152021-12-25發(fā)布I胡蘿卜小孢子培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和NY/T2306花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程3.1高等植物生活史中雄配子體發(fā)育過(guò)程中短暫而重要的階段，是減數(shù)分裂后四分體釋放出的單倍性3.2導(dǎo)形成愈傷組織或胚狀體，進(jìn)而形成完整植3.314.2藥品無(wú)機(jī)試劑：硝酸銨，硝酸鉀，硫酸銨，氯化鈣、硝酸鈣，硫酸鎂，磷酸二化鉀，硼酸，硫酸錳，硫酸鋅，鉬酸鈉，硫酸銅，氯化鈷有機(jī)試劑：肌醇，煙酸，鹽酸吡哆醇、鹽酸硫胺素、甘氨酸，葉酸，生物素，谷氨酰胺小孢子培養(yǎng)各階段使用商品化的B5、NLN、MS和1/2MS基本培養(yǎng)基，具體成養(yǎng)基說(shuō)明書用量加入基本培養(yǎng)基、根據(jù)附錄A的用量加入除瓊脂外的其它成分，待培養(yǎng)基內(nèi)所有組分充將配制好的培養(yǎng)基分裝至三角瓶中封口后進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，滅菌應(yīng)符合NY/T2306的規(guī)定。滅菌結(jié)束后，待培養(yǎng)基溫度降至55℃~60℃時(shí)，在超凈工作臺(tái)中將分離培養(yǎng)基、誘導(dǎo)培養(yǎng)基、分化培養(yǎng)基分裝至培養(yǎng)皿中、生根培養(yǎng)基分裝至三角瓶中7.2外植體消毒7.3小孢子分離mL離心管中，700r/min離心3min，去上清液，沉淀用1mL分離培養(yǎng)基懸浮。重復(fù)上述步驟2次后，將懸浮液加入液體誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，將小孢子濃度調(diào)至1×105個(gè)·mL-1。吸取2ml移入固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。2將培養(yǎng)皿放入恒溫培養(yǎng)箱中33℃下暗培養(yǎng)照強(qiáng)度1500lx，16h·d-1，溫7.7煉苗與移栽將培養(yǎng)瓶放置于日光溫室中，打開瓶蓋，加水至培養(yǎng)基上1cm，煉苗3d，然后將根部培養(yǎng)基清洗干凈，栽種于裝有消毒育苗基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)缽中，澆水后用塑料袋覆蓋保濕，7d后取掉塑料袋。溫度白天控制在25℃±3℃,夜晚12℃±3℃。取幼苗根尖，采用根尖壓片法進(jìn)行壓片，在顯微鏡下觀察染色體數(shù)目，當(dāng)再生植株染色體數(shù)目為93A.1商品基本培養(yǎng)基成分用量見表A.NLNNH4NO3000002O02O000MgSO40NaH2PO4000MnSO42O32O2Na2MoO42O2O2O02ONa2EDTA2O1150222000