第68頁(yè)（共68頁(yè)）2026年高考生物復(fù)習(xí)新題速遞之基因工程（2025年7月）一．選擇題（共15小題）1．（2025?寧德模擬）生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的操作順序會(huì)直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，下列實(shí)驗(yàn)操作順序錯(cuò)誤的是（）選項(xiàng)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容部分操作步驟A培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化先將蓋玻片放在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室上，再將培養(yǎng)液滴在蓋玻片邊緣BDNA片段的電泳鑒定先將電泳緩沖液加入電泳槽，再將擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物與凝膠載樣緩沖液（內(nèi)含指示劑）混合，注入加樣孔內(nèi)CDNA粗提取與鑒定先將研磨液加入等體積預(yù)冷的酒精溶液，再置于4℃冰箱幾分鐘后，取上清液D探索生長(zhǎng)素類(lèi)調(diào)節(jié)劑促進(jìn)插條生根的最適濃度先設(shè)計(jì)一組梯度較大的預(yù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行摸索，再在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)更合理的濃度梯度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)A．A B．B C．C D．D2．（2025春?西安期末）某遺傳病的正?；蚝屯蛔兓騿捂溒稳鐖D1，研究人員擬用PCR擴(kuò)增2種基因片段，再用某限制酶（識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如圖2）酶切，檢測(cè)基因突變情況。下列敘述正確的是（）A．PCR反應(yīng)的循環(huán)中復(fù)性后DNA解旋為單鏈 B．PCR反應(yīng)體系中需要添加耐高溫的DNA聚合酶 C．該限制酶酶切后形成的末端為﹣GATG﹣ D．該限制酶酶切突變基因后會(huì)形成兩個(gè)片段3．（2025?湖北模擬）病毒與人類(lèi)健康、生產(chǎn)生活息息相關(guān)。下列有關(guān)病毒的說(shuō)法，正確的是（）A．某些病毒侵入細(xì)胞后，其遺傳物質(zhì)能影響宿主細(xì)胞的DNA B．利用植物細(xì)胞工程對(duì)草莓進(jìn)行作物脫毒，可獲得抗病毒植株 C．病毒的身份標(biāo)簽?zāi)鼙粷{細(xì)胞識(shí)別并結(jié)合，從而引發(fā)機(jī)體的免疫反應(yīng) D．病毒的蛋白質(zhì)在自身基因的指導(dǎo)下合成，其基因是具有遺傳效應(yīng)的DNA片段4．（2025春?武漢期末）CrylAc和Pta是兩種抗蟲(chóng)基因，常被用于轉(zhuǎn)基因作物中以增強(qiáng)植物對(duì)害蟲(chóng)的抵抗力。實(shí)驗(yàn)人員構(gòu)建了含有CrylAc基因和Pta基因的雙價(jià)抗蟲(chóng)基因表達(dá)載體，以增強(qiáng)番茄的抗蟲(chóng)能力。為檢測(cè)培育是否成功，實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行了初步分子檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如表所示。下列敘述正確的是（）MWT123目的基因檢測(cè)CrylAc基因Pta注：M是標(biāo)準(zhǔn)參照物，WT表示非轉(zhuǎn)基因番茄，1～3表示轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)番茄。A．構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)用到的工具酶有載體、DNA連接酶、限制酶 B．雙價(jià)抗蟲(chóng)基因表達(dá)載體常通過(guò)顯微注射法導(dǎo)入番茄受精卵或體細(xì)胞 C．番茄葉片DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增后，需用瓊脂糖凝膠電泳對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行鑒定 D．植株1、3能檢測(cè)到兩種抗蟲(chóng)基因，說(shuō)明1、3為培育成功的轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)番茄5．（2025?湖北模擬）反向PCR可以擴(kuò)增已知序列兩側(cè)的未知序列，得到大量的未知序列后，可以進(jìn)行基因測(cè)序，從而定位目的基因所在的位置。為確定某種目的基因（堿基序列已知）在植物細(xì)胞染色體DNA中的插入位置，進(jìn)行了反向PCR，簡(jiǎn)要過(guò)程如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．過(guò)程Ⅰ使用的限制酶在圖示目的基因區(qū)域中不能存在可識(shí)別序列 B．過(guò)程Ⅰ兩個(gè)未知序列經(jīng)限制酶切割后形成的黏性末端相同 C．過(guò)程Ⅱ加入的引物為圖中的引物3和引物4 D．過(guò)程Ⅲ后需要使用限制酶將PCR產(chǎn)物剪切成鏈狀6．（2025?雨花區(qū)校級(jí)模擬）雙脫氧測(cè)序法是第一代DNA測(cè)序方法。在4支試管中分別加入4種dNTP和少量的1種ddNTP進(jìn)行PCR，再把PCR產(chǎn)物變性，利用電泳進(jìn)行分離，根據(jù)結(jié)果確定特定堿基的位置。通過(guò)該方法測(cè)定并比較某疾病患者與對(duì)照個(gè)體DNA模板鏈的一段堿基序列，結(jié)果如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（）注：dNTP是PCR的四種原料；雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP）有ddATP、ddCTP、ddGTP、ddTTP四種；在DNA聚合酶作用下，ddNTP與dNTP競(jìng)爭(zhēng)核苷酸鏈延長(zhǎng)位點(diǎn)，以加入ddATP的體系為例：若配對(duì)的為ddATP，延伸終止；若配對(duì)的為dATP，繼續(xù)延伸。A．上述PCR反應(yīng)體系中模板鏈需要足夠多 B．患者該段序列中某位點(diǎn)的堿基C突變?yōu)門(mén) C．5'﹣TAGTGCCCATC﹣3'為對(duì)照個(gè)體的一段序列 D．沿電泳方向，核苷酸鏈長(zhǎng)度逐漸減小7．（2025春?貴陽(yáng)期末）T4溶菌酶耐熱性差，若將該酶的第3位氨基酸——異亮氨酸（密碼子為AUU、AUC、AUA）改造為半胱氨酸（密碼子為UGU、UGC），并使第3位的氨基酸和第97位氨基酸之間形成1個(gè)二硫鍵，可以大大提高其耐熱性。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．根據(jù)設(shè)計(jì)的T4溶菌酶的氨基酸序列可能推測(cè)出多種脫氧核苷酸序列 B．T4溶菌酶耐熱性改造設(shè)計(jì)思路與天然蛋白質(zhì)的合成過(guò)程相同 C．改造T4溶菌酶可利用基因定點(diǎn)突變技術(shù)，對(duì)相關(guān)基因進(jìn)行改造 D．改造后的T4溶菌酶需要進(jìn)行功能鑒定才能應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐8．（2025春?貴陽(yáng)期末）草甘膦是一種廣譜、非選擇性的系統(tǒng)性除草劑，通過(guò)抑制植物中EPSPS酶的活性，使植物細(xì)胞內(nèi)某些氨基酸不能合成，從而達(dá)到除草的目的。為提高小麥對(duì)草甘膦的耐受性，科學(xué)家將細(xì)菌的EPSPS基因轉(zhuǎn)入小麥葉綠體中，得到抗草甘膦轉(zhuǎn)基因小麥。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．將EPSPS基因?qū)胄←湹娜~綠體可防止花粉傳播造成的基因污染 B．可通過(guò)PCR等技術(shù)檢測(cè)小麥細(xì)胞中是否有EPSPS基因的表達(dá)產(chǎn)物 C．個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定，可通過(guò)噴灑草甘膦來(lái)檢驗(yàn)轉(zhuǎn)基因小麥?zhǔn)欠衽嘤晒?D．用草甘膦同時(shí)噴灑轉(zhuǎn)基因小麥和對(duì)照組小麥，轉(zhuǎn)基因小麥存活率高于對(duì)照組9．（2025春?西安期末）Cry蛋白是蘇云金芽孢桿菌的主要?dú)⑾x(chóng)蛋白。研究人員利用基因的定點(diǎn)突變技術(shù)將Cry蛋白第282位的丙氨酸和第283位的亮氨酸分別替換成甘氨酸和絲氨酸后，Cry蛋白對(duì)煙草天蛾的毒性提高了7倍。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．根據(jù)Cry蛋白的氨基酸序列能推測(cè)出多種相應(yīng)的mRNA序列 B．Cry蛋白的毒性提高了7倍的原因可能是改變了該蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu) C．改造Cry蛋白應(yīng)從Cry蛋白基因的脫氧核苷酸序列出發(fā)設(shè)計(jì)其特有的結(jié)構(gòu) D．經(jīng)改造后的蘇云金芽孢桿菌中的Cry蛋白毒性提高這一性狀可遺傳10．（2025春?蘇州期末）PCR產(chǎn)物一般通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳來(lái)鑒定。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．DNA遷移的方向主要取決于電場(chǎng)，而與緩沖液的酸堿度基本無(wú)關(guān) B．待分離的DNA片段較小時(shí)，實(shí)驗(yàn)所用瓊脂糖凝膠的濃度宜稍高些 C．DNA電泳鑒定時(shí)需預(yù)先將染料加入凝膠中以使待測(cè)DNA充分染色 D．對(duì)PCR產(chǎn)物電泳，結(jié)果符合預(yù)期的DNA片段通常還需進(jìn)行基因測(cè)序11．（2025?樂(lè)山三模）下列實(shí)驗(yàn)操作能夠達(dá)成所述目的的是（）A．取洋蔥鱗片葉表皮細(xì)胞制臨時(shí)裝片，可在顯微鏡下觀察到葉綠體的運(yùn)動(dòng) B．用無(wú)水乙醇提取新鮮綠葉中的色素進(jìn)行紙層析，可分離出四種光合色素 C．用高濃度蔗糖溶液處理紫色洋蔥鱗片葉外表皮細(xì)胞，可測(cè)得細(xì)胞液濃度 D．將洋蔥研磨液離心后保留沉淀物并加入冷酒精靜置后，可收集較多DNA12．（2025?安康三模）PCR技術(shù)可實(shí)現(xiàn)基因的定點(diǎn)突變。研究人員設(shè)計(jì)了與蛋白A基因結(jié)合的兩對(duì)引物（引物B和C中都替換了一個(gè)堿基）如圖1所示。研究人員按照如圖2所示的方式進(jìn)行4次PCR擴(kuò)增，以獲得定點(diǎn)突變的新的蛋白A基因。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．PCR1體系和PCR2體系必須分開(kāi)進(jìn)行 B．PCR3體系中應(yīng)該加入引物B和C C．PCR4體系中應(yīng)該加入引物A和D D．DNA聚合酶能夠從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸13．（2025?雁峰區(qū)校級(jí)模擬）關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”及“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”實(shí)驗(yàn)，下列說(shuō)法正確的是（）A．DNA的提取和鑒定過(guò)程中不會(huì)發(fā)生雙螺旋結(jié)構(gòu)的改變 B．常使用預(yù)冷的體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精獲得粗提取的DNA C．在向微量離心管中添加PCR反應(yīng)體系時(shí)不需要更換移液器上的槍頭 D．PCR產(chǎn)物的鑒定可通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行14．（2025?晉中模擬）植物完成受精依賴(lài)于雌雄蕊之間持續(xù)的識(shí)別和相互作用?；ǚ勐湓谥^上后，會(huì)釋放小肽PCP﹣Bs與柱頭上的受體結(jié)合，進(jìn)而促進(jìn)花粉萌發(fā)并在花粉管通道中向下延伸。與此同時(shí)，胚珠釋放出小肽信號(hào)引導(dǎo)花粉管轉(zhuǎn)變延伸方向并向其生長(zhǎng)（如圖），最終使精子釋放并完成受精。受精后，胚珠釋放的小肽LURE1會(huì)被肽酶特異性降解，以阻止其他花粉管的靠近。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．花粉管的萌發(fā)生長(zhǎng)既受多種小肽調(diào)控，又受植物激素調(diào)節(jié) B．肽酶功能正?？杀苊庖蚨嗑肼讯鹑旧w數(shù)目的變異 C．不同物種的精卵之間無(wú)法識(shí)別與結(jié)合可能與受體特異性有關(guān) D．利用基因工程改造卵細(xì)胞膜受體即可實(shí)現(xiàn)不同物種間的遠(yuǎn)緣雜交15．（2025?樂(lè)山三模）我國(guó)科學(xué)家通過(guò)敲除豬的糖抗原合成基因（β4GalNT2），并轉(zhuǎn)入相應(yīng)的調(diào)節(jié)基因后，將基因編輯豬的單個(gè)腎移植給切除自體雙腎的獼猴，最終移植腎存活184天。在移植后的前五個(gè)月里，獼猴的移植腎功能完全正常，之后出現(xiàn)逐漸加重的蛋白尿，下列說(shuō)法錯(cuò)誤是（）A．基因編輯豬的成功體現(xiàn)了動(dòng)物細(xì)胞的全能性 B．出現(xiàn)蛋白尿的原因可能是腎臟功能障礙導(dǎo)致 C．豬和獼猴腎臟差異的根本原因是基因的不同 D．敲除豬β4GalNT2基因能降低免疫排斥反應(yīng)二．解答題（共5小題）16．（2025?湖北模擬）細(xì)菌中的M蛋白在酶X的作用下被ATP磷酸化，磷酸化的M蛋白積累會(huì)抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，酶Y則可使其發(fā)生去磷酸化。研究人員用X基因（編碼酶X）、Y基因（編碼酶Y）和GFP基因（編碼綠色熒光蛋白）構(gòu)建3種融合基因（GFP基因均位于融合基因的上游），并將3種融合基因分別導(dǎo)入不含X和Y基因的大腸桿菌中，以研究酶Y的功能?；卮鹣铝袉?wèn)題。（1）將融合基因a和質(zhì)粒構(gòu)建的基因表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌后，接種在含卡那霉素的培養(yǎng)基上，從長(zhǎng)出的菌落中提取DNA，選用引物組合進(jìn)行PCR，以檢測(cè)融合基因a是否正確插入。若實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范但未獲得擴(kuò)增產(chǎn)物，其原因可能是。（2）構(gòu)建融合基因b時(shí)，應(yīng)將GFP基因中編碼的序列刪除，使得受體細(xì)胞合成GFP﹣酶X融合蛋白。為檢測(cè)導(dǎo)入融合基因b的工程菌內(nèi)融合基因b是否完整表達(dá)以及酶X的活性，首先從具有特征的菌落中提取蛋白質(zhì)進(jìn)行電泳，在泳道中添加的物質(zhì)還應(yīng)包括，后續(xù)實(shí)驗(yàn)用特異性識(shí)別磷酸化的M蛋白的抗體檢測(cè)，通過(guò)是否出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果來(lái)判斷酶X的活性。（3）將以上3種融合基因分別轉(zhuǎn)化的工程菌與未轉(zhuǎn)化的大腸桿菌通過(guò)法接種到同一平板的①～④區(qū)域。一段時(shí)間后，菌落生長(zhǎng)狀況如圖2所示，推測(cè)導(dǎo)入融合基因a的工程菌被接種在圖中的區(qū)域。為從中篩選出高活性酶Y的突變菌株，基本思路是。17．（2025?新鄉(xiāng)三模）科研人員利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的噴花法（即將農(nóng)桿菌懸浮液用微型噴壺均勻噴灑于棉花柱頭和花藥等器官上）將海島棉中控制纖維發(fā)育良好的目的基因GbHCT與草銨麟除草劑抗性基因?qū)腙懙孛轞1169中（如圖），研究棉花株高、有效鈴數(shù)等農(nóng)藝性狀的改變與目的基因GbHCT插入的關(guān)系?；卮鹣铝邢嚓P(guān)問(wèn)題：（1）GbHCT基因包括GbHCT13、GbHCT15兩種，首先用PCR技術(shù)對(duì)基因分別擴(kuò)增，擴(kuò)增兩基因時(shí)均需要引物，引物的作用是，該過(guò)程中為激活參與反應(yīng)的酶需在緩沖液中添加。（2）利用BglⅡ與BstEⅡ?qū)CAMBIA3301載體進(jìn)行雙酶切的優(yōu)點(diǎn)是。用PCR技術(shù)擴(kuò)增GbHCT基因時(shí)，對(duì)目的基因的引物的操作是。（3）研究人員將帶有pCAMBIA3301﹣GbHCT重組載體的農(nóng)桿菌菌液通過(guò)噴花法轉(zhuǎn)化到棉花中，其原理是。在幼苗期對(duì)每株植株的同一葉片涂抹大田適用的草銨麟除草劑，該操作的目的是，此時(shí)草銨膦除草劑抗性基因?qū)儆凇＃?）下表為兩個(gè)轉(zhuǎn)基因棉花品系農(nóng)藝性狀與非轉(zhuǎn)基因陸地棉Y1169對(duì)照組之間的比較。品系株高有效果枝數(shù)有效鈴數(shù)轉(zhuǎn)GbHCT1385.1011.1014.96轉(zhuǎn)GbHCT1583.3512.7817.14Y116979.709.309.20據(jù)此得出的實(shí)驗(yàn)結(jié)論是。18．（2025?安徽模擬）3﹣磷酸甘油脫氫酶（GPD）是酵母細(xì)胞中甘油合成的關(guān)鍵酶。利用某假絲酵母菌株為材料，克隆具有高效催化效率的3﹣磷酸甘油脫氫酶的基因（Gpd）。采用的方案是：先通過(guò)第1次PCR擴(kuò)增出該基因的中間部分，再通過(guò)第2次PCR分別擴(kuò)增出該基因的兩側(cè)，經(jīng)拼接獲得完整基因的序列，如圖所示，回答下列問(wèn)題：（1）以該菌株基因組DNA為模板進(jìn)行第1次PCR時(shí)，在制備的PCR反應(yīng)體系中，除了需加入模板DNA，兩種引物，4種脫氧核苷酸，無(wú)菌水，還需要加入，其中加入引物的作用是。（2）為獲得完整的Gpd基因，分別用限制性核酸內(nèi)切酶PstⅠ和SalⅠ單酶切基因組DNA后，各自用DNA連接酶連接形成環(huán)形DNA，再用苯酚一氯仿抽提除去雜質(zhì)，最后加入沉淀環(huán)形DNA。根據(jù)第一次PCR產(chǎn)物測(cè)定獲得的序列，重新設(shè)計(jì)一對(duì)引物，以環(huán)形DNA為模板進(jìn)行第二次PCR，最后進(jìn)行測(cè)序。用于第二次PCR的一對(duì)引物，其序列應(yīng)是DNA鏈上的（A．P1和P2B．P3和P4C．P1和P4D．P2和P3）。根據(jù)測(cè)序結(jié)果拼接獲得完整的Gpd基因序列，其中的啟動(dòng)子和終止子具有功能。（3）將獲得的Gpd基因與載體連接，此步驟的目的是。19．（2025?貴陽(yáng)模擬）木糖醇作為能量物質(zhì)攝入人體后不會(huì)引起胰島素的升高，適用于糖尿病患者等需要控制血糖的人群，市場(chǎng)需求量大，但其在植物體中含量很低，提取困難；而化學(xué)生產(chǎn)法存在產(chǎn)量有限、環(huán)境污染、成木高昂等缺點(diǎn)。課題小組設(shè)計(jì)將畢赤酵母中的木糖醇脫氫酶（XDH）基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)，如圖是利用同源重組法構(gòu)建木糖醇脫氫酶（XDH）與綠色熒光蛋白（GFP）融合基因表達(dá)載體的流程示意圖。請(qǐng)結(jié)合圖表信息回答下列問(wèn)題：（1）圖中引物F1﹣F和F2﹣R的5'端添加了同源序列（分別是圖中所示），添加同源序列的目的是為同源重組提供同源臂，引導(dǎo)線性化載體與PCR產(chǎn)物通過(guò)同源序列精準(zhǔn)連接。如果在引物3'端添加同源序列，可能導(dǎo)致的后果是。（2）實(shí)驗(yàn)中需要將PCR產(chǎn)物和載體片段混合后加入重組酶。重組酶的作用是。（3）重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌后，若菌落發(fā)出綠色熒光，說(shuō)明。若要驗(yàn)證XDH基因是否正確插入載體，應(yīng)選擇（填“Fl﹣F/F1﹣R”或“F2﹣F/F2﹣R”）作為引物進(jìn)行PCR，因?yàn)?。?）若電泳結(jié)果顯示某菌落的PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度為1806bp，推測(cè)該產(chǎn)物包含的基因片段為（填“XDH”“GFP”或“XDH﹣GFP”），判斷依據(jù)是。20．（2025?湖北模擬）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法是將外源基因?qū)胫参锛?xì)胞的常用方法。農(nóng)桿菌是普遍存在于土壤中的一種細(xì)菌，它能在自然條件下趨化性地感染大多數(shù)雙子葉植物和裸子植物的受傷部位。下面表格中為培養(yǎng)農(nóng)桿菌的LB培養(yǎng)基配方，圖1是對(duì)培養(yǎng)的農(nóng)桿菌進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)的過(guò)程?；卮鹣铝袉?wèn)題：胰蛋白胨酵母浸粉NaCl？10.0g5.0g10.0g定容至1000mL（1）表中“？”為，培養(yǎng)基配制完成后，將pH調(diào)至性。（2）圖中的a、b、c、d中加入的都是LB培養(yǎng)基，結(jié)合圖文信息判斷，a與b、c、d在物理性質(zhì)上的區(qū)別是。若經(jīng)接種培養(yǎng)后，b、c、d中農(nóng)桿菌菌落數(shù)分別為48、57、60，則在a中農(nóng)桿菌的密度約為個(gè)/mL。（3）圖2是利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育某種轉(zhuǎn)基因抗鹽作物的過(guò)程。質(zhì)粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三種限制酶切割位點(diǎn)，它們的識(shí)別序列和黏性末端各不相同，該質(zhì)粒同時(shí)含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因。①在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用SalⅠ、HindⅢ對(duì)質(zhì)粒和含抗鹽基因的DNA進(jìn)行切割，選兩種不同酶切割的理由是（寫(xiě)出兩點(diǎn)）。②檢測(cè)篩選是基因工程中的重要步驟。圖3表示利用影印培養(yǎng)法（使一系列培養(yǎng)皿的相同位置上能出現(xiàn)相同菌落的一種接種培養(yǎng)方法）檢測(cè)重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入了土壤農(nóng)桿菌。培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B含有的抗生素分別為。從檢測(cè)篩選的結(jié)果分析，含有目的基因的是（填數(shù)字）菌落中的細(xì)菌。（4）將轉(zhuǎn)入抗鹽基因的工程細(xì)胞培育成完整植株需要用組織培養(yǎng)技術(shù)，植物激素中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵激素，主要是它們的對(duì)植物細(xì)胞發(fā)育方向產(chǎn)生影響。

2026年高考生物復(fù)習(xí)新題速遞之基因工程（2025年7月）參考答案與試題解析一．選擇題（共15小題）題號(hào)1234567891011答案CBACDCBBCAB題號(hào)12131415答案BDDA一．選擇題（共15小題）1．（2025?寧德模擬）生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的操作順序會(huì)直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，下列實(shí)驗(yàn)操作順序錯(cuò)誤的是（）選項(xiàng)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容部分操作步驟A培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化先將蓋玻片放在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室上，再將培養(yǎng)液滴在蓋玻片邊緣BDNA片段的電泳鑒定先將電泳緩沖液加入電泳槽，再將擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物與凝膠載樣緩沖液（內(nèi)含指示劑）混合，注入加樣孔內(nèi)CDNA粗提取與鑒定先將研磨液加入等體積預(yù)冷的酒精溶液，再置于4℃冰箱幾分鐘后，取上清液D探索生長(zhǎng)素類(lèi)調(diào)節(jié)劑促進(jìn)插條生根的最適濃度先設(shè)計(jì)一組梯度較大的預(yù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行摸索，再在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)更合理的濃度梯度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)A．A B．B C．C D．D【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定；探究植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的應(yīng)用；探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化；DNA的粗提取與鑒定．【專(zhuān)題】正推法；植物激素調(diào)節(jié)；種群和群落；從生物材料提取特定成分；PCR技術(shù)；理解能力．【答案】C【分析】DNA粗提取和鑒定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精；DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性。（2）DNA的鑒定：在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會(huì)被染成藍(lán)色?！窘獯稹拷猓篈、使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)先蓋上蓋玻片再將培養(yǎng)液滴在蓋玻片邊緣，A正確；B、瓊脂糖凝膠電泳能鑒定不同的DNA，操作時(shí)應(yīng)先將電泳緩沖液加入電泳槽，再將擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物與凝膠載樣緩沖液（內(nèi)含指示劑）混合，注入加樣孔內(nèi)，B正確；C、先將研磨液在4℃冰箱中放置幾分鐘后，取上清液，再在上清液中加入體積相等的、預(yù)冷的酒精溶液，C錯(cuò)誤；D、預(yù)實(shí)驗(yàn)可以確定大致的范圍，在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)更合理的濃度梯度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，D正確。故選：C?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的相關(guān)內(nèi)容，要求學(xué)生能結(jié)合所學(xué)知識(shí)正確作答。2．（2025春?西安期末）某遺傳病的正?；蚝屯蛔兓騿捂溒稳鐖D1，研究人員擬用PCR擴(kuò)增2種基因片段，再用某限制酶（識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如圖2）酶切，檢測(cè)基因突變情況。下列敘述正確的是（）A．PCR反應(yīng)的循環(huán)中復(fù)性后DNA解旋為單鏈 B．PCR反應(yīng)體系中需要添加耐高溫的DNA聚合酶 C．該限制酶酶切后形成的末端為﹣GATG﹣ D．該限制酶酶切突變基因后會(huì)形成兩個(gè)片段【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定；限制性?xún)?nèi)切核酸酶．【專(zhuān)題】正推法；PCR技術(shù)；理解能力．【答案】B【分析】1、多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段過(guò)程是：變性→復(fù)性→延伸。過(guò)程說(shuō)明變性當(dāng)溫度上升到90℃以上時(shí)，雙鏈DNA解聚為單鏈復(fù)性溫度下降到50℃左右，兩種引物通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈DNA結(jié)合延伸72℃左右時(shí)，TaqDNA聚合酶有最大活性，可使DNA新鏈由5'端向3'端延伸3、結(jié)果：上述三步反應(yīng)完成后，一個(gè)DNA分子就變成了兩個(gè)DNA分子，隨著重復(fù)次數(shù)的增多，DNA分子就以2n的形式增加。PCR的反應(yīng)過(guò)程都是在PCR擴(kuò)增儀中完成的?！窘獯稹拷猓篈、PCR反應(yīng)的循環(huán)中，變性后DNA解旋為單鏈，A錯(cuò)誤；B、PCR反應(yīng)體系中需要加入脫氧核苷酸、耐高溫的DNA聚合酶和緩沖液等，B正確；C、由圖2可知，限制酶酶切后形成的末端為平末端，C錯(cuò)誤；D、限制酶酶切后突變基因不會(huì)形成兩個(gè)片段，因?yàn)閺膱D中可以看出，突變基因發(fā)生了堿基對(duì)的替換，使得突變基因中沒(méi)有了該限制酶的識(shí)別序列，D錯(cuò)誤。故選：B。【點(diǎn)評(píng)】本題主要考查的是DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的理解掌握，難度適中。3．（2025?湖北模擬）病毒與人類(lèi)健康、生產(chǎn)生活息息相關(guān)。下列有關(guān)病毒的說(shuō)法，正確的是（）A．某些病毒侵入細(xì)胞后，其遺傳物質(zhì)能影響宿主細(xì)胞的DNA B．利用植物細(xì)胞工程對(duì)草莓進(jìn)行作物脫毒，可獲得抗病毒植株 C．病毒的身份標(biāo)簽?zāi)鼙粷{細(xì)胞識(shí)別并結(jié)合，從而引發(fā)機(jī)體的免疫反應(yīng) D．病毒的蛋白質(zhì)在自身基因的指導(dǎo)下合成，其基因是具有遺傳效應(yīng)的DNA片段【考點(diǎn)】基因工程在農(nóng)牧、醫(yī)療、食品等方面的應(yīng)用；病毒；基因與DNA的關(guān)系；體液免疫；植物快速繁殖的新途徑．【專(zhuān)題】正推法；基因；免疫調(diào)節(jié)；植物的組織培養(yǎng)；基因工程；解決問(wèn)題能力．【答案】A【分析】1、病毒沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，必須寄生在活細(xì)胞中，僅有蛋白質(zhì)和遺傳物質(zhì)（DNA或RNA）組成。2、自身免疫病是指由于免疫系統(tǒng)異常敏感、反應(yīng)過(guò)度，“敵我不分”地將自身物質(zhì)當(dāng)做外來(lái)異物進(jìn)行攻擊而引起的疾病?！窘獯稹拷猓篈、某些逆轉(zhuǎn)錄病毒侵入細(xì)胞后，其遺傳物質(zhì)RNA可以通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄形成DNA，然后整合到宿主細(xì)胞的DNA中，從而影響宿主細(xì)胞的DNA，A正確；B、由于莖尖等部位病毒極少甚至無(wú)病毒，利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得脫毒植株，而不是抗病毒植株?？共《局仓暌话闶峭ㄟ^(guò)基因工程等手段導(dǎo)入抗病毒基因來(lái)培育的，B錯(cuò)誤；C、病毒的身份標(biāo)簽（抗原）能被淋巴細(xì)胞識(shí)別，但漿細(xì)胞不能識(shí)別抗原，漿細(xì)胞只能產(chǎn)生和分泌抗體，C錯(cuò)誤；D、病毒的蛋白質(zhì)在自身基因的指導(dǎo)下合成，但是病毒的基因是具有遺傳效應(yīng)的DNA片段或RNA片段，因?yàn)椴《镜倪z傳物質(zhì)可能是DNA，也可能是RNA，D錯(cuò)誤。故選：A。【點(diǎn)評(píng)】本題主要考查病毒的相關(guān)知識(shí)，對(duì)于病毒的結(jié)構(gòu)、功能和生活方式的了解是解題的關(guān)鍵。4．（2025春?武漢期末）CrylAc和Pta是兩種抗蟲(chóng)基因，常被用于轉(zhuǎn)基因作物中以增強(qiáng)植物對(duì)害蟲(chóng)的抵抗力。實(shí)驗(yàn)人員構(gòu)建了含有CrylAc基因和Pta基因的雙價(jià)抗蟲(chóng)基因表達(dá)載體，以增強(qiáng)番茄的抗蟲(chóng)能力。為檢測(cè)培育是否成功，實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行了初步分子檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如表所示。下列敘述正確的是（）MWT123目的基因檢測(cè)CrylAc基因Pta注：M是標(biāo)準(zhǔn)參照物，WT表示非轉(zhuǎn)基因番茄，1～3表示轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)番茄。A．構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)用到的工具酶有載體、DNA連接酶、限制酶 B．雙價(jià)抗蟲(chóng)基因表達(dá)載體常通過(guò)顯微注射法導(dǎo)入番茄受精卵或體細(xì)胞 C．番茄葉片DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增后，需用瓊脂糖凝膠電泳對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行鑒定 D．植株1、3能檢測(cè)到兩種抗蟲(chóng)基因，說(shuō)明1、3為培育成功的轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)番茄【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．【專(zhuān)題】歸納推理；正推法；基因工程；解決問(wèn)題能力．【答案】C【分析】1、基因工程至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、載體。2、基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲取；②基因表達(dá)載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞；④目的基因的檢測(cè)與表達(dá)。【解答】解：A、構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)用到的工具有載體、DNA連接酶、限制酶，載體不是工具酶，A錯(cuò)誤；B、雙價(jià)抗蟲(chóng)基因表達(dá)載體常通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法或花粉管通道法導(dǎo)入番茄受精卵或體細(xì)胞，導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞一般用顯微注射法，B錯(cuò)誤；C、番茄葉片DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增后，需用瓊脂糖凝膠電泳對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行鑒定，再結(jié)合電泳圖結(jié)果進(jìn)行分析，C正確；D、植株1、3能檢測(cè)到兩種抗蟲(chóng)基因，只能說(shuō)明轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)番茄轉(zhuǎn)入了CrylAc基因和Pta基因，但不能說(shuō)明1、3為培育成功的轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)番茄，因?yàn)镃rylAc基因和Pta基因是否成功表達(dá)還需要進(jìn)步檢測(cè)，D錯(cuò)誤。故選：C?！军c(diǎn)評(píng)】本題主要考查了基因工程等相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，意在考查學(xué)生對(duì)相關(guān)知識(shí)點(diǎn)的理解和熟練應(yīng)用的能力。5．（2025?湖北模擬）反向PCR可以擴(kuò)增已知序列兩側(cè)的未知序列，得到大量的未知序列后，可以進(jìn)行基因測(cè)序，從而定位目的基因所在的位置。為確定某種目的基因（堿基序列已知）在植物細(xì)胞染色體DNA中的插入位置，進(jìn)行了反向PCR，簡(jiǎn)要過(guò)程如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．過(guò)程Ⅰ使用的限制酶在圖示目的基因區(qū)域中不能存在可識(shí)別序列 B．過(guò)程Ⅰ兩個(gè)未知序列經(jīng)限制酶切割后形成的黏性末端相同 C．過(guò)程Ⅱ加入的引物為圖中的引物3和引物4 D．過(guò)程Ⅲ后需要使用限制酶將PCR產(chǎn)物剪切成鏈狀【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．【專(zhuān)題】模式圖；PCR技術(shù)；理解能力．【答案】D【分析】1、DNA連接酶：主要是連接DNA片段之間的磷酸二酯鍵，起連接作用，在基因工程中起作用。2、DNA聚合酶：主要是連接DNA片段與單個(gè)脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵，在DNA復(fù)制中起作用?！窘獯稹拷猓篈、進(jìn)行反向PCR是為了確定某種目的基因在植物細(xì)胞染色體DNA中的插入位置，整個(gè)過(guò)程中目的基因不能被破壞，A正確；B、過(guò)程Ⅰ兩個(gè)未知序列使用限制酶切割后，兩端的黏性末端是相同的，否則不能連接成環(huán)狀，B正確；C、加入引物3和引物4最終得到的主要是未知序列，只含有目的基因的一部分，加入引物1和引物2進(jìn)行的是正向PCR，最終得到的是目的基因，達(dá)不到擴(kuò)增未知序列的目的，C正確；D、過(guò)程Ⅲ的擴(kuò)增產(chǎn)物本身就是鏈狀，不需要剪切，D錯(cuò)誤。故選：D?！军c(diǎn)評(píng)】本題主要考查的是基因工程的操作的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的理解掌握的能力，難度適中。6．（2025?雨花區(qū)校級(jí)模擬）雙脫氧測(cè)序法是第一代DNA測(cè)序方法。在4支試管中分別加入4種dNTP和少量的1種ddNTP進(jìn)行PCR，再把PCR產(chǎn)物變性，利用電泳進(jìn)行分離，根據(jù)結(jié)果確定特定堿基的位置。通過(guò)該方法測(cè)定并比較某疾病患者與對(duì)照個(gè)體DNA模板鏈的一段堿基序列，結(jié)果如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（）注：dNTP是PCR的四種原料；雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP）有ddATP、ddCTP、ddGTP、ddTTP四種；在DNA聚合酶作用下，ddNTP與dNTP競(jìng)爭(zhēng)核苷酸鏈延長(zhǎng)位點(diǎn)，以加入ddATP的體系為例：若配對(duì)的為ddATP，延伸終止；若配對(duì)的為dATP，繼續(xù)延伸。A．上述PCR反應(yīng)體系中模板鏈需要足夠多 B．患者該段序列中某位點(diǎn)的堿基C突變?yōu)門(mén) C．5'﹣TAGTGCCCATC﹣3'為對(duì)照個(gè)體的一段序列 D．沿電泳方向，核苷酸鏈長(zhǎng)度逐漸減小【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專(zhuān)題】正推法；PCR技術(shù)；理解能力．【答案】C【分析】依據(jù)雙脫氧測(cè)序法的原理，可以確定每個(gè)泳道中的條帶（DNA片段）的3'終端的堿基，如+ddATP的泳道中出現(xiàn)的條帶（DNA片段）的3'終端堿基就是A。另外由于每個(gè)片段的起始點(diǎn)相同，但終止點(diǎn)不同，因此可以通過(guò)比較片段的長(zhǎng)度來(lái)確定DNA序列中每個(gè)位置上的堿基。【解答】解：A、在進(jìn)行序列時(shí)，模板量的數(shù)量需要足夠多，以確保測(cè)序的準(zhǔn)確性和可測(cè)性。如果模板DNA量不足，可能會(huì)導(dǎo)致測(cè)序結(jié)果不準(zhǔn)確或無(wú)法進(jìn)行，A正確；B、患者的測(cè)序結(jié)果為5'﹣CTACCTGTGAT﹣3'，對(duì)照個(gè)體的測(cè)序結(jié)果為5'﹣CTACCCGTGAT﹣3'，對(duì)比患者和對(duì)照個(gè)體的測(cè)序結(jié)果可知，患者該段序列中某位點(diǎn)的堿基C突變?yōu)門(mén)，B正確；C、圖示電泳方向?yàn)閺纳稀?，即?duì)應(yīng)的DNA片段為長(zhǎng)→短，則對(duì)應(yīng)的DNA測(cè)序結(jié)果為3'→5'，如對(duì)照個(gè)體的電泳結(jié)果最短的條帶為+ddCTP泳道組的條帶，則說(shuō)明該DNA片段5'端第一個(gè)堿基為C；因此對(duì)照個(gè)體的測(cè)序結(jié)果為5'﹣CTACCCGTGAT﹣3'，C錯(cuò)誤；D、電泳時(shí)，產(chǎn)物的片段越大，遷移速率越慢，故據(jù)圖可知沿電泳方向，核苷酸鏈長(zhǎng)度逐漸減小，D正確。故選：C?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查PCR的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力，學(xué)生具備運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問(wèn)題的能力是解答本題的關(guān)鍵。7．（2025春?貴陽(yáng)期末）T4溶菌酶耐熱性差，若將該酶的第3位氨基酸——異亮氨酸（密碼子為AUU、AUC、AUA）改造為半胱氨酸（密碼子為UGU、UGC），并使第3位的氨基酸和第97位氨基酸之間形成1個(gè)二硫鍵，可以大大提高其耐熱性。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．根據(jù)設(shè)計(jì)的T4溶菌酶的氨基酸序列可能推測(cè)出多種脫氧核苷酸序列 B．T4溶菌酶耐熱性改造設(shè)計(jì)思路與天然蛋白質(zhì)的合成過(guò)程相同 C．改造T4溶菌酶可利用基因定點(diǎn)突變技術(shù)，對(duì)相關(guān)基因進(jìn)行改造 D．改造后的T4溶菌酶需要進(jìn)行功能鑒定才能應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐【考點(diǎn)】蛋白質(zhì)工程基本原理．【專(zhuān)題】模式圖；基因工程；解決問(wèn)題能力．【答案】B【分析】蛋白質(zhì)工程，即以蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過(guò)基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行基因改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿(mǎn)足人類(lèi)的生產(chǎn)和生活的需要?！窘獯稹拷猓篈、由于一種氨基酸可能對(duì)應(yīng)多種密碼子，因此根據(jù)設(shè)計(jì)的T4溶菌酶的氨基酸序列可能推測(cè)出多種脫氧核苷酸序列，A正確；B、根據(jù)題意“科學(xué)家通過(guò)相關(guān)研究，最終使T4溶菌酶的第3位異亮氨酸變?yōu)榘腚装彼帷笨芍?，T4溶菌酶耐熱性提高的原因是組成該酶的氨基酸種類(lèi)和排列順序發(fā)生了改變，而氨基酸的數(shù)量沒(méi)變，B錯(cuò)誤；C、根據(jù)題意，改造T4溶菌酶可以從合成蛋白質(zhì)的基因進(jìn)行改造，因此可利用基因定點(diǎn)突變技術(shù)，對(duì)相關(guān)基因進(jìn)行改造，C正確；D、該實(shí)例將蛋白質(zhì)進(jìn)行了改造，屬于蛋白質(zhì)工程的范疇，T4溶菌酶本質(zhì)為蛋白質(zhì)，可利用抗原—抗體特異性結(jié)合的特點(diǎn)對(duì)該酶進(jìn)行檢測(cè)，D正確。故選：B?！军c(diǎn)評(píng)】本題結(jié)合圖解，考查蛋白質(zhì)工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記蛋白質(zhì)工程的原理、基本程序等基礎(chǔ)知識(shí)，能正確分析題圖，再結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題。8．（2025春?貴陽(yáng)期末）草甘膦是一種廣譜、非選擇性的系統(tǒng)性除草劑，通過(guò)抑制植物中EPSPS酶的活性，使植物細(xì)胞內(nèi)某些氨基酸不能合成，從而達(dá)到除草的目的。為提高小麥對(duì)草甘膦的耐受性，科學(xué)家將細(xì)菌的EPSPS基因轉(zhuǎn)入小麥葉綠體中，得到抗草甘膦轉(zhuǎn)基因小麥。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．將EPSPS基因?qū)胄←湹娜~綠體可防止花粉傳播造成的基因污染 B．可通過(guò)PCR等技術(shù)檢測(cè)小麥細(xì)胞中是否有EPSPS基因的表達(dá)產(chǎn)物 C．個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定，可通過(guò)噴灑草甘膦來(lái)檢驗(yàn)轉(zhuǎn)基因小麥?zhǔn)欠衽嘤晒?D．用草甘膦同時(shí)噴灑轉(zhuǎn)基因小麥和對(duì)照組小麥，轉(zhuǎn)基因小麥存活率高于對(duì)照組【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．【專(zhuān)題】正推法；基因工程；理解能力．【答案】B【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：1、目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是鈣離子處理法。4、目的基因的檢測(cè)與鑒定：（1）分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因——PCR檢測(cè)等技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA——PCR檢測(cè)等技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)——抗原—抗體雜交技術(shù)。（2）個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！窘獯稹拷猓篈、將目的基因整合到受體細(xì)胞的葉綠體基因組中能防止基因污染，因?yàn)槿~綠體基因組不會(huì)進(jìn)入花粉，A正確；B、根據(jù)EPSPS基因設(shè)計(jì)引物，可通過(guò)PCR等技術(shù)檢測(cè)小麥細(xì)胞中是否導(dǎo)入EPSPS基因，但是PCR技術(shù)不能檢測(cè)到基因表達(dá)產(chǎn)物，B錯(cuò)誤；C、轉(zhuǎn)基因小麥如果培育成功，則會(huì)產(chǎn)生EPSPS酶，能抵抗草甘膦，因此可以通過(guò)噴灑草甘膦來(lái)檢驗(yàn)轉(zhuǎn)基因小麥?zhǔn)欠衽嘤晒Γ珻正確；D、轉(zhuǎn)基因小麥能抗除草劑，用草甘膦同時(shí)噴灑轉(zhuǎn)基因小麥和對(duì)照組小麥，轉(zhuǎn)基因小麥存活率高于對(duì)照組，D正確。故選：B。【點(diǎn)評(píng)】本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生理解識(shí)記有關(guān)技術(shù)的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能將教材中的知識(shí)結(jié)合題中信息進(jìn)行遷移應(yīng)用。9．（2025春?西安期末）Cry蛋白是蘇云金芽孢桿菌的主要?dú)⑾x(chóng)蛋白。研究人員利用基因的定點(diǎn)突變技術(shù)將Cry蛋白第282位的丙氨酸和第283位的亮氨酸分別替換成甘氨酸和絲氨酸后，Cry蛋白對(duì)煙草天蛾的毒性提高了7倍。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．根據(jù)Cry蛋白的氨基酸序列能推測(cè)出多種相應(yīng)的mRNA序列 B．Cry蛋白的毒性提高了7倍的原因可能是改變了該蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu) C．改造Cry蛋白應(yīng)從Cry蛋白基因的脫氧核苷酸序列出發(fā)設(shè)計(jì)其特有的結(jié)構(gòu) D．經(jīng)改造后的蘇云金芽孢桿菌中的Cry蛋白毒性提高這一性狀可遺傳【考點(diǎn)】蛋白質(zhì)工程基本原理．【專(zhuān)題】正推法；基因工程；解決問(wèn)題能力．【答案】C【分析】蛋白質(zhì)工程：（1）蛋白質(zhì)工程的基本原理是：通過(guò)改造或合成基因來(lái)完成對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)的設(shè)計(jì)改造。（2）蛋白質(zhì)工程的基本思路是：從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→找到并改變相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列（基因）或合成新的基因→獲得所需要的蛋白質(zhì)。【解答】解：A、由于密碼子的簡(jiǎn)并性，根據(jù)Cry蛋白的氨基酸序列可以推測(cè)出多種mRNA序列，A正確；B、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)決定功能，Cry蛋白的毒性提高了7倍的原因可能是改變了該蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)，B正確；C、改造Cry蛋白應(yīng)從Cry蛋白的功能出發(fā)設(shè)計(jì)其特有的結(jié)構(gòu)，C錯(cuò)誤；D、編碼Cry蛋白的基因進(jìn)行定點(diǎn)突變，其遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，故經(jīng)改造后的蘇云金芽孢桿菌中的殺蟲(chóng)晶體蛋白Cry毒性提高這一性狀是可以遺傳的，D正確。故選：C?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查蛋白質(zhì)工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力，運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問(wèn)題的能力。10．（2025春?蘇州期末）PCR產(chǎn)物一般通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳來(lái)鑒定。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．DNA遷移的方向主要取決于電場(chǎng)，而與緩沖液的酸堿度基本無(wú)關(guān) B．待分離的DNA片段較小時(shí)，實(shí)驗(yàn)所用瓊脂糖凝膠的濃度宜稍高些 C．DNA電泳鑒定時(shí)需預(yù)先將染料加入凝膠中以使待測(cè)DNA充分染色 D．對(duì)PCR產(chǎn)物電泳，結(jié)果符合預(yù)期的DNA片段通常還需進(jìn)行基因測(cè)序【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專(zhuān)題】正推法；PCR技術(shù)；理解能力．【答案】A【分析】DNA分子具有可解離的基團(tuán)，在一定的pH下，這些基團(tuán)可以帶上正電荷或負(fù)電荷，在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與它所帶電荷相反的電極移動(dòng)?！窘獯稹拷猓篈、DNA分子具有可解離的基團(tuán)，在一定的pH下，這些基團(tuán)可以帶上正電荷或負(fù)電荷，在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與它所帶電荷相反的電極移動(dòng)，故DNA遷移與緩沖液的酸堿度也有關(guān)，A錯(cuò)誤；B、較小的DNA片段需要較高濃度的瓊脂糖凝膠才能有效分離，B正確；C、DNA電泳鑒定時(shí)需預(yù)先將染料加入凝膠中以使待測(cè)DNA充分染色，凝膠中的DNA分子通過(guò)染色，可以在波長(zhǎng)為300nm的紫外燈下被檢測(cè)出來(lái)，C正確；D、電泳結(jié)果只能顯示DNA片段大小，需要結(jié)合基因測(cè)序才能最終確認(rèn)PCR產(chǎn)物序列的正確性，D正確。故選：A。【點(diǎn)評(píng)】本題考查電泳鑒定的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力，運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問(wèn)題的能力是解答本題的關(guān)鍵。11．（2025?樂(lè)山三模）下列實(shí)驗(yàn)操作能夠達(dá)成所述目的的是（）A．取洋蔥鱗片葉表皮細(xì)胞制臨時(shí)裝片，可在顯微鏡下觀察到葉綠體的運(yùn)動(dòng) B．用無(wú)水乙醇提取新鮮綠葉中的色素進(jìn)行紙層析，可分離出四種光合色素 C．用高濃度蔗糖溶液處理紫色洋蔥鱗片葉外表皮細(xì)胞，可測(cè)得細(xì)胞液濃度 D．將洋蔥研磨液離心后保留沉淀物并加入冷酒精靜置后，可收集較多DNA【考點(diǎn)】DNA的粗提取與鑒定；高倍顯微鏡觀察葉綠體與細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)；細(xì)胞的吸水和失水；葉綠體色素的提取和分離實(shí)驗(yàn)．【專(zhuān)題】歸納推理；正推法；細(xì)胞器；細(xì)胞質(zhì)壁分離與復(fù)原；光合作用與細(xì)胞呼吸；基因工程；理解能力．【答案】B【分析】1、葉綠體色素的提取和分離實(shí)驗(yàn)：（1）提取色素原理：色素能溶解在酒精或丙酮等有機(jī)溶劑中，所以可用無(wú)水酒精等提取色素。（2）分離色素原理：各色素隨層析液在濾紙上擴(kuò)散速度不同，從而分離色素。溶解度大，擴(kuò)散速度快；溶解度小，擴(kuò)散速度慢。2、DNA粗提取和鑒定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精。（2）DNA的鑒定：在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會(huì)被染成藍(lán)色?！窘獯稹拷猓篈、洋蔥鱗片葉表皮細(xì)胞不含葉綠體，故取洋蔥鱗片葉表皮細(xì)胞制臨時(shí)裝片在顯微鏡下觀察不到葉綠體的運(yùn)動(dòng)，A錯(cuò)誤；B、提取光合色素用無(wú)水乙醇，分離色素用紙層析法，因此用無(wú)水乙醇提取新鮮綠葉中的色素進(jìn)行紙層析，可分離出四種光合色素，B正確；C、用高濃度蔗糖溶液處理紫色洋蔥鱗片葉外表皮細(xì)胞，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞失水，據(jù)此只能說(shuō)明細(xì)胞液濃度低于外界蔗糖濃度，但不能測(cè)得細(xì)胞液濃度，C錯(cuò)誤；D、將洋蔥研磨液離心后保留上清液溶于2mol/L的NaCl溶液中，再向其中加入等體積的冷酒精靜置后，可收集到DNA，D錯(cuò)誤。故選：B?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查細(xì)胞觀察實(shí)驗(yàn)、觀察質(zhì)壁分離及復(fù)原實(shí)驗(yàn)、葉綠體中色素的提取和分離實(shí)驗(yàn)、DNA的粗提取和分離實(shí)驗(yàn)，對(duì)于此類(lèi)試題，需要考生注意的細(xì)節(jié)較多，如實(shí)驗(yàn)的原理、實(shí)驗(yàn)采用的方法、實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象及結(jié)論等，需要考生在平時(shí)的學(xué)習(xí)過(guò)程中注意積累。12．（2025?安康三模）PCR技術(shù)可實(shí)現(xiàn)基因的定點(diǎn)突變。研究人員設(shè)計(jì)了與蛋白A基因結(jié)合的兩對(duì)引物（引物B和C中都替換了一個(gè)堿基）如圖1所示。研究人員按照如圖2所示的方式進(jìn)行4次PCR擴(kuò)增，以獲得定點(diǎn)突變的新的蛋白A基因。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．PCR1體系和PCR2體系必須分開(kāi)進(jìn)行 B．PCR3體系中應(yīng)該加入引物B和C C．PCR4體系中應(yīng)該加入引物A和D D．DNA聚合酶能夠從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專(zhuān)題】正推法；PCR技術(shù)；基因工程；理解能力．【答案】B【分析】PCR技術(shù)的PCR全稱(chēng)為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)，其原理為DNA復(fù)制，該過(guò)程的進(jìn)行首先要有一段已知核苷酸序列的目的基因以便合成一對(duì)引物，其過(guò)程為：高溫變性：DNA解旋過(guò)程（PCR擴(kuò)增中雙鏈DNA解開(kāi)不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動(dòng)解開(kāi)）；低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補(bǔ)鏈DNA上；中溫延伸：合成子鏈?！窘獯稹拷猓篈、PCR1和PCR2分別以不同的引物對(duì)蛋白A基因的不同片段進(jìn)行擴(kuò)增，如果不分開(kāi)進(jìn)行，引物會(huì)相互干擾，無(wú)法準(zhǔn)確地?cái)U(kuò)增出所需的特定片段，所以PCR1體系和PCR2體系必須分開(kāi)進(jìn)行，A正確；B、從圖2可以看出，PCR3是對(duì)PCR1和PCR2產(chǎn)物混合復(fù)性后的產(chǎn)物進(jìn)行擴(kuò)增，其目的是將兩個(gè)帶有部分突變序列的片段連接起來(lái)，此時(shí)不需要引物B和C，因?yàn)橐顱和C是用于PCR1和PCR2中引入突變堿基的，在PCR3中應(yīng)利用PCR1和PCR2產(chǎn)物的互補(bǔ)配對(duì)來(lái)進(jìn)行延伸，B錯(cuò)誤；C、PCR4是最終獲得完整的新的蛋白A基因的步驟，此時(shí)需要擴(kuò)增出完整的基因，引物A和D可以分別結(jié)合在基因兩端，從而擴(kuò)增出完整的含有定點(diǎn)突變的新的蛋白A基因，所以PCR4體系中應(yīng)該加入引物A和D，C正確；D、DNA聚合酶的作用特點(diǎn)就是能夠從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸，沿著模板鏈合成新的DNA鏈，D正確。故選：B?！军c(diǎn)評(píng)】本題以PCR技術(shù)的定點(diǎn)突變這一較復(fù)雜的應(yīng)用為背景，綜合考查學(xué)生對(duì)PCR原理、引物設(shè)計(jì)及使用等知識(shí)的理解，不僅要求學(xué)生掌握基礎(chǔ)知識(shí)，還需深入理解不同PCR階段引物選擇的原因。對(duì)于PCR技術(shù)的基本原理，如DNA聚合酶作用特點(diǎn)、引物的功能等基礎(chǔ)知識(shí)，學(xué)生要扎實(shí)掌握，這是理解復(fù)雜PCR應(yīng)用的前提；學(xué)習(xí)過(guò)程中要將所學(xué)知識(shí)與實(shí)際應(yīng)用相聯(lián)系，思考知識(shí)點(diǎn)在不同情境下的應(yīng)用方式，提高知識(shí)遷移能力，以便應(yīng)對(duì)類(lèi)似的結(jié)合科研情境的題目。13．（2025?雁峰區(qū)校級(jí)模擬）關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”及“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”實(shí)驗(yàn)，下列說(shuō)法正確的是（）A．DNA的提取和鑒定過(guò)程中不會(huì)發(fā)生雙螺旋結(jié)構(gòu)的改變 B．常使用預(yù)冷的體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精獲得粗提取的DNA C．在向微量離心管中添加PCR反應(yīng)體系時(shí)不需要更換移液器上的槍頭 D．PCR產(chǎn)物的鑒定可通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定；DNA的粗提取與鑒定．【專(zhuān)題】正推法；從生物材料提取特定成分；PCR技術(shù)；理解能力．【答案】D【分析】PCR全稱(chēng)為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)，其原理基于DNA復(fù)制。在瓊脂糖凝膠電泳中，相對(duì)分子質(zhì)量較大的DNA片段遷移速率較慢，因此與點(diǎn)樣處的距離較近?！窘獯稹拷猓篈．在DNA鑒定步驟中，通過(guò)沸水浴處理會(huì)破壞DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)，A錯(cuò)誤；B．DNA粗提取實(shí)驗(yàn)中，需使用預(yù)冷的體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精來(lái)沉淀DNA，B錯(cuò)誤；C．向微量離心管添加PCR反應(yīng)體系時(shí)，為避免試劑交叉污染，每種試劑均需更換移液器槍頭，C錯(cuò)誤；D．瓊脂糖凝膠電泳是鑒定PCR產(chǎn)物的標(biāo)準(zhǔn)方法，D正確；故選：D?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查DNA實(shí)驗(yàn)操作的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生的識(shí)記和分析能力。14．（2025?晉中模擬）植物完成受精依賴(lài)于雌雄蕊之間持續(xù)的識(shí)別和相互作用?；ǚ勐湓谥^上后，會(huì)釋放小肽PCP﹣Bs與柱頭上的受體結(jié)合，進(jìn)而促進(jìn)花粉萌發(fā)并在花粉管通道中向下延伸。與此同時(shí)，胚珠釋放出小肽信號(hào)引導(dǎo)花粉管轉(zhuǎn)變延伸方向并向其生長(zhǎng)（如圖），最終使精子釋放并完成受精。受精后，胚珠釋放的小肽LURE1會(huì)被肽酶特異性降解，以阻止其他花粉管的靠近。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．花粉管的萌發(fā)生長(zhǎng)既受多種小肽調(diào)控，又受植物激素調(diào)節(jié) B．肽酶功能正?？杀苊庖蚨嗑肼讯鹑旧w數(shù)目的變異 C．不同物種的精卵之間無(wú)法識(shí)別與結(jié)合可能與受體特異性有關(guān) D．利用基因工程改造卵細(xì)胞膜受體即可實(shí)現(xiàn)不同物種間的遠(yuǎn)緣雜交【考點(diǎn)】基因工程在農(nóng)牧、醫(yī)療、食品等方面的應(yīng)用；細(xì)胞膜的功能；受精作用；其他植物激素的種類(lèi)和作用．【專(zhuān)題】模式圖；生物膜系統(tǒng)；植物激素調(diào)節(jié)；基因工程；解決問(wèn)題能力．【答案】D【分析】1、經(jīng)減數(shù)分裂形成的精子和卵細(xì)胞，要相互結(jié)合形成受精卵，才能發(fā)育成新個(gè)體。受精作用是卵細(xì)胞和精子相互識(shí)別、融合成為受精卵的過(guò)程。在受精作用進(jìn)行時(shí)，通常是精子的頭部進(jìn)入卵細(xì)胞，尾部留在外面。與此同時(shí)，卵細(xì)胞的細(xì)胞膜會(huì)發(fā)生復(fù)雜的生理反應(yīng)，以阻止其他精子進(jìn)入。精子的頭部進(jìn)入卵細(xì)胞后不久，精子的細(xì)胞核就與卵細(xì)胞的細(xì)胞核融合，使彼此的染色體會(huì)合在一起。2、油菜素內(nèi)酯能促進(jìn)莖、葉細(xì)胞的擴(kuò)展和分裂，促進(jìn)花粉管生長(zhǎng)、種子萌發(fā)等。【解答】解：A、由題干信息可知，花粉管萌發(fā)并在花粉管通道中向下延伸受小肽PCP﹣Bs的作用。與此同時(shí)，胚珠釋放出小肽信號(hào)引導(dǎo)花粉管轉(zhuǎn)變延伸方向并向其生長(zhǎng)。另外油菜素內(nèi)酯能促進(jìn)進(jìn)花粉管生長(zhǎng)，因此花粉管的萌發(fā)生長(zhǎng)既受多種小肽調(diào)控，又受植物激素調(diào)節(jié)，A正確；B、依題意，受精后，胚珠釋放的小肽LURE1會(huì)被肽酶特異性降解，以阻止其他花粉管的靠近。因此，肽酶功能正?？杀苊庖蚨嗑肼讯鹑旧w數(shù)目的變異，B正確；C、信號(hào)分子與受體間發(fā)生特異性的識(shí)別和結(jié)合，不同物種的精卵之間無(wú)法識(shí)別與結(jié)合可能與受體特異性有關(guān)，C正確；D、遠(yuǎn)緣雜交能否成功不僅受精子與卵細(xì)胞膜受體間的相互識(shí)別的影響，還涉及到配子發(fā)育、胚胎形成及染色體配對(duì)等多環(huán)節(jié)，僅依賴(lài)改造卵細(xì)胞膜受體無(wú)法簡(jiǎn)單實(shí)現(xiàn)跨物種雜交，D錯(cuò)誤。故選：D。【點(diǎn)評(píng)】本題考查受精作用、植物激素調(diào)節(jié)和基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力，學(xué)生具備運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問(wèn)題的能力是解答本題的關(guān)鍵。15．（2025?樂(lè)山三模）我國(guó)科學(xué)家通過(guò)敲除豬的糖抗原合成基因（β4GalNT2），并轉(zhuǎn)入相應(yīng)的調(diào)節(jié)基因后，將基因編輯豬的單個(gè)腎移植給切除自體雙腎的獼猴，最終移植腎存活184天。在移植后的前五個(gè)月里，獼猴的移植腎功能完全正常，之后出現(xiàn)逐漸加重的蛋白尿，下列說(shuō)法錯(cuò)誤是（）A．基因編輯豬的成功體現(xiàn)了動(dòng)物細(xì)胞的全能性 B．出現(xiàn)蛋白尿的原因可能是腎臟功能障礙導(dǎo)致 C．豬和獼猴腎臟差異的根本原因是基因的不同 D．敲除豬β4GalNT2基因能降低免疫排斥反應(yīng)【考點(diǎn)】基因工程在農(nóng)牧、醫(yī)療、食品等方面的應(yīng)用．【專(zhuān)題】正推法；基因工程；解決問(wèn)題能力．【答案】A【分析】①細(xì)胞全能性是指已經(jīng)分化的細(xì)胞，仍然具有發(fā)育成完整生物體或各種細(xì)胞的潛能，在多細(xì)胞生物中，每個(gè)體細(xì)胞的細(xì)胞核都含有個(gè)體發(fā)育的全部基因，只要條件許可，都可發(fā)育成完整的個(gè)體；②器官移植是將一個(gè)個(gè)體的某一器官整體或部分地轉(zhuǎn)移到另一個(gè)體（或本體的另一位置，如自體皮膚移植）的過(guò)程，器官移植存在的主要問(wèn)題：免疫排斥反應(yīng)和供體器官不足，針對(duì)免疫排斥反應(yīng)，可采用免疫抑制劑來(lái)提高移植器官的成活率?！窘獯稹拷猓篈、基因編輯豬屬于基因工程的應(yīng)用范疇，其原理為基因重組，該項(xiàng)技術(shù)沒(méi)有利用細(xì)胞的全能性，A錯(cuò)誤；B、出現(xiàn)蛋白尿主要是腎小球通透性增強(qiáng)導(dǎo)致的，可能與腎臟功能障礙有關(guān)，B正確；C、豬和獼猴不是同一物種，遺傳物質(zhì)不同，因此其腎臟的差異體現(xiàn)了不同遺傳物質(zhì)對(duì)性狀的決定，根本原因是基因的不同，C正確；D、根據(jù)題目信息可知，β4GalNT2是糖抗原合成基因，因而敲除β4GalNT2能改變膜蛋白種類(lèi)，進(jìn)而降低免疫排斥反應(yīng)，D正確。故選：A?！军c(diǎn)評(píng)】本題主要考查的是基因工程的應(yīng)用的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的理解掌握的能力，難度適中。二．解答題（共5小題）16．（2025?湖北模擬）細(xì)菌中的M蛋白在酶X的作用下被ATP磷酸化，磷酸化的M蛋白積累會(huì)抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，酶Y則可使其發(fā)生去磷酸化。研究人員用X基因（編碼酶X）、Y基因（編碼酶Y）和GFP基因（編碼綠色熒光蛋白）構(gòu)建3種融合基因（GFP基因均位于融合基因的上游），并將3種融合基因分別導(dǎo)入不含X和Y基因的大腸桿菌中，以研究酶Y的功能?；卮鹣铝袉?wèn)題。（1）將融合基因a和質(zhì)粒構(gòu)建的基因表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌后，接種在含卡那霉素的培養(yǎng)基上，從長(zhǎng)出的菌落中提取DNA，選用引物組合1、4或2、3進(jìn)行PCR，以檢測(cè)融合基因a是否正確插入。若實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范但未獲得擴(kuò)增產(chǎn)物，其原因可能是融合基因a未成功導(dǎo)入或與質(zhì)粒反向連接。（2）構(gòu)建融合基因b時(shí)，應(yīng)將GFP基因中編碼終止密碼子的序列刪除，使得受體細(xì)胞合成GFP﹣酶X融合蛋白。為檢測(cè)導(dǎo)入融合基因b的工程菌內(nèi)融合基因b是否完整表達(dá)以及酶X的活性，首先從具有綠色熒光特征的菌落中提取蛋白質(zhì)進(jìn)行電泳，在泳道中添加的物質(zhì)還應(yīng)包括M蛋白和ATP，后續(xù)實(shí)驗(yàn)用特異性識(shí)別磷酸化的M蛋白的抗體檢測(cè)，通過(guò)是否出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果來(lái)判斷酶X的活性。（3）將以上3種融合基因分別轉(zhuǎn)化的工程菌與未轉(zhuǎn)化的大腸桿菌通過(guò)稀釋涂布平板法接種到同一平板的①～④區(qū)域。一段時(shí)間后，菌落生長(zhǎng)狀況如圖2所示，推測(cè)導(dǎo)入融合基因a的工程菌被接種在圖中的③區(qū)域。為從中篩選出高活性酶Y的突變菌株，基本思路是從③區(qū)域挑取菌落制成菌液后，涂布到平板上進(jìn)行培養(yǎng)，篩選出較大的菌落?！究键c(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．【專(zhuān)題】圖文信息類(lèi)簡(jiǎn)答題；基因工程；理解能力．【答案】（1）1、4或2、3；融合基因a未成功導(dǎo)入或與質(zhì)粒反向連接（2）終止密碼子；綠色熒光；M蛋白和ATP（3）稀釋涂布平板；③；從③區(qū)域挑取菌落制成菌液后，涂布到平板上進(jìn)行培養(yǎng)，篩選出較大的菌落【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因—PCR技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA—PCR技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)—抗原﹣抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！窘獯稹拷猓海?）融合基因要插入到啟動(dòng)子與終止子之間，要檢測(cè)融合基因a是否正確插入，需選擇能與融合基因a兩端互補(bǔ)配對(duì)的引物組合，即引物1、4或2、3。若實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范但未獲得擴(kuò)增產(chǎn)物，原因可能是融合基因a未成功導(dǎo)入，或者導(dǎo)入的質(zhì)粒反向連接，導(dǎo)致引物無(wú)法與目的基因正確結(jié)合進(jìn)行擴(kuò)增。（2）構(gòu)建融合基因b時(shí)，為使受體細(xì)胞合成GFP﹣X融合蛋白，應(yīng)將GFP基因中編碼終止密碼子的序列刪除，否則翻譯會(huì)提前終止，無(wú)法形成融合蛋白。檢測(cè)融合基因b是否完整表達(dá)及酶X活性時(shí)，先從具有綠色熒光特征的菌落中提取蛋白質(zhì)，因?yàn)槿诤匣騜含GFP基因，表達(dá)后有綠色熒光。在電泳道中添加的物質(zhì)還應(yīng)包括M蛋白和ATP，因?yàn)槊竂可使M蛋白磷酸化（需要ATP的磷酸基團(tuán)），通過(guò)檢測(cè)是否出現(xiàn)磷酸化的M蛋白來(lái)判斷酶X的活性。（3）將轉(zhuǎn)化的工程菌與未轉(zhuǎn)化的大腸桿菌通過(guò)稀釋涂布平板法接種到同一平板的①﹣④區(qū)域。由于融合基因a中含X基因，X基因表達(dá)的酶X使M蛋白磷酸化抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，而Y基因表達(dá)的產(chǎn)物使其發(fā)生去磷酸化，所以導(dǎo)入融合基因a的工程菌接種在圖中的③區(qū)域（菌落相對(duì)較少），導(dǎo)入融合基因c和導(dǎo)入空白質(zhì)粒的大腸桿菌表現(xiàn)為正常生長(zhǎng)，對(duì)應(yīng)圖中②④區(qū)域，導(dǎo)入融合基因b的大腸桿菌表現(xiàn)為抑制生長(zhǎng)，對(duì)應(yīng)圖中①區(qū)域。篩選高活性酶Y的突變菌株的基本思路是從③區(qū)域（導(dǎo)入融合基因c，含Y基因）挑取菌落制成菌液后，涂布到平板上進(jìn)行培養(yǎng)，篩選出較大的菌落。因?yàn)楦呋钚缘拿竃能使磷酸化的M蛋白去磷酸化，解除對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的抑制，使菌落生長(zhǎng)較大。故答案為：（1）1、4或2、3；融合基因a未成功導(dǎo)入或與質(zhì)粒反向連接（2）終止密碼子；綠色熒光；M蛋白和ATP（3）稀釋涂布平板；③；從③區(qū)域挑取菌落制成菌液后，涂布到平板上進(jìn)行培養(yǎng)，篩選出較大的菌落【點(diǎn)評(píng)】本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力，運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問(wèn)題的能力是解答本題的關(guān)鍵。17．（2025?新鄉(xiāng)三模）科研人員利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的噴花法（即將農(nóng)桿菌懸浮液用微型噴壺均勻噴灑于棉花柱頭和花藥等器官上）將海島棉中控制纖維發(fā)育良好的目的基因GbHCT與草銨麟除草劑抗性基因?qū)腙懙孛轞1169中（如圖），研究棉花株高、有效鈴數(shù)等農(nóng)藝性狀的改變與目的基因GbHCT插入的關(guān)系?；卮鹣铝邢嚓P(guān)問(wèn)題：（1）GbHCT基因包括GbHCT13、GbHCT15兩種，首先用PCR技術(shù)對(duì)基因分別擴(kuò)增，擴(kuò)增兩基因時(shí)均需要引物，引物的作用是使DNA聚合酶從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸，該過(guò)程中為激活參與反應(yīng)的酶需在緩沖液中添加Mg2+。（2）利用BglⅡ與BstEⅡ?qū)CAMBIA3301載體進(jìn)行雙酶切的優(yōu)點(diǎn)是避免載體的自身環(huán)化，確保目的基因與載體定向連接。用PCR技術(shù)擴(kuò)增GbHCT基因時(shí)，對(duì)目的基因的引物的操作是在擴(kuò)增時(shí)通過(guò)在引物的5'端設(shè)計(jì)相應(yīng)酶的識(shí)別序列，而實(shí)現(xiàn)目的基因兩側(cè)存在BglⅡ與BstEⅡ的酶切位點(diǎn)。（3）研究人員將帶有pCAMBIA3301﹣GbHCT重組載體的農(nóng)桿菌菌液通過(guò)噴花法轉(zhuǎn)化到棉花中，其原理是農(nóng)桿菌中Ti質(zhì)粒上的T﹣DNA可將目的基因插入棉花細(xì)胞的染色體DNA上。在幼苗期對(duì)每株植株的同一葉片涂抹大田適用的草銨麟除草劑，該操作的目的是篩選導(dǎo)入目的基因的棉花植株，此時(shí)草銨膦除草劑抗性基因?qū)儆跇?biāo)記基因。（4）下表為兩個(gè)轉(zhuǎn)基因棉花品系農(nóng)藝性狀與非轉(zhuǎn)基因陸地棉Y1169對(duì)照組之間的比較。品系株高有效果枝數(shù)有效鈴數(shù)轉(zhuǎn)GbHCT1385.1011.1014.96轉(zhuǎn)GbHCT1583.3512.7817.14Y116979.709.309.20據(jù)此得出的實(shí)驗(yàn)結(jié)論是與非轉(zhuǎn)基因棉花相比，2個(gè)轉(zhuǎn)基因品系的各項(xiàng)農(nóng)藝性狀均有提高，其中轉(zhuǎn)GbHCT15品系優(yōu)勢(shì)更明顯?！究键c(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．【專(zhuān)題】圖文信息類(lèi)簡(jiǎn)答題；基因工程；理解能力．【答案】（1）使DNA聚合酶從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸Mg2+（2）避免載體的自身環(huán)化，確保目的基因與載體定向連接在擴(kuò)增時(shí)通過(guò)在引物的5'端設(shè)計(jì)相應(yīng)酶的識(shí)別序列，而實(shí)現(xiàn)目的基因兩側(cè)存在BglⅡ與BstEⅡ的酶切位點(diǎn)（3）農(nóng)桿菌中Ti質(zhì)粒上的T﹣DNA可將目的基因插入棉花細(xì)胞的染色體DNA上篩選導(dǎo)入目的基因的棉花植株標(biāo)記基因（4）與非轉(zhuǎn)基因棉花相比，2個(gè)轉(zhuǎn)基因品系的各項(xiàng)農(nóng)藝性狀均有提高，其中轉(zhuǎn)GbHCT15品系優(yōu)勢(shì)更明顯【分析】1、基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲?。虎诨虮磉_(dá)載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞；④目的基因的檢測(cè)與表達(dá)。其中，基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心。引物是一小段能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對(duì)的短單鏈核酸。用于PCR的引物長(zhǎng)度通常為20～30個(gè)核苷酸。2、轉(zhuǎn)化是指目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程。【解答】解：（1）GbHCT基因包括GbHCT13、GbHCTI5兩種，首先用PCR技術(shù)對(duì)基因分別擴(kuò)增，擴(kuò)增兩基因時(shí)均需要引物，引物的作用是使DNA聚合酶從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸，該過(guò)程中需在緩沖液中添加Mg2+，因?yàn)镸g2+能激活DNA聚合酶。且該過(guò)程中用到的是耐高溫的DNA聚合酶。（2）結(jié)合圖示可以看出，在構(gòu)建目的基因表達(dá)載體時(shí)，使用BglⅡ與BstEⅡ?qū)CAMBIA3301載體進(jìn)行雙酶切，采用雙酶切的優(yōu)勢(shì)是避免載體的自身環(huán)化，確保目的基因與載體定向連接。用PCR技術(shù)擴(kuò)增GbHCT基因時(shí)，需要對(duì)目的基因的引物進(jìn)行的操作是在引物的5'端設(shè)計(jì)相應(yīng)酶的識(shí)別序列，進(jìn)而在目的基因的兩側(cè)構(gòu)建BglⅡ與BstEⅡ的酶切位點(diǎn)。（3）研究人員將帶有pCAMBIA3301﹣GbHCT重組載體的農(nóng)桿菌菌液通過(guò)噴花法轉(zhuǎn)化到棉花中，這是因?yàn)檗r(nóng)桿菌中Ti質(zhì)粒上的T﹣DNA可將目的基因插入棉花細(xì)胞的染色體DNA上，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化。在幼苗期對(duì)每株植株的同一葉片涂抹大田適用的草銨麟除草劑，其目的是篩選導(dǎo)入目的基因的棉花植株，因?yàn)橹亟M質(zhì)粒上帶有草銨膦除草劑抗性基因，此時(shí)草銨膦除草劑抗性基因?qū)儆跇?biāo)記基因。（4）表為兩個(gè)轉(zhuǎn)基因棉花品系農(nóng)藝性狀與非轉(zhuǎn)基因陸地棉Y1169對(duì)照組之間的比較可以看出2個(gè)轉(zhuǎn)基因品系有效果枝數(shù)和有效鈴數(shù)均增多，其中轉(zhuǎn)GbHCT15品系優(yōu)勢(shì)更明顯。故答案為：（1）使DNA聚合酶從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸Mg2+（2）避免載體的自身環(huán)化，確保目的基因與載體定向連接在擴(kuò)增時(shí)通過(guò)在引物的5'端設(shè)計(jì)相應(yīng)酶的識(shí)別序列，而實(shí)現(xiàn)目的基因兩側(cè)存在BglⅡ與BstEⅡ的酶切位點(diǎn)（3）農(nóng)桿菌中Ti質(zhì)粒上的T﹣DNA可將目的基因插入棉花細(xì)胞的染色體DNA上篩選導(dǎo)入目的基因的棉花植株標(biāo)記基因（4）與非轉(zhuǎn)基因棉花相比，2個(gè)轉(zhuǎn)基因品系的各項(xiàng)農(nóng)藝性狀均有提高，其中轉(zhuǎn)GbHCT15品系優(yōu)勢(shì)更明顯【點(diǎn)評(píng)】本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力，運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問(wèn)題的能力是解答本題的關(guān)鍵。18．（2025?安徽模擬）3﹣磷酸甘油脫氫酶（GPD）是酵母細(xì)胞中甘油合成的關(guān)鍵酶。利用某假絲酵母菌株為材料，克隆具有高效催化效率的3﹣磷酸甘油脫氫酶的基因（Gpd）。采用的方案是：先通過(guò)第1次PCR擴(kuò)增出該基因的中間部分，再通過(guò)第2次PCR分別擴(kuò)增出該基因的兩側(cè)，經(jīng)拼接獲得完整基因的序列，如圖所示，回答下列問(wèn)題：（1）以該菌株基因組DNA為模板進(jìn)行第1次PCR時(shí)，在制備的PCR反應(yīng)體系中，除了需加入模板DNA，兩種引物，4種脫氧核苷酸，無(wú)菌水，還需要加入TaqDNA聚合酶，其中加入引物的作用是與模板DNA鏈結(jié)合，為DNA聚合酶提供合成DNA的起始位點(diǎn)。（2）為獲得完整的Gpd基因，分別用限制性核酸內(nèi)切酶PstⅠ和SalⅠ單酶切基因組DNA后，各自用DNA連接酶連接形成環(huán)形DNA，再用苯酚一氯仿抽提除去雜質(zhì)，最后加入預(yù)冷的95%乙醇沉淀環(huán)形DNA。根據(jù)第一次PCR產(chǎn)物測(cè)定獲得的序列，重新設(shè)計(jì)一對(duì)引物，以環(huán)形DNA為模板進(jìn)行第二次PCR，最后進(jìn)行測(cè)序。用于第二次PCR的一對(duì)引物，其序列應(yīng)是DNA鏈上的C（A．P1和P2B．P3和P4C．P1和P4D．P2和P3）。根據(jù)測(cè)序結(jié)果拼接獲得完整的Gpd基因序列，其中的啟動(dòng)子和終止子具有啟動(dòng)子啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄，終止子終止基因轉(zhuǎn)錄功能。（3）將獲得的Gpd基因與載體連接，此步驟的目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用?！究键c(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定；基因工程的操作過(guò)程綜合．【專(zhuān)題】圖文信息類(lèi)簡(jiǎn)答題；正推法；PCR技術(shù)；基因工程；理解能力．【答案】（1）TaqDNA聚合酶與模板DNA鏈結(jié)合，為DNA聚合酶提供合成DNA的起始位點(diǎn)（2）預(yù)冷的95%乙醇C啟動(dòng)子啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄，終止子終止基因轉(zhuǎn)錄（3）使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：1、目的基因的獲取：方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)和標(biāo)記基因等。3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是鈣離子處理法。4、目的基因的檢測(cè)與鑒定首先要檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用PCR檢測(cè)。其次還要檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，方法是PCR檢測(cè)。最后檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原﹣抗體雜交。有時(shí)還需進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定。如轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)植物是否出現(xiàn)抗蟲(chóng)性狀?！窘獯稹拷猓海?）PCR反應(yīng)體系中，除模板DNA、引物、4種脫氧核苷酸、無(wú)菌水外，還需熱穩(wěn)定的DNA聚合酶即TaqDNA聚合酶，它能在高溫下催化DNA合成。引物的作用是與模板DNA鏈通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，為DNA聚合酶提供起始位點(diǎn)，使DNA聚合酶從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸進(jìn)行子鏈合成。（2）DNA不溶于酒精，常用預(yù)冷的95%乙醇沉淀DNA，以提取純化DNA。第一次PCR擴(kuò)增出基因中間部分，其主要目的是為了可以對(duì)基因中間部位進(jìn)行測(cè)序，從而設(shè)計(jì)出兩種引物，這兩種引物應(yīng)能用來(lái)擴(kuò)增兩引物兩次的DNA序列。因引物只能從子鏈的5’→3’來(lái)延伸，所以要擴(kuò)增目的基因的兩側(cè)，應(yīng)選擇P1和P4?；蛑械膯?dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄，終止子則使轉(zhuǎn)錄在相應(yīng)位置停止。（3）將目的基因（Gpd基因）與載體連接形成重組DNA分子，這樣做可以使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，不會(huì)被受體細(xì)胞內(nèi)的核酸酶等降解，并且能夠隨著載體的復(fù)制而遺傳給下一代，同時(shí)載體上的一些調(diào)控序列可以使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。故答案為：（1）TaqDNA聚合酶與模板DNA鏈結(jié)合，為DNA聚合酶提供合成DNA的起始位點(diǎn)（2）預(yù)冷的95%乙醇C啟動(dòng)子啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄，終止子終止基因轉(zhuǎn)錄（3）使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用【點(diǎn)評(píng)】本題圍繞基因克隆這一核心，將PCR技術(shù)、引物設(shè)計(jì)、基因結(jié)構(gòu)功能及基因與載體連接目的等多個(gè)基因工程關(guān)鍵知識(shí)點(diǎn)有機(jī)融合，考查學(xué)生對(duì)知識(shí)的綜合運(yùn)用能力。對(duì)于基因工程涉及的各項(xiàng)技術(shù)原理，如PCR擴(kuò)增、酶切連接等，學(xué)生要深入理解，不僅要知其然，更要知其所以然，這樣才能在復(fù)雜情境中靈活運(yùn)用知識(shí)；另外在平時(shí)學(xué)習(xí)中，要將基因工程不同環(huán)節(jié)的知識(shí)點(diǎn)串聯(lián)起來(lái)，形成完整知識(shí)體系，理解各環(huán)節(jié)間的邏輯聯(lián)系，以便更好地應(yīng)對(duì)綜合性題目。19．（2025?貴陽(yáng)模擬）木糖醇作為能量物質(zhì)攝入人體后不會(huì)引起胰島素的升高，適用于糖尿病患者等需要控制血糖的人群，市場(chǎng)需求量大，但其在植物體中含量很低，提取困難；而化學(xué)生產(chǎn)法存在產(chǎn)量有限、環(huán)境污染、成木高昂等缺點(diǎn)。課題小組設(shè)計(jì)將畢赤酵母中的木糖醇脫氫酶（XDH）基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)，如圖是利用同源重組法構(gòu)建木糖醇脫氫酶（XDH）與綠色熒光蛋白（GFP）融合基因表達(dá)載體的流程示意圖。請(qǐng)結(jié)合圖表信息回答下列問(wèn)題：（1）圖中引物F1﹣F和F2﹣R的5'端添加了同源序列（分別是圖中所示），添加同源序列的目的是為同源重組提供同源臂，引導(dǎo)線性化載體與PCR產(chǎn)物通過(guò)同源序列精準(zhǔn)連接。如果在引物3'端添加同源序列，可能導(dǎo)致的后果是DNA聚合酶無(wú)法從引物3′端延伸，導(dǎo)致擴(kuò)增失?。ɑ蛞餆o(wú)法正確結(jié)合模板DNA，導(dǎo)致PCR擴(kuò)增失?。＃?）實(shí)驗(yàn)中需要將PCR產(chǎn)物和載體片段混合后加入重組酶。重組酶的作用是將PCR產(chǎn)物和載體片段精準(zhǔn)連接在一起。（3）重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌后，若菌落發(fā)出綠色熒光，說(shuō)明融合基因（XDH﹣GFP）已轉(zhuǎn)入大腸桿菌，并且GFP基因成功表達(dá)。若要驗(yàn)證XDH基因是否正確插入載體，應(yīng)選擇F1﹣F/F1﹣R（填“Fl﹣F/F1﹣R”或“F2﹣F/F2﹣R”）作為引物進(jìn)行PCR，因?yàn)镕1﹣F和FI﹣R的引物設(shè)計(jì)在XDH基因兩側(cè)，能擴(kuò)增出包含XDH的片段，驗(yàn)證其是否插入正確位置。（4）若電泳結(jié)果顯示某菌落的PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度為1806bp，推測(cè)該產(chǎn)物包含的基因片段為XDH﹣GFP（填“XDH”“GFP”或“XDH﹣GFP”），判斷依據(jù)是XDH基因（1086bp）與GFP基因（720bp）融合后總長(zhǎng)度為1806bp。【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．【專(zhuān)題】圖文信息類(lèi)簡(jiǎn)答題；正推法；PCR技術(shù)；基因工程；理解能力；解決問(wèn)題能力．【答案】（1）DNA聚合酶無(wú)法從引物3′端延伸，導(dǎo)致擴(kuò)增失?。ɑ蛞餆o(wú)法正確結(jié)合模板DNA，導(dǎo)致PCR擴(kuò)增失敗）（2）將PCR產(chǎn)物和載體片段精準(zhǔn)連接在一起（3）融合基因（XDH﹣GFP）已轉(zhuǎn)入大腸桿菌，并且GFP基因成功表達(dá)F1﹣F/F1﹣RF1﹣F和F1﹣R的引物設(shè)計(jì)在XDH基因兩側(cè)，能擴(kuò)增出包含XDH的片段，驗(yàn)證其是否插入正確位置（4）XDH﹣GFPXDH基因（1086bp）與GFP基因（720bp）融合后總長(zhǎng)度為1806bp【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定。【解答】解：（1）由題可知，添加同源序列是為讓PCR產(chǎn)物和載體因同源序列互補(bǔ)配對(duì)，利于重組酶連接。若在引物的3'端添加同源序列，則會(huì)改變引物與模板結(jié)合，使DNA聚合酶無(wú)法從引物的3'端延伸，導(dǎo)致擴(kuò)增失敗。（2）重組酶作用是催化有同源序列的DNA片段（PCR產(chǎn)物和載體片段）進(jìn)行同源重組，實(shí)現(xiàn)連接構(gòu)建重組載體。（3）GFP基因成功表達(dá)會(huì)產(chǎn)生綠色熒光蛋白，使菌落發(fā)出綠色熒光，說(shuō)明融合基因（XDH﹣GFP）已轉(zhuǎn)入大腸桿菌，并且其中的GFP基因得到了表達(dá)。分析題圖可知，F(xiàn)1﹣F和F1﹣R的引物設(shè)計(jì)在XDH基因的兩側(cè)，若XDH基因正確插入載體，PCR擴(kuò)增會(huì)得到包含XDH基因的特異性片段；若XDH基因未插入，則無(wú)法擴(kuò)增出該片段。（4）由圖可知，XDH基因大小為1080bp，GFP基因大小為720bp，XDH基因（1086bp）與GFP基因（720bp）融合后總長(zhǎng)度為1806bp，而電泳結(jié)果顯示某菌落的PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度為1806bp，說(shuō)明產(chǎn)物包含的基因片段為XDH﹣GFP。故答案