)胞克隆變化的特征以及l(fā)et-7e通過調(diào)控血管內(nèi)皮功能在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制，具體研究?jī)?nèi)容如下：動(dòng)脈粥樣硬化中T細(xì)胞克隆變化特征的研究：收集動(dòng)脈粥樣硬化患者和健康對(duì)照者的外周血及動(dòng)脈粥樣硬化斑塊組織樣本，運(yùn)用單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)和T細(xì)胞受體（TCR）測(cè)序技術(shù)，全面分析T細(xì)胞的克隆組成、克隆擴(kuò)增情況以及T細(xì)胞亞群的分布特征；通過生物信息學(xué)分析，挖掘與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展相關(guān)的T細(xì)胞克隆標(biāo)志物，為疾病的早期診斷和病情評(píng)估提供潛在的生物標(biāo)志物；采用細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證關(guān)鍵T細(xì)胞克隆在動(dòng)脈粥樣硬化炎癥反應(yīng)和斑塊進(jìn)展中的功能及作用機(jī)制。let-7e對(duì)血管內(nèi)皮功能調(diào)控機(jī)制的研究：構(gòu)建血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型，模擬動(dòng)脈粥樣硬化的病理微環(huán)境，研究let-7e在血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷過程中的表達(dá)變化；利用基因編輯技術(shù)，過表達(dá)或敲低血管內(nèi)皮細(xì)胞中的let-7e，觀察其對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響，包括血管舒張功能、炎癥因子分泌、細(xì)胞黏附分子表達(dá)等；通過生物信息學(xué)預(yù)測(cè)和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，確定let-7e調(diào)控血管內(nèi)皮功能的下游靶基因，并深入研究其調(diào)控機(jī)制，揭示let-7e在血管內(nèi)皮功能調(diào)控中的信號(hào)通路。T細(xì)胞克隆變化與let-7e調(diào)控血管內(nèi)皮功能關(guān)聯(lián)的研究：分析T細(xì)胞克隆變化與血管內(nèi)皮功能指標(biāo)之間的相關(guān)性，探討T細(xì)胞克隆變化對(duì)let-7e調(diào)控血管內(nèi)皮功能的影響；研究let-7e是否通過調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞與T細(xì)胞之間的相互作用，影響T細(xì)胞的活化、增殖和分化，進(jìn)而參與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展；通過體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證T細(xì)胞克隆變化與let-7e調(diào)控血管內(nèi)皮功能在動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程中的關(guān)聯(lián)，為動(dòng)脈粥樣硬化的防治提供新的理論依據(jù)和治療靶點(diǎn)。1.3研究方法與創(chuàng)新點(diǎn)本研究綜合運(yùn)用多種先進(jìn)的研究方法，從細(xì)胞、動(dòng)物和分子水平深入探究動(dòng)脈粥樣硬化中T細(xì)胞克隆變化及l(fā)et-7e對(duì)血管內(nèi)皮功能的調(diào)控機(jī)制，旨在為動(dòng)脈粥樣硬化的防治提供新的理論依據(jù)和治療靶點(diǎn)。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方面，通過體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）和外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs），構(gòu)建血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型和T細(xì)胞活化模型。利用脂多糖（LPS）、氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）等刺激物誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，模擬動(dòng)脈粥樣硬化的病理微環(huán)境；通過抗CD3/CD28抗體刺激PBMCs，激活T細(xì)胞并誘導(dǎo)其增殖和分化。采用CCK-8法、流式細(xì)胞術(shù)、ELISA等實(shí)驗(yàn)技術(shù)，檢測(cè)細(xì)胞的增殖、凋亡、周期、細(xì)胞因子分泌等指標(biāo)，研究T細(xì)胞克隆變化和let-7e對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響。運(yùn)用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)，構(gòu)建let-7e過表達(dá)和敲低的血管內(nèi)皮細(xì)胞系，進(jìn)一步驗(yàn)證let-7e的功能及作用機(jī)制。動(dòng)物模型研究也是本研究的重要部分。選用載脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）小鼠和低密度脂蛋白受體基因敲除（LDLR-/-）小鼠，建立動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型。通過高脂飲食喂養(yǎng)，加速動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。在實(shí)驗(yàn)過程中，定期采集小鼠的血液和組織樣本，進(jìn)行血脂檢測(cè)、病理切片分析、免疫組化檢測(cè)等，觀察動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成和發(fā)展情況。利用體內(nèi)成像技術(shù)，如小動(dòng)物活體成像系統(tǒng)，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)T細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中的浸潤(rùn)和分布情況，以及l(fā)et-7e對(duì)血管內(nèi)皮功能的影響。通過尾靜脈注射等方式，將過表達(dá)或敲低let-7e的腺病毒載體導(dǎo)入小鼠體內(nèi)，研究let-7e在體內(nèi)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程的調(diào)控作用。生物信息學(xué)分析在本研究中起到了關(guān)鍵的輔助作用。收集和整理已有的動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)、TCR測(cè)序數(shù)據(jù)和miRNA表達(dá)譜數(shù)據(jù)，運(yùn)用生物信息學(xué)軟件和工具，進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘和分析。通過差異表達(dá)分析，篩選出與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展相關(guān)的T細(xì)胞克隆標(biāo)志物和let-7e的潛在靶基因；利用基因富集分析（GO）和京都基因與基因組百科全書（KEGG）通路分析，探討T細(xì)胞克隆變化和let-7e調(diào)控血管內(nèi)皮功能的分子機(jī)制和信號(hào)通路。構(gòu)建蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)，挖掘關(guān)鍵的調(diào)控節(jié)點(diǎn)和分子，為實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證提供理論依據(jù)。通過生物信息學(xué)預(yù)測(cè)和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證相結(jié)合的方式，確定let-7e與靶基因之間的相互作用關(guān)系，深入研究其調(diào)控機(jī)制。本研究的創(chuàng)新點(diǎn)主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：首次從T細(xì)胞克隆變化和let-7e調(diào)控血管內(nèi)皮功能的多機(jī)制角度，全面深入地研究動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制，揭示兩者之間的內(nèi)在聯(lián)系，為動(dòng)脈粥樣硬化的研究提供了新的思路和方向。運(yùn)用單細(xì)胞測(cè)序和TCR測(cè)序等前沿技術(shù)，深入分析動(dòng)脈粥樣硬化中T細(xì)胞的克隆組成和動(dòng)態(tài)變化，挖掘潛在的T細(xì)胞克隆標(biāo)志物，為疾病的早期診斷和病情評(píng)估提供了新的生物標(biāo)志物。通過生物信息學(xué)預(yù)測(cè)和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證相結(jié)合的方法，系統(tǒng)研究let-7e調(diào)控血管內(nèi)皮功能的下游靶基因和信號(hào)通路，豐富了對(duì)let-7e在動(dòng)脈粥樣硬化中作用機(jī)制的認(rèn)識(shí)，為開發(fā)新的治療策略提供了理論基礎(chǔ)。本研究的成果有望為動(dòng)脈粥樣硬化的防治提供新的靶點(diǎn)和策略，具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。二、動(dòng)脈粥樣硬化與T細(xì)胞克隆變化2.1動(dòng)脈粥樣硬化概述動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）是一種慢性進(jìn)行性的血管疾病，其主要特征為動(dòng)脈管壁增厚、變硬，管腔逐漸狹窄，這是由于動(dòng)脈內(nèi)膜下脂質(zhì)、復(fù)合糖類、纖維組織、鈣鹽等物質(zhì)的逐漸沉積，形成了粥樣斑塊，進(jìn)而導(dǎo)致動(dòng)脈失去彈性，影響血液的正常流通。這種病變主要累及大中動(dòng)脈，如主動(dòng)脈、冠狀動(dòng)脈、腦動(dòng)脈等，是心腦血管疾病的主要病理基礎(chǔ)，嚴(yán)重威脅著人類的健康。動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制是一個(gè)復(fù)雜且尚未完全明確的過程，涉及多種因素的相互作用。目前被廣泛接受的發(fā)病機(jī)制理論主要包括脂質(zhì)浸潤(rùn)學(xué)說、炎癥反應(yīng)學(xué)說、內(nèi)皮損傷反應(yīng)學(xué)說等。脂質(zhì)浸潤(rùn)學(xué)說認(rèn)為，血脂異常是動(dòng)脈粥樣硬化的重要始動(dòng)因素，尤其是低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平的升高。當(dāng)血液中LDL-C濃度升高時(shí)，其容易通過受損的血管內(nèi)皮進(jìn)入內(nèi)皮下，被氧化修飾成氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）。ox-LDL具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，能夠吸引單核細(xì)胞進(jìn)入內(nèi)皮下，并分化為巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞通過其表面的清道夫受體大量攝取ox-LDL，逐漸轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞。隨著泡沫細(xì)胞的不斷堆積，形成了早期的脂質(zhì)條紋，這是動(dòng)脈粥樣硬化的早期病變。炎癥反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用，也是炎癥反應(yīng)學(xué)說的核心內(nèi)容。在動(dòng)脈粥樣硬化的起始階段，血管內(nèi)皮細(xì)胞受到各種危險(xiǎn)因素的刺激，如高血壓、高血糖、吸煙、氧化應(yīng)激等，會(huì)發(fā)生功能障礙，表現(xiàn)為內(nèi)皮細(xì)胞的通透性增加、黏附分子表達(dá)上調(diào)等。這些變化使得血液中的單核細(xì)胞、T細(xì)胞等炎癥細(xì)胞能夠更容易黏附并遷移到血管內(nèi)膜下。單核細(xì)胞在內(nèi)膜下分化為巨噬細(xì)胞，吞噬ox-LDL形成泡沫細(xì)胞，同時(shí)釋放多種炎癥細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）等，進(jìn)一步招募炎癥細(xì)胞，加劇炎癥反應(yīng)?；罨腡細(xì)胞也參與其中，不同類型的T細(xì)胞亞群通過分泌細(xì)胞因子，調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的強(qiáng)度和方向。例如，Th1細(xì)胞分泌干擾素-γ（IFN-γ），促進(jìn)炎癥反應(yīng)和巨噬細(xì)胞的活化；Th2細(xì)胞分泌IL-4、IL-10等抗炎細(xì)胞因子，抑制炎癥反應(yīng)。炎癥反應(yīng)的持續(xù)存在會(huì)導(dǎo)致血管壁的慢性炎癥狀態(tài)，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成和發(fā)展。內(nèi)皮損傷反應(yīng)學(xué)說則強(qiáng)調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷是動(dòng)脈粥樣硬化的始動(dòng)環(huán)節(jié)。正常情況下，血管內(nèi)皮細(xì)胞具有抗凝、抗血栓形成、調(diào)節(jié)血管張力等重要功能，能夠維持血管的正常生理狀態(tài)。當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞受到各種危險(xiǎn)因素的作用而受損時(shí)，其正常功能被破壞，會(huì)暴露內(nèi)皮下的膠原纖維等成分，激活血小板和凝血系統(tǒng)，導(dǎo)致血栓形成。同時(shí)，內(nèi)皮細(xì)胞損傷還會(huì)引起一系列的細(xì)胞和分子變化，如黏附分子的表達(dá)增加，促進(jìn)炎癥細(xì)胞的黏附、遷移；分泌多種生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子，刺激平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，這些都為動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。除了上述主要學(xué)說外，遺傳因素、免疫因素、血流動(dòng)力學(xué)因素等也在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用。遺傳因素通過影響血脂代謝、血管內(nèi)皮功能、炎癥反應(yīng)等多個(gè)環(huán)節(jié)，增加個(gè)體患動(dòng)脈粥樣硬化的易感性。一些遺傳基因突變可導(dǎo)致家族性高膽固醇血癥等遺傳性疾病，使得患者血脂水平顯著升高，動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)大大增加。免疫因素方面，免疫系統(tǒng)的異常激活會(huì)導(dǎo)致自身免疫反應(yīng)，攻擊血管壁細(xì)胞和組織，促進(jìn)炎癥反應(yīng)和動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。例如，抗磷脂抗體綜合征患者體內(nèi)存在抗磷脂抗體，可與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的磷脂成分結(jié)合，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷和血栓形成，增加動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。血流動(dòng)力學(xué)因素如高血壓、血流切應(yīng)力異常等，可直接作用于血管壁，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷，促進(jìn)脂質(zhì)沉積和炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，進(jìn)而加速動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程。動(dòng)脈粥樣硬化的病理過程通常分為脂質(zhì)點(diǎn)、脂質(zhì)條紋、斑塊前期、粥樣斑塊、纖維粥樣斑塊和復(fù)合病變六個(gè)階段。在脂質(zhì)點(diǎn)階段，動(dòng)脈內(nèi)膜出現(xiàn)小黃點(diǎn)，主要由小范圍的巨噬細(xì)胞含脂滴形成泡沫細(xì)胞積聚而成。隨著病變的發(fā)展，進(jìn)入脂質(zhì)條紋階段，動(dòng)脈內(nèi)膜可見黃色條紋，此時(shí)巨噬細(xì)胞成層并含脂滴，內(nèi)膜中的平滑肌細(xì)胞也含有脂滴，同時(shí)有T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。在斑塊前期，細(xì)胞外出現(xiàn)較多脂滴，在內(nèi)膜和中膜平滑肌層之間形成脂核，但動(dòng)脈壁的內(nèi)膜、中膜和外膜三層結(jié)構(gòu)仍清晰可見，尚未形成脂質(zhì)池。當(dāng)脂質(zhì)積聚進(jìn)一步增多，形成脂質(zhì)池，內(nèi)膜結(jié)構(gòu)被破壞，動(dòng)脈壁發(fā)生變形，便發(fā)展為粥樣斑塊階段。纖維粥樣斑塊是動(dòng)脈粥樣硬化最具特征性的病變，表現(xiàn)為白色斑塊突入動(dòng)脈腔內(nèi)，引起管腔狹窄。斑塊表面的內(nèi)膜被破壞，由增生的纖維膜（纖維帽）覆蓋于脂質(zhì)池之上，病變可向中膜擴(kuò)展，破壞管壁，并伴有纖維結(jié)締組織增生、變性壞死等繼發(fā)病變。如果纖維斑塊發(fā)生出血、壞死、潰瘍、鈣化和附壁血栓形成，則進(jìn)入復(fù)合病變階段，這是動(dòng)脈粥樣硬化的嚴(yán)重病變階段，容易導(dǎo)致急性心腦血管事件的發(fā)生。動(dòng)脈粥樣硬化在臨床上可導(dǎo)致多種嚴(yán)重的疾病，如冠心病、腦卒中等。冠心病是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致心肌缺血、缺氧而引起的心臟病，患者可出現(xiàn)心絞痛、心肌梗死等癥狀，嚴(yán)重時(shí)可危及生命。腦卒中則是由于腦動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致腦血管狹窄、閉塞或破裂，引起腦組織缺血、缺氧或出血，導(dǎo)致患者出現(xiàn)偏癱、失語、意識(shí)障礙等癥狀，致殘率和死亡率都很高。此外，動(dòng)脈粥樣硬化還可累及腎動(dòng)脈、腸系膜動(dòng)脈、四肢動(dòng)脈等，導(dǎo)致相應(yīng)器官的功能障礙，如腎功能不全、腹痛、間歇性跛行等。由于動(dòng)脈粥樣硬化起病隱匿，早期通常無明顯癥狀，隨著病情的進(jìn)展，才會(huì)逐漸出現(xiàn)各種臨床癥狀，因此早期診斷和預(yù)防對(duì)于降低動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)疾病的發(fā)病率和死亡率具有重要意義。2.2T細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用2.2.1T細(xì)胞亞群分類及功能T細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的重要組成部分，在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。根據(jù)其功能和表面標(biāo)志物的不同，T細(xì)胞可分為多個(gè)亞群，如輔助性T細(xì)胞（Th）、細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL或CD8+T細(xì)胞）、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）等，各亞群在動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程中展現(xiàn)出不同的功能。輔助性T細(xì)胞是一類重要的T細(xì)胞亞群，根據(jù)其分泌細(xì)胞因子和功能的差異，又可進(jìn)一步分為Th1、Th2、Th17等不同亞型。Th1細(xì)胞主要分泌干擾素-γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子-β（TNF-β）等細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子能夠激活巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)其吞噬和殺傷能力，促進(jìn)炎癥反應(yīng)。在動(dòng)脈粥樣硬化中，Th1細(xì)胞分泌的IFN-γ可上調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的黏附分子表達(dá)，促進(jìn)單核細(xì)胞和T細(xì)胞向血管內(nèi)膜下的黏附和遷移，進(jìn)而加速炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)和脂質(zhì)條紋的形成。Th1細(xì)胞還可通過激活巨噬細(xì)胞，使其大量攝取氧化低密度脂蛋白（ox-LDL），形成泡沫細(xì)胞，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)展。研究表明，在動(dòng)脈粥樣硬化患者的斑塊組織中，Th1細(xì)胞的數(shù)量和IFN-γ的表達(dá)水平明顯升高，且與斑塊的不穩(wěn)定性密切相關(guān)。Th2細(xì)胞主要分泌白細(xì)胞介素-4（IL-4）、IL-5、IL-10等細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子具有抑制炎癥反應(yīng)、促進(jìn)體液免疫等功能。IL-4可以抑制Th1細(xì)胞的分化和功能，減少IFN-γ等促炎細(xì)胞因子的分泌，從而減輕炎癥反應(yīng)。IL-10是一種重要的抗炎細(xì)胞因子，能夠抑制巨噬細(xì)胞和Th1細(xì)胞的活化，減少炎癥介質(zhì)的釋放。在動(dòng)脈粥樣硬化中，Th2細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子被認(rèn)為具有一定的保護(hù)作用，可抑制炎癥反應(yīng)，延緩動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。然而，Th2細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用仍存在一定爭(zhēng)議，一些研究發(fā)現(xiàn)，Th2細(xì)胞在某些情況下也可能通過促進(jìn)免疫球蛋白的產(chǎn)生，參與動(dòng)脈粥樣硬化的病理過程。Th17細(xì)胞是近年來發(fā)現(xiàn)的一種新型輔助性T細(xì)胞亞群，其主要特征是分泌白細(xì)胞介素-17（IL-17），同時(shí)還可分泌IL-21、IL-22等細(xì)胞因子。IL-17具有強(qiáng)大的促炎作用，能夠招募中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞到炎癥部位，促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生。在動(dòng)脈粥樣硬化中，Th17細(xì)胞及其分泌的IL-17可通過多種途徑促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。IL-17可以誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子和趨化因子，促進(jìn)炎癥細(xì)胞的黏附和遷移。IL-17還可刺激平滑肌細(xì)胞增殖和遷移，促進(jìn)血管壁的重構(gòu)，增加斑塊的不穩(wěn)定性。研究發(fā)現(xiàn)，動(dòng)脈粥樣硬化患者的血液和斑塊組織中Th17細(xì)胞的數(shù)量和IL-17的表達(dá)水平顯著升高，且與疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是一類具有免疫抑制功能的T細(xì)胞亞群，其主要功能是維持免疫系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)，抑制過度的免疫反應(yīng)，防止自身免疫性疾病的發(fā)生。Treg細(xì)胞可通過多種機(jī)制發(fā)揮免疫抑制作用，包括分泌抑制性細(xì)胞因子（如IL-10、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β，TGF-β）、細(xì)胞間直接接觸抑制等。在動(dòng)脈粥樣硬化中，Treg細(xì)胞能夠抑制Th1、Th17等促炎細(xì)胞亞群的活化和功能，減少炎癥細(xì)胞因子的分泌，從而減輕炎癥反應(yīng)，抑制動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成和發(fā)展。研究表明，Treg細(xì)胞數(shù)量的減少或功能缺陷與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，補(bǔ)充Treg細(xì)胞或增強(qiáng)其功能可有效抑制動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程。細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CD8+T細(xì)胞）是一類能夠直接殺傷靶細(xì)胞的T細(xì)胞亞群。在動(dòng)脈粥樣硬化中，CD8+T細(xì)胞可通過識(shí)別和殺傷被病原體感染的細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞以及表達(dá)異?？乖募?xì)胞，參與免疫防御和免疫監(jiān)視。一些研究表明，CD8+T細(xì)胞可能通過識(shí)別動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中的特定抗原，對(duì)斑塊中的細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用，促進(jìn)斑塊的不穩(wěn)定和破裂。CD8+T細(xì)胞還可分泌細(xì)胞因子，調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)和免疫細(xì)胞的功能。然而，CD8+T細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化中的具體作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步深入研究。除了上述主要的T細(xì)胞亞群外，還有一些其他類型的T細(xì)胞亞群，如γδT細(xì)胞、濾泡輔助性T細(xì)胞（Tfh）等，它們?cè)趧?dòng)脈粥樣硬化中的作用也逐漸受到關(guān)注。γδT細(xì)胞是一種特殊的T細(xì)胞亞群，其T細(xì)胞受體（TCR）由γ和δ鏈組成，與傳統(tǒng)的αβT細(xì)胞不同。γδT細(xì)胞具有獨(dú)特的抗原識(shí)別特性和效應(yīng)功能，能夠快速響應(yīng)病原體感染和組織損傷，在固有免疫和適應(yīng)性免疫之間發(fā)揮橋梁作用。在動(dòng)脈粥樣硬化中，γδT細(xì)胞可通過分泌細(xì)胞因子和趨化因子，調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)和免疫細(xì)胞的募集，影響動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)，γδT細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化早期階段數(shù)量增加，且與病變的進(jìn)展密切相關(guān)，其分泌的促炎細(xì)胞因子IL-17可促進(jìn)中性粒細(xì)胞的募集，加劇炎癥反應(yīng)。濾泡輔助性T細(xì)胞（Tfh）主要定位于淋巴濾泡，在B細(xì)胞的活化、分化和抗體產(chǎn)生過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。Tfh細(xì)胞通過分泌細(xì)胞因子（如IL-21）和表達(dá)共刺激分子（如CD40L），輔助B細(xì)胞產(chǎn)生高親和力的抗體，參與體液免疫應(yīng)答。在動(dòng)脈粥樣硬化中，Tfh細(xì)胞可能通過調(diào)節(jié)B細(xì)胞的功能，影響抗體的產(chǎn)生和免疫復(fù)合物的形成，進(jìn)而參與動(dòng)脈粥樣硬化的病理過程。然而，Tfh細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化中的具體作用機(jī)制目前尚不完全清楚，仍需要進(jìn)一步的研究來揭示。2.2.2T細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病過程中的作用機(jī)制T細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病過程中扮演著重要角色，其作用機(jī)制涉及多個(gè)方面，包括識(shí)別抗原、釋放細(xì)胞因子、與其他細(xì)胞相互作用等，這些過程相互交織，共同促進(jìn)了動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展。在動(dòng)脈粥樣硬化的起始階段，血管內(nèi)皮細(xì)胞受到多種危險(xiǎn)因素的刺激，如高血壓、高血糖、氧化應(yīng)激、感染等，導(dǎo)致其功能障礙，通透性增加。血液中的低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）通過受損的內(nèi)皮進(jìn)入血管內(nèi)膜下，被氧化修飾成氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）。ox-LDL具有較強(qiáng)的免疫原性，可被抗原呈遞細(xì)胞（APC），如巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等攝取和加工處理。APC將ox-LDL衍生的抗原肽呈遞給T細(xì)胞表面的T細(xì)胞受體（TCR），同時(shí)提供共刺激信號(hào)，如B7分子與CD28分子的結(jié)合，從而激活T細(xì)胞。活化的T細(xì)胞通過釋放多種細(xì)胞因子來調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，參與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。不同類型的T細(xì)胞亞群分泌的細(xì)胞因子具有不同的功能，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程產(chǎn)生不同的影響。Th1細(xì)胞分泌的干擾素-γ（IFN-γ）是一種重要的促炎細(xì)胞因子，它可以激活巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)其吞噬能力，促進(jìn)巨噬細(xì)胞攝取ox-LDL，形成泡沫細(xì)胞。IFN-γ還可以上調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的黏附分子，如血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）、細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）等的表達(dá)，促進(jìn)單核細(xì)胞和T細(xì)胞向血管內(nèi)膜下的黏附和遷移。研究表明，IFN-γ基因敲除小鼠的動(dòng)脈粥樣硬化病變明顯減輕，提示IFN-γ在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展中起重要促進(jìn)作用。Th17細(xì)胞分泌的白細(xì)胞介素-17（IL-17）也是一種促炎細(xì)胞因子，在動(dòng)脈粥樣硬化中發(fā)揮重要作用。IL-17可以誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌趨化因子，如CXCL8、CXCL1等，招募中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞到炎癥部位，加劇炎癥反應(yīng)。IL-17還可以刺激平滑肌細(xì)胞增殖和遷移，促進(jìn)血管壁的重構(gòu)，增加斑塊的不穩(wěn)定性。在動(dòng)脈粥樣硬化患者的血液和斑塊組織中，IL-17的表達(dá)水平顯著升高，且與疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)。Th2細(xì)胞分泌的白細(xì)胞介素-4（IL-4）、IL-10等細(xì)胞因子具有抗炎作用。IL-4可以抑制Th1細(xì)胞的分化和功能，減少IFN-γ等促炎細(xì)胞因子的分泌，從而減輕炎癥反應(yīng)。IL-10是一種重要的抗炎細(xì)胞因子，能夠抑制巨噬細(xì)胞和Th1細(xì)胞的活化，減少炎癥介質(zhì)的釋放。然而，Th2細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用仍存在爭(zhēng)議，一些研究發(fā)現(xiàn)，Th2細(xì)胞在某些情況下也可能通過促進(jìn)免疫球蛋白的產(chǎn)生，參與動(dòng)脈粥樣硬化的病理過程。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）通過分泌抑制性細(xì)胞因子，如IL-10、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）等，抑制Th1、Th17等促炎細(xì)胞亞群的活化和功能，從而減輕炎癥反應(yīng)，抑制動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。Treg細(xì)胞還可以通過細(xì)胞間直接接觸抑制其他免疫細(xì)胞的活化，維持免疫系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)。研究表明，Treg細(xì)胞數(shù)量的減少或功能缺陷與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，補(bǔ)充Treg細(xì)胞或增強(qiáng)其功能可有效抑制動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程。T細(xì)胞與其他細(xì)胞之間的相互作用也在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。T細(xì)胞與巨噬細(xì)胞之間存在密切的相互作用，巨噬細(xì)胞攝取ox-LDL后，可通過表面的主要組織相容性復(fù)合體（MHC）Ⅱ類分子將抗原肽呈遞給T細(xì)胞，激活T細(xì)胞?；罨腡細(xì)胞又可以通過分泌細(xì)胞因子，如IFN-γ、IL-4等，調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的功能，促進(jìn)或抑制其炎癥反應(yīng)。T細(xì)胞還可以與平滑肌細(xì)胞相互作用，Th17細(xì)胞分泌的IL-17可以刺激平滑肌細(xì)胞增殖和遷移，促進(jìn)血管壁的重構(gòu)，而Treg細(xì)胞則可以抑制平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，維持血管壁的穩(wěn)定性。T細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病過程中通過識(shí)別抗原、釋放細(xì)胞因子、與其他細(xì)胞相互作用等多種機(jī)制，參與炎癥反應(yīng)、血管壁重構(gòu)和斑塊形成等病理過程。深入研究T細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用機(jī)制，對(duì)于揭示動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制、尋找新的治療靶點(diǎn)具有重要意義。2.3動(dòng)脈粥樣硬化病變中T細(xì)胞克隆組成變化2.3.1研究方法與技術(shù)在研究動(dòng)脈粥樣硬化病變中T細(xì)胞克隆組成變化時(shí)，單細(xì)胞RNA測(cè)序和T細(xì)胞受體（TCR）測(cè)序等技術(shù)發(fā)揮著關(guān)鍵作用，為深入探究T細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用機(jī)制提供了有力工具。單細(xì)胞RNA測(cè)序（scRNA-seq）技術(shù)能夠在單細(xì)胞水平對(duì)mRNA進(jìn)行高通量測(cè)序，分析單個(gè)細(xì)胞的基因表達(dá)譜，揭示細(xì)胞間的異質(zhì)性。在動(dòng)脈粥樣硬化研究中，scRNA-seq技術(shù)可以對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊組織或外周血中的單個(gè)T細(xì)胞進(jìn)行測(cè)序，全面了解T細(xì)胞亞群的基因表達(dá)特征和功能狀態(tài)。通過該技術(shù)，能夠識(shí)別出在動(dòng)脈粥樣硬化病變中特異性表達(dá)的基因，從而篩選出與疾病發(fā)生發(fā)展相關(guān)的T細(xì)胞亞群和關(guān)鍵分子。利用scRNA-seq技術(shù)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化患者的斑塊組織進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)了一些在斑塊中高表達(dá)的基因，這些基因與T細(xì)胞的活化、增殖和炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，為進(jìn)一步研究T細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用機(jī)制提供了重要線索。TCR測(cè)序技術(shù)則主要用于分析T細(xì)胞受體的多樣性和克隆組成。TCR是T細(xì)胞識(shí)別抗原的關(guān)鍵分子，其多樣性決定了T細(xì)胞能夠識(shí)別多種不同的抗原。TCR測(cè)序通過對(duì)TCR基因的可變區(qū)進(jìn)行測(cè)序，獲取TCR的序列信息，從而分析T細(xì)胞的克隆組成和克隆擴(kuò)增情況。在動(dòng)脈粥樣硬化研究中，TCR測(cè)序可以幫助研究人員了解不同T細(xì)胞克隆在病變中的分布和動(dòng)態(tài)變化，以及它們與疾病進(jìn)展的關(guān)系。通過對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化患者和健康對(duì)照者的外周血進(jìn)行TCR測(cè)序，發(fā)現(xiàn)患者體內(nèi)存在一些克隆性擴(kuò)增的T細(xì)胞，這些T細(xì)胞克隆在疾病進(jìn)展過程中呈現(xiàn)出動(dòng)態(tài)變化，提示它們可能參與了動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病過程。將單細(xì)胞RNA測(cè)序和TCR測(cè)序技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用，可以更全面地分析動(dòng)脈粥樣硬化病變中T細(xì)胞克隆組成變化及其功能特征。通過scRNA-seq技術(shù)獲取單個(gè)T細(xì)胞的基因表達(dá)信息，結(jié)合TCR測(cè)序得到的TCR序列信息，能夠準(zhǔn)確地確定不同T細(xì)胞克隆的功能和表型，深入研究它們?cè)趧?dòng)脈粥樣硬化中的作用機(jī)制。在一項(xiàng)研究中，研究人員對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化小鼠模型的斑塊組織進(jìn)行了單細(xì)胞RNA測(cè)序和TCR測(cè)序，發(fā)現(xiàn)了一些在斑塊中特異性擴(kuò)增的T細(xì)胞克隆，這些克隆不僅具有獨(dú)特的TCR序列，而且其基因表達(dá)譜也顯示出與炎癥反應(yīng)和斑塊進(jìn)展相關(guān)的特征。進(jìn)一步的功能實(shí)驗(yàn)表明，這些T細(xì)胞克隆能夠分泌促炎細(xì)胞因子，促進(jìn)巨噬細(xì)胞的活化和泡沫細(xì)胞的形成，從而加速動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。除了上述兩種主要技術(shù)外，還有一些其他技術(shù)也在動(dòng)脈粥樣硬化病變中T細(xì)胞克隆組成變化的研究中得到應(yīng)用。流式細(xì)胞術(shù)可以通過檢測(cè)T細(xì)胞表面的標(biāo)志物，對(duì)不同T細(xì)胞亞群進(jìn)行分選和計(jì)數(shù)，分析它們?cè)趧?dòng)脈粥樣硬化病變中的比例變化。免疫組化技術(shù)則可以在組織切片上對(duì)T細(xì)胞進(jìn)行定位和定量分析，直觀地觀察T細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中的分布情況。這些技術(shù)與單細(xì)胞RNA測(cè)序和TCR測(cè)序技術(shù)相互補(bǔ)充，共同推動(dòng)了對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化病變中T細(xì)胞克隆組成變化的研究。2.3.2研究結(jié)果與分析通過對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化不同階段T細(xì)胞克隆組成變化的研究，發(fā)現(xiàn)隨著疾病的進(jìn)展，T細(xì)胞克隆組成呈現(xiàn)出明顯的動(dòng)態(tài)變化，這些變化與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展密切相關(guān)。在動(dòng)脈粥樣硬化的早期階段，即脂質(zhì)條紋期，T細(xì)胞克隆組成相對(duì)較為多樣化。研究發(fā)現(xiàn)，此時(shí)外周血和斑塊組織中存在多種T細(xì)胞亞群，包括Th1、Th2、Th17、Treg等，各亞群的比例相對(duì)穩(wěn)定。在斑塊組織中，Th1細(xì)胞和Th17細(xì)胞的比例略有升高，它們分泌的促炎細(xì)胞因子如IFN-γ、IL-17等，能夠促進(jìn)炎癥反應(yīng)，吸引更多的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)到斑塊部位，啟動(dòng)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。而Treg細(xì)胞的比例也相對(duì)較高，它們通過分泌抑制性細(xì)胞因子如IL-10、TGF-β等，抑制過度的免疫反應(yīng)，維持免疫系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)，在一定程度上延緩動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展。在這個(gè)階段，T細(xì)胞克隆的擴(kuò)增相對(duì)不明顯，表明T細(xì)胞尚未針對(duì)斑塊中的特定抗原產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)。隨著動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展，進(jìn)入纖維斑塊期，T細(xì)胞克隆組成發(fā)生了顯著變化。此時(shí)，斑塊組織中T細(xì)胞的數(shù)量明顯增加，克隆性擴(kuò)增現(xiàn)象更為明顯。研究表明，一些特定的T細(xì)胞克隆在斑塊中選擇性擴(kuò)增，這些克隆的TCR具有獨(dú)特的序列，可能針對(duì)斑塊中的特定抗原產(chǎn)生免疫反應(yīng)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，這些擴(kuò)增的T細(xì)胞克隆主要為Th1和Th17細(xì)胞，它們分泌大量的促炎細(xì)胞因子，加劇炎癥反應(yīng)，促進(jìn)平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，導(dǎo)致纖維帽的增厚和斑塊的進(jìn)一步發(fā)展。Treg細(xì)胞的比例在這個(gè)階段有所下降，其免疫抑制功能減弱，無法有效抑制Th1和Th17細(xì)胞的活化，使得炎癥反應(yīng)難以得到控制，加速了動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程。當(dāng)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展到晚期，即粥樣斑塊期和復(fù)合病變期，T細(xì)胞克隆組成的變化更加顯著。在粥樣斑塊期，斑塊中的脂質(zhì)核心增大，纖維帽變薄，T細(xì)胞克隆擴(kuò)增更為劇烈。此時(shí)，除了Th1和Th17細(xì)胞繼續(xù)擴(kuò)增外，還出現(xiàn)了一些新的T細(xì)胞克隆，這些克隆可能參與了斑塊的不穩(wěn)定和破裂過程。在復(fù)合病變期，斑塊發(fā)生出血、壞死、潰瘍等嚴(yán)重病變，T細(xì)胞克隆組成呈現(xiàn)出高度的異質(zhì)性。研究發(fā)現(xiàn)，此時(shí)斑塊中存在大量活化的T細(xì)胞，它們分泌多種細(xì)胞因子，如TNF-α、IL-6等，進(jìn)一步加劇炎癥反應(yīng)，促進(jìn)血栓形成，增加急性心腦血管事件的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。Treg細(xì)胞的數(shù)量和功能在這個(gè)階段嚴(yán)重受損，幾乎無法發(fā)揮免疫抑制作用，使得動(dòng)脈粥樣硬化病變難以逆轉(zhuǎn)。通過對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化不同階段T細(xì)胞克隆組成變化的分析，發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞克隆的動(dòng)態(tài)變化與疾病的進(jìn)展密切相關(guān)。在動(dòng)脈粥樣硬化的早期，T細(xì)胞克隆組成相對(duì)穩(wěn)定，各亞群之間相互制衡，維持著炎癥反應(yīng)的相對(duì)平衡。隨著疾病的進(jìn)展，Th1和Th17細(xì)胞的克隆擴(kuò)增逐漸占據(jù)主導(dǎo)地位，炎癥反應(yīng)加劇，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。而Treg細(xì)胞的功能失調(diào)和數(shù)量減少，使得免疫抑制機(jī)制失效，無法有效控制炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步加速了疾病的惡化。這些研究結(jié)果為深入理解動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制提供了重要依據(jù)，也為尋找新的治療靶點(diǎn)和干預(yù)策略提供了方向。2.4T細(xì)胞克隆變化對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展的影響2.4.1促炎作用機(jī)制T細(xì)胞克隆變化在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展進(jìn)程中展現(xiàn)出顯著的促炎作用，其通過多種復(fù)雜且相互關(guān)聯(lián)的機(jī)制，推動(dòng)炎癥反應(yīng)的發(fā)生與發(fā)展，進(jìn)而加速動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程。當(dāng)T細(xì)胞克隆發(fā)生變化時(shí)，一些特定的T細(xì)胞克隆會(huì)出現(xiàn)擴(kuò)增現(xiàn)象，其中以Th1和Th17細(xì)胞克隆的擴(kuò)增尤為突出。Th1細(xì)胞克隆的擴(kuò)增會(huì)導(dǎo)致其分泌大量的干擾素-γ（IFN-γ），IFN-γ是一種強(qiáng)有力的促炎細(xì)胞因子，具有多方面的促炎效應(yīng)。它能夠激活巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬活性，使其更高效地?cái)z取氧化低密度脂蛋白（ox-LDL），進(jìn)而形成泡沫細(xì)胞。巨噬細(xì)胞攝取ox-LDL后，會(huì)發(fā)生一系列的代謝和功能改變，其溶酶體酶活性增強(qiáng)，釋放出更多的炎癥介質(zhì)，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）等，這些炎癥介質(zhì)進(jìn)一步加劇了炎癥反應(yīng)。IFN-γ還能上調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的黏附分子表達(dá)，如血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）、細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）等。這些黏附分子的增加使得血液中的單核細(xì)胞、T細(xì)胞等炎癥細(xì)胞更容易黏附到血管內(nèi)皮細(xì)胞表面，并穿過內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入血管內(nèi)膜下，從而促進(jìn)炎癥細(xì)胞在斑塊部位的浸潤(rùn)和聚集。研究表明，在動(dòng)脈粥樣硬化患者的斑塊組織中，IFN-γ的表達(dá)水平與炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)程度呈正相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)了IFN-γ在促進(jìn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)方面的重要作用。Th17細(xì)胞克隆的擴(kuò)增同樣在動(dòng)脈粥樣硬化的促炎過程中扮演關(guān)鍵角色。Th17細(xì)胞主要分泌白細(xì)胞介素-17（IL-17），IL-17具有強(qiáng)大的促炎活性，能夠通過多種途徑促進(jìn)炎癥反應(yīng)。IL-17可以誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌趨化因子，如CXCL8、CXCL1等。這些趨化因子能夠吸引中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞等炎癥細(xì)胞向炎癥部位遷移，從而增加炎癥細(xì)胞在斑塊部位的數(shù)量。中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞在炎癥部位被激活后，會(huì)釋放多種炎癥介質(zhì)和蛋白酶，如髓過氧化物酶（MPO）、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）等，這些物質(zhì)能夠破壞血管壁的結(jié)構(gòu)和功能，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。IL-17還能刺激平滑肌細(xì)胞增殖和遷移，導(dǎo)致血管壁的重構(gòu)。平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移會(huì)使血管壁增厚，管腔狹窄，同時(shí)也會(huì)改變血管壁的力學(xué)性質(zhì)，增加斑塊的不穩(wěn)定性。研究發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)脈粥樣硬化患者的血液和斑塊組織中，IL-17的表達(dá)水平與斑塊的不穩(wěn)定性密切相關(guān)，高水平的IL-17往往預(yù)示著更高的心血管事件風(fēng)險(xiǎn)。T細(xì)胞克隆變化還可能導(dǎo)致T細(xì)胞對(duì)斑塊中抗原的識(shí)別和免疫反應(yīng)增強(qiáng)。在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中，存在多種抗原物質(zhì)，如ox-LDL、熱休克蛋白等。當(dāng)T細(xì)胞克隆發(fā)生變化時(shí)，一些T細(xì)胞克隆可能獲得對(duì)這些抗原更高的親和力，從而更有效地識(shí)別和結(jié)合抗原。T細(xì)胞與抗原的結(jié)合會(huì)激活T細(xì)胞的信號(hào)通路，導(dǎo)致T細(xì)胞的活化、增殖和分化。活化的T細(xì)胞會(huì)分泌更多的細(xì)胞因子，進(jìn)一步促進(jìn)炎癥反應(yīng)。T細(xì)胞還可以通過直接殺傷靶細(xì)胞的方式，參與動(dòng)脈粥樣硬化的病理過程。一些T細(xì)胞克隆可以識(shí)別并殺傷血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等，導(dǎo)致血管壁細(xì)胞的損傷和死亡，破壞血管壁的完整性，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。T細(xì)胞克隆變化通過Th1和Th17細(xì)胞克隆擴(kuò)增、炎癥細(xì)胞因子釋放、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、血管壁重構(gòu)以及對(duì)斑塊抗原的免疫反應(yīng)增強(qiáng)等多種機(jī)制，在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展中發(fā)揮著重要的促炎作用。深入研究這些促炎作用機(jī)制，對(duì)于理解動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制以及開發(fā)新的治療策略具有重要意義。2.4.2抗炎作用機(jī)制調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）克隆在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的抗炎作用，它們通過多種精細(xì)的調(diào)節(jié)機(jī)制，抑制炎癥反應(yīng)，維持免疫平衡，從而減緩動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展。Treg細(xì)胞克隆的主要功能之一是分泌抑制性細(xì)胞因子，其中白細(xì)胞介素-10（IL-10）和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）是最為關(guān)鍵的兩種細(xì)胞因子。IL-10是一種具有廣泛抗炎活性的細(xì)胞因子，它能夠抑制巨噬細(xì)胞、Th1細(xì)胞和Th17細(xì)胞等多種炎癥細(xì)胞的活化和功能。IL-10可以抑制巨噬細(xì)胞分泌促炎細(xì)胞因子，如TNF-α、IL-1、IL-6等，從而減少炎癥介質(zhì)的釋放，減輕炎癥反應(yīng)。IL-10還能抑制Th1細(xì)胞分泌IFN-γ，削弱Th1細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。對(duì)于Th17細(xì)胞，IL-10可以抑制其分化和功能，減少IL-17等促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生。研究表明，在動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型中，過表達(dá)IL-10能夠顯著減輕動(dòng)脈粥樣硬化病變的程度，降低炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)水平，提示IL-10在抑制動(dòng)脈粥樣硬化炎癥反應(yīng)中的重要作用。TGF-β也是一種重要的抑制性細(xì)胞因子，它在Treg細(xì)胞介導(dǎo)的抗炎過程中發(fā)揮著不可或缺的作用。TGF-β可以抑制T細(xì)胞的活化和增殖，減少T細(xì)胞分泌促炎細(xì)胞因子。TGF-β能夠抑制Th1和Th17細(xì)胞的分化，促進(jìn)Treg細(xì)胞的生成。在動(dòng)脈粥樣硬化中，TGF-β可以通過抑制平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，減少血管壁的重構(gòu)，從而維持血管壁的穩(wěn)定性。TGF-β還能促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的合成，增強(qiáng)纖維帽的強(qiáng)度，降低斑塊破裂的風(fēng)險(xiǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β基因敲除小鼠的動(dòng)脈粥樣硬化病變明顯加重，表明TGF-β在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中具有重要的保護(hù)作用。Treg細(xì)胞克隆還可以通過細(xì)胞間直接接觸的方式發(fā)揮免疫抑制作用。Treg細(xì)胞表面表達(dá)一些抑制性分子，如細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（CTLA-4）、程序性死亡受體1（PD-1）等。CTLA-4可以與抗原呈遞細(xì)胞表面的B7分子結(jié)合，競(jìng)爭(zhēng)性地抑制T細(xì)胞活化所需的共刺激信號(hào)，從而抑制T細(xì)胞的活化和增殖。PD-1則可以與靶細(xì)胞表面的程序性死亡配體1（PD-L1）結(jié)合，抑制T細(xì)胞的功能，促進(jìn)T細(xì)胞的凋亡。在動(dòng)脈粥樣硬化中，Treg細(xì)胞通過這些抑制性分子與其他免疫細(xì)胞相互作用，抑制炎癥細(xì)胞的活化和功能，減少炎癥反應(yīng)。Treg細(xì)胞克隆還可以調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞（DC）的功能。DC是一種重要的抗原呈遞細(xì)胞，在免疫應(yīng)答的啟動(dòng)和調(diào)節(jié)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。Treg細(xì)胞可以通過分泌細(xì)胞因子或直接接觸的方式，影響DC的成熟、功能和抗原呈遞能力。Treg細(xì)胞分泌的IL-10可以抑制DC的成熟，使其表達(dá)較低水平的共刺激分子和MHCⅡ類分子，從而降低DC激活T細(xì)胞的能力。Treg細(xì)胞還可以誘導(dǎo)DC分泌TGF-β等抑制性細(xì)胞因子，進(jìn)一步抑制免疫反應(yīng)。通過調(diào)節(jié)DC的功能，Treg細(xì)胞可以減少炎癥細(xì)胞的活化和增殖，維持免疫平衡，抑制動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞克隆通過分泌抑制性細(xì)胞因子、細(xì)胞間直接接觸以及調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞功能等多種機(jī)制，在動(dòng)脈粥樣硬化中發(fā)揮著重要的抗炎作用。深入研究Treg細(xì)胞克隆的抗炎機(jī)制，對(duì)于揭示動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制、尋找新的治療靶點(diǎn)具有重要意義。三、let-7e與血管內(nèi)皮功能3.1血管內(nèi)皮功能概述血管內(nèi)皮細(xì)胞作為血管壁的內(nèi)層細(xì)胞，是血液與血管壁之間的重要屏障，具有廣泛而關(guān)鍵的生理功能，對(duì)維持血管系統(tǒng)的正常穩(wěn)態(tài)起著不可或缺的作用。它不僅是一層簡(jiǎn)單的物理屏障，更是一個(gè)具有高度活性的內(nèi)分泌和旁分泌器官，能夠通過分泌多種生物活性物質(zhì)，精確調(diào)節(jié)血管的張力、維持血液的正常流動(dòng)狀態(tài)以及發(fā)揮抗凝作用，同時(shí)在炎癥反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)等生理病理過程中也扮演著重要角色。在調(diào)節(jié)血管張力方面，血管內(nèi)皮細(xì)胞主要通過釋放一氧化氮（NO）、前列環(huán)素（PGI2）和內(nèi)皮素-1（ET-1）等血管活性物質(zhì)來實(shí)現(xiàn)。NO是一種重要的血管舒張因子，由血管內(nèi)皮細(xì)胞中的一氧化氮合酶（eNOS）催化L-精氨酸生成。NO具有強(qiáng)大的舒張血管平滑肌的作用，它能夠擴(kuò)散到血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)，激活鳥苷酸環(huán)化酶，使細(xì)胞內(nèi)的環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）水平升高，進(jìn)而導(dǎo)致血管平滑肌舒張，降低血管阻力，增加血流量。研究表明，當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞受到血流切應(yīng)力、乙酰膽堿等刺激時(shí)，eNOS被激活，NO的釋放增加，從而維持血管的正常舒張功能。PGI2也是一種重要的血管舒張和抗血小板聚集物質(zhì)，它由花生四烯酸在環(huán)氧化酶的作用下生成。PGI2能夠抑制血小板的聚集和黏附，同時(shí)舒張血管平滑肌，與NO協(xié)同作用，共同維持血管的正常生理功能。相反，ET-1是一種強(qiáng)效的血管收縮因子，由血管內(nèi)皮細(xì)胞合成和分泌。ET-1通過與血管平滑肌細(xì)胞表面的受體結(jié)合，激活一系列信號(hào)通路，導(dǎo)致血管平滑肌收縮，血管阻力增加，血壓升高。正常情況下，血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的NO、PGI2與ET-1之間保持著動(dòng)態(tài)平衡，從而維持血管張力的穩(wěn)定。當(dāng)這種平衡被打破時(shí)，如在高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化等病理狀態(tài)下，ET-1的分泌增加，而NO和PGI2的釋放減少，會(huì)導(dǎo)致血管收縮增強(qiáng)，血管張力異常，進(jìn)而促進(jìn)疾病的發(fā)生發(fā)展。血管內(nèi)皮細(xì)胞在維持血液的流動(dòng)性和抗凝性方面也發(fā)揮著關(guān)鍵作用。它能夠合成和釋放多種抗凝物質(zhì)，如組織型纖溶酶原激活物（t-PA）、血栓調(diào)節(jié)蛋白（TM）和肝素樣物質(zhì)等。t-PA可以激活纖溶酶原轉(zhuǎn)化為纖溶酶，纖溶酶能夠降解纖維蛋白，溶解血栓，從而維持血液的流動(dòng)性。TM與凝血酶結(jié)合后，可以激活蛋白C，活化的蛋白C具有抗凝作用，能夠抑制凝血因子Ⅴa和Ⅷa的活性，從而阻止血栓的形成。肝素樣物質(zhì)則可以增強(qiáng)抗凝血酶Ⅲ的活性，抑制凝血酶的生成，發(fā)揮抗凝作用。血管內(nèi)皮細(xì)胞還表達(dá)一些抗血小板聚集的物質(zhì)，如前列環(huán)素（PGI2）和一氧化氮（NO），它們能夠抑制血小板的活化和聚集，防止血栓形成。正常的血管內(nèi)皮細(xì)胞表面光滑，血小板不易黏附。當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞受損時(shí)，內(nèi)皮下的膠原纖維暴露，會(huì)激活血小板，導(dǎo)致血小板黏附、聚集，形成血栓。血管內(nèi)皮細(xì)胞通過維持自身的完整性和正常功能，以及分泌抗凝和抗血小板聚集物質(zhì)，有效地維持了血液的流動(dòng)性和抗凝性。在炎癥反應(yīng)中，血管內(nèi)皮細(xì)胞扮演著重要的角色。當(dāng)機(jī)體受到病原體感染、損傷或其他炎癥刺激時(shí)，血管內(nèi)皮細(xì)胞會(huì)被激活，表達(dá)多種黏附分子，如血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）、細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）和E-選擇素等。這些黏附分子能夠與血液中的白細(xì)胞表面的相應(yīng)配體結(jié)合，促進(jìn)白細(xì)胞黏附到血管內(nèi)皮細(xì)胞表面，并穿過內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入炎癥部位，參與炎癥反應(yīng)。血管內(nèi)皮細(xì)胞還可以分泌多種趨化因子和細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素-8（IL-8）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等，這些物質(zhì)能夠吸引白細(xì)胞向炎癥部位遷移，調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的強(qiáng)度和進(jìn)程。在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過程中，血管內(nèi)皮功能障礙是一個(gè)早期關(guān)鍵事件。當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞受到高血壓、高血糖、氧化應(yīng)激、炎癥因子等危險(xiǎn)因素的刺激時(shí)，其正常功能會(huì)受到損害，導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能障礙。血管內(nèi)皮功能障礙表現(xiàn)為血管舒張功能受損，NO的釋放減少，ET-1的分泌增加，血管收縮增強(qiáng)；黏附分子表達(dá)上調(diào)，白細(xì)胞黏附和遷移增加，炎癥反應(yīng)加??；抗凝和抗血小板聚集功能減弱，血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)增加。這些變化會(huì)促進(jìn)脂質(zhì)在血管壁的沉積，引發(fā)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成和發(fā)展。研究表明，血管內(nèi)皮功能障礙與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，改善血管內(nèi)皮功能可以有效預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)疾病。3.2let-7e的生物學(xué)特性3.2.1let-7e的結(jié)構(gòu)與表達(dá)let-7e是let-7微小RNA（miRNA）家族中的重要成員，在生物體內(nèi)發(fā)揮著關(guān)鍵的調(diào)控作用。let-7家族是一類高度保守的內(nèi)源性非編碼單鏈RNA分子，長(zhǎng)度約為22個(gè)核苷酸。let-7e的成熟序列在不同物種間具有高度的保守性，如在人類、小鼠、大鼠等物種中，其序列僅有少量差異。以人類let-7e為例，其成熟序列為5'-UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUU-3'，這種高度保守的序列結(jié)構(gòu)暗示了let-7e在進(jìn)化過程中具有重要且不可或缺的生物學(xué)功能。從結(jié)構(gòu)上看，let-7e的前體（pre-let-7e）具有典型的發(fā)夾結(jié)構(gòu)，長(zhǎng)度約為70-80個(gè)核苷酸。在細(xì)胞核內(nèi)，let-7e基因首先由RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄生成初級(jí)轉(zhuǎn)錄本（pri-let-7e），pri-let-7e經(jīng)過核酸酶Drosha及其輔助因子DGCR8的加工，形成pre-let-7e。隨后，pre-let-7e在轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Exportin-5的作用下從細(xì)胞核轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞質(zhì)中。在細(xì)胞質(zhì)中，pre-let-7e被核酸酶Dicer進(jìn)一步切割，生成成熟的let-7e雙鏈RNA。其中一條鏈會(huì)被降解，另一條鏈則與RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體（RISC）結(jié)合，形成活性復(fù)合物，通過與靶mRNA的3'-非翻譯區(qū)（3'-UTR）互補(bǔ)配對(duì)，發(fā)揮對(duì)靶基因的調(diào)控作用。let-7e在多種組織和細(xì)胞中均有表達(dá)，但其表達(dá)水平存在明顯的組織特異性和細(xì)胞特異性。在正常生理狀態(tài)下，let-7e在心臟、肝臟、肺、腎臟等重要器官中均有一定程度的表達(dá)。在心臟組織中，let-7e參與心肌細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和功能調(diào)節(jié)，對(duì)維持心臟的正常生理功能具有重要作用。研究表明，let-7e在心肌細(xì)胞中的表達(dá)水平與心臟的發(fā)育階段密切相關(guān)，在胚胎期心肌細(xì)胞中表達(dá)較低，隨著心臟的發(fā)育成熟，其表達(dá)水平逐漸升高。在肝臟組織中，let-7e參與脂質(zhì)代謝、肝纖維化等過程的調(diào)控。通過對(duì)小鼠肝臟組織的研究發(fā)現(xiàn)，let-7e的表達(dá)水平與肝臟的脂質(zhì)合成和代謝相關(guān)基因的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，過表達(dá)let-7e可抑制肝臟脂質(zhì)的合成，降低血脂水平。在血管內(nèi)皮細(xì)胞中，let-7e也有穩(wěn)定的表達(dá)。血管內(nèi)皮細(xì)胞是血管壁的重要組成部分，let-7e在其中的表達(dá)對(duì)于維持血管內(nèi)皮細(xì)胞的正常功能至關(guān)重要。正常情況下，血管內(nèi)皮細(xì)胞中l(wèi)et-7e的表達(dá)能夠調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移以及血管舒張功能。當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞受到外界刺激，如氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）、脂多糖（LPS）等因素的作用時(shí)，let-7e的表達(dá)會(huì)發(fā)生明顯變化。研究發(fā)現(xiàn)，ox-LDL刺激可導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞中l(wèi)et-7e的表達(dá)下調(diào)，這種表達(dá)變化與血管內(nèi)皮功能障礙的發(fā)生密切相關(guān)。在免疫細(xì)胞中，let-7e的表達(dá)也具有重要意義。T細(xì)胞、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞均表達(dá)let-7e，其表達(dá)水平的變化會(huì)影響免疫細(xì)胞的活化、增殖和分化。在T細(xì)胞中，let-7e可以調(diào)節(jié)T細(xì)胞的活化和細(xì)胞因子的分泌。研究表明，let-7e過表達(dá)可抑制T細(xì)胞的活化，減少促炎細(xì)胞因子的分泌，從而調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。在巨噬細(xì)胞中，let-7e參與巨噬細(xì)胞的極化過程。巨噬細(xì)胞可分為經(jīng)典活化的M1型巨噬細(xì)胞和交替活化的M2型巨噬細(xì)胞，let-7e能夠調(diào)控巨噬細(xì)胞向M2型極化，抑制炎癥反應(yīng)。3.2.2let-7e的功能與調(diào)控機(jī)制let-7e在細(xì)胞的多種生理過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，其功能涉及細(xì)胞增殖、凋亡、分化以及代謝等多個(gè)方面。在細(xì)胞增殖方面，let-7e通常發(fā)揮抑制作用。研究表明，在多種腫瘤細(xì)胞中，let-7e的表達(dá)水平較低，而過表達(dá)let-7e可以抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。這是因?yàn)閘et-7e能夠靶向作用于一些與細(xì)胞增殖相關(guān)的基因，如Ras、Myc等。Ras基因是一種重要的原癌基因，其編碼的蛋白參與細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)通路，調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖和分化。let-7e可以通過與Ras基因mRNA的3'-UTR互補(bǔ)配對(duì)，抑制Ras基因的翻譯過程，從而降低Ras蛋白的表達(dá)水平，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。Myc基因也是一個(gè)與細(xì)胞增殖密切相關(guān)的基因，let-7e同樣可以通過調(diào)控Myc基因的表達(dá)，抑制細(xì)胞的增殖。在細(xì)胞凋亡過程中，let-7e也扮演著重要角色。一些研究發(fā)現(xiàn)，let-7e能夠促進(jìn)細(xì)胞凋亡。在神經(jīng)細(xì)胞中，當(dāng)受到氧化應(yīng)激等損傷時(shí)，let-7e的表達(dá)會(huì)升高，進(jìn)而促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡。let-7e促進(jìn)細(xì)胞凋亡的機(jī)制可能與它對(duì)凋亡相關(guān)基因的調(diào)控有關(guān)。例如，let-7e可以靶向抑制Bcl-2基因的表達(dá)。Bcl-2是一種抗凋亡蛋白，其表達(dá)水平的降低會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的增加。let-7e通過抑制Bcl-2基因的表達(dá)，打破了細(xì)胞內(nèi)促凋亡和抗凋亡蛋白的平衡，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。在細(xì)胞分化方面，let-7e參與多種細(xì)胞類型的分化過程。在胚胎干細(xì)胞分化過程中，let-7e的表達(dá)水平會(huì)發(fā)生動(dòng)態(tài)變化，并且對(duì)胚胎干細(xì)胞向不同細(xì)胞系的分化具有調(diào)控作用。研究表明，在胚胎干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的過程中，let-7e的表達(dá)逐漸升高，并且敲低let-7e會(huì)影響心肌細(xì)胞的分化效率。這說明let-7e在心肌細(xì)胞分化過程中起到了促進(jìn)作用。let-7e可能通過調(diào)控一些與細(xì)胞分化相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，來影響細(xì)胞分化的進(jìn)程。在代謝調(diào)控方面，let-7e在脂質(zhì)代謝、糖代謝等過程中發(fā)揮作用。在脂質(zhì)代謝中，let-7e可以調(diào)節(jié)肝臟中脂質(zhì)的合成和代謝。如前所述，let-7e能夠抑制肝臟中脂質(zhì)合成相關(guān)基因的表達(dá)，從而減少脂質(zhì)的合成。在糖代謝中，let-7e可以影響胰島素的敏感性和葡萄糖的攝取。研究發(fā)現(xiàn)，let-7e過表達(dá)可以提高細(xì)胞對(duì)胰島素的敏感性，促進(jìn)葡萄糖的攝取和利用，從而改善糖代謝。let-7e調(diào)控基因表達(dá)的機(jī)制主要是通過與靶mRNA的3'-UTR互補(bǔ)配對(duì)，在轉(zhuǎn)錄后水平抑制靶基因的表達(dá)。當(dāng)let-7e與RISC結(jié)合形成活性復(fù)合物后，復(fù)合物中的let-7e會(huì)識(shí)別并結(jié)合靶mRNA的3'-UTR。如果let-7e與靶mRNA的互補(bǔ)配對(duì)程度較高，RISC中的核酸酶會(huì)直接切割靶mRNA，導(dǎo)致其降解。如果互補(bǔ)配對(duì)程度較低，RISC則會(huì)抑制靶mRNA的翻譯過程，使靶基因無法正常表達(dá)。除了經(jīng)典的對(duì)3'-UTR的調(diào)控方式外，近年來的研究還發(fā)現(xiàn)，let-7e在某些情況下也可以與靶mRNA的5'-UTR或編碼區(qū)結(jié)合，影響mRNA的穩(wěn)定性和翻譯起始，從而調(diào)控基因表達(dá)。let-7e還可以通過調(diào)控信號(hào)通路來間接影響基因表達(dá)。例如，let-7e可以調(diào)控PI3K/Akt信號(hào)通路。PI3K/Akt信號(hào)通路在細(xì)胞的增殖、存活、代謝等過程中發(fā)揮著重要作用。let-7e可以通過靶向抑制PI3K/Akt信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子，如PI3K、Akt等，來調(diào)節(jié)該信號(hào)通路的活性，進(jìn)而影響下游基因的表達(dá)。研究表明，在腫瘤細(xì)胞中，let-7e過表達(dá)可以抑制PI3K/Akt信號(hào)通路的激活，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和存活。let-7e還可以與其他miRNA或非編碼RNA相互作用，形成復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，共同調(diào)節(jié)基因表達(dá)和細(xì)胞功能。3.3let-7e對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響3.3.1體外實(shí)驗(yàn)研究在體外實(shí)驗(yàn)中，為了深入探究let-7e對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響，研究人員首先構(gòu)建了血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型。通常選用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）作為研究對(duì)象，這是因?yàn)镠UVECs來源方便，且具有典型的血管內(nèi)皮細(xì)胞特征，能夠較好地模擬體內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞的生理和病理狀態(tài)。通過將HUVECs暴露于氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）、脂多糖（LPS）等刺激物中，可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，模擬動(dòng)脈粥樣硬化的病理微環(huán)境。ox-LDL是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展過程中的關(guān)鍵致病因素之一，它能夠損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞功能障礙，促進(jìn)炎癥反應(yīng)和脂質(zhì)沉積。LPS則是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的主要成分，可激活血管內(nèi)皮細(xì)胞的炎癥信號(hào)通路，引起炎癥反應(yīng)。在構(gòu)建好血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型后，研究人員利用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)，將let-7emimic或let-7einhibitor導(dǎo)入HUVECs中，實(shí)現(xiàn)let-7e的過表達(dá)或敲低。let-7emimic是一種人工合成的雙鏈RNA分子，其序列與內(nèi)源性let-7e成熟序列相同，可模擬let-7e的功能，增加細(xì)胞內(nèi)let-7e的表達(dá)水平。let-7einhibitor則是一種與let-7e互補(bǔ)的單鏈RNA分子，能夠特異性地結(jié)合let-7e，抑制其功能，降低細(xì)胞內(nèi)let-7e的表達(dá)水平。通過這種方式，可以研究let-7e表達(dá)水平的改變對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響。采用CCK-8法檢測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖能力。CCK-8試劑是一種基于WST-8的細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑，它可以被細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶還原為具有高度水溶性的橙黃色甲瓚產(chǎn)物，其生成量與活細(xì)胞數(shù)量成正比。將轉(zhuǎn)染了let-7emimic或let-7einhibitor的HUVECs接種于96孔板中，培養(yǎng)一定時(shí)間后，加入CCK-8試劑，孵育一段時(shí)間后，用酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔的吸光度值，從而評(píng)估細(xì)胞的增殖能力。研究結(jié)果表明，過表達(dá)let-7e可顯著抑制ox-LDL或LPS誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖。這可能是因?yàn)閘et-7e能夠靶向抑制一些與細(xì)胞增殖相關(guān)的基因表達(dá)，如細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）等。CyclinD1是細(xì)胞周期G1期向S期轉(zhuǎn)換的關(guān)鍵調(diào)控蛋白，其表達(dá)水平的降低可導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯，從而抑制細(xì)胞增殖。通過Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移能力。Transwell小室是一種具有通透性的杯狀裝置，將其放置于24孔板中，上室加入細(xì)胞懸液，下室加入含有趨化因子的培養(yǎng)基。細(xì)胞會(huì)受到趨化因子的吸引，通過小室底部的微孔遷移到下室。將轉(zhuǎn)染后的HUVECs接種于Transwell小室的上室，下室加入含10%胎牛血清的培養(yǎng)基作為趨化因子，培養(yǎng)一定時(shí)間后，取出小室，用棉簽擦去上室未遷移的細(xì)胞，固定并染色下室遷移的細(xì)胞，在顯微鏡下計(jì)數(shù)遷移細(xì)胞的數(shù)量，以此評(píng)估細(xì)胞的遷移能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，let-7e過表達(dá)可明顯抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移。這可能是由于let-7e通過調(diào)控一些與細(xì)胞遷移相關(guān)的基因和信號(hào)通路，如基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）家族成員等，影響細(xì)胞外基質(zhì)的降解和細(xì)胞骨架的重組，從而抑制細(xì)胞遷移。MMPs能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)成分，促進(jìn)細(xì)胞遷移，let-7e可能通過抑制MMPs的表達(dá)，減少細(xì)胞外基質(zhì)的降解，進(jìn)而抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移。利用AnnexinV-FITC/PI雙染法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡情況。AnnexinV是一種Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，對(duì)磷脂酰絲氨酸（PS）具有高度親和力，在細(xì)胞凋亡早期，PS會(huì)從細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜外側(cè)，AnnexinV可與之結(jié)合。PI是一種核酸染料，能夠穿透死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜，與細(xì)胞核中的DNA結(jié)合。將轉(zhuǎn)染后的HUVECs用AnnexinV-FITC和PI染色后，通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)，可將細(xì)胞分為活細(xì)胞（AnnexinV-/PI-）、早期凋亡細(xì)胞（AnnexinV+/PI-）、晚期凋亡細(xì)胞（AnnexinV+/PI+）和壞死細(xì)胞（AnnexinV-/PI+）。研究發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)let-7e可顯著增加ox-LDL或LPS誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。這可能是因?yàn)閘et-7e能夠調(diào)控一些凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，如Bcl-2家族成員等。Bcl-2家族包括抗凋亡蛋白（如Bcl-2、Bcl-XL等）和促凋亡蛋白（如Bax、Bad等），它們之間的平衡決定了細(xì)胞的存活或凋亡。let-7e可能通過抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，促進(jìn)促凋亡蛋白Bax的表達(dá)，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。通過ELISA法檢測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的炎癥因子和血管活性物質(zhì)水平。ELISA是一種基于抗原-抗體特異性結(jié)合的免疫測(cè)定技術(shù)，可用于定量檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清、血清、血漿等樣本中的各種蛋白質(zhì)。將轉(zhuǎn)染后的HUVECs培養(yǎng)一定時(shí)間后，收集細(xì)胞培養(yǎng)上清，采用ELISA試劑盒檢測(cè)炎癥因子（如白細(xì)胞介素-6，IL-6；腫瘤壞死因子-α，TNF-α等）和血管活性物質(zhì)（如一氧化氮，NO；內(nèi)皮素-1，ET-1等）的含量。研究結(jié)果顯示，過表達(dá)let-7e可降低炎癥因子IL-6和TNF-α的分泌，同時(shí)增加NO的釋放，減少ET-1的分泌。這表明let-7e具有抑制炎癥反應(yīng)和調(diào)節(jié)血管張力的作用。IL-6和TNF-α是重要的促炎細(xì)胞因子，它們的分泌增加會(huì)導(dǎo)致炎癥反應(yīng)加劇，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。NO是一種重要的血管舒張因子，能夠舒張血管平滑肌，降低血管阻力；ET-1則是一種強(qiáng)效的血管收縮因子，其分泌增加會(huì)導(dǎo)致血管收縮，血壓升高。let-7e可能通過調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)，影響這些炎癥因子和血管活性物質(zhì)的合成和釋放，從而發(fā)揮對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)作用。3.3.2體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，為了進(jìn)一步驗(yàn)證let-7e對(duì)血管內(nèi)皮功能的影響以及其在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展中的作用，通常選用載脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）小鼠或低密度脂蛋白受體基因敲除（LDLR-/-）小鼠建立動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型。ApoE是一種血漿載脂蛋白，在脂質(zhì)代謝中起著關(guān)鍵作用，ApoE-/-小鼠由于缺乏ApoE，會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的血脂異常，容易自發(fā)形成動(dòng)脈粥樣硬化斑塊。LDLR是低密度脂蛋白（LDL）的受體，LDLR-/-小鼠由于LDLR基因缺失，導(dǎo)致LDL代謝障礙，血漿中LDL水平升高，也容易發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化。將ApoE-/-小鼠或LDLR-/-小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組和let-7e干預(yù)組。對(duì)照組給予正常飲食，模型組和let-7e干預(yù)組給予高脂飲食，以加速動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。在實(shí)驗(yàn)過程中，通過尾靜脈注射等方式，將let-7e類似物或抑制劑導(dǎo)入let-7e干預(yù)組小鼠體內(nèi)。let-7e類似物是一種經(jīng)過化學(xué)修飾的let-7e分子，具有更好的穩(wěn)定性和生物利用度，能夠在體內(nèi)有效發(fā)揮作用。let-7e抑制劑則用于抑制小鼠體內(nèi)let-7e的功能。定期采集小鼠的血液樣本，檢測(cè)血脂水平，包括總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）等指標(biāo)。血脂異常是動(dòng)脈粥樣硬化的重要危險(xiǎn)因素，通過檢測(cè)血脂水平，可以評(píng)估小鼠動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展情況。研究發(fā)現(xiàn)，與模型組相比，let-7e干預(yù)組小鼠的血脂水平有所改善，LDL-C和TC水平降低，HDL-C水平升高。這表明let-7e可能通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化起到一定的防治作用。let-7e可能通過調(diào)控一些與脂質(zhì)代謝相關(guān)的基因表達(dá)，如膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白（SREBP）家族成員等，影響脂質(zhì)的合成、轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝。SREBP是一類轉(zhuǎn)錄因子，能夠調(diào)節(jié)膽固醇、脂肪酸和甘油三酯等脂質(zhì)的合成相關(guān)基因的表達(dá)，let-7e可能通過抑制SREBP的表達(dá)，減少脂質(zhì)的合成，從而降低血脂水平。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，處死小鼠，取主動(dòng)脈等血管組織進(jìn)行病理切片分析。通過蘇木精-伊紅（HE）染色，觀察動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形態(tài)和大?。煌ㄟ^油紅O染色，檢測(cè)斑塊內(nèi)脂質(zhì)的沉積情況；通過Masson染色，觀察血管壁膠原纖維的含量和分布，評(píng)估斑塊的穩(wěn)定性。研究結(jié)果顯示，let-7e干預(yù)組小鼠的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積明顯小于模型組，斑塊內(nèi)脂質(zhì)沉積減少，膠原纖維含量增加，斑塊穩(wěn)定性提高。這表明let-7e能夠抑制動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成和發(fā)展，增加斑塊的穩(wěn)定性。let-7e可能通過抑制炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能等多種途徑，減少脂質(zhì)在血管壁的沉積，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞合成和分泌膠原纖維，從而穩(wěn)定斑塊。采用免疫組化和Westernblot等技術(shù)，檢測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物和信號(hào)通路分子的表達(dá)。免疫組化可以在組織切片上定位和檢測(cè)特定蛋白質(zhì)的表達(dá)，通過觀察染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞數(shù)來評(píng)估蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。Westernblot則是一種用于檢測(cè)蛋白質(zhì)表達(dá)的常用技術(shù)，通過電泳分離蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)膜后用特異性抗體進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合酶（eNOS）、血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）、核因子-κB（NF-κB）等標(biāo)志物和信號(hào)通路分子的表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，let-7e干預(yù)組小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞中eNOS的表達(dá)增加，VCAM-1和NF-κB的表達(dá)降低。eNOS是合成一氧化氮（NO）的關(guān)鍵酶，其表達(dá)增加可促進(jìn)NO的生成，發(fā)揮血管舒張和抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。VCAM-1是一種重要的黏附分子，其表達(dá)增加會(huì)促進(jìn)炎癥細(xì)胞黏附到血管內(nèi)皮細(xì)胞表面，加重炎癥反應(yīng)。NF-κB是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，在炎癥信號(hào)通路中起著關(guān)鍵作用，其激活會(huì)導(dǎo)致多種炎癥因子的表達(dá)增加。let-7e可能通過抑制NF-κB信號(hào)通路的激活，降低VCAM-1等炎癥相關(guān)分子的表達(dá)，同時(shí)促進(jìn)eNOS的表達(dá)，從而改善血管內(nèi)皮功能，抑制動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。3.4let-7e調(diào)控血管內(nèi)皮功能的信號(hào)通路let-7e對(duì)血管內(nèi)皮功能的調(diào)控涉及多條復(fù)雜的信號(hào)通路，其中PI3K/Akt和MAPK等信號(hào)通路在這一過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。PI3K/Akt信號(hào)通路是細(xì)胞內(nèi)重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，參與細(xì)胞的增殖、存活、代謝等多種生理過程。在血管內(nèi)皮細(xì)胞中，PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì)于維持細(xì)胞的正常功能至關(guān)重要。研究表明，let-7e可以通過靶向作用于PI3K/Akt信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子，調(diào)節(jié)該信號(hào)通路的活性，從而影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能。let-7e能夠直接結(jié)合到PI3K的調(diào)節(jié)亞基p85的mRNA的3'-UTR上，抑制其翻譯過程，導(dǎo)致PI3K蛋白表達(dá)水平降低。PI3K是一種磷脂酰肌醇激酶，它能夠催化磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）生成磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3）。PIP3可以招募蛋白激酶B（Akt）到細(xì)胞膜上，并使其磷酸化激活。激活的Akt可以通過磷酸化多種下游底物，調(diào)節(jié)細(xì)胞的多種生理功能。當(dāng)let-7e抑制PI3K的表達(dá)后，PIP3的生成減少，Akt的激活受到抑制，進(jìn)而影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、存活和遷移等功能。研究發(fā)現(xiàn)，在ox-LDL誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型中，過表達(dá)let-7e可顯著抑制PI3K/Akt信號(hào)通路的激活，導(dǎo)致細(xì)胞增殖能力下降，凋亡增加。這表明let-7e通過抑制PI3K/Akt信號(hào)通路，加劇了血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷。相反，在一些生理?xiàng)l件下，抑制let-7e的表達(dá)可以激活PI3K/Akt信號(hào)通路，對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞起到保護(hù)作用。在血管內(nèi)皮細(xì)胞受到低氧刺激時(shí)，抑制let-7e的表達(dá)可使PI3K/Akt信號(hào)通路激活，促進(jìn)細(xì)胞的存活和增殖，增強(qiáng)血管內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)低氧損傷的耐受性。這說明let-7e對(duì)PI3K/Akt信號(hào)通路的調(diào)控具有雙向性，其具體作用取決于細(xì)胞所處的微環(huán)境和生理狀態(tài)。MAPK信號(hào)通路也是細(xì)胞內(nèi)重要的信號(hào)傳導(dǎo)途徑，包括細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38絲裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）等多個(gè)亞家族。這些亞家族在細(xì)胞的增殖、分化、凋亡、應(yīng)激反應(yīng)等過程中發(fā)揮著重要作用。在血管內(nèi)皮細(xì)胞中，MAPK信號(hào)通路參與調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能，如炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激等。研究表明，let-7e可以通過調(diào)控MAPK信號(hào)通路，影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能。let-7e可以靶向抑制MAPK信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子，如Raf、MEK等，從而抑制MAPK信號(hào)通路的激活。Raf是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，它可以磷酸化并激活MEK，MEK再磷酸化激活ERK。JNK和p38MAPK也有類似的激活級(jí)聯(lián)反應(yīng)。當(dāng)let-7e抑制Raf或MEK的表達(dá)后，MAPK信號(hào)通路的激活受到抑制，ERK、JNK和p38MAPK的磷酸化水平降低，進(jìn)而影響下游基因的表達(dá)和細(xì)胞功能。在炎癥刺激下，血管內(nèi)皮細(xì)胞中MAPK信號(hào)通路被激活，導(dǎo)致炎癥因子的表達(dá)增加，促進(jìn)炎癥反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，let-7e過表達(dá)可以抑制MAPK信號(hào)通路的激活，減少炎癥因子如IL-6、TNF-α等的表達(dá)，從而減輕炎癥反應(yīng)對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷。在ox-LDL誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥模型中，過表達(dá)let-7e可顯著降低JNK和p38MAPK的磷酸化水平，減少炎癥因子的分泌，表明let-7e通過抑制MAPK信號(hào)通路，發(fā)揮了抗炎作用。let-7e還可以通過調(diào)控MAPK信號(hào)通路，影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激反應(yīng)。在氧化應(yīng)激條件下，MAPK信號(hào)通路被激活，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）水平升高，損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞。let-7e可以通過抑制MAPK信號(hào)通路，減少ROS的生成，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞免受氧化應(yīng)激損傷。四、let-7e對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化中T細(xì)胞克隆變化的調(diào)控4.1let-7e與T細(xì)